注射用水细菌内毒素分析方法确认方案分析

注射用水细菌内毒素分析方法确认方案文件编号：YZ-VP-2020-00

方案起草日期

方案审核日期

方案批准日期

药业有限公司

目录

1. 概述 (3)

2. 确认目的 (3)

3. 适用范围 (3)

4. 确认小组成员及职责 (3)

5. 风险评估 (3)

6. 确认方案编制依据 (4)

7. 确认内容 (4)

7.1 确认人员培训 (4)

7.2 确认前准备工作 (4)

7.3 确认所需仪器 (4)

7.4 确认所需试剂 (4)

7.5 确认所需供试品 (5)

7.6 试验过程 (5)

8. 偏差处理 (6)

9. 确认结果评定与结论 (6)

10. 再验证周期 (7)

11. 确认进度安排 (7)

12. 附件 (7)

13. 变更历史 (7)

1. 概述：

依据细菌内毒素分析方法确认的试验原理，采用本公司注射用水进行细菌内毒素分析方法确认，得到其无干扰浓度。本方案中细菌内毒素的量用内毒素单位（EU）表示。

2. 确认目的：

为了确保注射用水细菌内毒素分析方法的可靠性，需在实际检验条件下，确认其对细菌内毒素检查试验有无干扰作用，以确认所采用的方法适合于注射用水的细菌内毒素检查。

3. 适用范围：

适用于注射用水细菌内毒素分析方法的确认。

4. 确认小组成员及职责：

姓名工作部门或职务职责

质量管理负责人负责方案及报告的批准

质量保证负责人负责跟踪方案的实施

质量控制负责人小组组长；负责方案的组织协调工作；负责各阶段确认结果汇总及评价；负责小组成员的培训及培训效果的评价

质量控制负责方案及报告的起草，并按照批准后的方案进行方法确认，并完成所有数据分析及试验记录

质量控制负责供试品的取样

5. 风险评估：

确认小组成员对注射用水细菌内毒素分析方法确认方案进行了风险评估分析，并制定了相应的控制措施以最大限度地降低风险。具体情况见下表：

风险识别风险分析评估S P D RPN 风险级别控制措施

分析方法验证活动的立项管理方法验证没有

按照公司验证

标准管理规程

的要求进行立

项

44464高级

对分析方法验证活

动进行立项，并开展

验证

分析方法验证方案管理分析方法验证

活动无方案，

或方案没有审

核、审批过程

34448高级

由验证小组验证方

案，并对验证方案进

行审核和批准

人员人员培训不到

位操作不符合

要求

32212中级

加强培训考核，确保

操作符合要求

人流、物流交叉交叉污染 4 5 1 20 中级人流、物流通道分开

确认所需仪器仪器没有校准

或验证

4 2 3 24 中级

确认所需仪器必须

经过校验或验证

环境及空气洁

净度级别不符合要求影响实验结果 5 5 1 25 中级

安装空气净化系统

及检测装置

6. 确认方案编制依据：

《中国药典》2015年版四部。

7. 确认内容：

7.1 确认人员培训：

参加确认人员经过确认方案、相关操作规程及偏差处理管理规程的培训，培训合格后方可参与确认。

见人员培训记录。

7.2 确认前准备工作

7.2.1 进行确认前，所有与确认有关的仪器应进行过校验，仪表、计量器具等应校正合格。

见确认所需仪器、仪表、量具清单及校正情况。

7.2.2 进行确认前，检查设备及仪器操作、维护等文件，确认所需的相关文件齐全，并经过批准。

见确认所需文件。

7.3 确认所需仪器：

序号仪器名称型号编号有效期至

1 电热鼓风干燥箱

2 洁净工作台

3 旋涡混合器

4 内毒素凝胶法测定仪

7.4 验证所需试剂：

序号名称生产厂家批号规格配制批号

1 细菌内毒素工作标准品

2 鲎试剂

3 细菌内毒素检查用水- -

5 75％酒精

7.5 验证所需供试品：

序号名称来源数量

1 注射用水

2 注射用水

3 注射用水

7.6 试验过程：应进行3次独立的平行试验。

7.6.1 试验准备：玻璃器皿用自来水彻底洗净，再用纯化水反复冲洗三遍以上，控干后用锡箔纸包好后放入金属容器内，放置入电热鼓风干燥箱。将电热鼓风干燥箱调至250℃，待电热鼓风干燥箱温度升至设定的温度后开始计时，干烤至少半小时。达到规定时间后，关断电源，待电热鼓风干燥箱温度自然降至室温。玻璃器皿用锡箔纸包装，在不打开包装的情况下，可在两周内使用。否则须再次干烤除去可能存在的外源性内毒素。

7.6.2 鲎试剂灵敏度复核：

详见《鲎试剂灵敏度复核操作规程》。

7.6.3 干扰实验：目的是检验在某一浓度下的供试品对于鲎试剂与内毒素反应有无干扰作用。使用的供试品溶液应为未检验出内毒素切不超过所使用的鲎试剂的最大有效稀释倍数的溶液。

7.6.3.1 制备内毒素标准对照溶液

取细菌内毒素工作标准品一支，轻弹瓶壁，使粉末落入瓶底，然后用砂轮在瓶颈上部轻轻划痕，用75％酒精棉球擦似乎后启开，启开过程中应防止玻璃屑落入瓶内。按照标准品说明书，加入规定量的细菌内毒素检查用水溶解其内容物，用封口膜将瓶口封严，置漩涡混合器上混合15分钟。然后进行稀释，制备成4个浓度的细菌内毒素标准溶液，即2λ、λ、0.5λ、0.25λ（λ为所复核的鲎试剂对的标示灵敏度），每稀释一步均应在漩涡混合器上混合30秒钟。

7.6.3.2 制备含内毒素的供试品溶液：

根据公式MVD=cL/λ，确定注射用水的最大有效稀释倍数MVD=1，将注射用水稀释一倍后将细菌内毒素工作标准品稀释成4个浓度即为2λ、λ、0.5λ、0.25λ，即得含内毒素的供试品溶液。