注射用水细菌内毒素分析方法确认方案分析
注射用水内毒素标准
注射用水内毒素标准注射用水内毒素标准注射用水是指用于注射给人或动物使用的水。
它是一种非常重要的药物溶剂，对患者的生命安全有着至关重要的作用。
因此，注射用水的质量与安全性也备受关注。
其中，水中的毒素是评价注射用水质量的重要指标之一。
本文将介绍注射用水内毒素标准的相关内容。
一、注射用水内毒素的种类常见的注射用水内毒素包括细菌内毒素、霉菌内毒素、金属离子和有机物等。
其中，细菌内毒素和霉菌内毒素是注射用水中最主要的毒素种类。
二、细菌内毒素和霉菌内毒素1. 细菌内毒素细菌内毒素是一种有机物质，可导致严重的感染和炎症，危及患者的生命。
其中，内毒素A是最常见的细菌内毒素，可以引起休克、发热和多器官衰竭等严重并发症。
2. 霉菌内毒素霉菌内毒素也是一种有机物质，会导致各种毒性反应，如肝损伤、肾损伤和神经系统损伤等。
其中，黄曲霉素和赭曲霉素是较为常见的霉菌内毒素。
三、注射用水内毒素标准注射用水内毒素标准是由各国制订的规范，用于评价注射用水的毒素含量是否安全。
国际药典（PhEur）和美国药典（USP）是目前全球公认的注射用水内毒素标准。
1. 国际药典标准（PhEur）国际药典标准规定了注射用水中内毒素的含量限制。
其中，细菌内毒素的限制为0.5 EU/ml，而霉菌内毒素的限制为10 ng/ml。
2. 美国药典标准（USP）美国药典标准与国际药典标准相似，在注射用水中内毒素的含量限制上也有一定的规定。
其中，细菌内毒素的限制为0.25 EU/ml，而霉菌内毒素的限制为2 ng/ml。
四、注射用水内毒素检测方法注射用水内毒素检测方法是用于检测注射用水中毒素含量的方法，直接影响到注射用水的质量。
常用的检测方法包括生物法和化学方法。
1. 生物法生物法通过利用生物学检测原理，检测注射用水中内毒素的含量。
常见的生物法包括细菌内毒素检测和荧光素酶菌毒素检测。
2. 化学方法化学方法通过化学分析技术检测注射用水中内毒素的含量。
其中，高效液相色谱法和气相色谱法是目前比较常用的化学方法之一。
注射用水内毒素检验方法验证方案
注射用水细菌内毒素检验方法验证方案1.0目的该方案确认制定的注射用水细菌内毒素检验方法适用于本公司微生物实验室对注射用水细菌内毒素的检验，方法能够提供一致、可信和准确的细菌内毒素检验结果。
2.0范围该方案适用于公司注射用水细菌内毒素检验方法的验证。
3.0名词定义BET：细菌内毒素测试(Bacterial Endotoxins Test)EU：内毒素单位，1EU=1IUλ：鲎试剂标示灵敏度MVD：最大有效稀释倍数4.0描述4.1验证方法：中国药典<1143>细菌内毒素检查法；4.2验证用注射用水：取注射用水检测点的新鲜注射用水；5.0接受标准注射用水细菌内毒素限度标准：＜0.25EU/ml6.0验证内容6.1验证前的准备：6.1.1验证器具准备➢将内毒素反应试管及取样三角瓶放入铬酸洗液中充分浸泡，用自来水将残留洗液彻底洗净，再用纯化水反复冲洗，晾干后放入不锈钢方盘或用锡箔纸包好后再放入不锈钢方盘内，置于干热灭菌烘箱。
➢将干热灭菌烘箱温度设定为250℃，灭菌时间设定为1h，开启灭菌程序，灭菌程序结束待灭菌烘箱温度降至室温。
6.1.2主要仪器设备/试剂、对照品：设备：细菌内毒素检测仪、干热灭菌烘箱、医药冷藏箱试剂、对照品：细菌内毒素工作标准品、细菌内毒素检查用水、鲎试剂细菌内毒素工作标准品：以细菌内毒素国家标准品为基准标定其效价，用于干扰试验及检查法中阳性及供试品阳性溶液的制备、鲎试剂灵敏度复核试验。
细菌内毒素检查用水：应符合灭菌注射用水标准，其内毒素含量小于0.015EU/ml(用于凝胶法），且对内毒素试验无干扰作用。
6.2验证过程：6.2.1鲎试剂灵敏度复核鲎试剂灵敏度复核的目的不仅是考察鲎试剂的灵敏度是否准确，也是考察检验人员操作方法是否正确及试验条件是否符合规定。
实验室在使用一批新的鲎试剂进行细菌内毒素检查前必须进行鲎试剂灵敏度复核试验。
6.2.1.1 内毒素标准溶液的制备：取内毒素工作标准品一支，加入1ml 内毒素检查用水溶解其内容物，用封口膜将瓶口封严，置旋涡混合器上混合15min 。
细菌内毒素检查验证方案
-起草人：审核人：批准人：批准日期：年月日1 概述 (1)2 验证目的及范围 (1)3 验证小组人员组成及职责 (1)4 验证依据 (2)5 验证前准备 (2)6 验证的实施 (2)7 偏差处理 (5)8 验证数据及评估 (5)9 验证报告及评审 (5)10 再验证及周期 (5)11 验证文件及归档 (5)12 附件 (5)细菌内毒素检查法系利用鲎试剂来检测或者量化由格兰阴性菌产生的细菌内毒素，以判 断供试品中细菌内毒素的限量是否符合规定的一种方法。
细菌内毒素检查报告两种发放， 即凝胶法和光度测定法， 后者包括浊度法和显色基 质法，供试品检测时，可使用其中任何一种方法发展实验。
公司自行制备的注射用 水需发展细菌内毒素的检查，本方案将采用凝胶法发展试验。
本验证方案合用于注射用水的细菌内毒素的检查，通过对鲎试剂灵敏度复核试验、干扰试验及凝胶限度试验，建立该产品的细菌内毒素检查方法，并对其有效性发展评 价，确保检测方法的专属性、灵敏度，保证检测结果可符合质量标准要求。
3.1 验证小组由以下部门人员组成：质量部、 QC 、生产部。
3.2 验证小组组成及职责列表"中华人民共和国药典"2022 版 1143 细菌内毒素检查法职 责1. 负责起草验证方案的起草2. 负责本方案的培训3. 仪器仪表校验确认4. 负责验证的实施5. 负责数据的采集和整理6. 负责数据分析7. 负责完成验证报告1. 负责验证方案、验证报告的审核与批准2. 负责验证现场的监视审查 1. 负责保障设备、器具的完好 2. 负责动力系统的保障组成Q C质量部生产部5.1 验证人员培训：验证报告起草人有责任在方案批准后〔且在验证实施前〕对本次验证相关人员发展培训。
培训人员记录见附件 1。
5.2 确认仪器仪表设施经过确认和校验，并填写确认记录。
5.3 相关文件，确认以下文件皆为现行有效版本。
序号相关文件文件编号1 DHG 型电热恒温鼓风枯燥箱操作规程 WI-1002 BSC-100-II-B2 生物安全柜操作和维护保养规程 WI-1013 W*QI-S-18SI 自动手提式灭菌器使用和维护保养规程 WI-1034 DK 型电热恒温水浴锅操作规程 WI-1045 HWS 型恒温恒湿箱操作规程 WI-1056 JA2003N 电子天平操作及维护保养规程 WI-1067 PHS-3C 型 PH 计操作及维护保养规程 WI-1088 SHP-3C 型低温生化培养箱操作及维护保养规程 WI-1099 YJ-875SDB 型净化操作台的操作及维护保养规程 WI-11310 "培养基管理规程" WI-766.1实验材料及用具电子天平6.1.2. 电热枯燥箱6.1.3. 恒温恒湿箱6.1.4.水银温度计6.1.5. 旋涡混合器6.1.6. 鲎试剂〔具有国家主管部门的批准文号〕 6.1.7.细菌内毒素工作标准品(由中国药品生物制品检定所统一发放的标准品) 6.1.8.细菌内毒素检查用水：应符合灭菌注射用水标准，其内毒素含量小于0.015EU/ml，且对内毒素试验无干扰作用。
细菌内毒素检验方法验证方案
细菌内毒素检验方法验证方案一、背景介绍细菌内毒素是一种由细菌产生的有毒分子，它可以引起中毒反应并对人类健康造成危害。
因此，准确检测和验证细菌内毒素的方法非常重要。
本方案旨在验证细菌内毒素检验方法的准确性和可靠性。
二、实验目的本实验旨在验证细菌内毒素检验方法，确保其能够准确地检测细菌内毒素的含量。
三、实验材料和设备1. 细菌内毒素检验试剂盒2. 细菌培养基3. 细菌菌种4. 培养皿5. 恒温培养箱6. 试管7. 离心机8. 显微镜9. 无菌培养室四、实验步骤1. 准备工作a. 清洁实验桌面和实验器材，防止污染。
b. 准备所需要的材料和设备，并确保其干净和无菌。
2. 细菌培养a. 随机取一支细菌菌种采样放入培养基中并均匀涂抹于培养皿上。
b. 将培养皿置于恒温培养箱中，以适当的温度和时间培养细菌。
3. 细菌内毒素检验a. 取一份细菌内毒素检验试剂盒，根据说明书的指导进行试剂的调配和处理。
b. 等待试剂反应完成后，根据试剂盒的说明书进行结果的解读。
4. 结果分析a. 观察试剂盒结果，根据颜色变化和强度判断细菌内毒素的含量。
b. 结果符合预期的样本被认为是阳性，否则为阴性。
五、质量控制1. 测量前需进行必要的质量控制，包括试剂的稳定性和标准品的准确性。
六、风险控制1. 实验过程中需佩戴个人防护装备，如实验手套和口罩，以减少潜在的健康风险。
七、数据处理与结果1. 将实验所得数据进行整理和统计，并进行数据分析和结果的解读。
八、讨论与结论1. 讨论实验结果与预期结果之间的差异，分析可能的原因，并提出改进和优化的建议。
2. 结论验证细菌内毒素检验方法的准确性和可靠性。
九、参考文献参考实验所使用的细菌内毒素检验方法的相关文献。
以上是细菌内毒素检验方法验证方案的内容，该方案通过详细的步骤和操作说明，确保了实验的准确性和可靠性。
通过验证该方法，将可为细菌内毒素检验提供可靠的数据支持，为相关领域的研究和应用提供技术支持。
细菌内毒素检查案例分析
①制备标准曲线：1.0,0.1,0.01EU/ml; ②制备供试品溶液：按照药典的要求制备供试品溶 液0.015g/ml，记为S；
17
5.例子Ⅲ-动态显色法试验
• 注意：离心后有漂浮物！要按照药典的要求过滤， 取续滤液小心，吸到漂浮物后果非常严重！
曲线上漂
溶液离心后有漂浮物。检测时吸到漂浮物的反应曲线图。
10
3.例子Ⅰ-凝胶法干扰试验
• （5）复溶鲎试剂； • （6）加样反应； • （7）检测结果
编号 溶液内容 E0.06
E0.03
C E0.015
结果 编号 溶液内容
++ SE0.06
++ SE0.03
++ B SE0.015
D
E0.0075
w
--
--
A
SE0.0075
18
5.例子Ⅲ-动态显色法试验
③制备溶液B：
0.1mlE1.0+0.9mlS
1.0mlSE0.1
• （6）取动态显色法鲎试剂1支，打开，复溶；
• （7）加样，反应
• （8）结果判断
19
5.例子Ⅲ-动态显色法试验
分析方法：动态显色法
符合 规定
案例分析
湛江安度斯生物有限公司 2016年7月
实验助手APP授权发布
1
案例分析
活性炭（供注射用）细菌内毒素 检查
鲎试剂灵敏度复核不符合规定原 因调查
一种疫苗的半成品BET结果分析
生产过程控制原辅料的内毒素限 值计算
2
（一） 活性炭（供注射用） 细菌内毒素检查
3
活性炭（供注射用）细菌内毒素检查 • 包括：
注射用水的细菌内毒素控制方案
注射用水的细菌内毒素控制方案注射用水热原反应·水是生命之源，各行各业都离不开水，尤其是医药行业，制药用水广泛用于药品/医疗器械生产过程和药物制剂的制备，同时也被用作溶剂、冲洗剂等。
制药用水，特别是注射用水的质量直接影响药品的质量，与药品的安全息息相关。
在兽药生产中，不论容器洗涤还是原料、制剂的生产都离不开水。
水是制药生产中的主要用料之一，也是污染源之—。
因此，水的质量就关系到成品的质量，必须对生产用水进行合理选择、严格的管理。
“兽药生产工艺中使用的水，包括：饮用水、纯化水、注射用水。
工艺用水要求和用途如下表：注射用水的制备方法：注射用水是以纯化水作为原水，经特殊设计的蒸馏器蒸馏，冷凝冷却后经膜过滤制备而得的水。
注射用水可作为配制注射剂用的溶剂。
细菌内毒素是注射剂中重要的关键质量属性，控制原辅料本身带入的细菌内毒素水平，原辅料带入的细菌内毒素越低，成品的细菌内毒素就越低。
细菌内毒素细菌内毒素是是革兰氏阴性菌的细胞壁成分，当细胞死亡或自溶后便会释放出内毒素，如果被大量注射进入血液时可引起发热、微循环障碍、内毒素休克及播散性血管内凝血等反应——又叫“热原反应”。
因此，在注射剂中需严格控制细菌内毒素。
所有能引起热原反应的物质称为热原。
药品中的热原主要是细菌内毒素。
一般可以认为：细菌内毒素是热原，但热原不等于细菌内毒素。
特征"微生物热原"相对于"革兰氏阴性细菌内毒素",已成为许多不同物质的通用描述术语。
然而,一些革兰氏阳性菌、分枝杆菌、真菌和病毒可以产生热源性物质,但革兰氏阴性菌也可以产生热源性物质,内毒素对制药业有重要意义。
在革兰氏阴性菌的外膜中发现的细菌内毒素是一种叫脂多糖(LPS)的磷脂成员。
LPS不是革兰氏阴性菌的外源产物。
从细菌释放LPS在细胞死亡和溶解后发生。
热原产生革兰氏阴性菌的好例子有大肠杆菌、变形杆菌、芽孢杆菌、肠杆菌和克雷伯菌。
内毒素规范要求由于细菌内毒素对人体健康有着重大影响，所以制药，兽药，医疗卫生、食品加工等行业会关注内毒素水平，尤其是医疗机构的医疗用水（多为纯化水）对细菌内毒素敏感，对于注射用水可以按照中国药典要求进行细菌内毒素要求<0.25EU/ml，内毒素≥0.125EU/ml为预警水平。
细菌内毒素检查验证方案
细菌内毒素检查验证方案文件编号：VP-QC-2015-06起草人：审核人：批准人：批准日期：年月日目录1 概述 12 验证目的及范围 13 验证小组人员组成及职责 14 验证依据 25 验证前准备 26 验证的实施 27 偏差处理 58 验证数据及评估 5 9验证报告及评审 510 再验证及周期 511 验证文件及归档 512 附件 51 概述细菌内毒素检查法系利用鲎试剂来检测或量化由格兰阴性菌产生的细菌内毒素，以判断供试品中细菌内毒素的限量是否符合规定的一种方法。
细菌内毒素检查报告两种发放，即凝胶法和光度测定法，后者包括浊度法和显色基质法，供试品检测时，可使用其中任何一种方法进行实验。
公司自行制备的注射用水需进行细菌内毒素的检查，本方案将采用凝胶法进行试验。
2 验证目的和方法本验证方案适用于注射用水的细菌内毒素的检查，通过对鲎试剂灵敏度复核试验、干扰试验及凝胶限度试验，建立该产品的细菌内毒素检查方法，并对其有效性进行评价，确保检测方法的专属性、灵敏度，保证检测结果可符合质量标准要求。
3.验证小组人员组成及职责：3.1验证小组由以下部门人员组成：质量部、QC、生产部。
3.2 验证小组组成及职责列表4 验证依据《中华人民共和国药典》2015版1143 细菌内毒素检查法5.验证前准备5.1验证人员培训：验证报告起草人有责任在方案批准后（且在验证实施前）对本次验证相关人员进行培训。
培训人员记录见附件1。
5.2 确认仪器仪表设施经过确认和校验，并填写确认记录。
6 验证的实施6.1实验材料及用具6.1.1电子天平6.1.2. 电热干燥箱6.1.3. 恒温恒湿箱6.1.4.水银温度计6.1.5. 旋涡混合器6.1.6. 鲎试剂（具有国家主管部门的批准文号）6.1.7.细菌内毒素工作标准品(由中国药品生物制品检定所统一发放的标准品)6.1.8.细菌内毒素检查用水：应符合灭菌注射用水标准，其内毒素含量小于0.015EU/ml，且对内毒素试验无干扰作用。
内毒素方法验证方案
一、验证目的确保氯化钠注射液细菌内毒素检测方法的专属性、灵敏度，保证检测结果可符合质量标准要求，特制定此方案。
二、适用范围适用于本公司氯化钠注射液的细菌内毒素检测方法。
四、内容1 实验材料及用具1.1电子天平1.2电热恒温干燥箱1.3试管恒温仪1.4水银温度计1.5旋涡混合器1.6鲎试剂供应商:批号：灵敏度：规格：1.7细菌内毒素国家标准品供应商:中国药品生物制品检定所提供批号：效价：1.8细菌内毒素检查用水供应商:批号：规格：1.9实验用具:移液管、凝集管、三角瓶、试管、试管架、洗耳球、时钟、75%酒精棉、剪刀、砂轮。
2 实验准备2.1玻璃器皿的洗涤将玻璃器皿放入铬酸洗液或其他热原灭活剂或清洗液中充分浸泡，然后取出将洗液空干，用生活饮用水将残留洗液彻底洗净，再用注射用水反复冲洗三遍以上，空干后放入适宜的密闭金属容器中，然后放置入电热恒温干燥箱。
2.2除去玻璃器皿表面可能存在的外源性内毒素玻璃器皿置电热恒温干燥箱后，将电热恒温干燥箱调至250℃，待电热恒温干燥箱温度升至设定的温度后开始计时，干烤至少1 小时。
达到规定时间后，关断电源，待电热恒温干燥箱温度自然降至室温。
在不打开金属容器的情况下，可在两天内使用,否则须再次干烤。
3 具体验证步骤3.1鲎试剂灵敏度复核3.1.1目的考察鲎试剂的灵敏度是否准确，并考察检验人员操作方法是否正确及实验条件是否符合规定。
3.1.2操作方法3.1.2.1细菌内毒素标准溶液的制备将1支细菌内毒素标准品（140EU/支）完全溶解于1ml细菌内毒素检查用水中(置漩涡混合器上混合15分钟)，其浓度为140EU/ml，用这个浓度连续稀释制备1.0EU/ml、0.5EU/ml、0.25EU/ml、0.125EU/ml (每步稀释过程均应在旋涡混合器上混合30秒钟)四个浓度的细菌内毒素标准浓度。
3.1.2.2鲎试剂灵敏度复核操作取18支（0.1ml/支）待验证灵敏度的鲎试剂，加入适量的细菌内毒素检查用水，复溶备用。
氯化钾注射液细菌内毒素检查方法探讨
氯化钾注射液细菌内毒素检查方法探讨摘要本文用鲎试剂灵敏度的复核，确定其灵敏度，然后进行供试品的干扰实验和供试品的细菌内毒素检查。
结果此种方法可信，并以家兔法作比较，结果一致。
表明细菌内毒素检查法可提高热原检查的效率和灵敏度，对实际工作有一定价值。
关键词氯化钾注射液，细菌内毒素，鲎试剂氯化钾注射液也是临床上的常用药之一，收载于中国药典1995年版二部［1］，并规定其热原检查采用家兔法，热原检查又是本药品的重要检查项。
为此我们采用细菌内毒素检查法检测氯化钾注射液热原的可行性进行了研究，现将实验作以下报道。
1 实验材料1.1 药品氯化钾注射液：规格1 g／10 ml，泗水制药厂生产，鲎试剂（TAL）：灵敏度0.25 EU／ml，批号990824，规格0.1 ml／支，细菌内毒素工作标准品；批号990716，规格10 EU／支，细菌内毒素检查用水（BET）：批号981215，规格5 ml／支。
以上均由湛江安度斯生物有限公司提供。
细菌内毒素国家标准品，批号981，规格9000 EU／支，由中国药品生物制品检定所提供。
1.2 动物新西兰兔由山东省动物实验中心提供2 方法［2］与结果2.1 鲎试剂（TAL）灵敏度的复核按中国药典1995年版二部1998增补本［3］规定方法进行灵敏度复核，将细菌内毒素国家标准品，用细菌内毒素检查用水1 ml先溶解，在旋涡混合器上混合15 min后，然后再用细菌内毒素检查用水稀释成2 λ、λ、1／2 λ及1／4 λ的系列溶液，即0.5、0.25、0.125、0.0625 EU．ml-1浓度的系列溶液，结果(见表1)。
表1 鲎试剂灵敏度复核本批鲎试剂灵敏度0.25 EU．ml-1，经复核灵敏度为0.125 EU．ml-1，在其标示值0.5～2 λ之间，符合中国药典规定。
2.2 干扰试验2.2.1 内毒素理论限值（L）的确定，根据热原检查剂量计算出相应的限值（L)［4］，计算公式为：L＝K／M其中K为家兔和人的致热阈值（5 EU．kg-1），家兔注射剂量3 mg／ml，10 ml．kg-1来计算出氯化钾注射液的内毒素理论限值（L≤0.25 EU／1.5 mg）(或L≤1.25 EU／0.75 mg）。
注射液工艺验证方案
1.目旳:此工艺验证是建立在厂房, 空气洁净度, 工艺用水及设备和设备清洁已验证并合格旳基础上展开旳, 拟通过持续三批生产来验证该产品旳工艺规程, 对维生素C注射液生产中也许影响产品质量旳多种生产系统条件和生产工艺变化原因控制在工艺规程规定旳原则范围内, 保证产品旳可靠性和稳定性, 生产出符合企业内控原则旳--注射液。
2、合用范围:合用于维生素C注射液旳工艺验证。
3.责任者:参与维生素C注射液工艺验证旳人员。
4、方案4.1.验证措施:本产品工艺验证方案计划在水针新车间生产前三批旳生产过程中进行验证。
4.2.有关文献《验证SMP》《----注射液工艺规程》YBSTP－SC027－034.3.方案概要4.3.1重要工艺内容及生产条件如下:－洗瓶、杀菌干燥 －配液 －灭菌检漏 －灌封－灯检－印包4.3.2验证过程详细分为六个生产工艺过程:⑴ 洗瓶、杀菌干燥 ⑵ 配液 ⑶ 灌封 ⑷ 灭菌 ⑸ 灯检 ⑹ 印包4.3.3每个生产工艺过程验证旳每一项内容中均包括描述与生产过程有关旳规程, 文献和有关旳设备, 并论述生产系统多种元素旳评价措施及生产过程中多种也许影响产品质量旳原因提供变量旳评价措施。
生产系统多种元素旳评价措施中论述了在生产前、生产过程中及生产过程结束后对生产系统多种元素特性旳检查内容及评价原则。
每项检查评价结束后, 评价及检查成果应记录于本方案中设计旳登记表中, 并附于验证汇报中。
生产过程中多种也许影响产品质量旳工艺变量旳评价措施, 论述了生产过程中应进行旳一系列有关工艺变量旳评价措施及评价原则。
评价成果应记录于本方案设计旳登记表中并附于验证汇报中。
4.3.4工艺流程图:4.3.5质量原则及文献《质量原则》《中国药典》2023版二部《--注射液中间体质量原则》《YBSTP-QA209-00》《--注射液成品质量原则》《YBSTP-QA300-00 》维生素C注射液质量原则4.3.6生产系统要素旳评价:目旳:提供文字根据证明生产系统要素符合维生素注射液生产准备和工艺条件.从而保证用此系统生产旳多种物料符合质量原则,最终身产出符合质量林求旳合格旳产品.⑴项目:有关文献洗瓶、杀菌干燥SOP YBSOP-WS214-00YBSOP-WS201-00 YBSOP-WS202-00YBSOP-SC260-00 YBSOP-SC261-00配液 YBSOP-WS213-00YBSOP-SC262-00 YBSOP-WS203-00灌封 YBSOP-WS215-00YBSOP-SC264-00 YBSOP-WS204-00灭菌 YBSOP-WS216-00YBSOP-SC269-00 YBSOP-WS209-00灯检 YBSOP-WS217-00印字 YBSOP-WS218-00YBSOP-SC270-00 YBSOP-WS207-00评价措施检查所有文献旳完备状况。
细菌内毒素检验方法验证方案
1 概述：为了符合2010版GMP的要求，为了确保生产检验出符合预定用途和注册要求的产品，确保产品质量合格。
保证用药安全。
确认检查方法的科学持续稳定可靠适用性理想。
本方案对注射用水细菌内毒素检查方法进行验证。
2 验证目的：为确保注射用水细菌内毒素检测方法的专属性、灵敏度在本实验室条件下的适用性保证检测结果科学准确可靠，特制定此方案对注射用水细菌内毒素检查方法进行验证。
3 验证方式：结合实验室实际情况，按照2010版药典附录细菌内毒素检查方法检查。
由合格的检验人员对同一批供试品进行检查同一操作方法同一批供试品检查重复检查3次记录检查结果对比，看检查结果是否符合要求，重复性稳定性是否符合要求。
4 验证范围：适用于注射用水细菌内毒素检查方法验证，按照2010版药典附录细菌内毒素检查方法检查项下要求逐一进行。
5 验证结果的评价：根据药典合格标准来验证确认，确认检查方法检查结果的重现性稳定性是否符合要求。
适用性是否理想。
6 验证机构组成6.1验证委员会根据验证工作需要，常设验证委员会，负责所有验证工作的领导和组织，负责审批验证方案和验证报告、发放验证证书。
验证委员会针对每一个具体验证项目成立专门的验证小组，负责该验证项目的验证方案起草，实施、组织与协调，负责验证结果记录与评定，负责完成验证报告。
6.2验证委员会组成：姓名部门及职务验证委员会中职务验证工作中职责6.4职责：6.4.1 验证委员会：6.4.1.1 负责验证方案的审批。
6.4.1.2 负责验证的总协调工作，以保证本验证方案顺利实施。
6.4.1.3 负责验证数据及结果的审核。
6.4.1.4 负责发放验证证书。
6.4.2 验证小组：6.4.2.1 负责验证方案的制定和实施。
6.4.2.2 负责验证工作的组织与协调。
6.4.2.3 负责验证数据的收集和结果评定。
6.4.2.4 负责完成验证报告。
7文件准备和培训7.1所需文件已准备齐全。
7.2培训：在确认实施前，依据验证小组通过的方案，对参加验证人员培训，明确分工。
细菌内毒素检查验证方案
细菌内毒素检查验证方案一、引言细菌内毒素是一类具有强毒性的生物毒素，可以由细菌产生并释放到环境中。
其存在对于人类和动物的健康具有潜在的危害。
因此，建立一种可靠有效的细菌内毒素检查验证方案至关重要。
本文将介绍一种基于实验室技术的细菌内毒素检查验证方案。
二、实验目的本实验的目的是开发一种验证细菌内毒素检测的方法，以确保检测结果的准确性和可靠性。
具体目标包括：1. 确定合适的细菌内毒素检测方法；2. 确定验证方案的实施步骤；3. 评估验证方案的可行性和有效性。
三、实验设计1. 材料准备- 细菌内毒素检测试剂盒（根据实验需求选择合适的试剂盒）- 多个细菌培养菌株- 培养基和培养用具- 杂质过滤器- 试管和离心管等实验室常用器具2. 实验步骤1) 培养细菌菌株：选择多个细菌菌株进行培养，确保含有多种不同类型的内毒素。
2) 提取内毒素：将培养的细菌离心，取上清液，通过杂质过滤器去除细菌细胞残留和固体杂质。
得到的上清液即为细菌内毒素提取物。
3) 验证检测方法：使用细菌内毒素检测试剂盒对提取物进行检测，按照试剂盒说明书进行操作。
根据试剂盒结果，评估其准确性和可靠性。
4) 重复实验：根据上述步骤，重复多次实验以确保实验结果的稳定性和可重复性。
5) 数据分析：收集实验结果并进行统计分析，评估所选择的细菌内毒素检测方法的可行性和有效性。
四、实验注意事项1. 实验过程中要严格遵守实验室操作规范，注意安全。
2. 选择合适的细菌内毒素检测试剂盒，确保其适用于所需检测的内毒素类型。
3. 在提取内毒素时，要注意避免细菌细胞的污染。
4. 实验过程中要确保操作的准确性和重复性，避免人为误差的干扰。
5. 对于实验结果的分析，要进行统计学处理，确保数据的准确性和可信度。
五、预期结果通过本实验，预计将得到以下结果：1. 确定合适的细菌内毒素检测方法，验证其具有较高的准确性和可靠性。
2. 提供一个详细的细菌内毒素检查验证方案，使其可应用于实际生产中。
细菌内毒素检验方法验证方案
细菌内毒素检验方法验证方案1 概述:为了符合2010版GMP的要求，为了确保生产检验出符合预定用途和注册要求的产品，确保产品质量合格。
保证用药安全。
确认检查方法的科学持续稳定可靠适用性理想。
本方案对注射用水细菌内毒素检查方法进行验证。
2 验证目的:为确保注射用水细菌内毒素检测方法的专属性、灵敏度在本实验室条件下的适用性保证检测结果科学准确可靠，特制定此方案对注射用水细菌内毒素检查方法进行验证。
3 验证方式:结合实验室实际情况，按照2010版药典附录细菌内毒素检查方法检查。
由合格的检验人员对同一批供试品进行检查同一操作方法同一批供试品检查重复检查3次记录检查结果对比，看检查结果是否符合要求，重复性稳定性是否符合要求。
4 验证范围:适用于注射用水细菌内毒素检查方法验证，按照2010版药典附录细菌内毒素检查方法检查项下要求逐一进行。
5 验证结果的评价:根据药典合格标准来验证确认，确认检查方法检查结果的重现性稳定性是否符合要求。
适用性是否理想。
6 验证机构组成6.1验证委员会根据验证工作需要，常设验证委员会，负责所有验证工作的领导和组织，负责审批验证方案和验证报告、发放验证证书。
验证委员会针对每一个具体验证项目成立专门的验证小组，负责该验证项目的验证方案起草，实施、组织与协调，负责验证结果记录与评定，负责完成验证报告。
6.2验证委员会组成: 姓名部门及职务验证委员会中职务验证工作中职责6.4职责:6.4.1 验证委员会:6.4.1.1 负责验证方案的审批。
6.4.1.2 负责验证的总协调工作，以保证本验证方案顺利实施。
6.4.1.3 负责验证数据及结果的审核。
6.4.1.4 负责发放验证证书。
6.4.2 验证小组:6.4.2.1 负责验证方案的制定和实施。
6.4.2.2 负责验证工作的组织与协调。
6.4.2.3 负责验证数据的收集和结果评定。
6.4.2.4 负责完成验证报告。
7文件准备和培训7.1所需文件已准备齐全。
注射用水内毒素检验方法验证方案
注射用水细菌内毒素检验方法验证方案1.0目的该方案确认制定的注射用水细菌内毒素检验方法适用于本公司微生物实验室对注射用水细菌内毒素的检验，方法能够提供一致、可信和准确的细菌内毒素检验结果。
2.0范围该方案适用于公司注射用水细菌内毒素检验方法的验证。
3.0名词定义BET：细菌内毒素测试(Bacterial Endotoxins Test)EU：内毒素单位，1EU=1IUλ：鲎试剂标示灵敏度MVD：最大有效稀释倍数4.0描述4.1验证方法：中国药典<1143>细菌内毒素检查法；4.2验证用注射用水：取注射用水检测点的新鲜注射用水；5.0接受标准注射用水细菌内毒素限度标准：＜0.25EU/ml6.0验证内容6.1验证前的准备：6.1.1验证器具准备➢将内毒素反应试管及取样三角瓶放入铬酸洗液中充分浸泡，用自来水将残留洗液彻底洗净，再用纯化水反复冲洗，晾干后放入不锈钢方盘或用锡箔纸包好后再放入不锈钢方盘内，置于干热灭菌烘箱。
➢将干热灭菌烘箱温度设定为250℃，灭菌时间设定为1h，开启灭菌程序，灭菌程序结束待灭菌烘箱温度降至室温。
6.1.2主要仪器设备/试剂、对照品：设备：细菌内毒素检测仪、干热灭菌烘箱、医药冷藏箱试剂、对照品：细菌内毒素工作标准品、细菌内毒素检查用水、鲎试剂细菌内毒素工作标准品：以细菌内毒素国家标准品为基准标定其效价，用于干扰试验及检查法中阳性及供试品阳性溶液的制备、鲎试剂灵敏度复核试验。
细菌内毒素检查用水：应符合灭菌注射用水标准，其内毒素含量小于0.015EU/ml(用于凝胶法），且对内毒素试验无干扰作用。
6.2验证过程：6.2.1鲎试剂灵敏度复核鲎试剂灵敏度复核的目的不仅是考察鲎试剂的灵敏度是否准确，也是考察检验人员操作方法是否正确及试验条件是否符合规定。
实验室在使用一批新的鲎试剂进行细菌内毒素检查前必须进行鲎试剂灵敏度复核试验。
6.2.1.1 内毒素标准溶液的制备：取内毒素工作标准品一支，加入1ml 内毒素检查用水溶解其内容物，用封口膜将瓶口封严，置旋涡混合器上混合15min 。
细菌内毒素检测方法验证方案 定稿
细菌内毒素检测方法验证方案起草人：审核人：批准人：生效日期：文件分发范围：QA、QC1.验证目的：为确保细菌内毒素检测方法的专属性、灵敏度，保证检测结果可符合质量标准要求，特制定此验证方案。
2.验证范围：适用于注射液细菌内毒素检测方法验证。
3.验证小组成员及职责：组长：，QC经理，负责协调小组的行动，跟进验证方案的审批流程，协调与其他部门及小组成员内的交流，组织验证数据并文件化。
组员：，QC人员，负责起草方案并按照确认方案进行验证，起草验证报告。
组员：QC微生物主管，负责验证方案与报告的审核，验证过程的复核。
4.验证依据：4.1《药品生产质量管理规范》（2010年修订）4.2《药品生产验证指南》(2003年版)4.4《细菌内毒素检验操作规程》（SN-O08-F0061-02）4.5《中国药典2010版二部》附录5.验证前准备：5.1人员培训确认：检查人：日期：复核人：日期：5.2仪器设备5.3检验材料、试剂及标准品6. 鲎试剂灵敏度复核：以上该批鲎试剂按《细菌内毒素检查法操作规程》（SN-O08-F0061-02）检查法的要求复核标示灵敏度，应符合规定。
《鲎试剂灵敏度复核记录》（SN-O08-F0061-R02-01）编号：。
灵敏度复核结果： EU/ml7.验证方法：通过比较内毒素在水溶液和供试品溶液中反应的差异程度，来确定供试品在该浓度下是否对细菌内毒素（BET）检查有干扰，至少对3批样品进行干扰试验。
7.1供试品细菌内毒素限值和最大稀释倍数的确定（L）：7.1.1限值：每1mg中含细菌内毒素的量应小于30EU7.1.2供试品的最大有效稀释倍数（MVD）公式：MVD＝C*L/λ式中：C为供试品溶液的浓度（为2.5mg/ml），其中当L以EU/ml表示时，C为1.0ml/ml；当L以EU/mg或EU/U表示时，C的单位为mg/ml或U/ml，λ为鲎试剂的灵敏度。
7.1.3最大有效稀释倍数（MVD）计算结果：MVD＝CL/λ＝（2.5mg/ml*30EU/mg）/0.25 EU/ ml＝ 300倍7.2干扰试验7.2.1细菌内毒素标准溶液制备：取细菌内毒素工作标准品（160EU/ml）一支，开启，加入1ml 细菌内毒素检查用用水溶解，置旋涡混合器上混合15分钟，得到160EU/ml的内毒素标准溶液（以E160表示），用细菌内毒素检查用水稀释成4个浓度的标准溶液即2λ、λ、0.5λ、0.25λ。
内毒素方法验证方案
一、验证目的确保氯化钠注射液细菌内毒素检测方法的专属性、灵敏度，保证检测结果可符合质量标准要求，特制定此方案。
二、适用范围适用于本公司氯化钠注射液的细菌内毒素检测方法。
四、内容1 实验材料及用具1.1电子天平1.2电热恒温干燥箱1.3试管恒温仪1.4水银温度计1.5旋涡混合器1.6鲎试剂供应商:批号：灵敏度：规格：1.7细菌内毒素国家标准品供应商:中国药品生物制品检定所提供批号：效价：1.8细菌内毒素检查用水供应商:批号：规格：1.9实验用具:移液管、凝集管、三角瓶、试管、试管架、洗耳球、时钟、75%酒精棉、剪刀、砂轮。
2 实验准备2.1玻璃器皿的洗涤将玻璃器皿放入铬酸洗液或其他热原灭活剂或清洗液中充分浸泡，然后取出将洗液空干，用生活饮用水将残留洗液彻底洗净，再用注射用水反复冲洗三遍以上，空干后放入适宜的密闭金属容器中，然后放置入电热恒温干燥箱。
2.2除去玻璃器皿表面可能存在的外源性内毒素玻璃器皿置电热恒温干燥箱后，将电热恒温干燥箱调至250℃，待电热恒温干燥箱温度升至设定的温度后开始计时，干烤至少1 小时。
达到规定时间后，关断电源，待电热恒温干燥箱温度自然降至室温。
在不打开金属容器的情况下，可在两天内使用,否则须再次干烤。
3 具体验证步骤3.1鲎试剂灵敏度复核3.1.1目的考察鲎试剂的灵敏度是否准确，并考察检验人员操作方法是否正确及实验条件是否符合规定。
3.1.2操作方法3.1.2.1细菌内毒素标准溶液的制备将1支细菌内毒素标准品（140EU/支）完全溶解于1ml细菌内毒素检查用水中(置漩涡混合器上混合15分钟)，其浓度为140EU/ml，用这个浓度连续稀释制备1.0EU/ml、0.5EU/ml、0.25EU/ml、0.125EU/ml (每步稀释过程均应在旋涡混合器上混合30秒钟)四个浓度的细菌内毒素标准浓度。
3.1.2.2鲎试剂灵敏度复核操作取18支（0.1ml/支）待验证灵敏度的鲎试剂，加入适量的细菌内毒素检查用水，复溶备用。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
注射用水细菌内毒素分析方法确认方案文件编号：YZ-VP-2020-00
方案起草日期
方案审核日期
方案批准日期
药业有限公司
目录
1. 概述 (3)
2. 确认目的 (3)
3. 适用范围 (3)
4. 确认小组成员及职责 (3)
5. 风险评估 (3)
6. 确认方案编制依据 (4)
7. 确认内容 (4)
7.1 确认人员培训 (4)
7.2 确认前准备工作 (4)
7.3 确认所需仪器 (4)
7.4 确认所需试剂 (4)
7.5 确认所需供试品 (5)
7.6 试验过程 (5)
8. 偏差处理 (6)
9. 确认结果评定与结论 (6)
10. 再验证周期 (7)
11. 确认进度安排 (7)
12. 附件 (7)
13. 变更历史 (7)
1. 概述：
依据细菌内毒素分析方法确认的试验原理，采用本公司注射用水进行细菌内毒素分析方法确认，得到其无干扰浓度。
本方案中细菌内毒素的量用内毒素单位（EU）表示。
2. 确认目的：
为了确保注射用水细菌内毒素分析方法的可靠性，需在实际检验条件下，确认其对细菌内毒素检查试验有无干扰作用，以确认所采用的方法适合于注射用水的细菌内毒素检查。
3. 适用范围：
适用于注射用水细菌内毒素分析方法的确认。
4. 确认小组成员及职责：
姓名工作部门或职务职责
质量管理负责人负责方案及报告的批准
质量保证负责人负责跟踪方案的实施
质量控制负责人小组组长；负责方案的组织协调工作；负责各阶段确认结果汇总及评价；负责小组成员的培训及培训效果的评价
质量控制负责方案及报告的起草，并按照批准后的方案进行方法确认，并完成所有数据分析及试验记录
质量控制负责供试品的取样
5. 风险评估：
确认小组成员对注射用水细菌内毒素分析方法确认方案进行了风险评估分析，并制定了相应的控制措施以最大限度地降低风险。
具体情况见下表：
风险识别风险分析评估S P D RPN 风险级别控制措施
分析方法验证活动的立项管理方法验证没有
按照公司验证
标准管理规程
的要求进行立
项
44464高级
对分析方法验证活
动进行立项，并开展
验证
分析方法验证方案管理分析方法验证
活动无方案，
或方案没有审
核、审批过程
34448高级
由验证小组验证方
案，并对验证方案进
行审核和批准
人员人员培训不到
位操作不符合
要求
32212中级
加强培训考核，确保
操作符合要求
人流、物流交叉交叉污染 4 5 1 20 中级人流、物流通道分开
确认所需仪器仪器没有校准
或验证
4 2 3 24 中级
确认所需仪器必须
经过校验或验证
环境及空气洁
净度级别不符合要求影响实验结果 5 5 1 25 中级
安装空气净化系统
及检测装置
6. 确认方案编制依据：
《中国药典》2015年版四部。
7. 确认内容：
7.1 确认人员培训：
参加确认人员经过确认方案、相关操作规程及偏差处理管理规程的培训，培训合格后方可参与确认。
见人员培训记录。
7.2 确认前准备工作
7.2.1 进行确认前，所有与确认有关的仪器应进行过校验，仪表、计量器具等应校正合格。
见确认所需仪器、仪表、量具清单及校正情况。
7.2.2 进行确认前，检查设备及仪器操作、维护等文件，确认所需的相关文件齐全，并经过批准。
见确认所需文件。
7.3 确认所需仪器：
序号仪器名称型号编号有效期至
1 电热鼓风干燥箱
2 洁净工作台
3 旋涡混合器
4 内毒素凝胶法测定仪
7.4 验证所需试剂：
序号名称生产厂家批号规格配制批号
1 细菌内毒素工作标准品
2 鲎试剂
3 细菌内毒素检查用水- -
5 75％酒精
7.5 验证所需供试品：
序号名称来源数量
1 注射用水
2 注射用水
3 注射用水
7.6 试验过程：应进行3次独立的平行试验。
7.6.1 试验准备：玻璃器皿用自来水彻底洗净，再用纯化水反复冲洗三遍以上，控干后用锡箔纸包好后放入金属容器内，放置入电热鼓风干燥箱。
将电热鼓风干燥箱调至250℃，待电热鼓风干燥箱温度升至设定的温度后开始计时，干烤至少半小时。
达到规定时间后，关断电源，待电热鼓风干燥箱温度自然降至室温。
玻璃器皿用锡箔纸包装，在不打开包装的情况下，可在两周内使用。
否则须再次干烤除去可能存在的外源性内毒素。
7.6.2 鲎试剂灵敏度复核：
详见《鲎试剂灵敏度复核操作规程》。
7.6.3 干扰实验：目的是检验在某一浓度下的供试品对于鲎试剂与内毒素反应有无干扰作用。
使用的供试品溶液应为未检验出内毒素切不超过所使用的鲎试剂的最大有效稀释倍数的溶液。
7.6.3.1 制备内毒素标准对照溶液
取细菌内毒素工作标准品一支，轻弹瓶壁，使粉末落入瓶底，然后用砂轮在瓶颈上部轻轻划痕，用75％酒精棉球擦似乎后启开，启开过程中应防止玻璃屑落入瓶内。
按照标准品说明书，加入规定量的细菌内毒素检查用水溶解其内容物，用封口膜将瓶口封严，置漩涡混合器上混合15分钟。
然后进行稀释，制备成4个浓度的细菌内毒素标准溶液，即2λ、λ、0.5λ、0.25λ（λ为所复核的鲎试剂对的标示灵敏度），每稀释一步均应在漩涡混合器上混合30秒钟。
7.6.3.2 制备含内毒素的供试品溶液：
根据公式MVD=cL/λ，确定注射用水的最大有效稀释倍数MVD=1，将注射用水稀释一倍后将细菌内毒素工作标准品稀释成4个浓度即为2λ、λ、0.5λ、0.25λ，即得含内毒素的供试品溶液。
7.6.3.3 鲎试剂的准备：
取规格为0.1ml/支的鲎试剂，用细菌内毒素检查用水溶解，在旋涡混合器上混匀15分钟，然后制成2λ、λ、0.5λ、0.25λ四个浓度的内毒素标准溶液，每稀释一步均应在旋涡混合器上混匀30秒。
7.6.3.4 合格标准：两λc在0.5λ-2.0λ范围内，且Et均在0.5Es-2.0Es范围内，说明该供试品浓度稀释至0.02mg/ml确已排除干扰作用，在低于或等于此浓度的情况下即可使用细菌内毒素检查法。
见干扰试验检验记录。
7.6.4 供试品细菌内毒素检查：
7.6.4.1 在细菌内毒素检查中，按下表制备试验溶液，每批供试品必须做2支供试品管和2支供试品阳性对照，同时每次试验必须做2支阳性对照和2支阴性对照。
编号内毒素浓度/被加入内毒素的溶液平行管数
A 无/供试品溶液 2
B 2λ/供试品溶液 2
C 2λ/检查用水 2
D 无/检查用水 2
7.6.4.2 合格标准：保温60min±2min后观察结果。
若阴性对照溶液D的平行管均为阴性，阳性对照溶液B的平行管均为阳性，阳性对照溶液C的平行管均为阳性，试验有效。
若溶液A的两个平行管均为阴性，判定供试品符合规定。
若溶液A的两个平行管均为阳性，判定供试品不符合规定。
若溶液A的两个平行管中的一管为阳性，另一管为阴性，需进行复试。
复试时，溶液A需做4支平行管，若所有平行管均为阴性，判定供试品瓿符合规定，否则判定供试品不符合规定。
若供试品的稀释倍数小于MVD而溶液A出现不符合规定时，需将供试品稀释MVD重新实验，再对结果进行判断。
见细菌内毒素检验记录。
8. 偏差处理：
在确认过程中应严格按照方案执行，发现任何异常情况，应分析查明偏差原因后制定纠正预防措施，重新进行确认。
见偏差记录。
9. 确认结果评定与结论：
确认小组根据确认结果起草确认报告，并报确认与验证领导小组审批。
确认与验证领导小组对确认结果进行综合评审，并作出结论，确认合格后发放合格证
书。
10. 再验证周期：
若产品的分组或原检查条件发生改变可能影响检验结果时，根据实际情况，对分析方法进行评估以决定是否需要再确认，以保证使用的分析方法能够控制药品的内在质量。
11. 确认进度安排：
拟定确认小组于年月日至年月日对注射用水细菌内毒素分析方法确认方案进行确认。
12. 变更历史
版本号变更日期变更原因备注
00 新制定-。