酸性磷酸酶
实验十五：酸性磷酸酶的显示
lOOml
• 0.6醋酸加蒸馏水200ml、取其
42ml
• 醋酸钠1.36g加蒸馏水200ml，取其158ml共
200ml
• B-甘油磷酸钠
2g
• 醋酸铅
2g
• 5％氯化镁
5ml
• 以上作用液在临用时配制，最终在pH5～5.2，过 滤使用。
• 3．材料：小鼠腹腔液涂片
• 【方法步骤】 • 1．免疫动物：实验前4～6天用无菌注射器取已
• 5．酸性磷酸酶的显示方法：酸性磷酸酶（acid phosphatase，ACP）主要存在于巨噬细胞，定 位于溶酶体内。在溶酶体膜稳定完整时，底物不 易渗入，ACP活力微弱或无活性，经固定，在合 适pH条件下，膜本身变为不稳定，逐渐改变其渗 透性，底物可以渗入，酶活力被显示。ACP在酸 性条件下（pH4.7）可使作用液中的底物β-甘油磷 酸钠的磷酸根解离出来，进而与溶液中硝酸铅结 合形成磷酸铅沉淀，因其是难溶解的无色沉淀物 ，需要与黄色的硫化铵作用，生成棕黑色PbS沉 淀而被显示出来。
灭菌的3%淀粉溶液1ml注射于小鼠腹腔内，每天 一次。 • 2．颈椎脱臼处死小鼠，打开腹腔。 • 3．吸取少量腹腔液，在玻片上涂层一薄层，室温 晾干。 • 4．将涂片滴置于温盒中，滴加适量ACP作用液， 37℃作用30分钟。取出后，蒸馏水漂洗。用10% 甲醛钙溶液后固定5min。 • 5．玻片入2%硫化胺溶液作用2～3min，进行显 色。取出后蒸馏水漂洗，镜检。 • 6．对照组的作用液中不加β-甘油磷酸钠，而以蒸 馏水代替；或入作用液前先用高温（50）处理 30min，使酶失去活性，作好标记，然后同时进 行上述实验。
• β-甘油磷酸钠 甘油+PO3-
• PO4 +Pb（NO3)2
酸性磷酸酶的显示方法
酸性磷酸酶的显示方法
酸性磷酸酶是一种酶类物质，它在人体细胞内起着重要的催化作用，并具有重要的调节作用。
因此，在许多疾病的诊断中，检测酸性磷酸酶的活性和浓度是非常重要的。
以下是关于酸性磷酸酶的显示方法的中文介绍。
常见的酸性磷酸酶显示方法包括酶活力测定、基础染色和免疫染色等。
这些方法可以通过不同的化学试剂和仪器设备来实现，从而得出酸性磷酸酶的活性和浓度。
2. 酶活力测定法
酶活力测定法是用于检测酸性磷酸酶活性的一种方法，其原理是通过一系列的化学反应来形成可测定的产物。
这种方法通常使用p-nitrophenyl phosphate（pNPP）作为酶活力测量底物，它可以转化为p-nitrophenol。
测量产生的p-nitrophenol的光密度可以用于计算样品中酸性磷酸酶的活性。
3. 基础染色法
基础染色法是通过将酸性磷酸酶活性产生的颜色染到细胞和组织切片上来显示酸性磷酸酶的分布和浓度。
这种方法使用基础染料如甲基绿、苏木精、尤红和新绿等来染色，然后通过显微镜观察染色后的细胞和组织切片来判断样品中是否含有酸性磷酸酶。
免疫染色法是通过使用抗体来检测酸性磷酸酶的存在和浓度的方法。
该方法使用细胞和组织切片，将其与具有特异性抗体的二抗结合，然后用荧光素或酶标记的标记剂来标记结合的二抗。
最终，通过荧光显微镜或酶标的方法来检测抗体与酸性磷酸酶的结合情况。
总结：。
酸性磷酸酶的临床意义【健康小知识】
酸性磷酸酶的临床意义
文章导读
酸性磷酸酶是一种广泛存在于人体组织内的一种物质，主要存在于细胞和体液
里面，血液里面的酸性磷酸酶，主要来源于前列腺，来源于血小板，白细胞等，其中在
前列腺里面，含量是最丰富的。
在日常的医疗检查当中，通过对酸性磷酸酶的检查，能够
取得前列腺癌的辅助诊断的作用，另外对于血液病、骨类疾病也有一定的诊断的作用和效果。
临床意义
正常人血清中的酸性磷酸酶来源于骨、肝、肾、脾、胰等组织，故不论男女老幼，其
含量大致相同。
而前列腺患者以及出现肝炎、甲状旁腺机能亢进、红血球病变等疾病时，
血清中酸性磷酸酶的活力都会升高。
为了鉴别血清中增加的酸性磷酸酶是来自前列腺还是
来自其他器官，必须加以区别。
为此可进一步采用某些抑制剂进行选择性抑制作用。
例如：乙醇和酒石酸对前列腺酸性磷酸酶有显着的抑制作用，而对红血球酸性磷酸酶的抑制作用
较弱。
ACP测定主要用于前列腺癌的辅助诊断。
(1)前列腺癌：尤其是转移癌ACP明显升高。
PAP对前列腺癌的诊断较ACP敏感，二
者对晚期前列腺的诊断、疗效观察及预后监测价值更大。
(2)血液病：粒细胞白血病、高雪病、尼曼匹克病、原发性血小板减少性紫癜、溶血性
贫血等ACP活性亦增高。
(3)非恶性前列腺疾病：前列腺炎、前列腺肥大、前列腺梗死等ACP活性也增高。
(4)骨疾病：变形性骨炎、成骨不全、软骨病、骨肉瘤、多发性骨髓瘤及某些非前列腺
恶性肿瘤的骨转移，ACP活性也可升高。
(5)其他：甲状腺功能亢进，急、慢性肾炎、尿潴留等ACP活性可增高。
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正常值： 血清2.2～10.5U／L。
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相关检查： 血清酸性磷酸酶、血清酸性磷酸酶 （ACP）。
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相关症状： 口粘腻、黄疸、呼吸异常、紫绀、心悸、 血尿。
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ห้องสมุดไป่ตู้相关疾病：
医学检验·各论 酸性磷酸酶
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别名： 酸性磷酸酶。
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简介： 酸性磷酸酶主要分布于前列腺、肝、
脾、乳汁、红细胞、血小板及骨骼等。以 前列腺含量最为丰富。
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临床意义：
增高：前列腺癌，特别是有转移时， 血清酸性磷酸酶可明显增高。变形性骨髓 炎、原发性骨肿瘤、甲状腺功能亢进、白 血病、乳腺癌、心肌梗死、肝炎、肝硬化、 胆囊炎、溶血性疾病、急性尿潴留时可增 高。此外，前列腺活检。膀胱镜检查、直 肠检查等也可使酸性磷酸酶活性增高。
乳腺癌、老年人前列腺癌、前列腺癌、甲 状腺功能亢进症、心肌梗死、急性心肌梗 死、骨肿瘤、甲型病毒性肝炎、乙型病毒 性肝炎。
谢谢！
实验十五：酸性磷酸酶的显
如钼酸铵-硫酸溶液，用 于与水解产物反应生成
有色络合物。
用于提取植物组织中的 酸性磷酸酶。
用于调节实验溶液的pH 值。
03
实验操作过程
实验步骤一：样本制备
准备不同浓度的酸性磷酸酶溶液，以 便后续实验对比。
准备适量的底物溶液，以备后续使用。
将样本分别置于离心管中，标记好浓 度和编号。
实验步骤二：显色反应
中孵育15分钟。
02
03
4. 加入4-氨基安替比林和铁 氰化钾，混匀。
04
05
5. 用分光光度计测量各试管 在550nm处的吸光度。
02
材料与试剂
实验材料
新鲜植物组织样品
如菠菜叶片、豌豆叶片等。
缓冲液
用于保持实验环境的pH稳定。
实验试剂
酸性磷酸酶溶液
显色剂
无水乙醇
醋酸
用于催化磷酸酯的水解 反应。
混合液以及准确测量吸光度值等细节，以确保实验结果的准确性和可靠性。
04
结果分析
数据分析
01
02
03
实验数据整理
将实验过程中记录的数据 进行整理，包括不同时间 点的吸光度值、温度、pH 值等。
数据清洗
去除异常值和缺失值，确 保数据分析的准确性。
数据转换
对数据进行适当的转换， 如求平均值、中位数等， 以便更好地反映实验结果。
通过实验数据，可以得出酸性磷酸酶的浓度与显色深浅呈正相关，可以通过观察颜 色变化来间接判断酶的浓度变化。
结果应用与意义
酸性磷酸酶在生物学、医学和农业等 领域具有广泛的应用价值，例如在骨 代谢、癌症诊断和治疗以及植物抗病 研究中都发挥着重要作用。
本实验结果可以为这些领域的研究提 供参考，帮助人们更好地了解酸性磷 酸酶的性质和作用机制，从而为相关 研究和应用提供有益的启示。
《酸性磷酸酶的》课件
基因克隆与表达
基因克隆
通过分子生物学技术，从生物体中提取酸性磷酸酶基因的全 长或部分序列，并在实验室中进行复制。
基因表达
将克隆的酸性磷酸酶基因转染至适当的细胞或生物体中，使 其表达产生相应的蛋白质。
基因突变与功能研究
基因突变
研究酸性磷酸酶基因突变对其功能的 影响，包括酶活性、底物特异性等方 面的变化。
功能研究
通过体外实验和体内实验，深入了解 酸性磷酸酶在生物体内的生理功能和 作用机制。
基因治疗与药物研发
基因治疗
利用酸性磷酸酶基因或其相关分子进行治疗，以纠正或补偿某些遗传性疾病或病理状态 。
药物研发
基于酸性磷酸酶的特性，开发具有治疗作用的新型药物，用于癌症、感染性疾病等的治 疗。
06 酸性磷酸酶的未来研究方 向与展望
低副作用。
抑制剂的优化
02
对已有抑制剂进行结构优化，以提高其选择性、稳定性和口服
生物利用度。
抑制剂的作用机制研究
03
深入探讨酸性磷酸酶抑制剂的作用机制，为进一步的药物设计
和优化提供理论支持。
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药效学特性
抑制剂对酸性磷酸酶的抑制作用具有选择性，对其他酶的影响较小。抑制剂的作 用强度与抑制常数（Ki）成反比，Ki越小，抑制作用越强。
药代动力学特性
抑制剂在体内的吸收、分布、代谢和排泄过程受多种因素影响。药物的生物利用 度、半衰期、血药浓度等药代动力学参数对药物的疗效和安全性具有重要影响。
05 酸性磷酸酶的基因工程研 究
它具有一些重要的特性，包括 对pH值的敏感性，通常在酸性 环境下表现出较高的活性。
此外，酸性磷酸酶还具有底物 特异性，只作用于特定的磷酸 酯底物。
酸性磷酸酶(ACP)检测
迪信泰检测平台
酸性磷酸酶（ACP）检测
酸性磷酸酶（Acid phosphatase, ACP）是一种是非特异性磷酸单酯酶，可以催化几乎所有的磷酸单酯的水解反应，生成无机磷酸和相应的醇、酚、糖等，还可以催化磷酸基团的转移反应，并直接参加磷代谢，在钙、磷的消化、吸收和分泌过程中发挥了重要的作用。
诱导并分泌酸性磷酸酶是植物应对低磷环境的重要适应性反应之一，血清酸性磷酸酶活力已成为诊断和监测多种疾病重要手段。
迪信泰检测平台采用生化法，结合相应的酶类的试剂盒可以高效、精准的检测酸性磷酸酶的活性变化。
此外，我们还提供其他酯酶类的检测服务，以满足您的不同需求。
生化法测定酸性磷酸酶样本要求：
1. 请确保样本量大于0.2g或者0.2mL。
周期：2~3周。
项目结束后迪信泰检测平台将会提供详细中英文双语技术报告，报告包括：
1. 实验步骤（中英文）。
2. 相关参数（中英文）。
3. 图片。
4. 原始数据。
5. 酸性磷酸酶活性信息。
迪信泰检测平台可根据需求定制其他物质测定方案，具体可免费咨询技术支持。
《酸性磷酸酶的》课件
研究进展：酸性磷酸 酶与其他生物标志物 的联合应用在肿瘤、 心血管疾病等研究中 的应用前景
联合检测方法：介绍酸 性磷酸酶与其他生物标 志物的联合检测方法， 如酶联免疫吸附试验、 荧光定量PCR等
PART SEVEN
研究酸性磷酸酶的分子结构，了解其功能与作用机制 探索酸性磷酸酶在生物体内的分布与调控机制 研究酸性磷酸酶在疾病发生发展中的作用，为疾病治疗提供新思路 开发酸性磷酸酶的抑制剂或激活剂，为药物研发提供新方向
代谢
酸性磷酸酶B 主要存在于细 胞核中，参与 DNA修复和基
因表达调控
酸性磷酸酶A 和酸性磷酸酶 B在生理功能 和调控机制上
有所不同
PART THREE
细胞内：主要存在于细胞质中，参 与细胞代谢
组织分布：主要分布在肝脏、肾脏、 骨骼等组织中
添加标题
添加标题
添加标题
添加标题
细胞外：存在于细胞外液中，参与 细胞间信号传递
酸性磷酸酶的检测：通过检测酸性磷酸酶的活性，可以评估骨质疏松症的严重程度
酸性磷酸酶在骨关节炎中的作用：参与骨关节软骨代谢，影响关节健康 骨关节炎的症状：关节疼痛、肿胀、僵硬等 酸性磷酸酶与骨关节炎的关系：酸性磷酸酶水平升高可能与骨关节炎的发生和发展有关 治疗方法：药物治疗、物理治疗、手术治疗等，其中药物治疗包括抑制酸性磷酸酶活性的药物
酸性磷酸酶在骨 代谢中的调节作 用：通过调节骨 细胞活性和骨基 质代谢，维持骨 代谢的平衡
酸性磷酸酶在骨 代谢中的其他作 用：参与骨细胞 凋亡和骨细胞信 号传导，影响骨 代谢的调控
酸性磷酸酶在免疫反应中的作用：参与免疫细胞的激活和增殖，增强免疫反应 酸性磷酸酶在炎症反应中的作用：参与炎症介质的生成和释放，促进炎症反应 酸性磷酸酶在免疫调节中的作用：参与免疫调节，维持免疫系统的平衡 酸性磷酸酶在炎症调节中的作用：参与炎症调节，减轻炎症反应对机体的损害
实验三、 细胞中酸性磷酸酶的定位
A液（0.2mol/L乙酸液）：冰醋酸1.2ml加蒸馏水100ml 。 B液（0.2mol/L乙酸钠液）：NaAc.3H2O 2.72g加蒸馏 水至１00毫升。 取A液３０毫升＋B液70毫升＋蒸馏水300毫升。 6)6%淀粉肉汤:牛肉膏0.3g ,蛋白胨1.0g,NaCl 0.5g,可溶性 淀粉６.0g，蒸馏水１00ml，煮沸灭菌，４℃保存，使 用时热水浴融化。 3.仪器、 用具：注射器、恒温水箱、显微镜、擦镜纸、 解剖盘、解剖剪、盖玻片、吸水纸。
七、实验报告及思考题
简图表示所观察到的酸性磷酸酶显示结果 和分布。 思考题 在制片的过程中为什么要采用冷冻涂片？ 简述巨噬细胞（MΦ）发育及MΦ分布？
在高等动物中存在大小两类吞噬细胞（巨噬细胞和嗜中性粒细 胞），专司吞噬作用，在细胞的非特异免疫功能中发挥重要作 用。 1.单核细胞 单核细胞来自骨髓的前单核细胞，发育成熟后释放到血液中。 血液中单核细胞已向全身各组织并进一步分化成各种组织的巨噬 细胞。血液中单核细胞为圆形或椭圆形，直径14-20微米，在形态 上很难和其他独核细胞相区分。胞质中含有嗜天青颗粒，它是一 种溶酶体，其中含有过氧化物酶，酸性磷酸酶，非特异性酯酶和 溶菌酶等，这些酶与单核细胞的杀伤和消化功能有关。单核吞噬 细胞在血液中约占白细胞的1%-3%，其在血液中的半衰期约为810个小时，一旦进入组织分化为巨噬细胞后，其生命周期可长达 数月至数年。
实验三、 细胞中酸性磷酸酶的定位
一、实验目的
1.了解并掌握酸性磷酸酶定位的原理及操作 步骤。 2.观察酸性磷酸酶在细胞中的分布。
二、实验原理
酸性磷酸酶（ACP）是溶酶体的特征性酶，主要 存在于巨噬细胞,定位于溶酶体内。正常条件下,巨 噬细胞处于休止状态,酶活性很低。但在合适的pH 条件下，经过活化，其形态、代谢和功能上表现 出一系列显著的变化， 如膜活性增高和酸性磷酸 酶活性增强，从而改变其渗透性底物可以渗入,酶 活力被显示。
前列腺特异性酸性磷酸酶
前列腺特异性酸性磷酸酶前列腺特异性酸性磷酸酶介绍：前列腺特异性酸性磷酸酶(prostatic acid phosphatase，PAP)是酸性磷酸酶同工酶，由前列腺上皮细胞溶酶体产生，是一种由两个相同亚单位组成的糖蛋白，其分子量为100kD，等电点4.4～5.5，半衰期为1.1～2.6小时。
男性血清中酸性磷酸酶主要来源于前列腺，而前列腺组织中酸性磷酸酶活力较其他组织高1000倍。
前列腺特异性酸性磷酸酶正常值：0～2.1μg/L。
前列腺特异性酸性磷酸酶临床意义：异常结果：(1)前列腺癌患者血清PAP水平明显增高，且PAP水平随前列腺癌病情进展而升高，有转移者较未转移者升高更为明显。
提示血清PAP检测对前列腺癌的分期及预后判断具有一定的临床意义。
(2)血清PAP水平升高还可见于其他恶性肿瘤如骨肉瘤、多发性骨髓瘤以及其他癌的骨转移等。
(3)在某些非肿瘤性疾病如前列腺增生、甲状旁腺功能亢进症、骨质疏松等亦可出现血清PAP水平升高，但测定值较低。
需要检查的人群：有尿频、尿急、尿痛、血尿、骨头疼痛等症状的人群。
前列腺特异性酸性磷酸酶注意事项：检查前:1、抽血前一天不吃过于油腻、高蛋白食物，避免大量饮酒。
血液中的酒精成分会直接影响检验结果。
2、体检前一天的晚八时以后，应开始禁食12小时，以免影响检测结果。
3、抽血时应放松心情，避免因恐惧造成血管的收缩，增加采血的困难。
检查后:1、抽血后，需在针孔处进行局部按压3-5分钟，进行止血。
注意：不要揉，以免造成皮下血肿。
2、按压时间应充分。
各人的凝血时间有差异，有的人需要稍长的时间方可凝血。
所以当皮肤表层看似未出血就马上停止压迫，可能会因未完全止血，而使血液渗至皮下造成青淤。
因此按压时间长些，才能完全止血。
如有出血倾向，更应延长按压时间。
3、抽血后出现晕针症状如：头晕、眼花、乏力等应立即平卧、饮少量糖水，待症状缓解后再进行体检。
4、若局部出现淤血，24小时后用温热毛巾湿敷，可促进吸收。
前列腺酸性磷酸酶(PAP)
前列腺酸性磷酸酶（PAP）
前列腺酸性磷酸酶（PAP）介绍：
前列腺酸性磷酸酶(PAP)系由成熟的前列腺上皮细胞合成及分泌的糖蛋白(分子量100000)，经前列腺管道进入精囊，由尿道排出。
前列腺癌时，癌细胞产生的前列腺酸性磷酸酶由于无导管或腺体导管由癌细胞破坏，故直接被吸收入血循环，而导致血清前列腺酸性磷酸酶升高。
前列腺酸性磷酸酶（PAP）正常值：
>300U/L(King氏法)。
前列腺酸性磷酸酶（PAP）临床意义：
异常结果：本法可用作前列腺癌的诊断、治疗效果及预后估价及转移性骨肿瘤鉴别诊断。
据报道伴骨转移的前列腺癌患者前列腺酸性磷酸酶升高者占80%。
部分良性前列腺增生患者血清前列腺酸性磷酸酶可升高，此时应临床判断及随访观察。
近期前列腺直肠指检可引起血清前列腺酸性磷酸酶升高，因此宜于检查前或检查后2周采血测定。
标本切忌溶血，否则亦可使测定结果异常。
需要检查的人群：有尿频、尿急、尿潴留、尿痛、难以形成尿流、血尿、骨头疼痛等症状的人群。
前列腺酸性磷酸酶（PAP）注意事项：
检查前注意：1、前列腺有急性炎症时，禁忌前列腺按摩检查。
2、按摩时用力应均匀，切忌使用暴力，以免引起疼痛及损伤。
3、按摩时应注意前列腺液的外观，并行镜检。
4、在按摩中应注意前列腺的大小、硬度、表面是否光滑、有无结节与压痛，中央沟是否存在、变浅或消失，腺体是否固定，触痛时有否捻发音，从而达到检查的目的。
前列腺酸性磷酸酶（PAP）检查过程：检查方法：可为直肠指检。
实验三、 细胞中酸性磷酸酶的定位
四、实验方法与步骤
１.前处理
（１）小白鼠每日腹腔注射６％淀粉肉汤１ml， 连续注射３天．
（２）在第３－４天,再向腹腔注射１ml生理盐 水，过３～５min用颈椎脱臼法处死小鼠，剖开腹 腔，把内脏推向一侧，用不带针头的注射器或吸管 吸取腹腔液．
２.制片
1.将腹腔液滴一滴于冰冻的干净载玻片上，涂开， 自然干燥。 2.放入作用液中，37℃ 保温30min 。 3.蒸馏水漂洗片刻。 4.放入甲醛钙固定液中固定5min 。 5.蒸馏水漂洗片刻。 6.放入2%硫化铵液3-5min 。 7.蒸馏水漂洗,镜检。
2.巨噬细胞的特性
组织中的巨噬细胞则呈显著的多形性，在培养条件下对塑料或 玻璃表面具有极强的粘附性，一次可利用这一特性分离巨噬细 胞并与非粘附性细胞分开，但其作用机制不详。巨噬细胞在体 内可借其表面粘附分子与其它细胞或细胞外基质黏附在一起。 巨噬细胞的另一特性是对异物通过不同机制具有吞噬作用 （phagocytosis）,吞饮（endocytosis）或胞饮作用 （pinocytosis）。可将异物吞入胞内，并借其胞浆内的大量液 泡及颗粒中的内含物和代谢产物将吞入的异物降解，消化和清 除。
3.小鼠的处死
脊柱脱臼法 用左手拇指和食指捏住小白鼠头的后部，并用力下 压，右手抓住鼠尾，用力向后上方拉，即可使颈椎脱臼，瞬间 死亡 。 皮肤和腹膜要分别剪开，并确保皮肤血液 不流入腹腔。 腹腔内的冲洗液要全部吸干。
六、实验结果与分析
巨噬细胞的细胞质中，出现许多棕色或棕 黑色的颗粒和斑块。部分细胞内，酸性磷 酸酶极为丰富。整个细胞质区域都有黑色 沉淀。中性粒细胞呈现阴性反应。
A液（0.2mol/L乙酸液）：冰醋酸1.2ml加蒸馏水100ml 。 B液（0.2mol/L乙酸钠液）：NaAc.3H2O 2.72g加蒸馏 水至１00毫升。 取A液３０毫升＋B液70毫升＋蒸馏水300毫升。 6)6%淀粉肉汤:牛肉膏0.3g ,蛋白胨1.0g,NaCl 0.5g,可溶性 淀粉６.0g，蒸馏水１00ml，煮沸灭菌，４℃保存，使 用时热水浴融化。 3.仪器、 用具：注射器、恒温水箱、显微镜、擦镜纸、 解剖盘、解剖剪、盖玻片、吸水纸。
医院检验中心酸性磷酸酶染色操作规程
医院检验中心酸性磷酸酶(ACP)染色操作规程
[原理]
酸性磷酸酶在酸性环境中水解甘油磷酸钠，产生磷酸根。
磷酸根与硝酸铅作用生成磷酸铅，定位于胞浆中的磷酸铅再与硫化铵反应生成棕黑色硫化铅沉淀。
[试剂]
1．2mol/L乙酸缓冲液(pH4．7)：1mol／L乙酸100ml 加1mol/L氢氧化钠54．4ml，再加蒸馏水至500mL。
2．孵育液：乙酸缓冲液12m1，508／L硝酸铅2m1，32g ／L β—甘油磷酸钠4ml，蒸馏水74ml。
3．硫化铵溶液：硫化铵1—2ml加蒸馏水到100m1。
4．4．28／L甲基绿：甲基绿2g加蒸馏水100ml。
[操作]
(1)新鲜涂片滴加95％乙醇10滴，固定10分钟。
(2)水洗后晾干。
放入孵育液37℃2—4小时。
(3)水洗数次，置于10g/L硫化铵染色3分钟；
(4)自来水冲洗后，用20g/L甲基绿复染10分钟，水洗，
待干后镜检。
[临床意义]
(1)单核细胞和组织细胞呈阳性反应。
(2) Gaucher3细胞呈强阳性反应，而尼曼—匹克
(Nie-mann-Picks)氏细胞为阴性。
(3)毛细胞性白血病常为阳性反应(加1—酒石酸后
不被抑制)。
(4) T淋巴细胞为阳性。
且被酒石酸抑制；而B淋
巴细胞为阴性。
[附注]
(1)涂片要新鲜，并应尽早固定染色。
若不能及时测定，
应固定后放冰箱保存。
(2)硫化铵试剂出现深黄色，提示有大量硫离子消耗，若
染色效果不佳，应先考虑硫化铵试剂变质，应予更换
后再做试验。
2024肿瘤标志物：前列腺酸性磷酸酶(PAP)检测的临床意义
2024肿瘤标志物：前列腺酸性磷酸酶(PAP)检测的临床意义前列腺酸性磷酸酶(PrOStatiCaClCphosphatase,PAP)是前列腺合成的一种糖蛋白，为前列腺分泌的一种分子量102kDa,由两个相同亚单位组成的糖蛋白的酶类半衰期为1.1-2.6h o在酸性条件下，具有水解磷酸的能力。
1936年Gutmann等在前列腺癌患者及骨转移患者中发现血清酸性磷酸酶活性升高，而前列腺组织中酸性磷酸酶活性较其他组织高IOe)O倍。
PAP是酸性磷酸酶的同工酶，具有被酒石酸抑制的特征。
检测方法以往常采用生化方法测定PAP,但灵敏度低，现大多采用放射免疫分析法、酶免疫分析以及化学发光免疫分析进行检测。
参考区间酶免疫分析(EIA)):<2.0μg∕L,参考区间可因方法、仪器、试剂不同而有不同，因此各实验室应根据试剂说明书和临床实践建立自己的参考区间。
临床意义前列腺癌时可见血清PAP浓度升高，出现的频率与前列腺癌分级的高低成正比在初期（A期、B期）为58%,C期为68%,D期达91%。
因此PAP测定可用作肿瘤定级的辅助指标，同时可根据PAP值监控患者对治疗的反应。
PAP诊断前列腺癌的特异性比PSA高，但灵敏度低于PSA,30%~40%发生转移的前列腺患者为PAP假阴性。
因此对该疾病无早期诊断价值。
前列腺肥大病人有约10%的假阳性率,前列腺炎和泌尿生殖系统疾病时也可见PAP升高,联合检测PSA和PAP可以提高对前列腺癌诊断的阳性率。
注意事项由于一天中PAP值可上下波动50%,因此,PAP测定应于每日固定时采取标本。
前列腺按摩后血清PAP可一过性增高，在判断测定结果时要予以考虑。
参考文献：口]丛玉隆，尹一兵，陈瑜.检验医学高级教程（第2版）[M].北京：科学出版社，2017.[2]胡成进，陈英剑，公衍文.检验结果临床解读（第3版）[M].北京：科学出版社,2019.[3]尚红，王毓三,申子瑜.全国临床检验操作规程（第4版）[M].北京：人民卫生出版社，2019.。
酸性磷酸酶检测试剂盒（PNP比色法）
酸性磷酸酶检测试剂盒（PNP比色法）酸性磷酸酶(ACP)检测试剂盒(PNP 比色法)简介：酸性磷酸酶(acid phosphatase ，ACP)分布极广泛，遍布各种组织，主要存在于细胞的溶酶体内，所以常作为溶酶体标志酶。
溶酶体外的酸性磷酸酶存在于内质网和胞质内，各种动物中的酸性磷酸酶各有不同，酸性磷酸酶的适宜pH 为4.5～5.5。
酸性磷酸酶是一个蛋白家族，哺乳动物中其分子量从18kD 到100kD 不等，该酶分为两类，一类为酒石酸盐敏感型，一类为氟离子敏感型。
溶酶体中的酸性磷酸酶为酒石酸盐敏感型，而红细胞和巨噬细胞中的酸性磷酸酶为氟离子敏感型。
Leagene 酸性磷酸酶(ACP)检测试剂盒(PNP 比色法)(Acid Phosphatase Colorimetric Assay Kit)检测原理是利用Para-nitrophenyl phosphate (pNPP)为一种常用的磷酸酶显色底物，在酸性条件下，可在酸性磷酸酶的作用下生成p -nitrophenol 。
在碱性条件下p -nitrophenol 呈黄色，产物黄色越深，说明酸性磷酸酶活性越高，反之则酶活性越低，通过分光光度比色法(分光光度计)测定处吸光度，据此通过比色分析就可以计算出酸性磷酸酶活性水平。
该试剂盒可用于检测细胞或组织的裂解液或匀浆液、血浆、血清、尿液等样品中内源性的酸性磷酸酯酶活性。
该试剂盒仅用于科研领域，不宜用于临床诊断或其他用途。
组成：自备材料：1、比色杯2、水浴锅或恒温箱3、分光光度计操作步骤(仅供参考)：1、准备样品：①血浆、血清和尿液样品：血浆、血清按照常规方法制备后可以直接用于本试剂盒的测定，编号名称TE0034 60T Storage试剂(A): ACP Assay buffer 50ml 4℃ 试剂(B): pNPP2支 -20℃ 避光试剂(C): p -nitrophenol(10mM) 0.2ml-20℃ 避光使用说明书1份尿液通常也可以直接用于测定，冻存，用于酸性磷酸酶的检测。
实验六酸性磷酸酶的显示
学习酸性磷酸酶的显示方法
酸性磷酸酶的显示方法有多种，包括 化学染色法、荧光染色法、同位素示 踪法等。
其中，化学染色法是最常用的一种方 法，通过特定的化学反应将酸性磷酸 酶催化生成的磷酸酯与特定的指示剂 结合，从而显示出酶的活性。
掌握实验操作流程
实验操作流程包括组织或细胞的处理、酶反应、结果观察等 步骤。
的转移和代谢。
在骨组织中，酸性磷酸酶参与骨质的矿化和骨细胞的凋亡过程。
03
显示酸性磷酸酶的化学反应原理
01
02
03
在酸性条件下，酸性磷 酸酶能够催化磷酸单酯 水解，释放出无机磷酸
。
无机磷酸与染色剂（如 茜素红、甲苯胺蓝等） 反应，生成有色产物， 从而显示出酸性磷酸酶
的存在。
染色剂的颜色变化与无 机磷酸的浓度呈正比关 系，因此可以通过观察 颜色变化来判断酸性磷
02 了解其活性调节的分子机制，为药物设计和疾病治疗
提供理论支持。
发展新型酸性磷酸酶显示技术
03
针对现有技术的不足，开发更加灵敏、特异和便捷的
显示方法。
感谢您的观看
THANKS
实验技能提升
通过本次实验，我掌握了酸性磷酸酶的显示方法，提高了实验操作 技能和实验数据分析能力。
理论知识应用
实验过程中，我深刻体会到了理论知识与实际应用的结合，加深了 对相关酶学反应的理解。
团队合作意识
实验需要多人协作完成，锻炼了我的团队协作意识和沟通能力。
实验不足与改进建议
实验操作细节需优化
在实验过程中，我发现有些操作步骤不够严谨，影响了实验结果的可重复性。未来应更 加注重操作的规范性和细节处理。
在实验操作过程中，需要注意实验条件、试剂浓度、反应时 间等因素对实验结果的影响，确保实验结果的准确性和可靠 性。
psa在生物化学实验的含义
psa在生物化学实验的含义PSA，全称为“酸性磷酸酶”（Phosphatase）。
它是一种广泛存在于生物体内的酵素，参与许多生物化学过程。
在生物化学实验中，PSA的含义与其作用紧密相关。
本文将探讨PSA在生物化学实验中的含义，以及其在实验中的重要作用。
一、PSA的基本概念在生物化学中，酸性磷酸酶是一类能够水解磷酸酯键的酵素。
这类酶主要催化底物分子中磷酸酯键的断裂，将磷酸基团引入水分子中，形成无机磷酸和底物的副产物。
PSA按照pH值的敏感性，可以分为酸性磷酸酶和碱性磷酸酶。
而在生物体内，酸性磷酸酶主要存在于溶酶体、内质网和细胞膜等位置，参与调控细胞内磷酸化的过程。
二、PSA在酶活性测定中的应用PSA在生物化学实验中应用广泛，特别是在酶活性测定中起到重要作用。
酶活性测定是评估酶在反应体系中催化底物转化速率的一种方法。
而PSA的测定可以通过检测酶催化反应中磷酸酯键的断裂从而反映酶活性水平。
酶活性的测定需要选择适当的底物和检测方法。
在测定酸性磷酸酶活性时，常使用磷酸酯类底物，如p-Nitrophenyl phosphate (pNPP)。
pNPP在PSA的催化下发生水解，生成黄色磷酸根离子，可以通过分光光度计检测其吸光度的变化。
通过测定吸光度的变化，可以推断出底物的水解速率，从而评估酶活性水平。
酶活性测定是生物化学实验中常用的手段，可以用于疾病的诊断和药物的研发。
在疾病诊断中，如前列腺特异性抗原（Prostate-Specific Antigen，PSA）的测定可以帮助早期发现前列腺癌。
同时，在药物研发中，酶活性测定可以评估药物对特定酶的抑制效果，为药物筛选提供重要依据。
三、PSA在基因工程中的应用除了在酶活性测定中的应用外，PSA在基因工程中也扮演着重要的角色。
基因工程是利用DNA技术对生物体进行基因的修饰和操作，以实现对生物体性状的改良和转化。
在基因工程中，PSA常用于判断重组结构的正确性。
例如，在重组蛋白质表达系统构建中，通过将目标基因插入带有PSA的表达载体，可以在转化细胞中筛选出含有目标DNA的细胞。
实验四酸性磷酸酶Km及Vmax值测定
Certain Time
Stop the reaction
Color developed
酶Fo液lin－•酚溶液生0化. 实验课老师：于晓虹
磷酸苯二钠 0.
• 实验报告请交到讲台上来 催化磷酸单酯的水解反响
加液程序表
催化磷酸单酯的水解反响
• 酶液稀释 取上清液３００微升，稀释 以反响时间为横坐标，A680nm为纵坐标，绘制反响进程曲线，并从该曲线上求出酸性磷酸酶反响初速率的时间范围。
加液程序表
管号
1234560
磷酸苯二钠 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5
酶液 酶液
0.
folin-酚测定酚的浓度
0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5
精确反响时间 3 Folin－酚溶液已稀释好！
6的HAC缓冲液稀释30倍，用于实验。
5
10 15
20
25
碳酸钠溶液 2 2 计算出反响速度〔用产物生成量/min来表示〕
酶液
下开始 － － － － － － 0.
结果：
反应时间 吸光度
01 2 3 4 5 6 0 3 5 10 15 20 25
以反响时间为横坐标，A680nm为纵坐标，绘制反 响进程曲线，并从该曲线上求出酸性磷酸酶反响初 速率的时间范围。
• 3、制作酚标准曲线
• 〔目的：可从酚标准曲线上查出A680nm 所相当的酚含量,并计算出反响速度〔用每 分钟产物生成量来表示〕
• 4、[S]与V0关系实验
实验加液程序表
管号
1234560
磷酸苯二钠 0.10 0.15 0.20 0.25 0.30 0.50 0.50
醋酸缓冲液 0.40 0.35 0.30 0.25 0.20 - -
酸性磷酸酶的显示方法
四、实验操作
④30min后，将玻片转入10％中性福尔马林，4℃冰箱内 固定30min。 ⑤自来水漂洗5min，把水沥干。 ⑥转入酸性磷酸酶作用液中，37℃处理30min。 ⑦自来水漂洗片刻。 ⑧1％硫化胺处理3～5 min。 ⑨自来水冲洗，甩干。
四、实验操作
⑩用1：30的姬姆萨染液染色15min。 ⑾自来水冲去染液，用磷酸盐缓冲液临时封片，镜检。 ⑿对照实验 ⒀将第3步的腹腔液涂片置50℃温箱中处理30min，使酶失 活，再进行⑥～ ⑾步的的基本原理和方法。 观察酸性磷酸酶在细胞内的分布状况。
二、实验原理
酸性磷酸酶能分解磷酸脂而释放出磷酸基，在pH5.0 的环境中，磷酸基能与铅盐反应形成磷酸铅。但因 其是无色的，所以再经过与硫化铵作用，形成棕黑 色的硫化铅沉淀，由此就能显示酸性璃酸酶在细胞 内的存在与分布。
实验八
酸性磷酸酶的显示方法
实验简介
酸性磷酸酶是溶酶体的特征性酶，主要存在于巨噬细胞中。在 正常情况下，巨噬细胞牌休止状态，酶活性很低，但在一定的
pH条件下，其酶活性可被激活。本实验预先用6％淀粉肉汤腹腔 注射以激活小鼠腹腔巨噬细胞，使酸性磷酸酶能分解磷酸脂而
释放磷酸基，在pH5.0时，磷酸基能与铅盐形成磷酸铅，然后经 与硫化铵作用而形成棕黑色的硫化铅沉淀。在显微镜下可见小 鼠腹腔巨噬细胞为不规则形状，阳性细胞内有大小不等的棕色 或棕黑色的颗粒，即为酸性磷酸酶。 实验学时3个。
五、实验结果
在巨噬细胞的细胞质中，出现许多棕色或棕黑色的颗 粒和班块。部分细胞内，酸性磷酸酶极为丰富，整个 细胞质区域都有黑色沉淀。 中性粒细胞呈现阴性反应。
六、作
业
简述酸性磷酸酶显色的原理是什么？ 绘制一张实验所见的巨噬细胞中酸性磷酸酶显色图。
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多种蛋白质（凝 固酶等） 含黄素 高浓度酸性磷酸酶 前列腺特异抗原 精胺 蛋白水解酶、 纤维蛋白酶 促使精子成熟，贮存精子 产生精子，分泌雄性激素
精液的体外变化
乳白色半透明粘稠液体， 有特殊气味
5min
凝固酶（精囊腺）
胶冻状 20min
中性蛋白酶、纤溶酶
稀薄半流动状
精子的发生
睾丸曲细精管
Sperm 精子
种 属 试 验
个 体 识 别
发现可 疑精斑
是否精斑
是否人精斑 个体来源
Visual examination 肉眼观察
简便
目的： 发现可疑精斑，确定其位置 与分布，以便准确取材
紫 外 线 照 射
无损
非特异
Preliminary test 预试验
• 目的:筛选可疑精斑
• 特点：方法简单，灵敏度高 • 方法： 酸性磷酸酶检验 结晶试验 其它：锌检出法，马铃薯凝集试验
1998年1月23日，琼斯性骚扰案
中证人、白宫前实习员莫妮
卡· 莱温斯基被指控与克林顿有
染。
克林顿(美国第42任总统1993年-2000年)
1998年8月17日 克林顿承认和莱温 斯基有不正当关系
Identification of Seminal stain
Nie Shengjie, Assoc.Prof Section of Forensic Biology
磷酸苯二钠
萘 酚
酸性磷酸酶
醌类
• 缓冲液：磷酸苯二钠，4-氨基安替比林， 柠檬酸， 氢氧化钠，氯仿
• 显色液：铁氰化钾，氢氧化钠，碳酸氢钠
磷酸苯二钠试验(Kind-King test)
阳性：立即出现红色，深浅与浓度有关 阴性：橙黄色（不是精斑或酶已破坏） 灵敏度：1：20000倍稀释，血液不影响 非特异：脏器组织或其它分泌物、排泄物（稀释/加热）
生殖腺——睾丸 男 性 生 殖 器
内生 殖器பைடு நூலகம்
外生 殖器
输精管——附睾、输精管、射 精管、尿道 附属腺体——精囊腺、前列腺、 尿道球腺 阴茎 阴囊
Semen 精液
Sperm cells（Spermatozoa，精子） Semen
Seminal vesicle fluid 精囊液 60%
精液
Seminal plasma 精浆
Typical ejaculation
2-5 milliliters of semen
Sperm: 107/ ml~ 108/ ml
• 3 pg DNA/sperm
480,000 ng DNA/ejaculate • Only 1 ng DNA needed for STR typing!
男性生殖系统结构
酸性磷酸酶（Acid phosphatase，AP）
特点： 1.精液中含量高，是其它体液、分泌液、 脏器的100倍以上； 2.稳定，对腐败、高热有较强抵抗力； 3.来自前列腺，无精子精液也适用； 4.非特异：部分水果、蔬菜，避孕药…
磷酸苯二钠试验(Kind-King test)
AP
铁氰化钾
氨基安替比林
受精过程中只有精子
的头部进入卵子内！
母 系 遗 传
Seminal stain 精液斑
多为淡黄色或灰白色不规则斑痕，触 之较硬，有时有特殊气味。
浓厚精斑呈灰白色浆糊状，稀薄精斑浸润于布纤维间，不易察见； 在浅色布料上，精斑多呈黄白色地图状，边沿色较深
精斑检验目的与要求
肉 眼 观 察 预 试 验 确 证 试 验
顶体
细 胞 核
末段
主段
中间段 颈
线粒体鞘
尾
头
Not all semen stains contain sperm
– Vasectomy- block spermatozoa 输精管结扎
• Still produces ejaculate with seminal vesicle fluid and prostatic fluid • Will not have enough sperm for DNA typing
碘化碘钾结晶试验（Florence crystal test）
分解
碘
碘-碘化钾试剂
卵磷脂 （精液）
胆碱
褐色结晶
灵敏度：1：400
干扰：血液或大小便会干扰结晶生成
太新鲜/陈旧，水洗，细菌污染均可呈阴性 非特异：凡含胆碱的分泌物，昆虫/植物汁液等
碘化碘钾结晶
精斑预试验
• 目的:筛选可疑精斑
• 特点：方法简单，灵敏度高 • 方法： 仅酸性磷酸酶检验灵敏度较高 实践中可以不经过预实验，直接进行确证； 预实验阴性，有时也需进行确证。
精斑确证试验
• 检测精液特有成分 • 阳性结果可确认精斑 • 方法： 精子检出法 免疫学实验（抗人精血清沉淀反应、 前列腺特异抗原检测）
2010.09.20
outline
• Biological feature
• Objective & procedure
• Visual examination
• Preliminary tests
• Confirmatory tests
• Individual identification
Biological feature
– Oligospermia- low sperm count
少精症
• May or may not have enough sperm for DNA typing
– Aspermia- no sperm
无精症
• Will not have enough sperm for DNA typing
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Prostatic fluid secretions
前列腺液
30%
Epididymis 附睾 5% bulbourethral glands 尿道球腺液 5%
semen
• 含蛋白质、各种酶及果糖等多种成分的碱性乳白 色胶状液体 • 成分： 细 胞：精子、睾丸细胞、脱落柱状上皮细胞、 白细胞 非细胞：前列腺卵磷脂小体、玻璃小体、精胺结 晶、色素颗粒、脂肪球 • 弱碱性 pH7.2~8.6
• Three distinct regions:
– Head ( acrosome and nucleus with haploid DNA) – Middle Piece (mitochondria) – Tail (flagella; mobility)
颈 中
主段
末
头
尾部
精子侧面观
顶体蛋白酶，透明质 酸酶，酸性磷酸酶