第4-透射电镜样品制备

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透射电镜样品制备

包埋剂：环氧树脂（不易与乙醇相溶）固化剂：十二烷基琥珀酸酐（DDSA）和六甲酸酐（MNA）增塑剂：邻苯二甲酸二丁酯（DBP）加速剂：2、4、6-三（二甲氨基甲基）苯酚。（DMP—30）
（2）浸透、包埋具体步骤：
① 浸透： a、包埋液与环氧丙烷1：1，37℃或常温1小时。 b、包埋液与环氧丙烷3：1，37℃或常温5小时或过夜。 c、纯包埋液37℃5小时，摆床或振荡器上浸透。
② 包埋与固化：组织块用牙签挑入包埋管中，注满包埋液，置温箱
中固化。 37℃ 、 12 小时后，移入 45℃ ， 24 小时， 60℃，24小时。
5．超薄切片
（1）制备超薄切片的准备
1）金属载网：
耐高温，无磁性；平整；网孔大小合适，孔间距小，价格便宜。 (一般直径3mm，内有网孔200～300个)
50%→70%→80%→90%→无水乙醇（或丙酮）（2～3次）每步10～20分钟（培养细胞时间可短些，致密组织时间长些），除无水乙醇（或丙酮）在室温下进行外，其余均应在4℃下进行。
可在70%乙醇中加2%铀盐块染：电子染色。
4．浸透与包埋：
是将组织块制成能进行超薄切片的硬块。
（1）包埋液的组成：
捞片——染色
6．超薄切片染色（正染）
染色的目的：利用重金属盐与组织细胞的不同成份呈不同程
度的结合或吸附，从而造成这些成份对电子散射能力的差异，散射电子多的结构在荧光屏上的图像深暗，称电子密度高;反之即为浅亮，电子密度低，从而起到增强图像反差的作用。
6．超薄切片染色（正染）
重金属盐有铀盐（如醋酸双氧铀）和铅盐（枸椽酸铅）等。
【2】常用固定剂的特点
（1）戊二醛（Glutraldehyde） 1）2.5%戊二醛固定液的配制（见书） 2）固定原理及优缺点

透射电镜样品制备步骤

透射电镜样品制备步骤透射电镜是一种重要的材料表征技术，它利用电子的波动性和微粒性来观察材料的结构和性质。

为了能够使用透射电镜观察样品，首先需要对样品进行制备。

透射电镜样品制备步骤如下：1.选择合适的样品：透射电镜样品可以是固体、液体、薄膜或纳米颗粒等。

根据研究目的和样品性质选择合适的样品。

2.样品预处理：根据样品性质的不同，进行必要的预处理。

例如，对于固体样品，可以选择切割、抛光或电解抛光等方法来得到平滑的表面。

3.样品固定：将样品固定到透射电镜样品架上。

不同的样品有不同的固定方法。

例如，对于固体样品，可以使用导电胶将其固定在样品架上。

4.薄层制备：对于厚度过大的样品，需要将其制备成透明的薄层以便透射电镜观察。

常用的方法有机械研磨、电子束刻蚀或离子束刻蚀等。

5.样品清洁：将样品放入超声波清洗机中进行清洗，以去除可能附着在样品表面的杂质或污染物。

6.特殊处理：如果需要对样品进行特殊处理，例如加热、冷冻处理或受到特定环境气氛的影响等，根据需要进行相应的处理。

7.样品干燥：将样品放入真空或氮气环境中，以确保样品干燥。

避免样品受到水汽的污染。

8.获得薄片：使用切片机将固态样品切割成适当厚度的薄片。

为了获得高质量的薄片，可以选择特殊的切片工具和技术，例如离子束切片或低速钻磨切片。

9.薄片形状整理：使用不同的研磨和抛光方法，将薄片的形状和表面进行调整，以确保样品的平滑度和一致性。

10.网格制备：将薄片粘贴在透射电镜网格上。

网格可以增强样品的稳定性和保护，同时提供用于定位和标识的标记。

11.后续处理：根据研究目的和透射电镜分析的要求，可以对样品进行进一步处理。

例如，可以进行染色、脱膜、溅射或腐蚀等处理。

以上是透射电镜样品制备的一般步骤。

不同样品和研究目的可能会有所不同。

因此，根据具体的研究需求和样品特点，制备过程可以做相应的调整和优化。

透射电镜的样品制备方法详解

透射电镜的样品制备透射电镜的样品制备是一项较复杂的技术，它对能否得到好的ＴＥＭ像或衍射谱是至关重要的．投射电镜是利用样品对如射电子的散射能力的差异而形成衬度的，这要求制备出对电子束＂透明＂的样品，并要求保持高的分辨率和不失真．电子束穿透固体样品的能力主要取决加速电压，样品的厚度以及物质的原子序数．一般来说，加速电压愈高，原子序数愈低，电子束可穿透的样品厚度就愈大．对于１００～２００ＫＶ的透射电镜，要求样品的厚度为５０～１００ｎｍ，做透射电镜高分辨率，样品厚度要求约１５ｎｍ（越薄越好）．透射电镜样品可分为：粉末样品，薄膜样品，金属试样的表面复型．不同的样品有不同的制备手段，下面分别介绍各种样品的制备．（１）粉末样品因为透射电镜样品的厚度一般要求在１００ｎｍ以下，如果样品厚于１００ｎｍ，则先要用研钵把样品的尺寸磨到１００ｎｍ以下，然后将粉末样品溶解在无水乙醇中，用超声分散的方法将样品尽量分散，然后用支持网捞起即可．（２）薄膜样品绝大多数的ＴＥＭ样品是薄膜样品，薄膜样品可做静态观察，如金相组织；析出相形态；分布，结构及与基体取向关系，错位类型，分布，密度等；也可以做动态原位观察，如相变，形变，位错运动及其相互作用．制备薄膜样品分四个步骤：ａ将样品切成薄片（厚度１００～２００微米），对韧性材料（如金属），用线锯将样品割成小于２００微米的薄片；对脆性材料（如Ｓｉ，ＧａＡｓ，ＮａＣｌ，ＭｇＯ）可以刀将其解理或用金刚石圆盘锯将其切割，或用超薄切片法直接切割．ｂ切割成φ３ｍｍ的圆片用超声钻或ｐｕｎｃｈｅｒ将φ３ｍｍ薄圆片从材料薄片上切下来．ｃ预减薄使用凹坑减薄仪可将薄圆片磨至１０μｍ厚．用研磨机磨（或使用砂纸），可磨至几十μｍ．ｄ终减薄对于导电的样品如金属，采用电解抛光减薄，这方法速度快，没有机械损伤，但可能改变样品表面的电子状态，使用的化学试剂可能对身体有害．对非导电的样品如陶瓷，采用离子减薄，用离子轰击样品表面，使样品材料溅射出来，以达到减薄的目的．离子减薄要调整电压，角度，选用适合的参数，选得好，减薄速度快．离子减薄会产生热，使样品温度升至１００～３００度，故最好用液氮冷却样品．样品冷却对不耐高温的材料是非常重要的，否则材料会发生相变，样品冷却还可以减少污染和表面损伤．离子减薄是一种普适的减薄方法，可用于陶瓷，复合物，半导体，合金，界面样品，甚至纤维和粉末样品也可以离子减薄（把他们用树脂拌合后，装入φ３ｍｍ金属管，切片后，再离子减薄）．也可以聚集离子术（ＦＩＢ）对指定区域做离子减薄，但ＦＩＢ很贵．对于软的生物和高分子样品，可用超薄切片方法将样品切成小于１００ｎｍ的薄膜．这种技术的特点是样品不会改变，缺点是会引进形变．（３）金属试样的表面复型即把准备观察的试样的表面形貌（表面显微组织浮凸）用适宜的非晶薄膜复制下来，然后对这个复制膜（叫做复型）进行透射电镜观察与分析．复型适用于金相组织，断口形貌，形变条纹，磨损表面，第二相形态及分布，萃取和结构分析等．制备复型的材料本身必须是＂无结构＂的，即要求复型材料在高倍成像时也不显示其本身的任何结构细节，这样就不致干扰被复制表面的形貌观察和分析．常用的复型材料有塑料，真空蒸发沉积炭膜（均为非晶态物质）．常用的复型有：ａ塑料一级复型，分辨率为１０～２０ｎｍ；ｂ炭一级复型，分辨率２ｎｍ，ｃ塑料－炭二级复型，分辨率１０～２０ｎｍ；ｄ萃取复型，可以把要分析的粒子从基体中提取出来，这种分析时不会受到基体的干扰．除萃取复型外，其余复型只不过是试样表面的一个复制品，只能提供有关表面形貌的信息，而不能提供内部组成相，晶体结构，微区化学成分等本质信息，因而用复型做电子显微分析有很大的局限性，目前，除萃取复型外，其他复型用的很少．。

透射电镜纳米颗粒样品制备流程

透射电镜纳米颗粒样品制备流程下载温馨提示：该文档是我店铺精心编制而成，希望大家下载以后，能够帮助大家解决实际的问题。

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第四讲-TEM样品制备

适用于生物试样适用于金属材料无机非金属材料大多数为多相、多组分的的非导电材料，上述方法均不适用。60 年代初产生了离子轰击减薄装置后，才使无机非金属材料的薄膜制备成为可能。
电解双喷法
1．冷却设备；2．泵、电解蔽；3．喷嘴 4．试样 5．样品架； 6．光导纤维管
二、块体脆性样品制备流程
二级复型照片
回火组织中析出的颗粒状碳化物
解理断口上的河流花样
30CrMnSi钢回火组织
低碳钢冷脆断口
3、萃取复型
既复制试样表面的形貌，同时又把第二相粒子粘附下来并基本上保持原来的分布状态不仅可观察基体的形貌，直接观察第二相的形态和分布状态，还可通过电子衍射来确定其物相。因此，萃取复型兼有复型试样与薄膜试样的优点。
2.3 透射电镜分辨本领和放大倍数的测定
•点分辨本领的测定：将铂、铂铱合金或铂钯合金，用真空蒸发的方式可以得到粒度为0.5～1nm、间距为0.2～1nm的粒子，将其均匀分布在火棉胶（或碳）支持膜上，在高放大倍数下拍摄成像。为了保证测定的可靠性，至少在相同条件下拍摄两张底片，然后经光学放大（5倍左右），从照片上找出粒子最小间距，除以总的放大倍数，即可得相应的点分辨本领。
一、直接样品的制备 1．粉末样品的制备
步骤一、超声波分散
避免颗粒团聚，造成厚度增加
步骤二、将分散悬浮液滴于铜网或微姗网
步骤三、烘干分散液
烘烤时间约20分钟
2．块状样品的制备
块状材料是通过减薄的方法（需要先进行机械或化学方法的预减薄）制备成对电子束透明的薄膜样品。减薄的方法有超薄切片、电解双喷和离子减薄等。
晶格分辨本领的测定利用外延生长方法所制定向单晶薄膜为标样，拍摄晶格像。晶体铜酞青铂酞青亚氯铂酸钾衍射面 (001) (001) (001) (100) 晶面间距 (nm) 1.26 1.194 0.413 0.699 钯晶体金衍射面 (200) (220) (111) (200) (400) 测定晶格分辨本领常用晶体晶面间距 (nm) 0.204 0.144 0.224 0.194 0.097

透射电镜的主要部件与样品制备

倒易点阵
将空间点阵（真点阵或实点阵）经过倒易变换，就得到倒易点阵。倒易点阵的外形也很象点阵，但其上的节点是对应着真点阵的一组晶面。倒易点阵的空间称为倒易空间。倒易点阵与正点阵的关系:
真点阵中的一组晶面（hkl），在倒易空间中将用一个点Ｐhkl表示（如图所示），点子与晶面有倒易关系，关系为：点子取在（hkl）的法面上，且Ｐ hkl点到倒易点阵原点的距离与（hkl）面间距反比．
双喷式电解抛光减薄
离子减薄
• 复型法 • 用对电子束透明的薄膜（碳、塑料、氧化物薄
膜）把材料表面或断口的形貌复制下来。
铁红金圈结晶釉的表面形貌
ห้องสมุดไป่ตู้
a
复型的典型应用 a)珠光体组织 b)准解理断口 c)断口萃取复型
b
c
复型观察断口比SEM清晰
7、电子衍射
电子衍射(ED)和XRD的比较
相同之处： • 电子衍射的原理和X射线衍射相似，是以满足
的比例关系。不同点阵的可能的 N 值受到消光条件(F=0)的限制，具
有不同的规律性。
• 简立方： N=1 2 3 4 5 6 8 9 10 11 12 13 14
• bcc: h+k+l=偶数，F0 N= 2 4 6 8 10 12 14 16 18
• fcc: hkl全奇数或全偶数 F0 N= 3 4 8 11 12 16
举例说明
• 已知L＝17.00mm Å, 测得环半径为8.42mm, 11.88mm, 14.52mm, 16.84mm, 18.88mm, 确定此多晶物体的物相。
R(mm) R2(mm2) N d(实验) I/I1(实验) d(查表) I/I1(查表)
8.42 70.90 2 2.02 100 2.01 100

透射电镜样品制备与观察实验指导书

兰州理工大学学生实验指导书学院材料科学与工程学院实验室实验中心课程名称材料测试方法实验类型综合性实验名称透射电镜样品制备与观察指导教师陈经民透射电镜样品制备与观察实验指导书1、实验原理及其目的1.1、透射电镜的组成与原理透射电镜是研究材料的重要仪器之一。

透射电镜通过加速高压发射电子，并使电子束透射试样后，与试样内部原子发生相互作用，从而改变其能量及运动方向。

由于不同结构具有不同的相互作用，因而，就可以根据透射电子图象所获得的信息，来了解试样内部的晶体结构。

由于试样结构和相互作用的复杂性，因此透射电镜所获得的图象也很复杂。

它不象表面形貌那样直观、易懂。

因此，如何对一张电子图象获得的信息作出正确的解释和判断，不但很重要，也很困难，必须根据相应的理论才能对透射电子象作出正确的解释。

透射电镜的组成与原理1.2、透射电镜样品的制备原理及方法1.2.1粉体材料样品的制备原理及方法将材料的粉末经研磨、过滤等方法，将粉末颗粒的粒径控制在50nm以下，然后取少量粉末放入装有无水乙醇（根据材料不同，也可选用甲苯、丙酮等）溶液的小试管中，再放入超声波振荡器中震荡10分钟左右，使粉末颗粒充分悬浮在溶液中。

最后将溶液滴到铜网或微栅上（观测倍数在20万倍以下时，用铜网；观测倍数在20万倍以上时，用微栅），即可放入透射电镜中观测。

1.2.2块体材料样品的制备原理及方法首先用金刚石圆锯或线切割机将块体材料切割成厚度为0.5mm以下、面积为2平方cm以上的薄片，再用砂纸将其厚度打磨到0.1mm以下。

然后用样品冲片器将薄片冲成直径为3mm的小圆片，再用凹坑仪在小圆片的中心位置凹一个小坑，以备用。

1.2.2.1导电材料样品的制备原理及方法导电材料可通过双喷电解的方法，对样品进行电解腐蚀，最终减薄样品。

电解抛光减薄是制备金属薄膜最常用的方法之一。

双喷射电解减薄器是其中主要的一种装置。

其特点是：（1）. 采用同轴光导控制，在金属薄片抛光减薄穿孔时能接收到光信号，穿孔后立即报警。

透射电镜样品的制备

第二节透射电镜样品的制备一、表面复型和萃取复型技术（一）复型样品成像原理复型样品是一种间接试样，是用中间媒介物（碳、塑料薄膜）把样品表面浮雕复制下来，通过对浮雕的观察间接地得到样品表面组织形貌。

一定能量的入射电子照射到样品上要受到样品内原子核与核外电子的作用，产生弹性散射与非弹性散射。

非晶体复型样品成像主要取决于入射电子与试样中原子相互作用所产生的电子散射。

电子束穿过样品时在样品厚的区域或原子序数大的区域受散射程度大，反之则小。

这就是所谓的质厚衬度效应。

如果在样品下方加一光阑，那么散射角大于光阑孔径角的电子被光阑挡住或吸收，而不能穿过光阑孔参与成像。

散射角小于或等于光阑孔径角的电子就能穿过光阑孔参与成像，因此在荧光屏上就形成了明暗不同的衬度，产生了样品的图像。

图5—10为复型样品成像示意图。

（二）复型样品制备技术1．对金相试样的要求电镜的高分辨本领使它能够显示出金属组织的微细特征。

为使组织微细特征不在制备试样时失真，对图5—10 复型样品成像示意图金相试样的制备要求严格。

否则会造成假像影响对观察结果的分析。

试样要细心磨制，仔细抛光，力求避免产生微小的磨痕及变形层。

浸蚀剂与做金相试样时所用的浸蚀剂相同，浸蚀应浅些，这样可保留组织细节。

如果浸蚀过重就可能引起相界、晶界的过浸蚀，导致失真、脱落，甚至会出现腐蚀坑等假象。

2．AC纸的制作AC纸就是醋酸纤维素薄膜，是用6%醋酸纤维素丙酮溶液制作的塑料薄膜。

为了使AC 纸质地柔软、渗透性强并具有蓝色，在所配制的溶液中再加入2%磷酸三苯脂和几粒甲基酯。

待醋酸纤维素在丙酮中溶解后将其倒在干净、平滑的玻璃板上，倾斜转动玻璃板，使溶液均匀展开。

然后用玻璃钟罩扣上，让钟罩下边与下板间留有一定间隙以便于丙酮挥发。

大约经过24小时后AC纸干透，用小刀片轻划AC纸边缘，小心揭下即可。

3．塑料—碳二级复型塑料—碳二级复型由于其制备过程不损坏金相试样表面，重复性好，供观察的第二级复型—碳膜导电、导热性好，在电子束照射下较为稳定，因而得到广泛的应用。

tem透射电镜的样品制备方法

tem透射电镜的样品制备方法TEM（透射电子显微镜）是一种常用的高分辨率显微镜，可以观察到物质的结构和组成。

样品制备对于TEM观测至关重要，良好的样品制备可以提供高质量的显微图像。

以下是TEM透射电镜的样品制备方法的详细讨论。

1.样品选择：选择适合TEM观察的样品，典型的样品包括纳米材料、生物细胞、材料薄膜等。

根据需要选择合适的样品尺寸和形状。

2.样品固定：根据样品的特性和需要，采取合适的方法将样品固定在支撑物上。

常用的方法包括离心沉淀、滴定、蒸发浓缩等。

对于生物样品，可以使用化学固定剂（如戊二醛）进行化学固定。

3.样品切片：对于大尺寸或不透明的样品，需要将其切割成薄片，一般要求切片尺寸在100 nm以下。

常用的切片工具有超声切割仪、离子切割仪等。

切割样品时要注意样品的定位和定向，以确保观察到感兴趣的区域。

4.样品脱水：对于生物样品，需要将其进行脱水处理。

脱水可以使用乙醇和丙酮等有机溶剂，逐渐将样品中的水分替换为有机溶剂。

脱水过程中要避免剧烈振荡，以防止样品的破坏。

5.样品浸渍：将脱水后的样品浸渍在透明介质中，如环氧树脂或聚合物。

浸渍过程中需要避免气泡和异物的进入，以保持样品的质量。

6.样品调平：将浸渍后的样品放在平板上，用研磨纸将其调平。

调平过程中要注意避免样品的损坏。

7.样品切割：将调平后的样品切成适当尺寸的小块，便于后续的操作。

切割时要使用锋利的刀具，以保证切面的平整度。

8.样品研磨：使用研磨纸或研磨腰带对样品进行研磨，以使其表面更加平整。

研磨过程中要注意研磨力度的控制，以免样品的破损。

9.样品薄化：使用电子束或离子束对样品进行薄化处理，将其厚度控制在适当的范围内。

薄化过程中要注意能量和时间的控制，以避免样品的损坏。

10.样品清洁：最后，使用有机溶剂或气流将样品上的杂质去除，使样品表面干净。

以上就是TEM透射电镜的样品制备方法的详细讨论。

不同的样品可能需要不同的制备方法，需要根据实际情况进行调整。

透射电镜样品制备方法

¾透射电子显微镜成像时，电子束是透过样品成像。

¾由于电子束的穿透能力比较低，用于透射电子显微镜分析的样品必须很薄。

¾根据样品的原子序数大小不同，一般在50～500nm之间。

透射电镜样品的要求：¾1. 样品必须对电子束透明。

¾2. 所制得样品必须具有代表性，以真实反映所分析材料的特征。

主要方法：粉末样品、复型、离子减薄、电解双喷。

¾透射电镜观察用的样品很薄，需放在专用的样品铜网上。

¾透射电子显微镜使用的铜网一般直径为3毫米，上面铳有许多微米大小的孔，在铜网上覆盖了一层很薄的火棉胶膜并在上面蒸镀了碳层以增加其膜的强度，被分析样品就承载在这种支撑膜上。

样品铜网的作用：¾承载样品，并使之在物镜极靴孔内平移、倾斜、旋转，寻找观察区。

¾样品通常放在外径3mm ，200目方孔或圆孔的铜网上，铜网牢固夹持在样品座中保持好的热、点接触，减少因电子照射引起的热或电荷积累而产生样品漂移或损伤。

样品台透射电子显微镜样品制备电镜观察时样品受到的影响：(1)真空的影响。

含有挥发溶剂或易升华的试样必须冷冻后观察。

(2)电子损伤的影响。

试样在电镜中受到l0－3～1A/cm2的电子束照射，电子束的能量部分转化为热，使试样内部结构或外形发生变化或污染。

观察有机物或聚合物试样时，为防止电子束对试样的损伤和污染，应提高电压。

(3)电子束透射能力的影响。

由于电子束透射能力较弱，一般100kv加速电压时，试样厚度必须在20～200nm之间。

粉末样品制备¾随着材料科学的发展，超细粉体及纳米材料发展很快，而粉末的颗粒尺寸大小、尺寸分布及形态对最终制成材料的性能有显著影响，因此，如何用透射电镜来观察超细粉末的尺寸和形态便成了电子显微分析的一的一项重要内容。

¾其关键工作是是粉末样品的制备，样品制备的关键是如何将超细粉的颗粒分散开来，使其均匀分散到支持膜上，各自独立而不团聚。

透射电镜常规样品制备流程(精)

透射电镜样品制备流程由于透射电镜能观察的样品必须很薄（60～70nm），所以透射电镜的样品准备要求很严格，方法也很单一，仅有一下两种方法：一．负染色技术负染色技术简单快速，可以显示生物大分子、细菌、分离的细胞器以及蛋白晶体等样品的形态、结构、大小以及表面结构的特征。

尤其在病毒学中，负染色技术有着广泛的应用。

样品要求：①样品悬液的纯度不要求很纯，但是如果杂质太多，如大量的细胞碎片，培养基残渣，糖类以及各种盐类结晶的存在都会干扰染色反应和电镜的观察。

尤其是不能有过多的糖类，因为在电子束的轰击下，糖类容易碳化而有碍观察，因此样品要适当提纯。

②样品悬液的浓度要适中，太稀在电镜下很难找到样品，太浓样品堆积影响观察。

操作流程：吸取样品悬液滴到有膜的铜网上，静置数分钟，然后用滤纸吸去多余的液体，滴上负染色液，染色1～2min后滤纸吸去负染色液，待干后用于电镜观察。

二、超薄切片技术超薄切片技术是为透射电镜观察提供薄样品的专门技术，是生物学中研究细胞超微结构最常用的技术。

广泛应用于生物体的各种细胞的超微结构观察。

一般厚度在10～100nm的切片称为超薄切片，制作这种切片的技术叫做超薄切片技术。

超薄切片制作的过程包括取材、固定、脱水、渗透、包埋、聚合、切片和染色等几个环节，和一般光学显微镜的石蜡切片过程相似。

但是，超薄切片切片过程更为细致与复杂，要求更严格，而且所用的试剂比较昂贵、配制复杂、强致癌。

具体操作步骤、注意事项如下：1．取材和前固定：快速的切取大小为0.5～1.0mm3的样品块，一分钟内把组织（样品）块浸入2.5％戊二醛（进口品质）溶液（取样前来平台领取），每个离心管内装20个以上的样品块，作为一个样送到平台。

要求：①取材前一定要和工作人员取得电话联系！②取材选择部位要准确可靠，确保每块材料都是要观察的部位。

③所有植物样品一定要抽真空，能够沉底的样品也抽真空15mins，不能沉底的样品一定要抽真空致沉底！④细菌、散在细胞等不能成块的样品，加戊二醛固定液，离心沉淀后送到平台，由平台工作人员处理。

透射电镜的样品制备技术ppt课件

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切片带弯曲可能原因及解决办法
可能原因梯形或矩形组织面上下边不平行刀刃锋利程度不一组织面上边或下边与刀刃不平行
解决办法用双面刀片重新休整组织切面使之平行更换新玻璃刀重新调整组织与刀刃距离，使之平行
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支持膜的制作
支持膜是一种能支持观察样品的膜，厚度约20nm。性能良好的支持膜应具备： 1.较高的透明度 2.在电镜下无可见结构 3.与所支持的各种样品不发生化学反应
无皱折、刀痕、震颤等缺陷。 • 样品反差良好，无染色沉淀。 • 支持膜厚度适中，观察时不产生漂移和破裂。
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六.电子染色
• 利用重金属盐类选择性地与生物样品中不同结构成分相结合，来提高结构成分散射电子的能力，从而增加图像反差的染色，又称为
正染色。
• 常用的染色剂: –0.5％～１％醋酸双氧铀
• 可使核酸、蛋白质、结缔组织纤维的反差增强。
❖染色步骤
复膜载网－滴样品-滴染1-2min－用滤纸吸去染液－观察
❖优点
适用于悬浮液的样品（细菌、病毒、其他微生物、大分子、分离细胞器）
操作快速、简便样品用量少图像结构反差好
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小结：（超薄切片） 1.取材:要求部位准确,块小,时间短,低温,器械锋利, 减小机械损伤. 2.固定:戊二醛固定时间可以适当延长,一般不要超过一周,期间要更换一次固定液,且要保持低温固定,充分清洗后再进行锇酸固定1-2小时,时间一定不要太长. 3.脱水:锇酸固定后经过充分清洗,进行酒精梯度脱水, 一般50%,70%,80%,95%,无水酒精, 4.样品侵透,包埋.一定要保持干燥,侵透彻底. 5.聚合:由室温到高温梯度升温聚合.如35度,45度,60 度顺序. 6.超薄切片:切片机性能,片厚度,捞片,载网质量都需要注意. 7.电子染色:过程中一定要避免一切污染.

透射电镜的制样方法

序号
1
2 3 4
电解液成份与配比
合用材料
乙醇（80ml），冰醋酸(80ml)，高氯酸 (15ml)，甘油(10ml)
正磷酸(480ml)，硫酸(50ml)，铬酐(80g)，水(60ml)
高氯酸(80ml)，冰醋酸(70ml)
高氯酸(10ml)，乙醇(90ml)
高温合金，耐热钢，铝及其合金。
铝及铝合金
和破裂。
碳一级复型
样品放入真空镀膜装置中，在垂直方向上向样品表面蒸镀一层厚度为数十纳米旳碳膜。把样品放入配好旳分离液中进行电解或化学分离。辨别率高（2－5nm），电子束照射下不易分解和破裂，样品易遭到破坏。
碳膜与塑料一级复型旳区别：
1.碳膜复型旳厚度基本上相同，而塑料复型旳厚度随试样位置而异。
下图是横截面样品旳制备示意图，如图a所示，首先将多块具有生长薄膜旳晶片对粘在一起，然后用特殊旳装置将其压紧，经过长时间固化后，再用线切割或者其他措施切出一种略不大于3mm旳小圆柱（如图b所示），确保小圆柱旳纵向接近轴线旳地方存在横截面，接下来用金刚石锯片将小圆柱切成小旳薄片，接下来旳工作与非金属材料旳制备相同。但是需要注意旳是，横截面样品旳制备要难得多，所以制备旳过程中一定要小心仔细，最佳在挖坑后来再用抛光轮再抛光一次，不然旳话在离子减薄时，生长薄膜很轻易被减掉。
钢，硅钢镍基合金，硅钢，
马氏体时效钢
离子减薄法
首先一般是用金刚石锯将块状样品切成0.5~1mm旳薄片，接下来用手工研磨旳措施将薄片研磨到50μm左右，然后用小刀片将其划为略不大于3毫米旳小块，用树脂胶或者A、B胶将小块样品粘于铜环或者钼环上，接着用手工研磨旳措施将其研磨至不大于20μm之后，用挖坑仪将其减薄至不大于10μm，然后用离子减薄仪将其减薄至穿孔为止。离子减薄是采用高能量旳Ar离子轰击样品表面，把样品表面上旳原子团或分子团剥离样品。

透射电镜常规样品制备流程(精)

透射电镜样品制备流程因为透射电镜能察看的样品一定很薄（ 60～ 70nm），所以透射电镜的样品准备要求很严格，方法也很单调，仅有一下两种方法：一．负染色技术负染色技术简单迅速，能够显示生物大分子、细菌、分别的细胞器以及蛋白晶体等样品的形态、构造、大小以及表面构造的特点。

特别在病毒学中，负染色技术有着宽泛的应用。

样品要求：①样品悬液的纯度不要求很纯，可是假如杂质太多，如大批的细胞碎片，培育基残渣，糖类以及各样盐类结晶的存在都会扰乱染色反响和电镜的察看。

特别是不可以有过多的糖类，因为在电子束的轰击下，糖类简单碳化而有碍察看，所以样品要适合提纯。

②样品悬液的浓度要适中，太稀在电镜下很难找到样品，太浓样品聚积影响察看。

操作流程：汲取样品悬液滴到有膜的铜网上，静置数分钟，而后用滤纸吸去剩余的液体，滴上负染色液，染色1～2min 后滤纸吸去负染色液，待干后用于电镜察看。

二、超薄切片技术超薄切片技术是为透射电镜察看供给薄样品的特意技术，是生物学中研究细胞超微构造最常用的技术。

宽泛应用于生物体的各样细胞的超微构造察看。

一般厚度在10～100nm 的切片称为超薄切片，制作这类切片的技术叫做超薄切片技术。

超薄切片制作的过程包含取材、固定、脱水、浸透、包埋、聚合、切片和染色等几个环节，和一般光学显微镜的白腊切片过程相像。

可是，超薄切片切片过程更加仔细与复杂，要求更严格，并且所用的试剂比较昂贵、配制复杂、强致癌。

详细操作步骤、注意事项以下：1．取材和前固定：迅速的切取大小为0.5～1.0mm3 的样品块，一分钟内把组织（样品）块浸入 2.5％戊二醛（入口质量）溶液（取样前来平台领取），每个离心管内装20个以上的样品块，作为一个样送到平台。

要求：①取材前必定要和工作人员获得电话联系！②取材选择部位要正确靠谱，保证每块资料都是要察看的部位。

③全部植物样品必定要抽真空，能够沉底的样品也抽真空 15mins，不可以沉底的样品必定要抽真空致沉底！④细菌、散在细胞等不可以成块的样品，加戊二醛固定液，离心积淀后送到平台，由平台工作人员办理。

透射电镜常规样品制备流程

透射电镜常规样品制备流程
透射电镜是电子显微镜技术中最重要的一种技术，普通晶体样品的常
规样品制备流程如下：
1、样品的准备：将样品、水、石蜡、助融剂(如NaCl)、磷酸盐、石墨、甲醛和电子源材料(碳粉)准备好备用，并配合温度控制装置使用。

2、样品处理：将样品用接近样品发热点的温度处理，一般为200?C，把样品放入室温保温的石蜡，再将该石蜡分别放入不同的温度槽，如助融
剂的温度可以高于样品放置温度。

3、镀膜：将样品放置在硝酸银或碳材料的固体膜下，镀膜时，将碳
气体经过电子枪加热，形成形状与原子相同的表面。

4、结晶：首先需要将样品放置在一定温度和压力下，进行结晶，再
将研磨剂如磷酸盐、石墨和水添加到样品中，使样品迅速结晶，并在腔内
升温至合适温度，加快结晶过程。

5、夹具的清洗：在滴定液中加入抗蚀剂，夹具进行清洗，确保样品
无几何不良影响。

6、取晶体：用软金属夹具取出晶体，放在清洗过的滴定液中浸泡，
以使样品重新渗透，然后将样品放入滴定液腔中，进行滴定，使样品表面
无污染物。

7、安装样品：用金刚石夹具将样品安装在金刚石台子上，并将其固定，以保证样品的准确安装。

透射电镜样品制备方法

透射电镜样品制备方法透射电子显微镜（Transmission Electron Microscope，简称TEM）是一种利用电子束穿透样品而观察样品结构的高分辨率显微镜。

为了获得高质量的透射电子显微镜图像，样品制备是非常重要的一步。

下面将介绍几种常见的透射电镜样品制备方法。

1.薄片制备法：薄片制备法是最常用的透射电镜样品制备方法之一、首先，将待观察的材料切割成薄片，通常使用切片机或者离心切片机进行切割。

然后，将薄片放置在网格上，并用显微镊夹持住。

接下来，使用离心机将网格和薄片一起离心，以去除多余的液体。

最后，将网格放入透射电镜中进行观察。

2.离解法：离解法适用于那些不易制备成薄片的样品。

首先，将待观察的样品制备成溶液或者悬浮液。

然后，将溶液滴在碳膜覆盖的网格上。

接下来，使用离心机将网格和溶液一起离心，使溶液在网格上均匀分布。

最后，将网格放入透射电镜中进行观察。

3.冻结法：冻结法适用于那些需要观察生物样品或者水溶液的样品。

首先，将待观察的样品制备成溶液或者悬浮液。

然后，在液氮中冷冻样品，使其迅速冻结成冰。

接下来，使用离心机将冰冻样品离心，以去除多余的液体。

最后，将网格放入透射电镜中进行观察。

4.脂溶法：脂溶法适用于那些不溶于水的样品。

首先，将待观察的样品制备成脂溶液。

然后，将脂溶液滴在碳膜覆盖的网格上。

接下来，使用离心机将网格和脂溶液一起离心，使脂溶液在网格上均匀分布。

最后，将网格放入透射电镜中进行观察。

除了以上几种常见的透射电镜样品制备方法，还有一些特殊的方法，如原位制备法、离子切割法等。

这些方法可以根据实际需求选择使用。

总结起来，透射电镜样品制备是透射电子显微镜观察样品结构的关键步骤。

合适的样品制备方法可以保证获得高质量的透射电镜图像。

不同的样品制备方法适用于不同类型的样品，研究人员可以根据实际情况选择合适的方法进行样品制备。