HE染色方法与步骤吐血整理
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HE染色
试剂配置
A:0.5~1%的伊红酒精溶液:
称取伊红Y0.5~1g,加少量蒸馏水溶解后,再滴加冰醋酸直至浆糊状。以滤纸过滤,将滤渣在烘箱中烤干后,以95%酒精(即工业酒精,如果不怕浪费,用无水乙醇配制也可)100毫升溶解。
B:苏木素染液配方:(配制3000ml,可按比列减少)
苏木精6g
无水乙醇100ml
硫酸铝钾150g
蒸馏水2000ml
碘酸钠1.2g
冰醋酸120ml
甘油900ml
配制方法:将苏木素溶于无水乙醇,再将硫酸铝钾溶于蒸馏水,溶解后将甘油倾入一起混合,最后加入冰醋酸和碘酸钠。
C:1%盐酸酒精分化液:将1毫升浓盐酸加入99毫升70%酒精中即可。
染色流程
(1)二甲苯(Ⅰ)15min
(2)二甲苯(Ⅱ)15min
(3)二甲苯:无水乙醇=1:12min
(4)100%乙醇(Ⅰ)5min
(5)100%乙醇(Ⅱ)5min
(6)80%乙醇5min
(7)蒸馏水5min
(8)苏木精液染色5min
(9)流水稍洗去苏木精液1-3s
(10)1%盐酸乙醇1-3s
(11)稍水洗10-30s
(12)蒸馏水过洗1-2s
(13)0.5%伊红液染色1-3min
(14)蒸馏水稍洗1-2s
(15)80%乙醇稍洗1-2s
(16)95%乙醇(Ⅰ)2-3s
(17)95%乙醇(Ⅱ)3-5s
(18)无水乙醇5-10min
(19)石炭酸二甲苯5-10min
(20)二甲苯(Ⅰ)2min
(21)二甲苯(Ⅱ)2min
(22)二甲苯(Ⅲ)2min
(23)中性树胶封固
注:①第(11)、(12)步可省去,(13)步冲水时间需延长至20-30min。
②第(21)步如果不用石炭酸二甲苯,可改用无水乙醇。
*冷冻切片HE染色步骤:
(1)冰冻切片固定10~30s
(2)稍水洗1~2s
(3)苏木精液染色(60℃)30~60s
(4)流水洗去苏木精液5~10s
(5)1%盐酸乙醇1~3s
(6)稍水洗1~2s
(7)促蓝液返蓝5~10s
(8)流水冲洗15~30s
(9)0.5%曙红液染色30~60s
(10)蒸馏水稍洗1~2s
(11)80%乙醇1~2s
(12)95%乙醇1~2s
(13)无水乙醇1~2s
(14)石炭酸二甲苯2~3s
(15)二甲苯(Ⅰ)2~3s
(16)二甲苯(Ⅱ)2~3s
(17)中性树胶封固。
注:第(14)步如果不用石炭酸二甲苯,可改用无水乙醇。
染色结果:细胞核蓝色,胞质、肌纤维、胶原纤维和红细胞呈深浅不一的红色。
4.12切片脱水透明切片经HE染色后,要彻底脱水透明,才能用中性树胶封盖。如果脱水不彻底,封片后呈白色雾状,镜下观察模糊不清,且容易褪色。切片1-2级无水乙醇脱水,也可使用石碳酸二甲苯进行脱水。石碳酸有较强脱水能力,但长时间可使切片脱色,因此要经过多次二甲苯以使石碳酸完全除去。
5.H-E染色评定标准:
(1)切片完整,厚度4-6微米,厚薄均匀,无皱褶无刀痕;
(2)染色核浆分明,红蓝适度,透明洁净,封裱美观。
4 染色结果编辑
细胞核被苏木精染成鲜明的蓝色,软骨基质、钙盐颗粒呈深蓝色,粘液呈灰蓝色。细胞浆被伊红染成深浅不同的粉红色至桃红色,胞浆内嗜酸性颗粒呈反光强的鲜红色。胶原纤维呈淡粉红色,弹力纤维呈亮粉红色,红血球呈橘红色,蛋白性液体呈粉红色。
着色情况与组织或细胞的种类有关,也随其生活周期及病理变化而改变。例如,很多细胞在新生时期胞浆对伊红着色较淡或轻度嗜碱,当其衰老时或发生退行性变则呈现嗜伊红浓染。胶原纤维在老化和出现透明变性时,伊红着色由浅变深。
Masson染色,用于显示组织中纤维的染色方法之一。
试剂:
Regaud 氏苏木精:苏木精1g,95%酒精10ml,甘油10ml,蒸馏水80ml。
将苏木精加入蒸馏水内加温溶解,冷却后加入酒精和甘油,放数日后即可应用。
Masson丽春红酸性复红液:丽春红0.7g,酸性复红0.3g,蒸馏水99ml,冰醋酸1ml。0.2%冰醋酸水溶液:冰醋酸0.2 ml,蒸馏水100 ml。
1%磷钼酸水溶液:磷钼酸1g,蒸馏水100 ml。
苯胺蓝水溶液:苯胺蓝2g,蒸馏水98 ml,冰醋酸2 ml。
1%光绿水溶液:光绿1g,蒸馏水100 ml。
Masson三色法步骤
1.石蜡切片脱蜡至水。
2.铬化处理或去汞盐沉淀(甲醛固定的组织此步可略)。
3.依次自来水和蒸馏水洗。
4.用Regaud苏木精染液或Weigert苏木精液染核5-10min。
5.充分水洗,如过染可盐酸酒精分化。
6.蒸馏水洗。
7.用Masson 丽春红酸性复红液5-10min。
8.以2%冰醋酸水溶液浸洗片刻。
9.1%磷钼酸水溶液分化3-5min。
10. 不经水洗,直接用苯胺蓝或光绿液染5min。
11.以0.2%冰醋酸水溶液浸洗片刻。
12.95%酒精、无水酒精、二甲苯透明、中性树胶封固。
结果:胶原纤维、粘液、软骨呈蓝色(如光绿液染色为绿色),胞浆、肌肉、纤维素、神经胶质呈红色,胞核黑蓝色。
体会与说明:
1.控制好染色步骤。
2.组织固定起着很重要的作用,根据不同的固定液可延长或缩短染色时间。
3.0.2%冰醋酸水溶液洗,可使色调清晰鲜艳。
4.磷钼酸水溶液对丽春红、酸性复红有分化作用,分化时镜下控制,肌纤维和纤维素呈红色,胶原纤维呈淡粉红色即可。
天狼猩红染色
[试剂配制]
(1)天狼星红饱和苦昧酸液O.5%天狼星红10ml,苦味酸饱和液90ml。
(2)天青石蓝液天青石蓝B1.25g.铁明矾1.25g,蒸馏水250ml。溶解煮沸、待冷却过滤加入甘油30ml,然后再加入浓盐酸0.5ml。