HE染色方法与步骤吐血整理
H.E染色方法
H.E染色二甲苯：AR（国药）/500ml乙醇：AR（国药）/500ml苏木素： Leagene伊红： Leagene中性树胶：国药石蜡切片1. 二甲苯（Ⅰ）15 min2.二甲苯（Ⅱ）15 min需准备二甲苯两份，单独标记使用. 后面步骤中100%乙醇（Ⅰ）与100%乙醇（Ⅱ）同理。
3.梯度乙醇3.1.100%乙醇（Ⅰ）2 min3.2.100%乙醇（Ⅱ） 2 min3.3. 95%乙醇（Ⅰ） 2 min3.4.95%乙醇（Ⅱ） 2 min3.5. 80%乙醇 2 min3.6. 70%乙醇 2 min此步骤使用的梯度乙醇需单独配置，不宜与下一步乙醇混用4. 自来水冲洗 5 min5.苏木素10 min6. 自来水冲洗10 min7.1%盐酸乙醇30 s盐酸-乙醇配制: 浓盐酸1ml，70%乙醇99ml。
8. 自来水冲洗10min9. 1%伊红10min10. 自来水冲洗1min11. 梯度乙醇11.1 70%乙醇 2 min11.2 80%乙醇 2 min11.3 95%乙醇（Ⅰ） 2 min11.4 95%乙醇（Ⅱ） 2 min11.5 100%乙醇（Ⅰ） 2 min11.6 100%乙醇（Ⅱ） 2 min12. 二甲苯（Ⅰ）10 min13. 二甲苯（Ⅱ）10 min14. 中性树胶封固树胶使用量根据组织面积大小决定，一般为三滴左右染色步骤依次进行，每次换到新染色液前需用吸水纸擦干玻片，注意不要触碰组织冰冻切片1. 苏木素染色10 min2. 自来水冲洗10 min冰冻切片易脱，自来水洗时水流不宜过大3. 1%盐酸乙醇30 s4. 自来水冲洗10min5. 1%伊红10min6. 自来水冲洗1min7. 梯度乙醇7.1 70%乙醇 2 min 7.2 80%乙醇2 min7.3 95%乙醇（Ⅰ） 2 min7.4 95%乙醇（Ⅱ） 2 min7.5 100%乙醇（Ⅰ）2 min7.6 100%乙醇（Ⅱ） 2 min8. 二甲苯（Ⅰ） 5 min9. 二甲苯（Ⅱ） 5 min10. 中性树胶封固。
HE 染色的步骤
HE 染色的步骤
待干燥后的切片进行HE 染色，具体操作如下：1、脱蜡：室温条件下，将切片
夹于弹簧夹上，然后置于二甲苯Ⅰ→二甲苯Ⅱ（各10 min）→无水乙醇：二甲苯（1：1、3 min）；2、下行梯度酒精复水：无水乙醇Ⅰ→无水乙醇Ⅱ→95%乙醇→85%乙醇→70%乙醇→50%乙醇（各3
~
5 min）；3、苏木素染色：将脱水后的切片置于苏木素内染
色（15 min），然后蒸馏水洗涤 2 次；4、盐酸分化：用0.25%盐酸快速分化；5、蓝化：将切片置于30℃左右的自来水中蓝化（20 min）；6、上行梯度酒精脱水：50% 乙醇→70%乙醇→85%乙醇→95%乙醇（各3
~
5 min）；7、伊红染色：将切片置于伊红染
液中染色（15S）；8、脱水：95%乙醇（5 min）→无水乙醇Ⅰ（10 min）→无水乙醇Ⅱ（10 min）→无水乙醇：二甲苯（1：1、3 min）9、透明：二甲苯Ⅰ（10 min）→
二甲苯Ⅱ（10 min）；10 、封片：用中性树脂胶将切片封好即可。
培养细胞的H·E染色
实验步骤（二）
以流动的自来水洗 加入0.5%氨水溶液进行返蓝处理（数十秒） 以流动的自来水洗后观察，效果好则以蒸馏水稍洗 加入伊红染液染色（数秒） 以蒸馏水洗 观察并记录（细胞核呈紫色、细胞质呈粉红色，层次感
分明）
注意：每步操作中都应随时镜检
保持湿润 不清洗干净后，按要求放置
实验中的废液请倒入废液桶中
实验结束后，请将各种试剂统一收回到最后一条实 验台上，托盘中的物品清洗干净后，请放置在原处
4. 淡氨水：0.5mL氨水、100mL自来水
5. 伊红染液：0.5g伊红B、100mL80%乙醇
实验步骤（一）
镜检：观察并记录细胞状态 吸弃培养基，以PBS溶液（1mL）漂洗1-2次 以固定剂固定15分钟 吸弃固定剂，以蒸馏水洗 加入苏木精染液（1mL，可重复使用）染色十数分钟
（随时镜检，以确定染色时间） 以流动的自来水洗 加入0.5%盐酸酒精溶液进行分色（数秒） 以蒸馏水洗
培养细胞的 H·E染色
H·E染色
苏木精 伊红
试剂
1. 4%多聚甲醛溶液
2. 苏木精染液
苏木精0.5g，无水乙醇10mL 硫酸铝钾25g，蒸馏水150mL 完全溶解后，混合均匀，加热煮沸3－5min，加入蒸馏水至500mL，
最后加入0.1g碘酸钠
3. 盐酸酒精溶液：0.5mL盐酸、100mL 70%乙醇
he染色的操作流程原理
he染色的操作流程原理下载温馨提示:该文档是我店铺精心编制而成，希望大家下载以后，能够帮助大家解决实际的问题。
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将组织样本迅速放入固定液中，以防止组织自溶和腐败。
HE染色步骤[推荐]
![HE染色步骤[推荐]](https://img.taocdn.com/s3/m/645e26c84793daef5ef7ba0d4a7302768f996f61.png)
HE染色步骤[推荐]
染色是加入染料将细胞或组织着色的过程。
HE染色是指使用
血红蛋白染成红色，细胞核染成蓝色的染色方法。
HE染色步骤如下：
1. 取制好的玻片（细胞或组织已固定在玻片上），用甲醇或乙醇进行脱水，使细胞或组织变得透明。
2. 将玻片放入染料盒中，加入苏丹三液（血红蛋白染料）浸泡。
时间通常为5-10分钟。
洗净玻片以去除多余的染料。
3. 将玻片放入氧化性酸液中（酸性洗涤液或稍微含有酒精的酸性水溶液），将苏丹三液中的铁离子还原成溶于水的亚铁离子。
时间通常为1-2分钟。
4. 接下来，将玻片放入碱性染色液中（含有甲苯重组溶液和酸性洗涤液的甲苯重组溶液），染色液中的亚铁离子被氧化成沉淀（血红蛋白）。
5. 最后，将玻片漂洗并脱水，然后用透明介质将玻片封闭，使其防止氧化。
通过HE染色，可以使细胞核染成蓝色，血红蛋白染成红色，
从而在显微镜下清晰地观察细胞或组织的结构和特征。
这是一种常用的组织学染色方法。
HE染色方法与步骤吐血整理
HE染色方法与步骤吐血整理染色是一种常见的实验技术，用于观察和分析生物样品中的细胞或组织结构。
HE染色是一种常用的组织和细胞染色方法，它能够同时染色细胞核和细胞质，因此得名HE（hematoxylin and eosin）染色。
下面是HE染色的步骤：1.染色前的准备工作：-选择合适的组织样品，通常是已固定和包埋的组织切片。
-准备好需要使用的试剂和设备，包括显微镜玻片、切片刀、染色盘、醇和蜡解剂、染色液和显微镜。
-将切片从包埋蜡中去蜡，并通过浸泡在蜡解剂中来溶解蜡质。
2.组织切片的处理：-将组织切片通过水洗涤，去除蜡解剂和剩余的蜡质。
-将切片通过不同浓度的醇溶液进行脱水处理，使得切片逐渐转移到无水状态。
-将脱水处理后的切片通过透明质量更好的试剂（如亚硫酸氢钠或甘油）进行透明处理，以利于细胞的观察。
3.组织切片的染色：-首先进行碱性染色，即将切片浸泡在染色盘中的伊洛酮溶液中，伊洛酮是一种天然的染色物质，能够与细胞核结构中的DNA结合，使细胞核染色为暗蓝色。
-然后进行酸性染色，即将切片浸泡在染色盘中的苏木精溶液中，苏木精是一种带正电荷的染色物质，能够与细胞质结构中的负电荷部分结合，使细胞质染色为粉红色。
4.组织切片的脱水和封片：-将染色后的切片通过不同浓度的醇溶液进行脱水处理，使得切片从水状态逐渐转移到无水状态。
-将切片在醇溶液中固定一段时间，然后转移到透明的试剂（如苏木精和二甲苯混合溶液）中进行浸泡。
- 最后将切片取出，放在显微镜玻片上，滴入固定剂（如Canada Balsam）并加盖玻片，使切片固定在玻片上。
5.显微镜观察和分析：-使用显微镜观察染色后的组织切片，并通过不同增大倍数的镜头进行详细观察。
-根据观察到的细胞和组织结构，进行分析和研究，并将观察结果记录下来。
需要注意的是，HE染色是一种简单、快速且广泛应用的染色方法，但在不同类型的组织和细胞中可能会有不同的染色效果。
因此，在进行HE染色时，需要根据具体实验要求和样品的特点，进行相应的优化和调整。
[论文]HE染色法
![[论文]HE染色法](https://img.taocdn.com/s3/m/ac04872d86c24028915f804d2b160b4e767f81c8.png)
HE染色法HE染色法整个染色过程包括五个内容：脱蜡,染色,脱水,透明和封固。
(一)脱蜡:1.从温箱中取出烤干的切片,立即投入二甲苯中脱蜡5～10min(可在二瓶中进行),脱蜡时间长短取决于蜡是不彻底溶解。
气温低可延长时间,气温高可适当缩短时间或在温箱中加速脱蜡。
2.移入无水酒精(100%)(二瓶)中,约2min。
3.移入90%酒精中(二瓶),约2min。
4.移入80%酒精中(二瓶),约2min。
5.移入70%酒精中,约2min。
6.移入水中,洗去酒精,约2～3min。
7.移入蒸馏水中,约2min。
(二)染色:1.移入苏木素中,浸染8～15min,一般以稍深染为宜。
2.移入水中,洗去苏木素和浮色,约1～2min。
3.移入分化液(1%盐酸酒精)中,分化几秒至30秒钟, 使切片褪色至淡兰红色即可。
分化的作用,可使细胞浆兰色脱去,而细胞核更加清晰,鲜丽,分化不足时,胞浆带兰,胞核过染,分化过度时,胞核太淡,难以辩认,可再退回苏木素染液, 延长一定时间。
4.移入流水中,洗涤30～60min,使组织呈鲜兰色或天兰色(兰化)。
5.移入伊红液中,浸染2～5min,如着染缓慢 , 可在伊红液中加入冰醋酸 (100ml伊红液加1～2滴冰醋酸)以助染。
6.移入水中,洗去伊红浮液,并用纱布擦净玻片上的多余染料。
(三)脱水:1.吸去玻片上的水分后多入80%酒精中,(二瓶)脱水,约1～2min, 如在酒精中褪色很快时,可迅速移入90%酒精或返回伊红液中复染。
2.移入90%酒精中(二瓶)脱水,约2～4min。
3.移入无水酒精(100%酒精)(二瓶)彻底脱水,约4～8min。
(四)透明1.移入二甲苯Ⅰ中透明3～5min。
2.移入二甲苯Ⅱ中透明5～10min。
(五)封固:用树胶封固,先从二甲苯Ⅱ中取出切片,将组织外围的二甲苯迅速擦去,在滴上一滴树胶于组织片上,然后取干净的盖玻片,仔细加在封固剂上,慢慢压平, 使盖片位置适中。
切片封固后,放在温箱中烤干,或平置凉干后装盒。
he染色流程步骤
he染色流程步骤HE 染色啊，这可是病理实验中的一项重要技术呢！就好像是给组织细胞精心打扮一番，让它们能更好地展现在我们眼前。
首先得准备好切片，这就像是给模特准备好展示的舞台。
切片要切得薄而均匀，就像裁衣服一样，得有好手艺。
然后把切片放到烤片机上稍微烤一下，让它能稳稳地待在那儿，就像给它定个型。
接下来就是染色的关键步骤啦！先把切片放到苏木精溶液里泡一泡，这苏木精就像是神奇的魔法药水，能让细胞核变得蓝汪汪的，特别好看。
就好像给细胞核穿上了一件蓝色的漂亮衣服。
染完细胞核，就得让细胞质也美起来呀。
这时候就要用到伊红溶液啦，把切片放进去，细胞质就会染上那鲜艳的红色，哇，一下子就生动起来了，就像给细胞质化了个美美的妆。
染完色可还没完事儿呢！还得经过一系列的脱水、透明步骤。
就好像给化好妆的模特做最后的整理，让一切都更加完美。
脱水呢，就像是把多余的水分挤出去，让切片变得更清爽。
透明呢，则像是给切片罩上一层薄薄的面纱，让它更有朦胧美。
最后一步就是封片啦！把切片用盖玻片封起来，就像是给模特穿上了一件华丽的外套，保护好它。
你说这 HE 染色是不是很神奇呀？就这么一步步的，把那些原本我们肉眼很难看清的组织细胞变得清晰又漂亮。
它就像是一个小小的魔法，让我们能更好地了解身体内部的奥秘。
想想看，如果没有 HE 染色，我们怎么能那么清楚地看到细胞的结构和形态呢？怎么能对疾病做出准确的诊断呢？它可是病理诊断的重要手段之一呢！所以啊，一定要好好掌握 HE 染色的流程步骤，这可关系到我们对生命的探索和了解呢！可不能马虎哟！这就像是学一门手艺，得用心去学，才能学好。
你说是不是呢？你要是学会了这一手，那可就厉害了，感觉就像掌握了打开生命奥秘大门的钥匙呢！。
HE染色方法与步骤吐血整理
HE染色方法与步骤吐血整理HE染色试剂配置A：0.5~1%的伊红酒精溶液：称取伊红Y0.5~1g，加少量蒸馏水溶解后，再滴加冰醋酸直至浆糊状。
以滤纸过滤，将滤渣在烘箱中烤干后，以95%酒精（即工业酒精，如果不怕浪费，用无水乙醇配制也可）100毫升溶解。
B：苏木素染液配方：(配制3000ml，可按比列减少)苏木精6g无水乙醇100ml硫酸铝钾150g蒸馏水2000ml碘酸钠1.2g冰醋酸120ml甘油900ml配制方法：将苏木素溶于无水乙醇，再将硫酸铝钾溶于蒸馏水，溶解后将甘油倾入一起混合，最后加入冰醋酸和碘酸钠。
C：1%盐酸酒精分化液：将1毫升浓盐酸加入99毫升70%酒精中即可。
染色流程(1)二甲苯（Ⅰ）15min(2)二甲苯（Ⅱ）15min（3）二甲苯：无水乙醇=1:12min(4)100%乙醇（Ⅰ）5min(5)100%乙醇（Ⅱ）5min(6)80%乙醇5min(7)蒸馏水5min(8)苏木精液染色5min(9)流水稍洗去苏木精液1-3s(10)1%盐酸乙醇1-3s(11)稍水洗10-30s(12)蒸馏水过洗1-2s(13)0.5%伊红液染色1-3min(14)蒸馏水稍洗1-2s(15)80%乙醇稍洗1-2s(16)95%乙醇（Ⅰ）2-3s(17)95%乙醇（Ⅱ）3-5s(18)无水乙醇5-10min(19)石炭酸二甲苯5-10min(20)二甲苯（Ⅰ）2min(21)二甲苯（Ⅱ）2min(22)二甲苯（Ⅲ）2min(23)中性树胶封固注：①第（11）、（12）步可省去，（13）步冲水时间需延长至20-30min。
②第（21）步如果不用石炭酸二甲苯，可改用无水乙醇。
*冷冻切片HE染色步骤：（1）冰冻切片固定10～30s（2）稍水洗1～2s（3）苏木精液染色（60℃）30～60s（4）流水洗去苏木精液5～10s（5）1%盐酸乙醇1～3s（6）稍水洗1～2s（7）促蓝液返蓝5～10s（8）流水冲洗15～30s（9）0.5%曙红液染色30～60s（10）蒸馏水稍洗1～2s（11）80%乙醇1～2s（12）95%乙醇1～2s（13）无水乙醇1～2s（14）石炭酸二甲苯2～3s（15）二甲苯（Ⅰ）2～3s（16）二甲苯（Ⅱ）2～3s（17）中性树胶封固。
HE染色操作流程
HE染色操作流程HE染色（Hematoxylin and Eosin Staining）是一种常用的组织学染色方法，用于观察和诊断组织学切片。
HE染色通过染色剂HE染料的组合，使细胞核染成紫色，胞质染成粉红色，从而揭示组织的结构与形态。
HE染色的操作流程一般包括标本处理、脱水、透明化、分解蜡和染色五个步骤。
下面将详细介绍每个步骤的具体操作。
1.标本处理：首先，将切割好的组织标本放入10%中性缓冲福尔马林进行固定，一般固定时间为24-48小时。
固定后，将组织标本转移到70%乙醇中进行离子交换，使组织中的水分逐渐去除。
2.脱水：将固定的组织标本依次转移到浓度逐渐提高的乙醇溶液中，如80%乙醇、95%乙醇和绝对乙醇，每个乙醇浓度保持15-30分钟。
这个过程称为脱水，目的是逐渐去除组织中的水分，使组织内的乙醇浓度逐渐升高。
3.透明化：将脱水后的组织标本依次转移到透明剂中，如苯并三氮唑、次氯酸、二氯甲烷等。
每种透明剂浓度和时间要根据实验需求进行调整，这个步骤的目标是使组织中的乙醇慢慢溶解，透明度增强。
4.分解蜡：将透明后的组织标本转移到蜡纸中，加热到60-65°C的融点，使固定的组织标本逐渐融化。
蜡纸是由石蜡和植物油混合而成，有助于固定和保护组织的形态。
5.染色：将脱蜡的组织标本依次转移到碱性染料（如血红素）溶液中，染10-15分钟，然后洗净；接着将组织标本转移到酸性染料（如紫杉醇）溶液中，染5-10分钟，然后洗净。
紫杉醇染料使细胞核染色成紫色，血红素染料使细胞胞质染色成粉红色。
最后用安全过滤垫将组织标本封装在玻片上，去除水分，然后用覆盖玻片进行固定。
病理HE染色流程
病理HE染色流程HE染色流程主要分为固定、脱水、清理、浸透、染色、脱色、洗涤和封片几个步骤。
下面将详细介绍每个步骤的操作。
1.固定：将取得的组织标本放入含有10%中性缓冲福尔马林中固定。
固定过程中，福尔马林可与细胞内的蛋白质发生共价结合，固定细胞组织。
2.脱水：将已固定的组织标本放入连续浓度逐渐增高的乙醇溶液（通常为70%、85%和95%乙醇）中脱水，以去除组织中的水分。
每种乙醇中的时间一般为1-2小时。
3.清理：将乙醇脱水后的组织标本放入清理剂（如苯、半乳索甘和二甲苯等）中浸泡，以溶解并除去脂类物质。
清理的时间一般为2个小时。
4.浸透：将清理后的组织标本放入浸透剂（如苯乳、半乳索甘和二甲苯等）中浸泡。
浸透剂可与标本中的清理剂互溶，并在选择性的清理脂质的同时，逐渐溶解脱水的细胞质内部结构。
浸透的时间一般为2个小时。
5.染色：将浸透后的组织标本放入酸性染料和碱性染料的混合物中浸泡。
酸性染料主要染色细胞核，如黑苦味酸铁染料；碱性染料主要染色胞质，如伊红染料。
染色的时间一般为5-15分钟。
6.脱色：将染色后的组织标本放入脱色剂（如乙醇和苯）中浸泡，以去除多余的染色剂。
脱色的时间一般为1-2分钟。
7.洗涤：将脱色后的组织标本用水流洗涤，以除去余留在标本上的脱色剂和染色剂。
8.封片：将洗涤后的组织标本放入玻璃干拭片中，用透明石蜡和玻璃片封住，以保护标本并便于观察。
以上是病理HE染色的主要步骤和操作方法。
HE染色可以清晰地显示出细胞核和胞浆的形态结构，帮助病理学家对组织样本进行诊断和评估。
虽然HE染色流程简单，但操作时需要细心和耐心，以确保染色结果的准确性和可靠性。
HE染色实验步骤
HE染色实验步骤HE染色是一种常用的细胞染色方法，用于染色细胞核和胞质。
以下是HE染色实验的详细步骤：1.组织样本的固定：将组织样本（如组织切片）固定在玻片上，以使其保持形态和结构。
常见的固定剂有甲醛、乙醇等。
将切片置于固定剂中浸泡一段时间，通常为24小时。
2.脱水：将固定的组织样本进行脱水处理，以去除其中的水分。
脱水过程常采用不同浓度的乙醇溶液，从低浓度到高浓度逐渐浸泡，通常为70%乙醇、80%乙醇、90%乙醇和绝对乙醇。
每个乙醇浓度的浸泡时间可以根据需要调整，但通常为2-3分钟。
3.渗透：为了使切片更容易与染料接触并吸收，需要对其进行渗透处理。
常见的渗透剂是亚麻酸，通常在乙醇浓度为90%时进行处理。
将切片放入亚麻酸中浸泡2-3分钟。
4.包埋：将渗透处理后的组织切片逐步置于熔蜡中，使其被包裹在蜡中。
可用化学品如戊二醛蜡、乙蜡等作为包埋材料。
首先，将切片置于低熔点蜡中，如55-60℃的乙蜡，浸泡30分钟至1小时。
然后，将切片置于高熔点蜡中，如60-65℃的戊二醛蜡，浸泡1小时至数小时。
5.包块切割：将包埋的组织块放在切片机中，用刀片切成薄片。
通常切片厚度为4-5μm。
切好的切片将浮在热水中，并从切片机上取出。
6.切片贴片：使用刷子将切片轻轻移至玻片上。
刷子应先浸泡在水中，然后轻轻刷过切片以避免切片损坏。
7.焙烧：将装有切片的玻片放在干燥器中，或将其放在烘箱中进行干燥。
干燥温度和时间可根据需要进行调整，通常为60-70℃，2-3小时。
8. 染色：使用Harris液体染料进行染色。
HE染色中的染料包括酸性染料苏丹Ⅰ（hematoxylin）和碱性染料伊红（eosin），也称为碱性苏丹染料。
将组织样本浸入苏丹Ⅰ染料中，时间为2-5分钟。
然后将其转移到酸性水中漂洗30秒至1分钟，以去除多余的苏丹Ⅰ染料。
接下来，将样本浸入伊红染料中，时间为1-2分钟。
最后，将样本漂洗并在流水下冲洗。
9.脱色：如果染色后的切片颜色过浓，需要进行脱色处理。
he染色步骤HE实验步骤
he染色步骤 HE实验步骤动物病理切片小结[样本处理]动物麻醉后，开胸，暴露心脏，头皮针插入左心室尖，打开37?生理盐水输液装置，从右心耳下沿剪开右心房，灌洗至流出的生理盐水无血(20min)，换4%多聚甲醛固定液灌注(约5min)[固定]4%多聚甲醛固定。
[石蜡切片]取样从固定中取出待切组织，用手术刀切成2mm厚度的小样，装入脱水小盒中，铅笔标号纸条同放入小盒后流水洗30min，蒸馏水浸洗处理Mice:脱水50%乙醇 2-3h170%乙醇 1-2h80%乙醇 1h95%乙醇 2h(1h+1h)100%乙醇 2h(1h+1h)透明二甲苯 35min+35min浸蜡 1h+1h+1h (62?蜡)[HE染色]脱蜡二甲苯? 15min二甲苯? 15min二甲苯:无水乙醇(1:1) 2min无水乙醇? 2min无水乙醇? 2min95%乙醇 2min85%乙醇 2min70%乙醇 2min50%乙醇 2min蒸馏水 5min(如果是DAB染色要抗原修复)HE染色苏木素 6-8min (时间可以延长，现在10-30min)冲洗 1min(反向将载玻片反向冲洗，注意不要脱片)2含1%盐酸的乙醇进行分色(用75%乙醇配)2-3s动作要快氨水反蓝 >10min伊红 10s冲洗固定脱水95%乙醇 2min100%乙醇? 2min100%乙醇? 2min二甲苯? 2min二甲苯? 2min 树胶封片组织浸蜡-常规石蜡切片制作组织经过透明剂的完全透明后，被移放于65?左右熔化的石蜡中，于65?的电热恒温箱中浸渍的过程称为浸蜡。
组织在脱水时，组织中的脂类和类脂等物质在脱水剂的作用下被溶解掉，留下了许多腔隙，许多管腔组织和血管，也有许多腔隙，这些都严重地影响了切片。
组织浸蜡时，由于诱导剂(二甲苯)的作用，石蜡进入到组织的各个角落，并在各个角落中保存下来。
当石蜡包埋后冷却时，这浸入到里3面的石蜡便可起到支撑的作用，而且使组织不致于变形，塌陷等现象，使切片能完整的切出，便于镜下观察。
HE染色的步骤及方法
HE染色的步骤及方法
一、技术简介
苏木精一伊红染色法(hematoxylin-eosin staining),简称HE染色法，石蜡切片技术里常用的染色法之一。
苏木精染液为碱性，主要使细胞核内的染色质与胞质内的核糖体着紫蓝色；伊红为酸性染料，主要使细胞质和细胞外基质中的成分着红色。
易于被碱性或酸性染料着色的性质称为嗜碱性和嗜酸性；而对碱性染料和酸性染料亲和力都比较弱的现象称为中性。
细胞内的酸性物质如细胞核的染色质、腺细胞和神经细胞内的粗面内质网及透明软骨基质等均被碱性染料染色，这些物质称为嗜碱性。
而细胞质中的其它蛋白质如红细胞中的血红蛋白、嗜酸粒细胞的颗粒及胶原纤维和肌纤维等被酸性染料染色，这些物质称为嗜酸型。
脱氧核糖核酸(DNA)两条链上的磷酸基向外，带负电荷，呈酸性，很容易与带正电荷的苏木精碱性染料以离子键结合而被染色。
苏木精在碱性溶液中呈蓝色，所以细胞核被染成蓝色。
伊红是一种化学合成的酸性染料，在水中离解成带负电荷的阴离子，与蛋口质的氨基正电荷的阳离子结合使胞浆染色，细胞浆、红细胞、肌肉、结缔组织、嗜伊红颗粒等被染成不同程度的红色或粉红色，与蓝色的细胞核形成鲜明对比。
二、实验流程
1.将脱蜡至水的切片放入苏木精水溶液中染色数分钟。
2.酸水及氨水中分色，各数秒钟。
3.流水冲洗Ih后入蒸憎水片刻。
4.70%和90%酒精中脱水各10 mine 3・酒精伊红染色液染色2-3 mine
6.染色后的切片经纯酒精脱水，再经二屮苯使切片透明。
7.将已透明的切片滴上加拿大树胶，盖上盖玻片封固。
he染色方法及步骤
he染色方法及步骤HE 染色啊，这可是病理实验里常用的染色方法呢！它就像是给细胞和组织化了个美美的妆，让我们能更清楚地看清它们的模样。
首先呢，得准备好切片。
这切片就像是一张等待上色的画布。
然后把切片放进二甲苯里，让它好好泡个澡，把上面的脏东西都洗掉。
接下来就是染色的关键时刻啦！把切片放进苏木精溶液里，这苏木精就像是神奇的魔法药水，能把细胞核染得蓝蓝的，就像给细胞核戴上了一顶蓝色的小帽子。
染完之后，再用水冲洗一下，把多余的苏木精冲掉。
然后呢，把切片放进盐酸酒精里分化一下，让细胞核的颜色更加清晰、分明。
再用水冲洗干净。
这时候，该伊红上场啦！伊红就像是给细胞穿上了一件红色的外衣，让细胞质变得红红的。
把切片放进伊红溶液里泡一泡，然后再冲洗干净。
经过这么一番折腾，切片就像是化好了妆的美人，变得格外动人啦！你想想啊，这就好像是给细胞举办了一场盛大的化妆舞会。
细胞核穿着蓝色的礼服，细胞质穿着红色的裙子，在显微镜下翩翩起舞。
染完色后，还要把切片进行脱水、透明。
就像是给化好妆的美人再喷上一层定妆喷雾，让妆容更加持久。
最后呢，用中性树胶封片，把这美丽的画面永远地保存下来。
HE 染色方法虽然看起来步骤挺多，但只要我们认真细心地去做，就一定能染出漂亮的切片。
这就像是我们做一件事情，只要有耐心，肯下功夫，就一定能做好。
而且啊，HE 染色对于病理诊断来说可是非常重要的呢！医生们通过观察染色后的切片，就能判断出细胞有没有病变，病情严不严重。
所以说呀，HE 染色可真是个神奇的技术呢！它让我们能更深入地了解细胞的世界，为医学研究和临床诊断提供了重要的帮助。
你说，这是不是很厉害呢？。
he染色步骤及注意事项
he染色步骤及注意事项一、组织固定1.组织取材后应立即进行固定，以防止组织自溶。
常用的固定剂有甲醛、乙醇等。
2.固定时应将组织放入适当的容器中，加入足够的固定剂，确保组织充分浸泡。
3.固定时间根据组织类型和大小而定，一般为数小时至数十小时。
二、切片制备1.固定后的组织需进行脱水、透明和浸蜡等处理，然后进行切片。
2.切片厚度应根据组织类型和染色需求而定，一般为3-5微米。
3.切片应平整、均匀，无皱褶、气泡等缺陷。
三、pH值调节1.在进行HE染色前，需将切片用pH值约为7.2-7.4的磷酸盐缓冲液（PBS）冲洗。
2.pH值调节有助于染色过程中组织的着色和分色。
四、控制分色时间1.HE染色过程中，分色时间对染色效果影响较大。
应严格控制分色时间，确保切片染色均匀、清晰。
2.分色时间过长可能导致切片颜色过深，过短则可能使切片颜色过浅。
五、彻底脱去酒精1.在染色过程中需使用酒精进行脱水，因此染色结束后需用无水乙醇彻底脱去切片中的酒精。
2.脱去酒精有助于提高切片的透明度和染色效果。
六、保持切片湿润1.在整个染色过程中，应保持切片湿润，以防止切片干燥和收缩。
2.可以使用甘油等保湿剂来保持切片湿润。
七、封片注意事项1.染色结束后，需用中性树胶等封片剂将切片封固。
2.封片时应避免气泡和溢胶，以保证切片平整和美观。
八、洗涤步骤1.在染色过程中，需用流水将切片上的染液冲洗干净。
2.洗涤时应彻底，以防止残留染液对切片产生影响。
九、避免空气暴露1.在染色过程中，应尽量避免切片暴露在空气中，以防止氧化和褪色。
2.可以使用湿盒或塑料薄膜等将切片包裹，以减少空气接触。
十、保持切片的湿润1.在储存和运输过程中，应保持切片湿润，以防止其干燥和收缩。
2.可以使用甘油等保湿剂来保持切片湿润。
同时，应避免阳光直射和高温环境，以防止切片褪色和变质。
HE染色的步骤及方法
HE染色的步骤及方法HE染色（hematoxylin and eosin staining）是一种广泛应用于组织学研究与临床病理学中的常规染色方法，用于显示组织和细胞的形态结构、特征和组织的组织学构造。
HE染色的主要步骤包括固定、脱水、透明、浸染、洗涤、脱色、洗涤、著色、酸洗、洗涤和封片等。
下面将详细介绍每个步骤的具体方法。
1.固定：将待染的组织标本放入含有4%至10%的缓冲醛（如10%的中性缓冲醛）中固定。
固定的时间一般为24至48小时，具体时间根据组织的大小和种类而定。
2.脱水：在固定后，将组织标本转移到带有不同浓度的乙醇溶液中进行脱水。
脱水的目的是逐渐将水分从组织中溶解掉，以便更好地进行后续处理。
常用的乙醇浓度为70%、80%、95%、绝对乙醇和绝对乙醇。
3.透明：将脱水的组织标本转移到透明剂中，如苯酚、甘油等。
透明的目的是去除残留的乙醇，并将标本与石蜡相容，以便进行后续处理。
4.浸染：将透明的组织标本转移到硬化的石蜡中，通过加热使其温度达到融点，使组织与石蜡充分浸透。
通常情况下，标本需要浸染多次以确保充分浸透。
5.洗涤：将浸染好的组织放入清洁的容器中，用去离子水或缓冲液轻轻洗涤，以去除未浸透的石蜡。
6. 脱色：将洗净的组织标本放入xylene或但醇溶液中进行脱色，以去除标本中的石蜡。
脱色时间视标本的大小和种类而定，通常为30分钟至1小时。
7.再洗：将脱色的组织标本用去离子水或缓冲液轻轻洗涤，以去除残留的脱色剂。
8. 著色：将洗净的组织标本置于染色剂中进行著色。
HE染色中，常用的染色剂为血红和嗜酸性染料安伊汀（Eosin）。
组织标本一般需在血红染色剂中浸泡2至5分钟，然后脱水，再在安伊汀染色剂中浸泡2至5分钟。
也可根据需要调整具体的染色时间。
9.酸洗：将著色好的组织标本用弱酸性缓冲液进行酸洗，以去除过量的染色剂。
酸洗时间一般为几秒钟至几分钟。
10.再次洗涤：将经酸洗的组织标本用去离子水或缓冲液轻轻洗涤，以去除残留的酸洗液。
he染色步骤HE实验步骤
he染色步骤 HE实验步骤动物病理切片小结[样本处理]动物麻醉后，开胸，暴露心脏，头皮针插入左心室尖，打开37?生理盐水输液装置，从右心耳下沿剪开右心房，灌洗至流出的生理盐水无血(20min)，换4%多聚甲醛固定液灌注(约5min)[固定]4%多聚甲醛固定。
[石蜡切片]取样从固定中取出待切组织，用手术刀切成2mm厚度的小样，装入脱水小盒中，铅笔标号纸条同放入小盒后流水洗30min，蒸馏水浸洗处理Mice:脱水50%乙醇 2-3h170%乙醇 1-2h80%乙醇 1h95%乙醇 2h(1h+1h)100%乙醇 2h(1h+1h)透明二甲苯 35min+35min浸蜡 1h+1h+1h (62?蜡)[HE染色]脱蜡二甲苯? 15min二甲苯? 15min二甲苯:无水乙醇(1:1) 2min无水乙醇? 2min无水乙醇? 2min95%乙醇 2min85%乙醇 2min70%乙醇 2min50%乙醇 2min蒸馏水 5min(如果是DAB染色要抗原修复)HE染色苏木素 6-8min (时间可以延长，现在10-30min)冲洗 1min(反向将载玻片反向冲洗，注意不要脱片)2含1%盐酸的乙醇进行分色(用75%乙醇配)2-3s动作要快氨水反蓝 >10min伊红 10s冲洗固定脱水95%乙醇 2min100%乙醇? 2min100%乙醇? 2min二甲苯? 2min二甲苯? 2min 树胶封片组织浸蜡-常规石蜡切片制作组织经过透明剂的完全透明后，被移放于65?左右熔化的石蜡中，于65?的电热恒温箱中浸渍的过程称为浸蜡。
组织在脱水时，组织中的脂类和类脂等物质在脱水剂的作用下被溶解掉，留下了许多腔隙，许多管腔组织和血管，也有许多腔隙，这些都严重地影响了切片。
组织浸蜡时，由于诱导剂(二甲苯)的作用，石蜡进入到组织的各个角落，并在各个角落中保存下来。
当石蜡包埋后冷却时，这浸入到里3面的石蜡便可起到支撑的作用，而且使组织不致于变形，塌陷等现象，使切片能完整的切出，便于镜下观察。
[整理版]he染色步调
![[整理版]he染色步调](https://img.taocdn.com/s3/m/8803b22b5b8102d276a20029bd64783e09127d2c.png)
HE染色步骤（1）切片在二甲苯中脱蜡5～10分钟。
（2）移入二甲苯和纯酒精（1∶1）混合液中5分钟左右（如经二次二甲苯脱蜡，此步可略）。
（3）入100％、95％、85％、70％酒精，各级为2～5分钟。
最后经蒸馏水转入染液。
（4）苏木精染液染色5～15分钟。
（5）水洗玻片上多余染液，0.5～1％盐酸酒精（70％酒精配制）分色片刻。
镜检控制，直至细胞核及核内染色质清晰为止，约数10秒钟。
（6）流水冲洗15～30分钟，或者在碳酸锂饱和液中短时间碱化或蓝化，即细胞核呈蓝色。
（7）蒸馏水短洗。
（8）0.1～0.5％伊红染液染色1～5分钟，若着色困难，可在每100毫升染液中加入1～2滴冰醋酸，使易着色且不易脱色。
（9）依次经70％、85％、95％、100％酒精脱水，各级为2～3分钟，在95％以下浓度的酒精中伊红易脱色，应适当缩短时间。
（10）二甲苯透明（二次），共约10分钟。
（11）封片：擦去切片周围多余二甲苯，切勿干涸，迅速滴加适量中性树胶，再加盖玻片封固。
4.9 苏木精染液配制配好苏木精染液是HE染色的关键。
苏木精配制有多种配方，关键在于氧化。
如加氧化汞作氧化剂时，要防止氧化过度，同时注意形成的氧化膜污染切片。
加碘酸钠作氧化剂时，就无需把苏木精液煮沸。
要配制自然成熟的苏木精则不需加氧化剂，但要较长时间才能氧化成熟。
不同苏木精染液的染色时间为5～20分钟，自然氧化成熟的苏木精液染色时间可以更长。
* 苏木精染液的配制方法：（1）Harri’s苏木精苏木精 1 g无水乙醇 10 ml硫酸铝钾 20 g蒸馏水 200 ml氧化汞 0.5 g冰醋酸 8 ml分别用无水乙醇溶解苏木精，蒸馏水加热溶解硫酸铝钾，然后两液混合并煮沸，加入氧化汞，继续加热和搅拌至溶液为深紫色，立即用冰水冷却，恢复至室温后过滤备用。
（2）改良Lillie-Mayer’s苏木精苏木精 2.5 g无水乙醇 20 ml硫酸铝钾 5 g蒸馏水 330 ml碘酸钠 250 mg甘油 150 ml冰醋酸 10 ml分别用无水乙醇溶解苏木素，蒸馏水溶解硫酸铝钾，然后两液混合后，依次加入碘酸钠、甘油和冰醋酸。
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HE染色试剂配置A：0.5~1%的伊红酒精溶液：称取伊红Y0.5~1g，加少量蒸馏水溶解后，再滴加冰醋酸直至浆糊状。
以滤纸过滤，将滤渣在烘箱中烤干后，以95%酒精（即工业酒精，如果不怕浪费，用无水乙醇配制也可）100毫升溶解。
B：苏木素染液配方：(配制3000ml，可按比列减少)苏木精6g无水乙醇100ml硫酸铝钾150g蒸馏水2000ml碘酸钠1.2g冰醋酸120ml甘油900ml配制方法：将苏木素溶于无水乙醇，再将硫酸铝钾溶于蒸馏水，溶解后将甘油倾入一起混合，最后加入冰醋酸和碘酸钠。
C：1%盐酸酒精分化液：将1毫升浓盐酸加入99毫升70%酒精中即可。
染色流程(1)二甲苯（Ⅰ）15min(2)二甲苯（Ⅱ）15min（3）二甲苯：无水乙醇=1:12min(4)100%乙醇（Ⅰ）5min(5)100%乙醇（Ⅱ）5min(6)80%乙醇5min(7)蒸馏水5min(8)苏木精液染色5min(9)流水稍洗去苏木精液1-3s(10)1%盐酸乙醇1-3s(11)稍水洗10-30s(12)蒸馏水过洗1-2s(13)0.5%伊红液染色1-3min(14)蒸馏水稍洗1-2s(15)80%乙醇稍洗1-2s(16)95%乙醇（Ⅰ）2-3s(17)95%乙醇（Ⅱ）3-5s(18)无水乙醇5-10min(19)石炭酸二甲苯5-10min(20)二甲苯（Ⅰ）2min(21)二甲苯（Ⅱ）2min(22)二甲苯（Ⅲ）2min(23)中性树胶封固注：①第（11）、（12）步可省去，（13）步冲水时间需延长至20-30min。
②第（21）步如果不用石炭酸二甲苯，可改用无水乙醇。
*冷冻切片HE染色步骤：（1）冰冻切片固定10～30s（2）稍水洗1～2s（3）苏木精液染色（60℃）30～60s（4）流水洗去苏木精液5～10s（5）1%盐酸乙醇1～3s（6）稍水洗1～2s（7）促蓝液返蓝5～10s（8）流水冲洗15～30s（9）0.5%曙红液染色30～60s（10）蒸馏水稍洗1～2s（11）80%乙醇1～2s（12）95%乙醇1～2s（13）无水乙醇1～2s（14）石炭酸二甲苯2～3s（15）二甲苯（Ⅰ）2～3s（16）二甲苯（Ⅱ）2～3s（17）中性树胶封固。
注：第（14）步如果不用石炭酸二甲苯，可改用无水乙醇。
染色结果：细胞核蓝色，胞质、肌纤维、胶原纤维和红细胞呈深浅不一的红色。
4．12切片脱水透明切片经HE染色后，要彻底脱水透明，才能用中性树胶封盖。
如果脱水不彻底，封片后呈白色雾状，镜下观察模糊不清，且容易褪色。
切片1-2级无水乙醇脱水，也可使用石碳酸二甲苯进行脱水。
石碳酸有较强脱水能力，但长时间可使切片脱色，因此要经过多次二甲苯以使石碳酸完全除去。
5.H-E染色评定标准：（1）切片完整，厚度4-6微米，厚薄均匀，无皱褶无刀痕；（2）染色核浆分明，红蓝适度，透明洁净，封裱美观。
4 染色结果编辑细胞核被苏木精染成鲜明的蓝色，软骨基质、钙盐颗粒呈深蓝色，粘液呈灰蓝色。
细胞浆被伊红染成深浅不同的粉红色至桃红色，胞浆内嗜酸性颗粒呈反光强的鲜红色。
胶原纤维呈淡粉红色，弹力纤维呈亮粉红色，红血球呈橘红色，蛋白性液体呈粉红色。
着色情况与组织或细胞的种类有关，也随其生活周期及病理变化而改变。
例如，很多细胞在新生时期胞浆对伊红着色较淡或轻度嗜碱，当其衰老时或发生退行性变则呈现嗜伊红浓染。
胶原纤维在老化和出现透明变性时，伊红着色由浅变深。
Masson染色,用于显示组织中纤维的染色方法之一。
试剂：Regaud 氏苏木精：苏木精1g，95%酒精10ml，甘油10ml，蒸馏水80ml。
将苏木精加入蒸馏水内加温溶解,冷却后加入酒精和甘油,放数日后即可应用。
Masson丽春红酸性复红液：丽春红0.7g，酸性复红0.3g，蒸馏水99ml，冰醋酸1ml。
0.2%冰醋酸水溶液：冰醋酸0.2 ml，蒸馏水100 ml。
1%磷钼酸水溶液：磷钼酸1g，蒸馏水100 ml。
苯胺蓝水溶液：苯胺蓝2g，蒸馏水98 ml，冰醋酸2 ml。
1%光绿水溶液：光绿1g，蒸馏水100 ml。
Masson三色法步骤1．石蜡切片脱蜡至水。
2．铬化处理或去汞盐沉淀（甲醛固定的组织此步可略）。
3．依次自来水和蒸馏水洗。
4．用Regaud苏木精染液或Weigert苏木精液染核5-10min。
5．充分水洗,如过染可盐酸酒精分化。
6．蒸馏水洗。
7．用Masson 丽春红酸性复红液5-10min。
8．以2%冰醋酸水溶液浸洗片刻。
9．1%磷钼酸水溶液分化3-5min。
10. 不经水洗,直接用苯胺蓝或光绿液染5min。
11．以0.2%冰醋酸水溶液浸洗片刻。
12．95%酒精、无水酒精、二甲苯透明、中性树胶封固。
结果：胶原纤维、粘液、软骨呈蓝色（如光绿液染色为绿色），胞浆、肌肉、纤维素、神经胶质呈红色，胞核黑蓝色。
体会与说明：1．控制好染色步骤。
2．组织固定起着很重要的作用，根据不同的固定液可延长或缩短染色时间。
3．0.2%冰醋酸水溶液洗，可使色调清晰鲜艳。
4．磷钼酸水溶液对丽春红、酸性复红有分化作用，分化时镜下控制，肌纤维和纤维素呈红色，胶原纤维呈淡粉红色即可。
天狼猩红染色[试剂配制](1)天狼星红饱和苦昧酸液O．5％天狼星红10ml，苦味酸饱和液90ml。
(2)天青石蓝液天青石蓝B1．25g．铁明矾1．25g，蒸馏水250ml。
溶解煮沸、待冷却过滤加入甘油30ml，然后再加入浓盐酸0．5ml。
[染色步骤](1)中性甲醛液固定组织，石蜡切片，常规脱蜡至水。
(2)人大青石蓝液染5一lOmin。
(3)蒸馏水洗3次。
(4)天狼星红饱和苦昧酸浓染15-30min(5)无水乙醇直接分化与脱水。
Devil二甲苯透明，中性树胶封固。
[注意事项](1)细胞核里染色可以用Harris苏木素染色液谈染。
(2)染色封固后的切片，须及时用偏光显微镜进行观察和照相已保持鲜艳的色彩注：在偏光显微镜下可以观察到四种类型的胶原纤维。
l型胶原纤维：紧密排列，显示很强的双折光性，呈黄色或红色的纤维oll型胶原纤维：显示弱的双折光，呈多种色彩的疏松网状分布。
皿型胶原纤维：显示弱的双折光，呈绿色的细纤维。
lv型胶原纤维：显示弱的双折光的基膜，呈淡黄色。
免疫组化步骤（ABC法）1。
4%多聚甲醛常规灌注固定，取材并置20%蔗糖溶液（4℃）中过夜。
蜡块制作。
切片，贴片。
0.01MKPBS清洗5min×3后；2。
加入配好的0.3%的过氧化氢甲醇溶液（甲醇80ml＋0.01MKPBS 100ml＋30%过氧化氢）30min，以消除内源性过氧化物酶的影响，0.01MPBS清洗5min×3；3。
加入配好的0.3% Triton X100（30% Triton X100＋0.01MKPBS 100ml）30min，以增加细胞的通透性，0.01MKPBS清洗5min×3；4。
加入用血清稀释液（牛血清白蛋白1.00g＋0.01MPBS 100ml＋叠氮纳0.08g）稀释的一抗，4℃存放24-48h；吸去抗体，0.01MKPBS洗5min×3；5。
加入0.01MKPBS稀释的的二抗，室温孵育2h。
0.01MKPBS洗5min×3；6。
加入ABC复合物之类的抗体，室温孵育2h，0.01MKPBS洗5min×3；蒸馏水迅速冲三次；7。
加入显色液，进行免疫组织化学显色，时间一般不超过30min，可不时在显微镜下进行观察，待细胞着色而背底颜色较淡时马上吸去显色液，用蒸馏水迅速冲三次后加入0.01MKPBS终止反应；8。
梯度酒精脱水之后，封片，拍照。
免疫组化SP法步骤：SP(streptavidin-perosidase)法,即链霉菌抗生物素蛋白-过氧化物酶连结法.按标记物质的种类，如荧光染料、放射性同位素、酶(主要有辣根过氧化物酶和碱性磷酸酶)、铁蛋白、胶体金等，可分为免疫荧光法、放射免疫法、酶标法和免疫金银法等。
按染色步骤可分为直接法(又称一步法)和间接法(二步、三步或多步法)；按结合方式可分为抗原—抗体结合，如过氧化物酶-抗过氧化物酶（PAP）法和亲和连接，如卵白素-生物素-过氧化物酶复合物（ABC）法、链霉菌抗生物素蛋白-过氧化物酶连结（SP）法等，其中SP法是最常使用的方法。
一般的sp法步骤啊,具体如下：1.烤片，68℃，20分钟,2. 常规二甲苯脱蜡，梯度酒精脱水；二甲苯I 20min --二甲苯II 20 min--100%酒精I 10min --100%II 10min --95% 5min-- 80% 5min-- 70% 5min3.阻断灭活内源性过氧化物酶：3%H2O2 37℃孵育10min，PBS冲洗3X5min；4. 抗原修复:置0.01M枸橼酸缓冲液（PH 6.0）中用煮沸（95℃，15－20min），自然冷却20min 以上，再用冷水冲洗缸子，加快冷却至室温，PBS冲洗3X5min。
5. 正常羊血清工作液封闭，37℃10 min，倾去勿洗.6. 滴加一抗4℃冰箱孵育过夜，PBS冲洗3X5min（用PBS缓冲液代替一抗作阴性对照）；滴加生物素标记二抗, 37℃孵育30min, PBS冲洗3X5min;7. 滴加辣根过氧化物酶标记的链霉素卵白素工作液，37℃孵育30min, PBS冲洗3X5min;8. DAB/ H2O2反应染色，自来水充分冲洗后，苏木素复染，常规脱水，透明，干燥，封片。
免疫组化（Elivision二步法）：（1）石蜡切片置于67℃烘箱中，烘片2小时，脱蜡至水，用pH7.4的PBS冲洗三次，每次3分钟（3×3’）。
（2）取一定量pH=6.0柠檬酸盐缓冲液，加入微波盒中，微波加热至沸腾，将脱蜡水化后的组织切片置于耐高温塑料切片架上，放入已沸腾的缓冲液中，中档微波处理10分钟，取出微波盒流水自然泠却，从缓冲液中取出玻片，先用蒸馏水冲洗两次，之后用PBS冲洗2×3’。
(注：不是所有的抗体都需要微波修复的，视具体情况而定)（3）每张切片加1滴3% H2O2，室温下孵育10分钟，以阻断内源性过氧化物酶的活性。
PBS冲洗3×3’。
（4）除去PBS液，每张切片加1滴相应的第一抗体（相应稀释倍数），室温下孵育2小时。
（5）PBS冲洗3×5’。
除去PBS液，每张切片加1滴聚合物增强剂（试剂A），室温下孵育20分钟。
PBS冲洗3×3’。
（6）除去PBS液，每张切片加1滴酶标抗鼠/兔聚合物（试剂B），室温下孵育30分钟。
PBS冲洗3×5’（7）除去PBS液，每张切片加1滴新鲜配制的DAB液，显微镜下观察5分钟。
（8）苏木素复染，0.1%HCl分化，自来水冲洗，蓝化，切片经梯度酒精脱水干燥，二甲苯透明，中性树胶封固，晾干后观察。