食品中氯霉素残留快速检测技术研究进展_张威

食品中氯霉素残留快速检测技术研究进展

张威，赵晓娟*，陈海光

（仲恺农业工程学院轻工食品学院，广东广州510225）

摘要：氯霉素类抗生素残留引起的食品安全问题已引起人们的普遍关注。简述动物源性食品中氯霉素类抗生素残留状况，综述2004年以来氯霉素类抗生素残留常用检测技术的开发应用情况，重点介绍免疫速测、传感器等快速检测技术的最新研究进展及应用，最后对氯霉素类抗生素残留检测技术的发展趋势进行讨论。关键词：食品安全；氯霉素；残留；快速检测

Research Progress in Fast Detection Techniques of Chloramphenicol Residues in Food

ZHANG Wei ，ZHAO Xiao-juan *，

CHEN Hai-guang （College of Light Industry and Food Sciences ，Zhongkai University of Agriculture and Engineering ，Guangzhou

510225，Guangdong ，China ）

Abstract ：Food safety issues caused by the chloramphenicol （CAPs ）residues have brought about increasing concern.In this paper ，the conditions of CAPs residues of animal derived food are introduced.The development and application of detection techniques of CAPs residues was summarized since 2004.In particular ，the fast detection techniques ，such as immunity analysis methods and sensors ，are focused.Finally ，the development trend of detection techniques of CAPs residues is discussed.Key words ：food safety ；chloramphenicol ；residues ；fast detection

基金项目：

国家自然科学基金项目（21005091）；广东省教育厅科技创新项目（2012KJCX0068）；广州市食品安全检测技术重点实验室（[2011]233-44）

作者简介：张威（1986—），男（汉），硕士研究生，研究方向：食品安全。*通信作者：赵晓娟（1980—），女，副教授，博士。

食品研究与开发

F ood Research And Development

2014年2月

第35卷第4期

DOI ：10.3969/j.issn.1005-6521.2014.04.030

氯霉素类抗生素

（Chloramphenicols ，CAPs ），是一类包括氯霉素（Chloramphenicol ，CAP ）以及一系列氯霉素衍生物的广谱高效抗菌性药物。1947年，Ehrlich 等[1]首次从委内瑞拉链霉菌（Streptomyces venezuela ）中分离得到CAP 。1948年，CAP 的结构被确定并成为第一种完全由人工合成的抗生素[2]。目前，我国常见的药用氯霉素类抗生素有氯霉素、甲砜霉素（Thiampheni －col ）和氟甲砜霉素（Florfenicol ）等。该类抗生素主要通过转换抗生素自身和改变微生物代谢机制[3]对多种病原菌起到较强抑制作用，因而广泛用于动物各种细菌性传染疾病的治疗，对各类家禽、家畜、水产品及蜂蜜制品各种传染性疾病的控制和治疗起重要作用[4]。

医学研究表明，肉、蛋和奶等动物源性食品中的CAPs 残留对人体有严重的副作用，长期微量摄入会使一些致病菌产生耐药性，并且引起机体正常菌群失调，使人们容易感染各种疾病。此外，CAPs 对人的骨髓细胞、肝细胞具有毒性作用，尤其是会引起与计量和疗程无关的不可逆再生障碍性贫血[5]。因此，许多国家已出台了关于氯霉素类药物禁用的相关法律法规和政策。例如，欧美仅允许氯霉素用于非食用动物；我国农业部2002年发布《食品动物禁用的兽药及其他化合物清单》，规定禁止在所有动物源性食品中使用氯霉素。但由于CAPs 价格低廉、抑菌效果好，目前仍被少数厂家违规使用，既对人类的健康造成极大威胁，也大大挫伤了人们对食品安全的信心。食品安全事件的频发和保障食品安全涉及到很多层面，但是无疑分析检测技术是保障食品安全的重要技术支撑，从监督层面对保证食品质量安全、保障人民身体健康等方面起到积极的促进作用。氯霉素类抗生素残留的检测技术主要有微生物检测技术、色谱检测技术、光谱分析技术和免疫速测法等快速检测技术。

专题论述

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1微生物检测技术

微生物法的测定方式可分为两种：一种是基于抗生素对微生物生长的抑制作用[6]；另一种是由于发光微生物对氯霉素敏感而引起生化特性的变化，如氯霉素对鳆发光杆菌具有抑光作用，通过检测鳆发光杆菌发光强度的变化可以检测氯霉素的含量[7-8]。微生物法经济简便、容易操作，可用于多种抗生素类药物的测定。但其敏感性和特异性低，不适合大批量样品的快速检测，而且由于其结果会出现假阳性，容易引起误判。

2色谱检测技术

近年来，各种仪器联用等分析新方法的不断涌现，赋予色谱检测技术更加优良的分离分析能力。色谱检测技术已广泛用于各类食品中CAPs残留的测定。我国现行标准GB/T22338-2008规定了动物源性食品中氯霉素类残留量的气相色谱-质谱（GC-MS）[9]和液相色谱-质谱/质谱（LC-MS-MS）[10]测定方法，适用于水产品、畜禽产品和畜禽副产品中氯霉素、氟甲砜霉素和甲霉素残留的定性确证和定量测定[11]。此外，其他色谱检测技术，如超高效液相色谱-串联质谱（UPLC-MS-MS）用于禽畜肉[12]、蜂蜜[13]、牛奶[14]、奶粉[15]和多种动物源性食品[16]中氯霉素的分析检测；高效液相色谱-电喷雾离子阱质谱法（HPLC-ESI-TRAP-MS）用于乳品中氯霉素类药物残留的测定[17]；气相色谱电子捕获法（GC-ECD）检测肌肉组织中的氯霉素残留[18]等。色谱检测技术具有灵敏度高、准确可靠等特点，但是样品前处理操作复杂、专业性强、成本较高，不适合进行大批量样品的快速筛选检测。

3光谱分析技术

光谱分析技术是利用物质的特征光谱进行定性、定量和结构分析的技术。研究者分别使用可见光谱[19]、紫外光谱[20]及近红外光谱[21]对动物源性食品中的氯霉素残留进行了检测，结果表明，光谱分析技术具有成本低、操作简便的优点。但该法的选择性较低，而且近红外光谱法需要结合化学计量学技术进行数据解析，专业性强。

4快速检测技术

快速检测技术通常具有灵敏快速、简便经济、适用于大批量样品快速筛选检测的特点，可以及时、快速地监控食品的安全状况，在食品和药物分析、临床诊断、环境保护等领域有着广泛的应用前景[22-23]。

4.1免疫速测分析技术

免疫速测分析技术是基于抗原抗体特异性反应建立起来的快速检测技术[24]。其中，酶联免疫吸附法是目前应用最为广泛的免疫分析方法之一。近年来，毛细管电泳免疫等新免疫分析技术的加入为免疫快速检测提供了更广阔的发展空间。

4.1.1酶联免疫吸附法

酶联免疫吸附法（ELISA）是一种以酶作为标记物的免疫分析方法。ELISA主要有夹心法、间接法和竞争法等测定方法。其中，夹心法和间接法主要用于测定抗体和大分子抗原，适用于临床诊断；竞争法主要用于测定小分子抗原，尤其适用于食品安全分析。程冰[25]选用竞争性酶联免疫吸附法分析了家禽可食组织器官中氯霉素的残留分布情况。郝俊虎等[26]用ELISA方法测定鸡组织中氯霉素的检出限为0.02ng/mL，样品中不同浓度的氯霉素标准品回收率均达84.8%以上。Tajik等[27]采用ELISA和HPLC等方法测定鸡肝、鸡肾和肌肉组织内的氯霉素残留，结果表明ELISA法的检测结果与HPLC的检测结果基本一致。杨艳艳等[28]在建立氯霉素单克隆抗体（CAP mAb）杂交瘤细胞株和阻断ELISA方法的基础上，研制出CAP残留快速检测试剂盒（CAP-kit），并对其性能进行了测定。此外，目前市场上已出现一些商品化的试剂盒产品[29-30]，可以直接用于生产实践，适用于大规模氯霉素的残留筛选检测。4.1.2胶体金免疫层析法

胶体金免疫层析法（GICA）是基于免疫层析技术和胶体金标记技术建立起来的免疫分析方法。以胶体金作为着色物，应用于抗原抗体特异性免疫反应。免疫胶体金试纸法将特异的抗体交联到试纸条上，试纸条上有控制线和显示结果的测试线，样品中抗原与抗体结合后，胶体金可使该区域显示一定的颜色，通过与控制线颜色的对比实现快速检测。杨挺等[31]应用杂交瘤技术制备了抗氯霉素单克隆抗体，并根据竞争式胶体金免疫层析试验原理，研制了氯霉素检测免疫试纸条。研究结果表明，该单克隆抗体对氯霉素的亲合性好、特异性高；该金标试纸条适用于动物源性食品中氯霉素残留的快速检测，对虾肉、蜂蜜样品的最低检出限为1.5μg/kg；对鲜奶的最低检出限为3μg/kg，检测时间只需5min~8min。王玮[32]利用胶体金标记快速检测技术对氯霉素兽药残留快速检测方法进行了系统的研究。通过优化各项实验指标，建立了渗滤式（Flow-through）和层析式（Lateralflow）两种金标记免疫竞争快速筛选方法。以氯霉素与固相膜上的氯霉素-卵清蛋白（CAP-OVA）偶联物（即包被抗原）竞争结合

专题论述

张威，等：食品中氯霉素残留快速检测技术研究进展114