细菌的革兰氏染色
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细菌的革兰氏染色法
一、目的要求
学习并掌握革兰氏染色的方法。
二、实验材料
1.菌种：枯草芽孢杆菌、大肠杆菌、金 黄色葡萄球菌。 2.染料：草酸铵结晶紫液、路哥氏碘 液、95%乙醇、番红液。 3.其他：显微镜、载玻片、接种环、酒 精灯、无菌生理盐水、香柏油、二甲 苯等。
三、基本原理
革兰氏染色法是细菌学中广泛使用 的一种鉴别染色法。 的一种鉴别染色法。 1884年由丹麦医师 年由丹麦医师Gram创立。 创立。 年由丹麦医师 创立
五、实验内容பைடு நூலகம்
1.对大肠杆菌、枯草芽孢杆菌、金黄色葡 对大肠杆菌、枯草芽孢杆菌、 对大肠杆菌 萄球菌分别进行革兰氏染色。 萄球菌分别进行革兰氏染色。 2.对大肠杆菌、枯草芽孢杆菌混合涂片进 对大肠杆菌、 对大肠杆菌 行革兰氏染色。 行革兰氏染色。
大肠杆菌（ 大肠杆菌（G ）
-
枯草芽孢杆菌（ 枯草芽孢杆菌（G+）
四、方法与步骤
操作过程如下： 操作过程如下： 涂片→干燥 固定 草酸铵结晶紫染色 涂片 干燥→固定 干燥 固定→草酸铵结晶紫染色 水洗→路哥氏碘液媒染 （1min）→水洗 路哥氏碘液媒染 ） 水洗 水洗→95%乙醇脱色（30s） 乙醇脱色（ （1min）→水洗 ） 水洗 乙醇脱色 ） →水洗 番红复染（1min）→水洗 干 水洗→番红复染 水洗→干 水洗 番红复染（ ） 水洗 镜检。 燥→镜检。 镜检
革兰氏阴性菌细胞壁脂类物质含量高， 革兰氏阴性菌细胞壁脂类物质含量高， 肽聚糖含量较低，乙醇溶解了脂类物质， 肽聚糖含量较低，乙醇溶解了脂类物质， 使细胞壁通透性增加，结晶紫——碘复 使细胞壁通透性增加，结晶紫 碘复 合物易被抽出，于是被脱色。 合物易被抽出，于是被脱色。
再有阳性菌菌体等电点较阴性菌低， 再有阳性菌菌体等电点较阴性菌低， 在相同pH条件下进行染色 条件下进行染色， 在相同 条件下进行染色，阳性菌吸附碱 性染料较多，因此不易脱去， 性染料较多，因此不易脱去，阴性菌则相 所以染色时的条件要严格控制。 反。所以染色时的条件要严格控制。
关键点： 关键点： 严格掌握乙醇脱色程度，如脱色过度， 严格掌握乙醇脱色程度，如脱色过度， 乙醇脱色程度 则阳性菌被误染为阴性菌； 则阳性菌被误染为阴性菌；而脱色不够 阴性菌被误染为阳性菌。 时，阴性菌被误染为阳性菌。 菌龄也影响染色结果， 菌龄也影响染色结果，如阳性菌培养 也影响染色结果 时间很长，或已死亡及部分自行溶解了， 时间很长，或已死亡及部分自行溶解了， 都常呈阴性反应。 都常呈阴性反应。
金黄色葡萄球菌与大肠杆菌
六、实验思考题
1.绘出大肠杆菌、枯草芽孢杆菌、金黄色葡萄 绘出大肠杆菌、枯草芽孢杆菌、 绘出大肠杆菌 球菌的形态图，注明放大倍数及颜色。 球菌的形态图，注明放大倍数及颜色。 2.为什么革兰氏染色所用细菌的菌龄一般不能 为什么革兰氏染色所用细菌的菌龄一般不能 超过24小时 小时？ 超过 小时？ 3.你的实验结果与课本中所述是否一致？如果 你的实验结果与课本中所述是否一致？ 你的实验结果与课本中所述是否一致 不一致，试分析原因。 不一致，试分析原因。 4.当你对一株未知菌进行革兰氏染色时，怎样 当你对一株未知菌进行革兰氏染色时， 当你对一株未知菌进行革兰氏染色时 才能确保你的操作正确，结果可靠？ 才能确保你的操作正确，结果可靠？
细菌先经碱性染料结晶紫染色，再经碘液 媒染后，用酒精脱色，在一定条件下有的 细菌紫色不被脱去，有的可被脱去，因此 可把细菌分为两大类，前者叫做革兰氏阳 性菌（G+），后者为革兰氏阴性菌（G）。
为观察方便，脱色后再用一种红色染料， 为观察方便，脱色后再用一种红色染料，如 碱性番红等进行复染。阳性菌仍带紫色， 碱性番红等进行复染。阳性菌仍带紫色， 阴性菌则被染上红色。 阴性菌则被染上红色。有芽孢的杆菌和绝 大多数球菌， 大多数球菌，以及所有的放线菌和真菌都 成革兰氏正反应；弧菌， 成革兰氏正反应；弧菌，螺旋体和大多数 致病性的无芽孢杆菌都成负反应。 致病性的无芽孢杆菌都成负反应。
另外， 另外，与细菌细胞壁的化学组成及结 构有关。 构有关。 革兰氏阳性细菌由于细胞壁肽聚糖含量高， 革兰氏阳性细菌由于细胞壁肽聚糖含量高， 脂类含量低，乙醇处理使细胞壁脱水， 脂类含量低，乙醇处理使细胞壁脱水，肽 聚糖层孔径变小，通透性降低， 聚糖层孔径变小，通透性降低，结晶紫碘 复合物被保留在细胞内，细胞不被脱色。 复合物被保留在细胞内，细胞不被脱色。
革兰式阳性菌和革兰氏阴性菌在化 学组成和生理性质上有很多差别， 学组成和生理性质上有很多差别，染色 反应不一样。 反应不一样。 一般认为革兰氏阳性菌体内含有特殊 的核蛋白质镁盐与多糖的复合物， 的核蛋白质镁盐与多糖的复合物，它与 碘和结晶紫的复合物结合很牢， 碘和结晶紫的复合物结合很牢，不易脱 色，阴性菌复合物结合程度低，吸附染 阴性菌复合物结合程度低， 料差，易脱色， 料差，易脱色，这是染色反应的主要依 据。
一、目的要求
学习并掌握革兰氏染色的方法。
二、实验材料
1.菌种：枯草芽孢杆菌、大肠杆菌、金 黄色葡萄球菌。 2.染料：草酸铵结晶紫液、路哥氏碘 液、95%乙醇、番红液。 3.其他：显微镜、载玻片、接种环、酒 精灯、无菌生理盐水、香柏油、二甲 苯等。
三、基本原理
革兰氏染色法是细菌学中广泛使用 的一种鉴别染色法。 的一种鉴别染色法。 1884年由丹麦医师 年由丹麦医师Gram创立。 创立。 年由丹麦医师 创立
五、实验内容பைடு நூலகம்
1.对大肠杆菌、枯草芽孢杆菌、金黄色葡 对大肠杆菌、枯草芽孢杆菌、 对大肠杆菌 萄球菌分别进行革兰氏染色。 萄球菌分别进行革兰氏染色。 2.对大肠杆菌、枯草芽孢杆菌混合涂片进 对大肠杆菌、 对大肠杆菌 行革兰氏染色。 行革兰氏染色。
大肠杆菌（ 大肠杆菌（G ）
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枯草芽孢杆菌（ 枯草芽孢杆菌（G+）
四、方法与步骤
操作过程如下： 操作过程如下： 涂片→干燥 固定 草酸铵结晶紫染色 涂片 干燥→固定 干燥 固定→草酸铵结晶紫染色 水洗→路哥氏碘液媒染 （1min）→水洗 路哥氏碘液媒染 ） 水洗 水洗→95%乙醇脱色（30s） 乙醇脱色（ （1min）→水洗 ） 水洗 乙醇脱色 ） →水洗 番红复染（1min）→水洗 干 水洗→番红复染 水洗→干 水洗 番红复染（ ） 水洗 镜检。 燥→镜检。 镜检
革兰氏阴性菌细胞壁脂类物质含量高， 革兰氏阴性菌细胞壁脂类物质含量高， 肽聚糖含量较低，乙醇溶解了脂类物质， 肽聚糖含量较低，乙醇溶解了脂类物质， 使细胞壁通透性增加，结晶紫——碘复 使细胞壁通透性增加，结晶紫 碘复 合物易被抽出，于是被脱色。 合物易被抽出，于是被脱色。
再有阳性菌菌体等电点较阴性菌低， 再有阳性菌菌体等电点较阴性菌低， 在相同pH条件下进行染色 条件下进行染色， 在相同 条件下进行染色，阳性菌吸附碱 性染料较多，因此不易脱去， 性染料较多，因此不易脱去，阴性菌则相 所以染色时的条件要严格控制。 反。所以染色时的条件要严格控制。
关键点： 关键点： 严格掌握乙醇脱色程度，如脱色过度， 严格掌握乙醇脱色程度，如脱色过度， 乙醇脱色程度 则阳性菌被误染为阴性菌； 则阳性菌被误染为阴性菌；而脱色不够 阴性菌被误染为阳性菌。 时，阴性菌被误染为阳性菌。 菌龄也影响染色结果， 菌龄也影响染色结果，如阳性菌培养 也影响染色结果 时间很长，或已死亡及部分自行溶解了， 时间很长，或已死亡及部分自行溶解了， 都常呈阴性反应。 都常呈阴性反应。
金黄色葡萄球菌与大肠杆菌
六、实验思考题
1.绘出大肠杆菌、枯草芽孢杆菌、金黄色葡萄 绘出大肠杆菌、枯草芽孢杆菌、 绘出大肠杆菌 球菌的形态图，注明放大倍数及颜色。 球菌的形态图，注明放大倍数及颜色。 2.为什么革兰氏染色所用细菌的菌龄一般不能 为什么革兰氏染色所用细菌的菌龄一般不能 超过24小时 小时？ 超过 小时？ 3.你的实验结果与课本中所述是否一致？如果 你的实验结果与课本中所述是否一致？ 你的实验结果与课本中所述是否一致 不一致，试分析原因。 不一致，试分析原因。 4.当你对一株未知菌进行革兰氏染色时，怎样 当你对一株未知菌进行革兰氏染色时， 当你对一株未知菌进行革兰氏染色时 才能确保你的操作正确，结果可靠？ 才能确保你的操作正确，结果可靠？
细菌先经碱性染料结晶紫染色，再经碘液 媒染后，用酒精脱色，在一定条件下有的 细菌紫色不被脱去，有的可被脱去，因此 可把细菌分为两大类，前者叫做革兰氏阳 性菌（G+），后者为革兰氏阴性菌（G）。
为观察方便，脱色后再用一种红色染料， 为观察方便，脱色后再用一种红色染料，如 碱性番红等进行复染。阳性菌仍带紫色， 碱性番红等进行复染。阳性菌仍带紫色， 阴性菌则被染上红色。 阴性菌则被染上红色。有芽孢的杆菌和绝 大多数球菌， 大多数球菌，以及所有的放线菌和真菌都 成革兰氏正反应；弧菌， 成革兰氏正反应；弧菌，螺旋体和大多数 致病性的无芽孢杆菌都成负反应。 致病性的无芽孢杆菌都成负反应。
另外， 另外，与细菌细胞壁的化学组成及结 构有关。 构有关。 革兰氏阳性细菌由于细胞壁肽聚糖含量高， 革兰氏阳性细菌由于细胞壁肽聚糖含量高， 脂类含量低，乙醇处理使细胞壁脱水， 脂类含量低，乙醇处理使细胞壁脱水，肽 聚糖层孔径变小，通透性降低， 聚糖层孔径变小，通透性降低，结晶紫碘 复合物被保留在细胞内，细胞不被脱色。 复合物被保留在细胞内，细胞不被脱色。
革兰式阳性菌和革兰氏阴性菌在化 学组成和生理性质上有很多差别， 学组成和生理性质上有很多差别，染色 反应不一样。 反应不一样。 一般认为革兰氏阳性菌体内含有特殊 的核蛋白质镁盐与多糖的复合物， 的核蛋白质镁盐与多糖的复合物，它与 碘和结晶紫的复合物结合很牢， 碘和结晶紫的复合物结合很牢，不易脱 色，阴性菌复合物结合程度低，吸附染 阴性菌复合物结合程度低， 料差，易脱色， 料差，易脱色，这是染色反应的主要依 据。