(完整版)菌种的保存,真空冷冻干燥法
冷冻真空干燥保藏法的原理
冷冻真空干燥保藏法的原理
冷冻真空干燥保藏法，又称冷冻干燥保藏法，简称冻干法，是一种常用的微生物保藏方法。
其原理是在低温下快速将含菌样品冻结，然后在减压条件下抽真空，使水分子直接从固态升华到气态，从而实现对样品的干燥保藏。
具体操作过程如下：首先，将需要保藏的菌悬液或孢子悬液制备成适当的浓度，并添加适量的保护剂以提高菌种稳定性。
接着，将样品装入安瓿管中，并在低温下快速将含菌样品冻结。
然后，将安瓿管置于真空干燥设备中，在减压条件下进行抽真空处理。
由于水分子直接从固态升华到气态，无需经过液态，因此可以有效地避免菌种在干燥过程中的损伤。
最后，将干燥后的菌种管放置在4℃或-20℃的低温环境中保存。
冷冻真空干燥保藏法的优点在于能够有效地保存菌种，且保存时间较长，一般可达到几年或几十年。
此外，该方法还具有较高的保藏效果，菌种在复苏后仍具有较高的活力和生长能力。
因此，冷冻真空干燥保藏法被广泛应用于微生物学、生物制品和医药研究领域。
冷冻干燥法保存菌株
1.制备无菌瓶。
药用青霉素小瓶先用2%盐酸浸泡8-10h，再用自来水冲洗多次，最后用蒸馏水洗2次，烘干。
贴标签，盖塞并用容器封口膜覆盖扎紧，高压蒸汽灭菌。
2.制备无菌脱脂牛奶。
配制20%脱脂乳115℃15min。
3.制备菌悬液。
在培养好的新鲜菌种斜面上，加入无菌水3ml，用接种环刮下，轻轻搅动，制成细胞分散均匀的菌悬液（不要刮破培养基）。
4.分装。
用无菌移液管将菌悬液分装与灭菌青霉素小瓶中，每瓶装0.2ml，再用无菌长滴管将灭菌脱脂乳0.2ml加入上述小瓶中，稍振摇使之混匀。
5.预冻。
将上述小瓶放入500ml干燥瓶中，放入-80℃的冰箱中预冻0.5h，待小瓶中菌悬液冻结成固体后取出；
6.冷冻真空干燥。
迅速将干燥瓶插在冷冻干燥器的抽真空管上，迅速抽真空，并冷冻干燥，约24-36h，待菌体混合物呈疏松态，稍一振动即脱离瓶壁方可取出。
7.封存。
在无菌室内将容器封口膜取下，迅速换以无菌橡皮塞，最后用封口膜将瓶口封住，-20℃低温冰箱保存。
经过试验，10%和20%的脱脂牛奶都可以。
菌种冷冻保藏
6.8干燥的确认和停机
终止干燥时间应根据下列情况判断：①冷冻管内菌悬液呈酥块状或松散片状；②真空度接近空载时的最高值；③选用1～2支对照管，其水份与菌悬液同量，其干燥后视为完结。水分已经蒸发完，即水蒸汽分压接近零时，真空度将达到最高值而不再上升；由于蒸发是一个吸热过程，在整个冷冻干燥过程中冷冻室的温度会维持很低，使菌悬液一直处于冻结状态，当没有水分继续蒸发后，冷冻室不再吸热，温度开始自然上升。
6.7冷冻真空干燥
真空冷冻干燥器有成套的装置出售（长药厂新近成立菌种中心，购有该机）。按其方法操作。冷冻干燥机要先开机预冷30分钟以上，再根据冷冻干燥机的水分蒸发能力，确定一次放入的冷冻管数量。将预冻好的冷冻管及指示管于次日取出迅速放入已预冷的冷冻干燥机的干燥箱内，开动真空泵进行一级真空抽干，待指示管出现由粉红色变全兰色时，再进行二级抽干12h。二级真空干燥既保持菌体细胞干燥度，又避免细胞反复冻结造成保存中菌体死亡，因而能更长期保存菌种，并能提高其存活率，又不会发生菌株的变异
1.真空干燥:取出预冻好的冷冻管，置于如沙土管制备能抽真空的玻璃干燥器内（干燥器四周置冰块或无水乙醇、冰盐水放低温冰箱或普通冰箱冷冻室事先冷至-21℃±），迅速抽真空。其间不断更换冰块或冷冻液。能将该玻璃干燥器置于冰柜抽真空更好。连续抽气6～8h即可。(干燥器盖底接触处需事先均匀涂抹凡士林石腊,以防微小漏气。）
也可以购买袋装或盒装的超高温灭菌优质脱脂牛奶直接使用，无需再灭菌。还可将脱脂奶粉制成还原乳，配成20%乳液，同上灭菌后使用。
如灭菌后放置时间超过24小时，则应弃用。
6.3菌种准备
菌种要求为筛选得到的优质良种，生长良好的纯种，孢子新鲜，菌龄以处于稳定期或超过对数生长期为好，有利于延长冻干存活期。放线菌斜面种子培养7～10天，生长饱满，孢子丰富，且无菌检查合格。
食用菌菌种贮藏八法
食用菌菌种贮藏八法1.低温定期移植贮藏法将需要贮藏的菌种接种在适宜的斜面培养基上，适温培养，当菌丝健壮地长满斜面时取出，放在3℃-5℃低温干燥处或4℃冰箱、冰柜中贮藏，每隔4-6个月时间移植转管一次，具体应根据菌种特性决定。
贮藏时要注意环境温度不能太高，以防霉菌通过棉塞进入管内。
因此，若用棉塞，可用干净的硫酸纸或牛皮纸包扎棉塞，即可减少污染的机会，也可防止培养基干燥。
除草菇菌种外，其他食用菌菌种都能采用此法贮藏。
2.液体石蜡贮藏法取化学纯液体石蜡(要求不含水分、不霉变)装于三角瓶中加棉塞并包纸，在1公斤/平方厘米压力下灭菌1小时，再放入40℃恒温箱中数天，以蒸发其中水分，至石蜡油完全透明为止。
将处理好的石蜡油移接在空白斜面上，在28℃-30℃温度下培养2-3天，确定无杂菌生长方可使用。
然后用无菌操作的方法把液体石蜡注入待贮藏的斜面试管中。
注入量以高出培养基斜面1-1.5厘米为宜，塞上橡皮塞，用固体石蜡封口，直立于低温干燥处贮藏。
贮藏时间在1年以上，在低温下，保藏时间还可延长。
3.沙土管贮藏法取河沙用水浸泡洗涤数次，过60目筛除去粗粒，再用10%盐酸浸泡2-4小时，除去其中有机物质，再用水冲洗至pH值达到中性，烘干备用。
同时取贫脊土或菜园土用水浸泡，使其呈中性，沉淀后除去上清液，烘干碾细，用100目筛子过筛，将处理好的沙与土以(2-4)：1比例混匀，用磁铁吸出其中的铁质，然后分装小试管或安瓿内，每管装量0.5-2克，塞棉塞，用纸包扎灭菌(1.5公斤/平方厘米，1小时)，再干热灭菌(160℃，2-3小时)1-2次，进行无菌检验，合格后使用。
将已形成孢子的斜面菌种，在无菌条件下注入无菌水3-5毫升，刮菌薹，制成菌悬液，再用无菌吸管吸取菌液滴入沙土管中，以浸透沙土为止。
将接种后的沙土管放入盛有干燥剂的真空干燥器内，接上真空泵抽气数小时，至沙土干燥为止。
真空干燥操作需在孢子接入后48小时内完成，以免孢子发芽。
微生物菌种保藏方法
微生物菌种保藏方法
微生物菌种的保藏是非常重要的，因为这些菌种可能用于各种实验和研究中。
以下是一些常见的微生物菌种保藏方法：
1. 冷冻保存：将菌种在液氮或-80的冰箱中冷冻保存。
这是最常见的保藏方法，能够长期保存菌株并保持其遗传稳定性。
2. 干燥保存：将菌种在无菌室中取出，用无菌纸或吸水纸吸干，然后放入无菌瓶中密封保存。
干燥保存适用于某些孢子或芽孢的微生物，比如放线菌、链霉菌等。
3. 明胶斜培养基保存：将菌种接种在含有明胶的固体培养基上，然后密封保存。
这种方法适用于某些菌株，如革兰氏阳性菌和厌氧菌。
4. 低温保存：将菌种保存在4的冰箱中。
这种保存方式可以在短时间内保持菌株的活性，但不能长期保存。
5. 液氮保存：将菌种在锅内预冷冷冻过的无菌玻璃管中加入10%甘油或蔗糖，然后立即在液氮中保存。
这种方法适用于大多数微生物，并且可以长期保存。
食用菌类栽培中的菌种保存与管理
食用菌类栽培中的菌种保存与管理菌种保存与管理在食用菌类栽培中起着至关重要的作用。
正确的保存和管理方法能够保证菌种的活力和纯度，从而提高菌丝的生长速度和产量。
本文将介绍几种常用的菌种保存与管理的方法。
一、菌种保存方法1. 冷冻保存法：冷冻保存是目前常用的一种菌种保存方法。
首先，将需要保存的菌种培养在含有适宜营养物质的琼脂平板上，进行培养。
然后，选择菌落良好、生长健壮的菌株进行保存。
将菌株切取一小块，放入无菌的保存管中，加入适量的冷冻保护剂，如甘油或乳糖。
最后，将保存管密封并放入低温冷冻箱中保存。
2. 雪藏保存法：雪藏保存也是一种常见的菌种保存方法。
首先，将需要保存的菌种培养在琼脂平板上。
然后，将培养好的菌落切取一小块，放入无菌的冰醋酸纤维素管或PCR管中。
接下来，将菌种在-80℃的环境中迅速冷冻至冰冻状态。
最后，将冷冻好的菌种保存在液氮罐中。
3. 干燥保存法：干燥保存法适用于某些特殊的菌种，可以有效地保护菌种的特殊形态。
首先，将需要保存的菌株培养在琼脂平板或液体培养基中。
接着，取一部分菌株，在无菌环境下置于无菌纸上，用干燥器或者通风处进行干燥。
最后，将完全干燥的菌株保存在无菌瓶中，密封保存。
二、菌种管理方法1. 菌种记录：在食用菌类栽培中，菌种管理的第一步是建立完整的菌种记录。
每个菌株需要有唯一的编号，记录培养的来源、传代次数、保存方法等信息。
同时，应建立菌种保存的数据库，记录每个菌株的详细信息，以便随时查询和管理。
2. 菌种传代：菌种的传代是菌种管理的重要环节。
传代是指将菌株从一个培养基转移到下一个培养基的过程。
在传代过程中，应注意消毒操作，避免外界的污染。
同时，要确保传代的菌株与原始菌株保持一致，不出现突变。
3. 菌种保持：对于长期保存的菌株，应定期复苏和保持活力。
通过以上介绍的保存方法，可以将菌株保存在恰当的条件下。
定期检查保存的菌株，保证其活力和纯度。
如果有发现菌株衰弱或受到污染的情况，应及时更换或重新培养。
菌种保存方法
菌种保存方法菌种保存是微生物学研究中非常重要的一环，它可以保证菌种的长期保存和稳定性，为科研工作提供了可靠的保障。
下面将介绍几种常见的菌种保存方法。
首先，冷冻保存是最常见的菌种保存方法之一。
冷冻保存是指将培养好的菌种悬浮液或培养物在-80℃以下的低温条件下保存。
在保存前，需要将菌种悬浮液加入一定比例的保护剂，如甘油或DMSO，以增加菌种的冷冻耐受性。
冷冻保存不仅简单易行，而且保存时间长，可以保存数年甚至更长时间。
其次，干燥保存也是一种常用的菌种保存方法。
干燥保存是指将培养好的菌种用干燥剂或者真空干燥的方法将菌种完全脱水，然后保存在低温、低湿的条件下。
这种方法保存的菌种可以在常温条件下保存，并且保存时间也相对较长。
另外，液氮保存也是一种非常有效的菌种保存方法。
液氮保存是指将培养好的菌种悬浮液或培养物直接存放在液氮罐中保存。
由于液氮的温度极低，可以有效地阻止微生物的代谢和生长，因此保存效果非常好。
但是在使用液氮保存时需要注意安全问题，操作人员要具备相关的安全知识和技能。
最后，冷冻干燥保存也是一种常见的菌种保存方法。
冷冻干燥保存是将培养好的菌种在低温条件下冷冻，然后通过真空干燥的方法将菌种脱水保存。
这种方法既兼具冷冻保存和干燥保存的优点，保存效果非常好，被广泛应用于微生物学研究中。
综上所述，菌种保存方法有很多种，选择合适的保存方法需要根据具体的实验要求和条件来确定。
无论采用何种保存方法，都需要严格按照操作规程来进行，以确保菌种的保存质量和稳定性。
希望本文介绍的菌种保存方法对大家有所帮助。
食用菌菌种保藏的基本方法
食用菌菌种保藏的基本方法食用菌菌种保藏的基本方法包括冷冻保存、覆盖培养基保存、液体保存、干燥保存和低温保存等。
以下是对这些方法的详细描述：1. 冷冻保存：冷冻保存是常见且相对简便的方法。
首先，将菌种培养于富含蔗糖的培养基中，培养至菌落成熟。
然后，将菌落切割成小块，置于含有15%-30%的甘油的冷冻溶液中。
菌种通过冷冻溶液迅速冷冻，然后可将冷冻块移入液氮罐中保存。
这种方法可有效防止冷冻过程中菌种组织的损伤，并延长菌种的保存时间。
2. 覆盖培养基保存：此方法适用于那些无法耐受冷冻保存的菌株。
首先，制备凝胶化的培养基，如琼脂培养基。
然后，将菌株接种于培养基表面，培养至菌落成熟。
接下来，将一块凯特纸置于培养皿中，与培养基表面紧密贴合，避免菌落受氧解的氧化作用的影响。
最后，将培养皿密封并储存于低温环境中，如冰箱或冷藏库。
这种方法可保持菌种的生物学特性，并较长时间内保持其活力。
3. 液体保存：液体保存通常用于保存菌株的液体培养基。
首先，将菌株接种于液体培养基中，培养至菌株生长到稳定阶段。
然后，将菌株转移至干净的试管中，加入20%-30%甘油。
接下来，使用自动分注器或玻璃针管，将菌种和甘油混合物分装至干净的小量容器中，如冻存管。
最后，将盖子紧固并储存在低温环境中。
这种方法可保持菌种的生物学特性，并可较长时间保存。
4. 干燥保存：干燥保存是将菌株置于低湿度的环境中进行保存。
首先，通过无菌技术将菌株均匀涂布在无机蓝色岩石上。
然后，在干燥箱中以50℃-55℃的温度下烘干48小时。
烘干后，将菌株和蓝色岩石放入密封的干燥管中，并将干燥管保存在低温干燥的环境中。
这种方法可确保菌株的长期保存，并能够在需要时重新激活。
5. 低温保存：低温保存通常是将菌株置于低温环境中进行保存。
此方法适用于冷冻保存非真菌类菌株时仍然受到破坏的情况。
常见的低温保存温度为-80℃或更低。
首先，将菌株接种于含有冻存保护剂的培养基中，培养至菌落成熟。
5菌种保藏的原理和方法
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方法。
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（六）液氮保藏法
原理：低温 悬浮介质： 10%甘油或5%的二甲亚砜 机理：甘油或二甲亚砜可进入细胞，并通过降低强烈的
脱水作用而保护细胞。 甘油—般用高压蒸汽灭菌，而二甲亚砜最好为过滤灭菌。 适用菌种：适用于所有微生物、动植物细胞保藏。 保藏期：置液氮内（-196 ℃ ），保存5-10年。 特点：保藏期最长，但保藏费用高，仅用于保存经济价
4 菌种保藏的原理和方法
菌种保藏原理及条件 菌种保藏的方法 菌种保藏的注意事项 菌种保藏机构
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一、菌种保藏原理
原理：
根据菌种的生理生化特性，人为创造条件使菌 体的代谢活动处于休眠的状态。
条件：
挑取优良纯种，最好是休眠体（孢子、芽孢等）
创造一个最有利于休眠的环境条件，如：降低培 养基营养成分、低温、干燥、隔氧及添加保护剂 等方法。
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二、菌种保藏的方法
斜面保藏法 穿刺保藏法 固体曲保藏法 沙土管干燥保藏法 真空冷冻干燥保藏法 液氮保藏法 悬液保藏法 低温保藏法
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（一）斜面保藏法
原理：低温 方法： 将培养好的斜面菌种，置于4-5℃冰箱保存，定期
移植到新的斜面培养基上继续保藏。 一般保存期3-6个月。 注意事项: 冰箱的温度； 培养基水分蒸发情况（用橡皮塞代替棉塞）。 优点：简便，适合于实验室中菌种的短期保藏。 缺点：短期内多次传代，易引起菌种变异、退化，染菌
过筛、灭菌并干燥的沙土为保藏介质，
可用硅胶、磁珠或多孔玻璃珠，但适于这些载 体的微生物不多，保存期短，不及沙土实用。
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（五）真空冷冻干燥保藏法
原理：在低温下迅速地将细胞冻结以保持细胞结构完整， 然后在真空下使水分升华（最有效方法之一）。
菌种长期保存方法
菌种长期保存方法
菌种的长期保存方法有多种，常用的包括以下几种：
1. 冷冻保存：将菌株培养物添加适量的保护剂（如甘油、蔗糖等），将菌种冷冻在低温下保存。
通常在-70或更低的温度下保存，可以避免菌种的变异和死亡。
2. 真空冻干保存：将菌株培养物通过真空冷冻干燥技术，制备成干粉状，然后密封保存。
这种方法适用于某些脆弱的菌种，有助于保持菌株的原始特性。
3. 高温烘箱保存：将菌株培养物置于高温（通常为40-50）的烘箱中烘干，然后密封保存。
这种方法适用于耐热的菌株，可以较长时间地保持菌种的活性。
4. 冷冻干燥保存：将菌株培养物进行冷冻干燥处理，制备成干燥粉末，并密封保存。
这种方法可以长期保存菌种，且易于运输和储存。
5. 非洲紫外线灭菌保存：将菌株培养物置于紫外线照射仪中进行灭菌处理，然后密封保存。
这种方法适用于一些容易形成胞内孢子的菌株，可以有效地保持菌种的活性。
选择合适的保存方法应根据菌株的特性以及实验需求来确定，同时在保存过程中应注意使用无菌操作，确保保存的菌种不受外界污染。
菌种的保藏方法
• 一般可保藏一年或更长。
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低温保藏法(-20℃)
• 将液体培养物或从琼脂斜面培养物收获的细胞接到 试管内，然后贮藏于温度范围在-5～-20℃的普通 冰箱(-20℃)中。或者，将菌种培养在小的试管或 培养瓶斜面上，待生长适度后，将试管或瓶口用橡 胶塞严格封好，同上置于冰箱中保存。
• 在超低温冷藏柜中保藏菌种的一般方法是： 1．离心收获对数生长中期至后期的微生物细胞； 2．用新鲜培养基重新悬浮所收获的细胞； 3．加入等体积的20％甘油或10％二甲亚砜； 4．混匀后分装入冷冻指管或安瓿中，于-70℃超
低温冰箱中保藏。
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• 如果待保藏菌种生长在斜面上，则可用含10％ 甘油的新配制液体培养基洗涤收获。超低温冰 箱的冷冻速度一般控制在1-2℃／min。若干细 菌和真菌菌种可通过此保藏方法保藏5年而活 力不受影响。
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穿刺保藏法
• 操作：将菌种穿刺接种于半固体培养基上，然后覆盖2－3mm的 液体石蜡，放入冰箱4℃保藏。一方面可防止因培养基水分蒸发 而引起菌种死亡，另一方面可阻止氧气进入，以减弱代谢作用。
• 此法实用而效果好。霉菌、放线菌、芽孢细菌可保藏2年以上不 死，酵母菌可保藏1—2年，一般无芽孢细菌也可保藏1年左右。 特别对难于冷冻干燥的丝状真菌和难以在固体培养基上形成孢 子的担子菌等的保藏更为有效。此法的优点是制作简单，不需 特殊设备，且不需经常移种。缺点是保存时必须直立放置，所 占位置较大，同时也不便携带。
• 当培养基中加入抗生素时，抗生素提供了一有利于携带质 粒的细胞群体的极有用的生长选择压。而且在运用基因工 程菌进行发酵时，抗生素的加入可帮助维持质粒复制与染 色体复制的协调。
微生物实验菌种保藏方案[最终定稿]
![微生物实验菌种保藏方案[最终定稿]](https://img.taocdn.com/s3/m/4b22ec28a200a6c30c22590102020740be1ecd2e.png)
微生物实验菌种保藏方案[最终定稿]第一篇：微生物实验菌种保藏方案一、石蜡油低温保藏法本方法的原理是在长好的斜面菌上覆盖灭菌的液体石蜡，达到菌体与空气隔绝，使菌处于生长和代谢停止状态，同时石蜡油还防止水分蒸发，在低温下达到较长期的保藏菌种的目的。
保藏温度要求在-4～4℃下。
液体石蜡法适用于不产孢子的菌种。
具体操作是：菌种为斜面培养菌种，斜面不宜过长；选择纯净优质石蜡油，置三角烧瓶中经过121℃高压蒸汽灭菌1～2h，将其放烘箱中(160℃左右)干热处理，去除灭菌时渗入的水分，待石蜡油变得清澈透明后冷却即可加入斜面，斜面上不能出现气泡，液蜡添加量以高出斜面顶部约1cm为宜。
二、甘油管冷冻保藏法1．试验方法介绍本法也是利用微生物在甘油中生长和代谢受到抑制的原理达到保藏目的。
其方法是，将80%的甘油高压蒸汽灭菌待用。
将培养好的斜面菌种用无菌水制成高浓度的菌悬液(108～1010/ml)。
取1ml灭菌甘油放入与甘油充分混匀，使甘油浓度约为10%-30%，于-70℃下冻存。
-20℃保存时间较短。
或采用体积比为8：2的甘油－生理盐水，加入新鲜培养的菌体肉汤，混合均匀后至-20℃冰箱保存。
2．效果该法适用于一般细菌的保存，同时也适用于链球菌、弧菌、真菌等需特殊方法保存的菌种，适用范围广，操作简便，效果好，无变异现象发生。
甘油－生理盐水保存液保存菌种优于甘油原液，其原因可能是加入生理盐水适当降低了甘油的高渗作用，且有肉汤培养物适量增加保存液的营养成分，从而更好地保护了待保存的菌株。
三、真空冷冻干燥法1．试验原理真空冷冻干燥保藏法是兼具低温、干燥、除氧三方面菌种保藏的主要因素，除不宜于丝状真菌的菌丝体外，对病毒、细菌、放线菌、酵母及丝状菌孢子等各类微生物都适用，不宜用冻干法保存的微生物不到2%。
冷冻干燥法是在低温下快速将细胞冻结，然后在真空条件下干燥，使微生物的生长和酶活动停止。
为了防止在冷冻和水分升华过程中对细胞的损害，要采用保护剂来制备细胞悬液，使菌在冻结和脱水过程中起到保护作用的溶质，通过氢键和离子键对水和细胞所产生的亲和力来稳定细胞成分的构型。
实验室最常用的五种菌种保藏方法
实验室最常用的五种菌种保藏方法一、冷冻保存在实验室中，冷冻保存是最常用的菌种保藏方法之一。
这种方法利用低温的环境，将菌种置于-70°C以下的冰柜或液氮罐中进行保存，以减缓菌种的新陈代谢过程，从而延长其保存时间。
冷冻保存不仅适用于常见的细菌菌种，对真菌、酵母菌等微生物也同样适用。
在冷冻保存的过程中，需要注意样品容器的密封性和防潮性，以避免保存过程中的交叉污染和冻结损伤。
二、干燥保存干燥保存是另一种常见的菌种保藏方法。
这种方法通过将菌种置于低温低湿环境中，使其水分蒸发，使菌种变得干燥并进入休眠状态，从而延长其保存时间。
常见的干燥保存方式包括真空冷冻干燥、干燥剂吸附法等。
干燥保存尤其适用于灵敏对湿度敏感的菌种，以及一些难以存活在液体培养基中的微生物。
三、低温保存除了冷冻保存外，低温保存也是常见的菌种保藏方式之一。
在这种方法中，菌种通常被保存在4°C左右的冰箱中，通过控制温度和湿度，延缓菌种的新陈代谢，并保持其生长状态。
这种保存方式不仅适用于微生物的短期保存，也可以用于长期保存对保存温度敏感的微生物。
四、液氮保存液氮保存是一种极低温的保存方式，通过将微生物样品浸没在液氮中进行保存。
这种方法不仅可以有效地防止菌种的新陈代谢和变异，还能够保持菌种的生物特性和遗传信息。
液氮保存适用于需要长期保存的珍贵菌株和难培养的微生物，如土壤中的特殊嗜冷菌和特殊嗜热菌等。
五、冻干保存冻干保存是将微生物样品在冷冻的条件下先冻结，然后通过真空干燥的方式将水分蒸发，最终将样品转变成固态的干燥状态。
这种方法既能保留微生物的生物特性，又能有效地延长样品的保存时间，适用于需要长时间运输和保存的微生物。
总结回顾通过冷冻保存、干燥保存、低温保存、液氮保存和冻干保存等五种菌种保藏方法，可以满足实验室对于微生物样品保存的不同需求。
不同的菌种和实验目的，需要选择合适的保存方式，以确保微生物的品质和可用性。
在进行菌种保存的过程中，需要注意样品的密封性、温度和湿度的控制，以及保存设备的维护和管理。
微生物菌种保藏流程
微生物菌种保藏流程一、准备工作。
咱得先找个合适的保藏容器呀。
这就像给小微生物们找个舒服的小窝。
一般来说，像小安培瓶、试管这些就很不错。
而且容器一定要干净、干燥，要是脏兮兮的，微生物们肯定不乐意住啦。
然后呢，还得准备保藏的培养基。
这培养基就像是微生物的美食，不同的微生物喜欢的美食可不一样呢。
得根据咱们要保藏的微生物种类来调配合适的培养基，可不能乱喂呀。
二、菌种的选择。
这一步也很关键哦。
要选择生长状态良好的微生物菌种。
就好比咱们挑宠物的时候，肯定要挑那种活蹦乱跳、健康的呀。
那些长得歪瓜裂枣、病恹恹的微生物可不行。
怎么看生长状态好呢？要是在培养基上长得密密麻麻、活力四射的，那基本就没错啦。
三、保藏方法。
（一）斜面低温保藏法。
这个方法可简单又常用啦。
把选好的菌种接种到斜面培养基上，让它们在合适的温度下生长一段时间，等长得差不多了，就放到冰箱的冷藏室里。
不过要注意哦，温度不能太低，一般4摄氏度左右就很合适啦。
这就像是给微生物们放了个小冰屋，让它们在里面舒舒服服地待着。
但是呢，这种方法也有个小缺点，就是保藏的时间不能太长，隔一段时间就得重新接种一次，就像定期给宠物换个新窝一样。
（二）甘油冷冻保藏法。
这个方法能让微生物们保存得更久一点。
先把菌种放到含有一定比例甘油的溶液里，甘油就像是给微生物们穿上了一层保暖衣。
然后把混合好的溶液放到超低温冰箱里，温度可能要达到零下80摄氏度呢。
这么冷的地方，微生物们却能安安稳稳地待着。
不过从这么冷的地方拿出来的时候也要小心哦，要慢慢地让它们适应常温，就像我们从寒冷的室外突然进到温暖的室内要适应一下一样。
（三）真空冷冻干燥保藏法。
这个方法听起来就很高级呢。
先把微生物菌种在低温下快速冻结，然后在真空环境下让水分升华。
这就好比把微生物们变成了一个个小干尸，但其实它们还活着哦。
这种方法保藏的时间超级长，而且对微生物的活性影响比较小。
不过设备要求比较高，操作起来也有点复杂，就像做一道超级难的菜一样，得小心翼翼的。
食用菌的菌种保护与贮藏技术
食用菌的菌种保护与贮藏技术食用菌是一种具有很高经济价值和营养价值的食品，因其含有丰富的蛋白质、维生素和多种微量元素，被广大人民所喜爱。
然而，食用菌的菌种保护与贮藏技术至关重要，直接影响着食用菌的质量和产量。
下面将介绍一些常见的食用菌的菌种保护与贮藏技术。
首先，食用菌菌种的保护技术是制备食用菌的关键步骤。
常见的保护技术有冷冻法、干燥法和冷冻干燥法。
其中，冷冻法是将菌种在低温下冷冻保存，可长时间保持其活性。
干燥法则是将菌种在较低湿度和适当温度下，通过蒸发水分使其干燥保存。
而冷冻干燥法是将菌种先冷冻，然后将菌种置于真空条件下，使其在低温下干燥，以保持其活性。
其次，食用菌菌种的贮藏技术是为了延长其保质期，增加其产量和品质。
常见的贮藏技术有低温贮藏、改性大气贮藏和真空包装贮藏等。
低温贮藏是将菌种存放在低温环境中，如冷藏库或冰箱中，以延缓其新陈代谢速度，延长保质期。
改性大气贮藏则是通过改变物质的气体环境来抑制微生物的生长和变质。
真空包装贮藏是将菌种放入密封袋中，排出其中的空气以减缓细菌生长和氧化反应。
再次，食用菌菌种的传热技术是保证其贮藏质量的关键环节。
常见的传热技术有冷链传热、热透传热和微波传热等。
冷链传热是将菌种从低温环境中传热到室温环境，以保持菌种的活性和质量。
热透传热是将菌种从高温环境中传热到室温环境，以避免菌种的热失活和变质。
微波传热是将菌种放入微波炉中，利用微波的加热作用，使菌种达到适宜的温度，以保持其活性和质量。
最后，食用菌的菌种保护与贮藏技术还需要充分利用现代科技手段进行研究和应用。
例如，可以利用基因工程技术来改良菌种的抗逆性和功能性。
同时，可以利用生物传感器来监测菌种的活性和质量，以实现菌种保护与贮藏技术的精确控制。
综上所述，食用菌的菌种保护与贮藏技术是食用菌产业发展的重要保障，通过合理的保护与贮藏技术，可以延长食用菌的保质期，提高产量和品质。
但是，菌种保护与贮藏技术仍然存在一些挑战，需要进一步开展研究，不断提高技术水平，以满足不断增长的食用菌市场需求。
微生物保存——冷冻真空干燥保存法03
冷冻真空干燥保藏法1、原理冷冻干燥保藏菌种法可克服简单保藏方法的不足。
利用有利于菌种保藏的—切因素，使微生物始终处于低温、干燥、缺氧的条件下，因而它是迄今为止最有效的菌种保藏法之一。
保藏菌种范围广、时间长、存活率高。
主要步骤为：①将待保藏菌种的细胞或孢子悬液悬浮于保护剂（如脱脂牛奶）中；②在低温（-45℃左右）下使微生物细胞快速冷冻；③在真空条件下使冰升华，以除去大部分的水。
2、材料菌株待保藏的各种菌种。
试剂2% HCl；脱脂牛奶（20%乳液）、50%甘油。
器具培养皿、5mlEP管、接种环、大三角瓶、高压蒸汽灭菌锅、牛皮纸、酒精灯、恒温培养箱、振荡培养箱、离心机、酒精棉球、安瓿管、标签、移液枪、普通棉、、冻干机。
培养基：LB液体培养基、LB固体平板培养基。
3、主要流程备安瓿管→备脱脂乳→制菌悬液→分装→预冻→真空干燥→封管保藏4、操作方法4.1准备安瓿管安瓿管先用2%HCl浸泡过夜，再用水洗多次，用蒸馏水冲洗三次，烘干。
管口塞上棉花，用牛皮纸包扎，灭菌备用。
（121℃灭菌30min）4.2制备脱脂乳使用脱脂奶粉配兑脱脂牛奶，配成20%乳液，灭菌（112℃灭菌5min），并做无菌试验后备用。
4.3制菌悬液①平板划线：将活化后的菌株用接种环进行平板划线，对菌种进行纯化。
倒置37℃恒温培养过夜。
②增菌培养：挑取单个菌落接种于液体培养基（3ml左右）中，振荡培养。
③甘油保存：菌液：甘油=0.75:0.75ml的比例，对菌株进行甘油保存（2管）。
④离心：将EP管放入离心机中进行离心，去掉培养基。
⑤配菌悬液：将1ml无菌脱脂牛奶直接加到离心后的EP管内，轻轻搅乱使其均匀地悬浮在牛奶内成悬浮液。
一般要求制成的菌液浓度达108~1010个为宜。
4.4分装用移液枪将悬浮液分装入安瓿管底部，每支安瓿管的装量约为0.2毫升(需4管) 塞上棉花，并贴上标签。
4.5预冻将分装好的安瓿管在冰箱冷冻室进行预冻。
4.6真空干燥预冻以后，将安瓿管放入真空器中，开动真空泵进行干燥。
菌种冷冻保藏
7.4采用酒精喷灯进行封管时，烧的温度要适宜。封管后不要立即放在台面Fra bibliotek，以防受冷撕裂。
附图：泪滴型安瓿管长颈毛细玻璃管
多头岐管
附：1、冷冻保藏改进方法（一）
因真空冷冻干燥器价格比较昂贵，通常抗生素生产厂都采用自制的简单易行办法，可达到同样的目的。即：
为了确保冷冻管内的菌粉不被污染在冷冻室进气口应装有空气过滤器如塞灭菌将取出的冷冻管装入抽真空的耐压橡皮歧管上抽气待真空度抽至133pa001毫米汞拄后再采用酒精喷灯火焰于冷冻管颈部棉塞以下熔封处拉细熔封封管好后要用高频火花器检查各冷冻管的真空情况
菌种冷冻保藏
菌种保藏对于生物制药是一项重要的基础工作。要使菌种长期保藏，且其生物学性状和遗传性质不变，必须选择适宜的载体和更稳定的保藏方法。菌种保藏无论哪种方法，其原理都是创造一个抑制细胞代谢的环境，即低温、干燥、缺氧、缺乏营养，使新陈代谢活动处于高度静止状态。在众多的菌种保存方法中，相对所需保藏环境，冷冻真空干燥法（即冷冻管保藏）是目前保藏方法中应用最为广泛最为有效的一种。
6.6预冻
因为迅速超低温预冻可保持菌体细胞结构成份原状，利于细菌存活。故将分装好的冷冻管及指示管置于低温冰箱冷冻室-70℃下快速冷冻过夜。无低温冰箱可用冷冻剂如干冰（固体CO2）酒精液或干冰丙酮液，温度可达-70℃。也可用液氮。将冷冻管插入冷冻剂，只需冷冻4—5分钟，即可使悬液结冰。也可用液氮预冻。还可用低温冰箱-80℃预冻1～2小时后转入冷冻真空干燥。
6.10冷冻保藏
封管合格的冷冻管置冰箱-20℃避光处作长期保存。较低的保藏温度(-20～-70℃)对于菌种的长期稳定更好。
7.注意事项
真空冷冻冷藏保藏菌种
冻干保藏
• 冷冻干燥的基本方法：是通过在减压条件下使 冻结的细胞悬液中的水分升华，使培养物干燥 。此法是微生物菌种长期保藏的最为有效的方 法之一。 • 冷冻干燥过程中必须使用冷冻保护剂，目前国 内常用脱脂乳和蔗糖，国外尚有运用动物血清 等的。 • 大部分微生物菌种可以在冻干状态下保藏10 年之久而不丧失活力。而且经冻干后的菌株无 需进行冷冻保藏，便于运输。
冬虫夏草菌种保藏----活化
冻干保藏菌种的活化: 从4 ℃冰箱中取出安培管，使温度升至室温。用酒精擦拭安培管上 部，将安培管口在火焰上烧热，用无菌棉签沾酒精在顶部擦一圈 ，顶部出现裂纹时，用镊子敲开顶部。取出干粉，将菌种与保护 剂的干粉一同置于20． 0 ml 无菌水中溶解稀释，用移液枪吸取 0.1ml 菌悬液涂布到新鲜平板培养基上培养，观察菌苔萌发、满管 时间及长势。
冬虫夏草菌种保藏---操作
冷冻真空干燥保藏: 将生长旺盛的斜面菌苔转接于液体培养基中， 25 ℃下置于140 r /min 摇瓶培养3 d，得到均匀的菌丝小球。用移液枪取菌丝球于安 培管中，用无菌针管注入2． 0 ml 所选保护剂，用无菌棉签封口， 阶段冷冻，分布于4 ℃冰箱中预冷30 min，－ 20 ℃冰箱中预冻2 h ，－ 80 ℃冰箱预冻24 h，然后将冻干室隔板取出预冻，再同时迅 速置于真空冷冻干燥机内，当冷凝室温度达到－ 40 ℃时抽真空， 于10 Pa 真空压强条件下干燥24 h。当菌种干燥为浅黄色疏松固体 时，取出安培管，用酒精喷灯从安培管颈部熔封，于4 ℃冰箱冷藏 。
(3)在安瓿中加入0.5～1ml营养液体培养基，慢慢 旋转安瓿，使冻干菌种复水。然后将此转接到 一含有再生培养基的无菌试管中，或直接接种 琼脂斜面或涂布平板。 (4)在指管中冻干的菌种通常为絮粉状，可以将此 直接振落入盛有l～2ml液体培养基的试管中， 轻轻振荡5～l0min，然后用此悬液接种适宜的 再生培养基。
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菌种的保存：真空冷冻干燥法
1准备安培管用于真空冷冻菌种保藏的安培管宜采用中性玻璃制造，形状可用长颈球形底的，亦称泪滴型安培管。
大小要求外径6～7.5mm，长105 mm，球部直径9～11 mm，壁厚0.6～1.2 mm，也可用没有球部的管状安培管。
先用2%盐酸浸泡8～10h，再经自来水冲洗多次，用蒸馏水涮洗2～3次，烘干；在每管内放入打好菌号及日期的标签，字面朝向管壁，管口塞好脱脂棉塞，121℃下高压灭菌20分钟，备用。
2准备菌种用真空冷冻干燥法保藏的菌种保藏期可长达几年甚至几十年，为了不出现差错，所用菌种纯度要高，而且菌龄要适宜。
细菌和酵母菌的菌龄要求超过对数生长期，若用对数生长期的菌种进行保藏，其存活期反而降低。
一般细菌的菌龄要求24～48h；酵母菌为3d；形成孢子的微生物则宜保藏孢子；放线菌和丝状真菌菌龄为7～10d。
3保护剂的选择和准备选取新鲜牛奶作为保护剂，牛奶要先脱脂，用离心方法去除上层油脂，115℃下高压蒸汽灭菌25min，备用。
4菌种准备及分装菌种要求为生长良好的纯种，菌龄以处于稳定期为好，孢子是新鲜的。
每支长好的斜面加2～3ml保护剂，用接种环将菌苔轻轻刮起(注意勿刮起培养基)，制成菌悬液。
如用液体培养的菌种，则需经离心收集和用灭菌生理盐水洗涤细胞，收集的菌体用保护剂悬浮制成菌悬液。
悬液中菌数要求达到108～1010个/ml为宜。
悬液制备完成尽快分装和冻结。
分装安瓿时可用灭菌的长滴入安瓿管底部，每管分装量约0.1～0.2毫升，分装安瓿管时间尽量要短，最好在1-2小时内分装完毕并预冻。
分装时应注意在无菌条件下操作。
5 预冻-80℃冰箱预冻1～2小时。
6冷冻干燥将冷冻后的样品安瓿管置于冷冻干燥机的干燥箱内，开始冷冻干燥，时间一般为8-20小时。
终止干燥时间应根据下列情况判断：①安瓿管内冻干物呈酥块状或松散片状；
②真空度接近空载时的最高值；③选用1-2支对照管，其水份与菌悬液同量，视为干燥完结。
7封口抽真空干燥后，取出安培瓶，接在封口用的玻璃管上，可用L形五通管继续抽气，约10min即可达到26.7Pa（0.2mmHg）。
于真空状态下，以煤气喷灯的细火焰在安培管颈中央进行封口。
8保藏安瓿管保藏在-20℃冰箱里。
9活化如果要从中取出菌种恢复培养，可先用75%酒精将管的外壁消毒，用镊子敲下已开裂的安瓿管的顶端，使管子破裂，在安瓿管中加入0.5～1ml液体培养基，慢慢旋转安瓿管，使冻干菌种复水，然后直接接种到琼脂斜面或涂布平板。