(整理)常用哺乳动物细胞培养基配方
常用缓冲液及培养基配方
常用缓冲液及培养基配方缓冲液和培养基是生物学实验中常用的重要试剂,它们的配方的选择对实验结果有着重要的影响。
下面将介绍几种常用的缓冲液和培养基的配方及其用途。
一、缓冲液配方1.磷酸盐缓冲液磷酸盐缓冲液常被用于细胞培养和生物化学实验中,它的使用范围很广。
常用的磷酸盐缓冲液有PBS(磷酸盐缓冲盐水),配方如下:-NaCl8g-KCl0.2g-Na2HPO41.42g-KH2PO40.24g将以上物质溶解在1L的去离子水中,pH值调到7.4,即可得到1×PBS缓冲液。
2. Tris缓冲液Tris缓冲液在分子生物学实验中常被用作DNA和RNA电泳的产物混合液。
常用的Tris缓冲液有Tris-HCl缓冲液和Tris-acetate缓冲液。
以下是Tris-HCl缓冲液的配方:- Tris 12.1 g-HCl(10M,pH7.6)10mL将Tris和HCl分别溶解在800 mL去离子水中,然后添加水调至1 L,pH值调节到目标值即可。
Tris-acetate缓冲液的配方与Tris-HCl相似,只是在Tris-HCl的基础上添加乙酸。
3. Glycine缓冲液Glycine缓冲液常被用于电泳实验中,用于电泳缓冲液和电泳媒介液的制备。
以下是Glycine缓冲液的配方:- Glycine 3 g- Tris 4.8 g-SDS0.207g-EDTA0.37g将以上物质溶解在1 L的去离子水中,pH值调至8.3,即可得到1×Glycine缓冲液。
1.LB培养基LB培养基是最常用的细菌培养基之一,用于培养大肠杆菌等革兰氏阴性菌。
以下是LB培养基的配方:- Tryptone 10 g- Yeast extract 5 g-NaCl10g将以上物质溶解在1L的去离子水中,加热至溶解,然后进行高压灭菌即可得到LB培养基。
2.M9培养基M9培养基是一种缺乏氮、氨基酸和碳的最小培养基,常被用于重组DNA的传输。
细胞培养的最佳生长条件和培养基配方
细胞培养的最佳生长条件和培养基配方细胞培养是一种很重要的实验技术,它可以帮助我们了解和研究细胞的生命活动过程。
在进行细胞培养之前,我们需要明确和了解细胞培养的最佳生长条件和培养基配方。
这些因素直接影响着细胞的生长和繁殖,因此选择合适的生长条件和培养基配方对于获得高质量的细胞培养是至关重要的。
细胞培养的最佳生长条件受到多个因素的影响,其中最重要的是温度、湿度和二氧化碳浓度。
对于大多数哺乳动物细胞而言,理想的生长温度往往在37摄氏度左右。
较低的温度会减缓细胞代谢活动,而过高的温度则会导致细胞脱水、代谢异常甚至死亡。
此外,细胞培养的湿度也非常重要。
过低的湿度会导致细胞脱水,而过高的湿度则可能引发细菌或霉菌的生长,对细胞培养产生不利影响。
通常情况下,细胞培养时会在培养器内加入一定浓度的二氧化碳,以维持细胞培养的最佳PH值。
大多数情况下,使用5% CO2浓度可以满足细胞的生长需求。
除了生长条件外,培养基配方也是细胞培养中不可或缺的因素。
通常情况下,培养基可以分为基础培养基和补充物两部分。
基础培养基提供了细胞所需的基本营养物质,如氨基酸、糖类、无机盐和维生素等。
常用的培养基包括DMEM (Dulbecco's Modified Eagle Medium)、RPMI-1640和MEM (Minimum Essential Medium)等。
这些培养基在组成和配方上略有区别,根据细胞的类型和需求,选择合适的基础培养基是十分重要的。
除了基础培养基外,补充物也是细胞培养中必不可少的。
补充物可以提供特定的生长因子、激素、细胞黏附因子和补充物等,以满足不同细胞的特殊需求。
常见的补充物有胎牛血清、人血清、胰岛素、转铁蛋白和脯氨酸等。
胎牛血清(Fetal Bovine Serum,FBS)是一种广泛使用的培养基补充物,它提供了丰富的生长因子、激素和营养物质,可以促进细胞的快速生长和繁殖。
然而,由于FBS来源和成分的不确定性,一些研究也开始使用人血清作为替代品,以减少动物血清对实验结果的可能影响。
细胞培养基本实验操作一般培养试剂介绍常用培养基及基本特性 HBSS的配制和使用攻略
常用培养基及基本特性1、RPMI-1640 MediumRPMI-1640广泛应用于哺乳动物、特殊造血细胞、正常或恶性增生的白细胞,杂交瘤细胞的培养,是目前应用十分广泛的培养基。
主要用于悬浮细胞培养。
其它像K-562、HL-60、Jurkat、Daudi、IM-9等成淋巴细胞、T细胞淋巴瘤细胞以及HCT-15上皮细胞等均可参考使用。
2、Minimum Essential Medium(MEM)也称最低必需培养基,它仅含有12种必需氨基酸、谷氨酰胺和8种维生素。
成分简单,可广泛适应各种已建成细胞系和不同地方的哺乳动物细胞类型的培养。
MEM-Alpha一般用于培养一些难培养细胞类型,而其它没有特殊之处的细胞株则几乎均可采用MEM来培养。
3、DMEM-高糖(标准型)是一种应用十分广泛的培养基,可用于许多哺乳动物细胞培养,更适合高密度悬浮细胞培养。
适用于附着性较差,但又不希望它脱离原来生长点的克隆培养,也可用于杂交瘤中骨髓瘤细胞和DNA转染的转化细胞的培养。
4、DMEM-低糖(标准型)是一种应用十分广泛的培养基,可用于许多哺乳动物细胞培养。
低糖适于依赖性贴壁细胞培养,特别适用于生长速度快、附着性较差的肿瘤细胞培养。
5、DMEM/F12DMEM/F12培养基适于克隆密度的培养。
F12培养基成分复杂,含有多种微量元素,和DMEM以1:1结合,称为DMEM/F12培养基(DME/F12medium),作为开发无血清配方的基础,以利用F12含有较丰富的成分和DMEM含有较高浓度的营养成分为优点。
该培养基适用于血清含量较低条件下哺乳动物细胞培养。
为了增强该培养基的缓冲能力,改良之一是在DMEM/F12(1:1)中加入15mM HEPES缓冲液。
6、McCoy’s 5AMcCoy’s 5A Medium 主要为肉瘤细胞的培养所设计,可支持多种(如骨髓、皮肤、肺和脾脏等)的原代移植物的生长,除适于一般的原代细胞培养外,主要用于作组织活检培养、一些淋巴细胞培养以及一些难培养细胞的生长支持。
经常使用哺乳动物细胞培育基配方
30
生物素
11
L-赖氨酸盐酸盐
31
D-泛酸钙
12
L-甲硫氨酸
32
叶酸
13
L-苯丙氨酸
33
i-肌醇
14
L-脯氨酸
34
烟酰胺
15
L-丝氨酸
35
氯化胆碱
16
L-苏氨酸
36
盐酸吡哆醇
17
L-色氨酸
37
核黄素
18
L-酪氨酸
38
盐酸硫胺素
19
L-缬氨酸
39
维生素 B 12
20
对氨基苯甲酸
DMEM(A) 基(粉末型)成份
28
盐酸硫胺
13
L-亮氨酸
29
盐酸吡哆辛
14
L-盐酸赖氨酸
30
葡萄糖
15
L-甲硫氨酸
31
丙酮酸钠
16
L-苯丙氨酸
32
酚红
DMEM(L) 基(粉末型)成份
序号
化合物名称
含量 (mg/L)
序号
化合物名称
含量 (mg/L)
1
无水氯化钙
17
L-丝氨酸
2
硝酸铁 .9H 2 O
18
L-苏氨酸
3
氯化钾
19
L-色氨酸
L-天门冬氨酸
33
D-泛酸钙
13
L-盐酸半胱氨酸
34
叶酸
14
L-盐酸胱氨酸
35
肌醇
15
L-谷氨酰胺
36
烟酰胺
16
L-谷氨酸
37
氯化胆碱
17
甘氨酸
38
培养基配方
一、哺乳动物培养基1、DMEM培养基DMEM培养基低糖(干粉) D2902 10X1L 含L-谷氨酰胺和1000 mg/L的葡萄糖。
不含酚红和和碳酸氢钠。
50L每升培养基含10.0g干粉。
配制时每升加3.7g碳酸氢钠。
DMEM培养基低糖(干粉)D5523 10×1L 含L-谷氨酰胺和1000 mg/L葡萄糖,不含碳酸氢钠。
2×5L每升培养基含10.0g干粉。
配制时每升加3.7g碳酸氢钠。
5L50L DMEM培养基低糖(干粉)D5030 10×1L 不含L-谷氨酰胺,葡萄糖,酚红,丙酮酸钠和碳酸氢钠。
10L每升培养基含8.3g干粉。
配制时每升加1.0g葡萄糖,0.584g 50LL-谷氨酰胺和3.7g碳酸氢钠。
DMEM培养基低糖(干粉)D5280 10×1L 可以高压消毒。
10L含1000 mg/L的葡萄糖。
不含L-谷氨酰胺和碳酸氢钠。
50L每升培养基含9.6g干粉。
配制时每升加0.584g L-谷氨酰胺和3.7g碳酸氢钠。
DMEM培养基低糖(液体)D5546 500ML 含有1000 mg/L葡萄糖和碳酸氢钠,不含L-谷氨酰胺。
用盐6×500ML 酸维生素B6代替盐酸吡哆醛。
使用前每升加入0.584g L-谷氨酰胺。
24×500ML1L6×1L DMEM培养基低糖(液体)D5921 100ML 含有1000 mg/L葡萄糖和碳酸氢钠,不含L-谷氨酰胺和酚红。
500ML用盐酸维生素B6代替盐酸吡哆醛。
使用前每升加入0.584g L-谷氨酰胺。
6×500MLDMEM培养基低糖(液体)D6046 100ML 含有1000 mg/L葡萄糖,L-谷氨酰胺和碳酸氢钠。
用盐酸维500ML 生素B6代替盐酸吡哆醛。
6×500ML1LDMEM培养基低糖(液体)D2429 100ML 1×的培养基含有1000 mg/L的葡萄糖。
各种培养基配方范文
各种培养基配方范文以下是一些常见的培养基配方:1.LB培养基配方:-水:1000mL-蛋白胨:10g-酵母提取物:5g-NaCl:10g*将以上成分溶解在水中,并调节pH至7.0。
加热至沸腾,搅拌溶解完全后,用纸质过滤器过滤消毒,装入培养瓶中。
2.TSB培养基配方:-水:1000mL-蛋白胨:17g-酵母提取物:3g-葡萄糖:2.5g-NaCl:5g*将以上成分溶解在水中,并调节pH至7.0。
加热至沸腾,搅拌溶解完全后,用纸质过滤器过滤消毒,装入培养瓶中。
3.M9盐基培养基配方:-水:1000mL-Na2HPO4:6g-KH2PO4:3g-NaCl:0.5g-NH4Cl:1g*将以上成分溶解在水中,并调节pH至7.0。
加热至沸腾,搅拌溶解完全后,用纸质过滤器过滤消毒,装入培养瓶中。
4. MacConkey琼脂培养基配方:-水:1000mL-蛋白胨:17g-胆盐混合物:1.5g-红薯提取物:10g-中性红:0.03g-结晶紫:0.001g-蔗糖:10g-氯化钠:5g*将以上成分溶解在水中,并调节pH至7.1、加热至沸腾,搅拌溶解完全后,用纸质过滤器过滤消毒,装入培养瓶中。
5. Sabouraud琼脂培养基配方:-水:1000mL-葡萄糖:40g-氯化钠:5g-氯化钾:1g-磷酸二氢钾:1g-氯化镁:0.5g-氯化钙:0.01g-硫酸亚铁:0.5g-红曲霉素:0.05g*将以上成分溶解在水中,并调节pH至5.6、加热至沸腾,搅拌溶解完全后,用纸质过滤器过滤消毒,装入培养瓶中。
以上是一些常见的培养基配方,不同的微生物或细胞需要不同的培养基来提供适合它们生长和繁殖的营养条件。
因此,在实际使用时,需要根据具体需求和文献资料进行配方的选择和调整。
293e细胞培养方法
293e细胞培养方法293E细胞是一种常用的哺乳动物细胞系,广泛应用于生物医学研究和重组蛋白表达等领域。
本文将介绍293E细胞的培养方法,包括细胞培养基的配制、细胞的传代和细胞的冻存。
一、细胞培养基的配制293E细胞的培养基配制相对简单,常用的培养基是DMEM (Dulbecco's Modified Eagle Medium)基础上加入适当的补充剂。
1.1 DMEM的配制将DMEM粉末加入无菌的蒸馏水中,并加热至溶解。
待完全溶解后,调节pH值至7.4,并加入适量的无菌纤维素。
1.2 培养基的补充剂将DMEM中加入10%的胎牛血清(FBS),1%的L-谷氨酰胺(L-Gln),100 U/mL的青霉素和100 μg/mL的链霉素。
混匀后滤过以获得无菌的培养基。
二、细胞的传代293E细胞的传代是维持细胞生长和增殖的重要步骤。
下面将介绍293E细胞的传代方法。
2.1 细胞解离用PBS(磷酸盐缓冲液)将培养皿中的细胞洗涤一次,去除培养基。
加入适量的胰酶或胰酶-乳酸酐(Trypsin-EDTA)溶液,并在37°C的恒温培养箱中孵育5-10分钟,直至细胞从培养皿上脱落。
2.2 细胞传代将细胞解离液转移至离心管中,离心300×g,室温下离心3-5分钟。
去除上清,加入适量的培养基悬浮细胞,并用移液器进行混匀。
将细胞悬液装入新的培养皿中。
2.3 细胞的培养条件将新传代的293E细胞放入37°C的恒温培养箱中,培养基的补充和细胞的观察一般每两天进行一次。
当细胞生长至80%-90%的密度时,可以进行下一次的传代。
三、细胞的冻存3.1 冻存液的配制将培养基中的FBS浓度提高至20%,添加相同体积的DMSO(二甲基亚砜),混匀后过滤灭菌得到冻存液。
3.2 细胞冻存将培养皿中的293E细胞加入足够量的培养基,离心300×g,室温下离心3-5分钟。
去除上清,加入冻存液悬浮细胞,并用移液器进行混匀。
各种培养液的配方
各种培养液的配方不同的细胞类型和培养目的需要使用不同的培养液。
下面列举一些常见的细胞培养液配方及其用途。
1.DMEM培养液:DMEM(Dulbecco's Modified Eagle's Medium)是一种最常用的细胞培养基,适用于多种哺乳动物细胞的培养。
以下是DMEM培养液的配方:-1×DMEM:将DMEM粉末加入去离子水中,调整pH至7.2-7.4,用0.22μm过滤器过滤灭菌。
-10%胎牛血清(FBS):将FBS加入1×DMEM中,使最终浓度为10%。
-1%抗生素/抗菌素:将1%抗生素/抗菌素(如青霉素/链霉素)加入1×DMEM中,使最终浓度为1%。
2.RPMI1640培养液:RPMI1640是一种适用于淋巴细胞和白血病细胞的培养基。
以下是RPMI1640培养液的配方:-1×RPMI1640:将RPMI1640粉末加入去离子水中,调整pH至7.2-7.4,用0.22μm过滤器过滤灭菌。
-10%FBS:将FBS加入1×RPMI1640中,使最终浓度为10%。
-1%抗生素/抗菌素:将1%抗生素/抗菌素加入1×RPMI1640中,使最终浓度为1%。
- 2-mercaptoethanol:将2-mercaptoethanol加入1×RPMI 1640中,使最终浓度为0.05mM。
3.MEM培养液:MEM(Minimum Essential Medium)是一种用于哺乳动物细胞培养的基础培养液。
以下是MEM培养液的配方:-1×MEM:将MEM粉末加入去离子水中,调整pH至7.2-7.4,用0.22μm过滤器过滤灭菌。
-10%FBS:将FBS加入1×MEM中,使最终浓度为10%。
-1%抗生素/抗菌素:将1%抗生素/抗菌素加入1×MEM中,使最终浓度为1%。
-1×非必需氨基酸:将非必需氨基酸(如谷氨酰胺、苏氨酸等)加入1×MEM中。
cho细胞培养参数
cho细胞培养参数
CHO细胞(Chinese Hamster Ovary Cell)是一种常用的哺乳动物细胞系,常用于重组蛋白的生产。
细胞培养参数主要包括以下几个方面:
1. 培养基:常用的CHO细胞培养基有DMEM/F12、RPMI 1640等,其中含有必需的氨基酸、维生素、葡萄糖以及其他生长因子和辅助物质。
2. 温度:CHO细胞的最适生长温度一般为37°C。
3. CO2浓度:为了维持细胞培养环境的酸碱平衡,一般在细胞培养箱中提供5% CO2气氛。
4. pH值:细胞培养液的pH值通常在7.2-7.4之间。
5. 细胞密度:细胞密度的种植密度根据所需的细胞产量,一般可根据细胞生长曲线和培养容器的尺寸来确定。
6. 培养时间:CHO细胞的培养时间一般为2-7天,具体根据细胞类型和实验目的而定。
7. 摇床速度:细胞培养时的摇床速度一般为80-120rpm,旋转摇床的旋转半径也会影响细胞的生长。
8. 营养物质浓度:选择适当的营养物质浓度,如葡萄糖、氨基酸、维生素等,对细胞的生长和产量有重要影响。
9. 培养容器:常用的培养容器有细胞培养板、细胞培养瓶、细胞培养滚筒等,选择合适的培养容器也会影响细胞的生长和产量。
以上为一般常用的CHO细胞培养参数,实际情况可能根据实
验目的和细胞特性的不同而有所调整。
在进行细胞培养实验时,需根据实际情况进行优化调整。
培养基配方及配制方法
培养基配方及配制方法培养基是一种用于寄养和培养细胞、微生物、组织等生物体的基质。
其配方的选择和配制方法对于不同的生物体和研究目的有很大的差异。
以下是一般常用的培养基配方及简单的配制方法:1. LB培养基(Luria-Bertani)LB培养基是常见的用于大肠杆菌等细菌的培养基,其配方包括:- 1% 蛋白胨(tryptone): 添加营养源和能量- 0.5% 酵母粉(yeast extract): 提供维生素和生长因子-1%NaCl(氯化钠):调节渗透压-蒸馏水:使混合液体稀释至所需体积配制方法:将蛋白胨、酵母粉和NaCl加入蒸馏水中,调整pH至7.0,将混合液体加热至溶解,过滤杂质,如需固化则加入1.5%的琼脂。
2. YPD培养基(Yeast extract-Peptone-Dextrose)YPD培养基常用于酵母菌的培养,其配方包括:- 1% 酵母提取物(yeast extract): 提供维生素和生长因子- 2% 蛋白胨(peptone): 为细菌提供碳源和能量- 2% 葡萄糖(dextrose): 为细菌提供碳源和能量-蒸馏水:使混合液体稀释至所需体积配制方法:将酵母提取物、蛋白胨和葡萄糖加入蒸馏水中,调整pH至7.0,将混合液体加热至溶解,过滤杂质,如需固化则加入2%的琼脂。
3. DMEM培养基(Dulbecco's Modified Eagle's Medium)DMEM培养基是常用的哺乳动物细胞培养基,其配方包括:-10%胎牛血清(FBS):提供生长因子和营养物质- 1% 青霉素-链霉素溶液(Penicillin-Streptomycin Solution): 防止细菌污染- 1% L-谷氨酰胺(L-Glutamine): 提供细胞代谢所需的基础物质-DMEM基础培养液:包括氨基酸、维生素等成分-蒸馏水:使混合液体稀释至所需体积配制方法:将胎牛血清、青霉素-链霉素溶液、L-谷氨酰胺和DMEM基础培养液加入蒸馏水中,调整pH值至7.4,混合均匀即可。
哺乳动物细胞培养技术
哺乳动物细胞培养技术一、前言哺乳动物细胞培养技术是生物学研究中的重要分支,它可以为生物医学研究提供大量的细胞材料,从而促进了细胞生物学、免疫学、药理学等领域的发展。
本文将介绍哺乳动物细胞培养技术,包括培养基的配制、无菌操作、细胞分离与传代、冷冻保存和复苏等方面。
二、培养基的配制1. 基础培养基哺乳动物细胞培养最常用的基础培养基是DMEM(Dulbecco's Modified Eagle Medium)和RPMI-1640(Roswell Park Memorial Institute 1640),这两种培养基都是以含有必需氨基酸和维生素的高糖量液体为基础,添加适当浓度的人血清或牛血清作为营养来源。
2. 补充因子除了上述基础成分外,还需要添加多种补充因子,如抗生素(青霉素和链霉素)、重组人胰岛素、转铁蛋白等。
抗生素可以有效地抑制细菌和真菌的生长,保证培养物的无菌性;胰岛素是细胞增殖和分化所必需的营养物质,可以提高培养细胞的存活率和增殖能力;转铁蛋白则可以促进铁离子的转运,保证细胞正常代谢。
3. pH值调节pH值对于细胞生长和代谢具有重要影响,因此需要在培养基中添加缓冲液来调节pH值。
最常用的缓冲液是HEPES(4-(2-羟乙基)-1-哌嗪乙烷磺酸),其pH范围为7.0~8.0。
三、无菌操作无菌操作是哺乳动物细胞培养过程中最为关键的环节之一。
以下是无菌操作需要注意的几个方面:1. 实验室环境实验室环境应该保持清洁、干燥、通风,并且应该经过消毒处理。
实验人员应该穿戴干净、整洁、合适的实验服,并戴上口罩和手套。
2. 器皿消毒所有用于培养细胞的器皿都需要在高压蒸汽灭菌器中进行消毒处理,以杀死其中的所有微生物。
3. 操作流程无菌操作应该按照一定的操作流程进行,包括洗手、穿戴实验服、准备实验器具和培养基、开展操作等步骤。
在操作过程中要注意不要碰触到非无菌区域和非无菌器具。
四、细胞分离与传代1. 细胞分离细胞分离是指将原始细胞群体中的单个细胞分离出来,使其成为一个独立的单元。
常用细胞培养基配方及缓冲液
常用细胞培养基配方及缓冲液细胞培养基是一种含有适当营养物质和生长因子的液体或凝胶,用于维持细胞的生长与繁殖。
常用的细胞培养基配方和缓冲液如下:一、常用的细胞培养基配方:1. DMEM(Dulbecco's Modified Eagle's Medium)-DMEM是最常用的细胞培养基之一,适用于多种种类的细胞培养。
-基本配方:-高糖DMEM:添加25mM葡萄糖-低糖DMEM:添加5.5mM葡萄糖-高氨基酸DMEM:添加高浓度的氨基酸,以促进细胞生长和蛋白质合成。
2.RPMI1640-适用于淋巴细胞和一些肿瘤细胞的培养。
-基本配方:-高糖RPMI1640:添加25mM葡萄糖-低糖RPMI1640:添加5.5mM葡萄糖-高氨基酸RPMI1640:添加高浓度的氨基酸。
3. MEM(Minimum Essential Medium)-MEM是最早用于细胞培养的培养基。
-基本配方:-高糖MEM:添加25mM葡萄糖-低糖MEM:添加5.5mM葡萄糖4. Ham's F-10-适用于肿瘤细胞和一些原代细胞的培养。
-基本配方:- 高糖Ham's F-10:添加25mM葡萄糖- 低糖Ham's F-10:添加5.5mM葡萄糖5.L-15-适用于多种种类的细胞培养。
-基本配方:- L-15培养基:必须在CO2-free环境下使用。
二、常用的缓冲液:1. 磷酸盐缓冲液(Phosphate Buffered Saline,PBS)-0.1MPBS的配方:-8gNaCl-0.2gKCl-1.44gNa2HPO4-0.24gKH2PO4-1L去离子水-调pH至7.42.HEPES缓冲液-基本配方:-119mMNaCl-5mMKCl-0.8mMMgSO4-0.4mMKH2PO4-2.4mMNaHCO3-20mMHEPES(pH7.4)-0.6mMCaCl23. Tris缓冲液-基本配方:- 25mM Tris- 192mM glycine-10%甘油-0.1%SDS-pH8.34. Hanks平衡盐液 (HBSS)-基本配方:-8gNaCl-0.4gKCl-0.146gKH2PO4-0.2gMgSO4-0.06gMgCl2-0.35gNaHCO3-0.06gNa2HPO4-pH7.45. Tris-EDTA-基本配方:- 1M Tris-HCl,pH 8.0-0.5MEDTA,pH8.0以上是常用的细胞培养基配方和缓冲液的一些例子,不同细胞类型和实验要求可能需要不同的培养基和缓冲液。
36种常用微生物培养基配制汇总
36种微生物常用培养基配制1.牛肉膏蛋白胨培养基(用于细菌培养)牛肉膏3g,蛋白胨10g,NaCl 5g,水1000mL,pH7.4~7.6。
2.高氏1号培养基(用于放线菌培养)可溶性淀粉20g,KNO3 1g,NaCl 0.5g,K2HPO4•3H2O 0.5g,MgSO4•7H2O0.5g,FeSO4•7H2O0.01g,水1000mL,pH7.4~7.6。
配制时注意:可溶性淀粉要先用冷水调匀后再加入到以上培养基中。
3.马丁氏(Martin)培养基(用于从土壤中分离真菌)K2HPO41g,MgSO4•7H2O0.5g,蛋白胨5g,葡萄糖10g,1/3000孟加拉红水溶液100mL,水900mL,自然pH,121℃湿热灭菌30min。
待培养基融化后冷却55~60℃时加入链霉素(链霉素含量为30μg/mL)。
4.马铃薯培养基(PDA)(用于霉菌或酵母菌培养)马铃薯(去皮)200g,蔗糖(或葡萄糖)20g,水1000mL,配制方法如下:将马铃署去皮,切成约2cm2的小块,放入1500mL的烧杯中煮沸30min,注意用玻棒搅拌以防糊底,然后用双层纱布过滤,取其滤液加糖,再补足至1000mL,自然pH,霉菌用蔗糖,酵母菌用葡萄糖。
5.察氏培养基(蔗糖硝酸钠培养基)(用于霉菌培养)蔗糖30g,NaNO3 2g,K2HPO4 1g,MgSO4•7H2O0.5g,KCl 0.5g,FeSO4•7H2O0.1g,水1000mL,pH7.0~7.2。
6.Hayflik培养基(用于支原体培养)牛心消化液(或浸出液)1000mL,蛋白胨10g,NaCl 5g,琼脂15g,pH7.8~8.0,分装每瓶70mL,121℃湿热灭菌15min,待冷却至80℃左右,每70mL中加入马血清20mL,25%鲜酵母浸出液10mL,15醋酸铊水溶液2.5mL,青霉素G钾盐水溶液(20万单位以上)0.5mL,以上混合后倾注平板。
*注意:醋酸铊是极毒的药品,需特别注意安全操作。
常用25种培养基详细配方
一、牛肉膏蛋白胨培养基(培养细菌用)牛肉膏3g蛋白胨10gNaCl 5g琼脂15—20g水1000mlpH 7.0—7.21.05kg/cm2,121.3℃灭菌20分钟。
二、淀粉琼脂培养基(高氏1号培养基,培养放线菌用)可溶性淀粉20gKNO31gNaCl 0.5gK2HPO40.5gMgSO40.5gFeSO40.01g琼脂20g水1000mlpH 7.2—7.4配制时,先用少量冷水,将淀粉调成糊状,在火上加热,边搅拌边加水及其他成分,溶化后,补足水分至1000ml。
1.05kg/cm2,121.3℃灭菌20分钟。
三、查氏培养基(培养霉菌用,实验16)NaNO32gK2HPO41gKCl 0.5gMgSO40.5gFeSO40.01g蔗糖30g琼脂15—20g水1000mlpH 自然1.05kg/cm2,121.3℃灭菌20分钟。
四、马丁氏(Martin)琼脂培养基(分离真菌用)葡萄糖10g蛋白胨5gKH2PO41gMgSO4·7H2O 0.5g1/3000孟加拉红(rose bengal,玫瑰红水溶液)100ml琼脂15—20gpH 自然蒸馏水800ml0.56kg/cm2(8磅/英寸2),112.6℃灭菌30分钟。
临用前加入0.03%链霉素稀释液100ml,使每毫升培养基中含链霉素30μg。
五、马铃薯培养基(实验16)马铃薯200g蔗糖(或葡萄糖) 20g琼脂15—20g水1000mlpH 自然马铃薯去皮,切成块煮沸半小时,然后用纱布过滤,再加糖及琼脂,溶化后补足水至1000ml。
1.05kg/cm2,121.3℃灭菌20分钟。
六、麦芽汁琼脂培养基(实验15)1.取大麦或小麦若干,用水洗净,浸水6—12小时,置15℃阴暗处发芽,上盖纱布一块,每日早、中、晚淋水一次,麦根伸长至麦粒的两倍时,即停止发芽,摊开晒干或烘干,贮存备用。
2.将干麦芽磨碎,一份麦芽加四份水,在65℃水浴锅中糖化3—4小时,糖化程度可用碘滴定之。
几种培养基的配方
几种培养基的配方培养基是用于细菌、真菌、细胞等生物体的培养和繁殖的人工营养物质。
不同生物体对于培养基的要求各不相同,因此配方也存在着各种不同的类型。
下面将介绍几种常见的培养基配方。
1. Luria-Bertani(LB)培养基配方:LB培养基是一种广泛应用于细菌培养的标准培养基,对于大多数非选择性的细菌和其他微生物都具有很好的生长支持作用。
其配方主要包括牛肉膏(或酵母提取物),蛋白胨,食盐和大肠杆菌细胞(如:DH5α),其具体比例可以根据实验要求进行调整。
2.苏氨酸–葡萄糖培养基配方:3. Sabouraud培养基配方:Sabouraud培养基是一种用于培养真菌的常规培养基。
其配方主要包括葡萄糖,蛋白胨和琼脂。
葡萄糖提供真菌所需的碳源和能量,蛋白胨提供维持真菌生长所需的氮源和其他营养物质,琼脂用于凝胶化培养基。
4. MEM(Minimum Essential Medium)培养基配方:MEM是一种用于培养哺乳动物细胞的基础培养基。
其配方主要包括氨基酸、维生素、微量元素和葡萄糖等。
相对于其他培养基,MEM还可添加胎牛血清或其他生长因子以提供细胞生长所需的营养物质和因子。
5. DMEM(Dulbecco's Modified Eagle Medium)培养基配方:DMEM是一种通用的哺乳动物细胞培养基,对于多种细胞株的生长具有良好的支持作用。
其配方基本与MEM类似,但DMEM常含有高葡萄糖浓度,可以提供更多的能量和碳源给细胞。
以上仅是几种常见的培养基配方,实际上根据不同的细胞株或微生物的特性和需求,还有更多种类和变种的培养基配方。
研究者可以根据具体实验目的和需求灵活调整培养基的配方,以满足所需的生长条件。
常用25种培养基详细配方
常用25种培养基详细配方以下是常用的25种培养基的详细配方:1. LB培养基(Luria-Bertani medium)-天然培养基:10g蛋白胨,5g酵母粉,10gNaCl,添加适量蒸馏水,pH值调至7.0。
- 固体培养基:添加15g agar。
2. TSA培养基(Tryptic Soy Agar)-17g蛋白胨,3g酵母提取物,5gNaCl,添加适量蒸馏水,pH值调至7.3-7.5- 固体培养基:添加15g agar。
3. NB培养基(Nutrient Broth)-8g蛋白胨,2g胰蛋白胨,5gNaCl,添加适量蒸馏水,pH值调至7.4 - 固体培养基:不添加agar。
4. R2A培养基(Reasoner's 2A medium)- 0.5g peptone,0.5g casein hydrolysate,0.5g yeast extract,0.5g glucose,0.5g soluble starch,0.3g dipotassium phosphate,0.05g magnesium sulfate,0.3g sodium pyruvate,10μg m anganese sulfate,添加适量蒸馏水,pH值调至7.2-7.4- 固体培养基:添加15g agar。
5. BHIS培养基(Brain Heart Infusion with 20% Sucrose)- 37.5g BHIS培养基,10g sucrose,添加适量蒸馏水,pH值调至7.5- 固体培养基:添加15g agar。
6. PDA培养基(Potato Dextrose Agar)-200g马铃薯,20g葡萄糖,添加适量蒸馏水,pH值调至5.6- 固体培养基:添加20g agar。
7. MRS培养基(de Man Rogosa Sharpe medium)- 10g peptone,10g beef extract,4g yeast extract,20g glucose,5g sodium acetate,2g dipotassium phosphate,0.02g magnesium sulfate,添加适量蒸馏水,pH值调至6.2-6.6- 固体培养基:添加20g agar。
常用哺乳动物细胞培养基配方
常用哺乳动物细胞培养基配方
本文档列出了几种常用哺乳动物细胞培养基的成分,包括RPMI-1640、DMEM、MEM、M199、F-10、F-12、DMEM/F-12 1:1、McCoy’s 5A 等等。
RPMI-1640 无酚红细胞培养基(粉末型)成分
RPMI-1640 细胞培养基(粉末型)成分
DMEM(A) 细胞培养基(粉末型)成分
DMEM(H) 细胞培养基(粉末型)成分
DMEM(L) 细胞培养基(粉末型)成分
MEM(A) 细胞培养基(粉末型)成分
MEM(G) 细胞培养基(粉末型)成分
MEM(H) 细胞培养基(粉末型)成分
MEM(L) 细胞培养基(粉末型)成分
MEM(α) 细胞培养基(粉末型)成分
199细胞培养基(粉末型)成分
199(无酚红)细胞培养基(粉末型)成分
199(无血清)细胞培养基(粉末型)成分
F-10液体培养基(液体)成分
DMEM/F-12 1:1细胞培养基(液体)成分
McCoy's 5A细胞培养基(液体)成分。
各种动物细胞培养基配方
199 SLM-BR
SLM111
199培养基的改良低血清培养基。可用于VERO细胞微载体反应器低血清培养。
320
240
180
MEM SLM
SLM120
MEM培养基的改良低血清培养基。可用于BHK21细胞的低血清培养。
320
240
180
5.替代天然培养基
产品名称
产品代码
特点
应用
10×1L
10L
500ml
1. 基础和改良细胞培养基
产品名称
产品代码
特点
10×1L
10L
500ml
BME
MD102
含Earle's盐和L-谷氨酰胺 不含碳酸氢钠。
160
120
120
DMEM
MD200
(低葡萄糖)含1000mg/L D-葡萄糖、L-谷氨酰胺和110mg/L丙酮酸钠 不含碳酸氢钠
160
120
120
MD201
(高葡萄糖)含4500mg/L D-葡萄糖和L-谷氨酰胺 不含碳酸氢钠
120
100
100
.
SAF100
CHO悬浮细胞生长培养基
CHO细胞抗体药物生产细胞生长
200
1800
200
SAF-CHO-RBH-001
SAF101
CHO细胞微载体灌流反应器、转瓶丰收细胞培养基
EPO、CHO乙肝疫苗生产细胞生长维持收液
200
1800
200
SAF-CHO-G-002
SAF103
富养CHO悬浮细胞培养基
CHO细胞筛选、克隆
SUB-1
SUB100
无动物组分,替代水解乳蛋白欧氏平衡盐溶液
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常用哺乳动物细胞培养基配方
本文档列出了几种常用哺乳动物细胞培养基的成分,包括RPMI-1640、DMEM、MEM、M199、F-10、F-12、DMEM/F-12 1:1、McCoy’s 5A 等等。
RPMI-1640 无酚红细胞培养基(粉末型)成分
RPMI-1640 细胞培养基(粉末型)成分
DMEM(A) 细胞培养基(粉末型)成分
DMEM(H) 细胞培养基(粉末型)成分
DMEM(L) 细胞培养基(粉末型)成分
MEM(A) 细胞培养基(粉末型)成分
MEM(G) 细胞培养基(粉末型)成分
MEM(H) 细胞培养基(粉末型)成分
MEM(L) 细胞培养基(粉末型)成分
MEM(α) 细胞培养基(粉末型)成分
199细胞培养基(粉末型)成分
199(无酚红)细胞培养基(粉末型)成分
199(无血清)细胞培养基(粉末型)成分
F-12细胞培养基(液体)成分
DMEM/F-12 1:1细胞培养基(液体)成分。