细胞生物学实验报告

细胞生物学实验报告

脂类细胞化学

【实验目的】

熟悉苏丹Ⅲ染色技术，了解脂肪在脂肪细胞中的分布。

【实验原理】

脂肪是体内储存能量和供给能量的重要物质，根据其性质可分为中性脂肪、脂肪酸、胆固醇、鞘磷脂等。很多细胞都含有脂肪，游离状态的脂肪呈小滴状悬浮于细胞质内，比较显著的如肝细胞。脂肪小滴可以集合，将细胞质及细胞核挤到一旁，如脂肪细胞。

脂肪不溶于水，易溶于浓酒精、苯、氯仿和乙醚等，因此制作脂类标本一般不用石蜡切片，而用冰冻切片或铺片法以保存脂类。固定多用甲醛类固定剂。其染色方法有脂溶性染料显示法、化学显示法和特异染色法等。

脂溶性染料显示法，即采用苏丹染料中的苏丹Ⅲ、苏丹Ⅳ或苏丹黑等溶于脂类使脂类显色的原理显示脂类，使用时，注意选择溶剂，要求既要溶解苏丹染料，又不溶掉脂肪。

苏丹染料染脂类是一种简单的物理变化，即苏丹染料是一种脂溶性染料，易溶于酒精但更易溶于脂肪，所以当含有脂肪的标本与苏丹染料接触时，苏丹染料即脱离酒精而溶于该含脂结构中而被染色。

苏丹Ⅲ是可溶于脂肪的染料，用于冰冻切片中显示甘油三酸酯，但是也可用于染色石蜡切片中与蛋白质结合的脂类。苏丹Ⅲ的70%酒精饱和液或丙酮和70%酒精等量饱和液，可将脂肪染为橙红色。

苏丹Ⅲ化学结构

1-[4-(苯基偶氮)苯基偶氮]-2-萘酚

【实验用品】

⒈材料

小白鼠

⒉试剂

甲醛钙溶液，70％乙醇，苏丹Ⅲ染液，蒸馏水

⒊器材

解剖刀、镊子、载玻片、盖玻片、解剖盘等

【实验步骤】

⒈断头法处死小鼠，置于解剖盘中，剪开腹腔，用镊子提起小肠将盖玻片紧贴于肠系膜，用剪连同盖玻片和其上粘的肠系膜取下，反扣于已滴加甲醛钙的载玻片上，固定 20 分钟。

⒉吸蒸馏水滴入载玻片与盖玻片之间冲洗，用滴管不断吸去液体以去除固定液。

⒊用 70%乙醇溶液代替蒸馏水重复步骤2的操作，再进行一次冲洗。

⒋用苏丹Ⅲ染色30分钟

⒌吸去溢出染液，擦净盖玻片表面及周边，用显微镜观察。

【实验结果】

⒈结果

从显微镜下观察得，脂肪细胞呈圆球形，内充满橘黄色（理想状态下为橘红色）脂类物质，细胞外也有散开的为橘黄色（理想状态下为橘红色）圆脂肪滴。

⒉图像

【分析与讨论】

⒈结果分析

⑴观察：从显微镜下观察发现，视野中的脂肪细胞呈现重叠和挤压的状况，而非透明度较高、排列有序的单层状。同时，视野中脂肪细胞的颜色为橘黄色而非橘红色。这两种情况对于观察效果有一定的影响。此外，血管也呈微红色而非无色透明。

⑵可能原因：

①制片的时候，未将小鼠肠系膜充分展开或者已经扯破，使之有一定程度的皱褶，造成脂肪细胞的重叠和挤压。

②染色时，固定液没被蒸馏水冲洗干净。

③用 70％乙醇溶液形成乙醇环境时，没有将剩余的蒸馏水和固定液去除干净。

④由于盖玻片盖得太紧，苏丹Ⅲ染液未能完全将肠系膜覆盖，造成染色不充分。

⑤染色过程中没有及时补充染液，使得苏丹Ⅲ染液因挥发而造成不足，最终影响染色效果。

⑥染色时间不足。

⑦制片前，未把小鼠的血放干净。

⒉注意事项

在选取肠系膜时，要尽量选取带有血管的膜，因为在血管的周围一般都附有脂肪组织给以保护。