两种微生物提取技术确定初始污染菌数的比较

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平均数
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表 2 琼脂覆盖法检测酒精片初始污染菌结果
样品号 非选择性需氧菌 样品号 ( cfu /件 )
霉菌 累计后细菌总数
( cfu /件 )
( cfu /件 )
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# 252#
Ch inese Journa l o f D isinfection 2009; 26( 3)
文章编号: 1001- 7658( 2009) 03- 0252- 02
=论 著 >
两种微生物提取技术确定初始污染菌数的比较
方菁嶷 张同成
( 苏州大学医学部, 苏州 215123)
提要 目的 比较两种 微生物提取技术对初始污染菌数 结果的影 响。方法 依据 IS011737- 1: 2006标准 方法分
本研究目的虽然在于比较两种检测方法, 但对 于含有杀菌成分的样品是否需要在培养基中加入中 和剂值得思考。因为含有杀菌成分的样品直接接种 到培养基中, 其残留消毒剂会抑制细菌生长, 部分存 活菌不能生长从而不能反映样片上实际污染菌数。 因此, 在对含消毒剂的样品进行污染菌数检测时, 需 要使用化学中和剂或其他去除残留消毒剂的方法。
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
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注: 两组细菌 总数的成 组 t 检验结果: t= - 01692, A= 01 103。 显著 性检验以 A= 01 05为标准, 提示两组结果差异无显著意义。
1 方法
111 实验准备 试验观察的酒精片规格为 5cm @ 4cm @ 015mm
无纺布, 浸湿 75% 酒精制成, 用于局部皮肤消毒, 江 苏省健尔康医用敷料有限公司提供。试验涉及到的 设备主要有压力蒸汽灭菌器、超净工作台、旋涡混合 器等。 主要 试 剂用 到 胰 酶解 大 豆 酪蛋 白 胨 琼脂
别用涡旋式混合和琼脂 覆盖两种提取技术酒精片初始污染菌数进行了检测比较。结果 两组细菌总数 t检验结果
无显著差异, 但琼脂覆盖提取技术检出率为 100% , 涡旋 式混合 提取技术 的检出 率为 10% 。 结论 对于初 始污染
菌较低、构型合适的样品选择大小合适的平皿直接用琼脂覆盖法提取微生物 , 能提高检出率, 获得更客观的结果。
2 结果
211 涡旋式混合法检测结果 检测结果表明, 依据检出率公式计算, 涡旋式混
合法从 10份需氧菌样品中检出 1份阳性, 平均检出 菌数 1 cfu /件, 阳性检出率为 10% ( 表 1)。 212 琼脂覆盖法检测结果
结果表明, 按上述公式计算, 琼脂 覆盖法从 10 份需氧菌样品中检出 10份阳性, 平均检出菌数 116 cfu /件, 阳性检出率为 100% ( 表 2)。
参考文献
112 ISO 11737- 1: 2007 S terilizat ion of m ed ical devices- m icrob iolog-
ical m ethods - part 1: d eterm inat ion of a popu lat ion of m icroorganism s on produ cts. 2007: 24 ~ 26.
琼脂覆盖是在产品表面涂上熔化的琼脂培养基 ( 最高温度在 45e ), 培养至生成可见菌落, 当生物 负载低和在产品构型合适时特别适用。由于样品不 需要稀释 (洗脱 ), 结果不需要乘以稀释倍数, 因此 结果较真实。其缺点是不能同时获得一件样品上的 需氧菌和霉菌数, 细菌总数需要由两件 ( 或更多 ) 样 品累加, 单件样品细菌总数存在误差, 并且由于需要 更多样品不适于贵重样品的检测。同时菌落在琼脂 介面散布、琼脂干燥、可能存在的厌氧菌等都是潜在 的不利因素。
表 1 涡旋式混合法检测酒精片初始污染菌结果
样品号 非选择性需氧菌 ( cfu /件 )
霉菌 ( cfu /件 )
细菌总数 ( cfu /件 )
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3 讨论
涡旋式混合是将检测标本浸于装有已知体积洗 脱液的密封容器中, 将容器靠压在旋转混合器的旋 转垫上以对所用的容器形成涡旋, 同时对混合时间 和混合器的速度加以规定。该方法操作简单快捷, 在初始污染菌检测中被广泛运用, 特别适用于具有 规则表面的小样品。涡旋混合法缺点是由于抽样误 差的存在, 对于初始污染菌数较低的样品容易产生 阴性结果, 以本次实验为例, 涡旋式混合法对非选择 性需氧菌检出率仅为 10% , 远远低于琼脂覆盖法对 需氧菌的检出率 100% 。当然由于微生物在不同材 料上的黏附能力不同, 涡旋混合的时间和速度也是 值得探讨的问题。
1作者简介 2 方菁嶷 ( 1975 - )女, 江苏苏州人, 医学硕士, 助 理实验 师, 从事微生物学教育和医疗产品检验工作。
( T SA )和 萨布罗右旋糖琼脂 ( SDA )等。 112 方法 11211 涡旋式混合法 将 10件酒精片样品以无菌 操作分别转移至 10 支各装有 10 m l洗脱液的试管 中, 密封后置于旋涡混合器中以 2800次 /m in 的速 度振荡 2 m in。取产品洗脱液 1 m ,l 接种无菌平皿一 式 2份, 每个平皿注入 20 m l TSA, 置于 35e 培养 72 h, 检 测 计数 非 选 择性 需 氧 菌。另 取 产 品洗 脱 液 1 m ,l 接种无菌平皿, 一式 2 份, 每 平皿注入 20 m l SDA, 于 25e 培养 120 h, 检测计数霉菌。计算出每 件样品的菌数 ( cfu /件 ) 。 11212 琼脂覆盖法 将 20件酒精片样品以无菌操 作分别转移至 20个平皿中, 其中 10个样品每个平 皿倾注 20 m l TSA, 置于 35e 培养 72 h, 进行非选择 性需氧菌 检测; 另 10 个 样品每 个平 皿注 入 20 m l SDA, 置于 35e 培养 120 h, 进行霉菌检测。计算出 每件样品的菌数 ( cfu /件 )。 11213 污染菌数计算 按菌落计数原则进行计数, 并将个位数对应的两件样 品的需氧菌和霉 菌数累
( 2008- 09- 25 收稿 )
中国消毒学杂志 2009年第 26卷第 3期
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计, 作为一件样品的菌数 ( cfu /件 )。计算菌数时, 以 生长菌落数乘以 10, 当菌数 < 1时, 则以 < 10作为 计算结果。细菌检出率 = 阳性结果个数 /检测个数 @ 100% 。
方法 1的非选择性需氧菌检出率仅为 10% (检 出率 = 阳性结果个 数 /检测 个数 @ 100% = 1 /10 @ 100% = 10% ) , 远远低于方法 2的需氧菌的检出率 100% (检出率 = 阳性结果个 数 /检 测个数 @ 100% = 10 /10 @ 100% = 100% ) 。
FANG J ing - yi , ZHANG T ong - cheng
( M ed ica l Schoo l of Soo chow U nivers ity, Soochow, Jiangsu 215123, Ch ina)
Abstrac t O b jective T o compare the e ffects between tw o m icroorgan ism remova l techn iques on results o f determ in ing the initial bioburden. M eth ods A ccording to IS011737- 1: 2006 standard m e thods, vortex m ix ing m ethod and agar ove rlaying m ethod w ere used to gets b ioburden from a lcoho l pad, and the results were com pa red. Re su lts T he t- test showed no sign ificant difference betw een the tota l bacter ia l coun t o f the tw o groups, but the detec tab le rate of vortex m ix ing m ethod w as 10% and that o f the agar overlay ing m ethod was 100% . Conclusion W hen the in itia l bioburden is low and the configura tion o f the product is su itab le, the agar overlay ing m e thod can increase the detectable ra te and achiev e ob jective resu lts. K ey word s m icroorganism removal technique; b ioburden; vortex m ix ing; agar overlay ing
无论是为了确立灭菌过程的处理程度, 还是用 于生产过程的常规控制, 选择一个合适的微生物估 测方法以获得较为精确的生物负载值都非常重要。 通过统计分析, 两组细菌总数 t检验结果无显著差 异, 说明两种结果均客观可信。但是通过检出率及 细菌总数具体数值比较, 琼脂覆盖方法得到的结果 更客观。对于初始污染菌数较低, 构型合适的样品, 选择大小合适的平皿直接 用琼脂覆盖法提 取微生 物, 充分混匀, 能提高检出率, 获得更客观的结果。
关键词 微生物提取技 术; 初始污染菌; 涡旋式混合; 琼脂覆盖
中图分类号: R 187. 1
文献标识码: A
COM PARASON BETW EEN TW O M ICROORGAN ISM REMOVAL TECHN IQUES IN DETERM IN ING THE IN ITIAL BIOBURDEN
初始污染菌量也称之为生物负载 ( b ioburden) , 是指一件产品及其包装上存活的微生物总数。由于 医疗器械的多样性, 期望通过一种方法适合任何器 械的微生物估测很难做到, 尤其是从器械上提取微 生物的技术受器械的大小、结构、性质等影响很大。 对此, ISO11737- 1: 2006标准推荐了一系列供选用 的提取方法 112。本研究以酒精片为实验对象, 用涡 旋式混合法和琼脂覆盖法两种技术提取微生物的结 果进行了比较观察。