淋巴瘤基因克隆性重排检测

血液 肿瘤
免疫学
（Immunology） • 免疫组化（IHC） • 流式细胞术（FCM）
细胞遗传学
（Cytogenetics） • 荧光原位杂交（FISH）
辅助诊断 预后分析 指导用药 MRD检测
分子检测-淋巴瘤
Moffitt, A. B. and S. S. Dave (2017). J Clin Oncol 35(9): 955-962.
IGH V区体细胞超突变检测的临床意义
对以下疾病提供重要预 后信息: 慢性淋巴细胞白血病 (CLL)
前提：
SHM 判
断IG标H准V突：变
比例
<2%
≥ 2%
淋巴细胞克隆性基因重排检测产品特点
1
BIOMED -2唯一授 权的商品
化试剂
2
全面涵盖各 种T\B细胞 重排类型
3
超过400例的临 床样本验证，反 应体系稳定，结
果可靠
4
可疑淋巴组 织增生性疾 病克隆性分 析的“金标
准”
5
最丰富的 阳性对照
淋巴细胞克隆性基因重排检测的目标分子
Ig和TCR--单一基因重排，即恶性淋巴细
▪ 无扩增产物：PCR扩增后电泳未见产物 送ma检rke组rP 织M中H2的O S细1 胞S1 ，S2抗S原2 受体基因无重排（NK，非淋巴细胞）或DNA质量
500过bp差- 。
400bp-
300bp250bp-
200bp175bp-
150bp-
IGH B(250-295bp)
Products are heterodulex-treated followed by PAGE on 6% gel
TRB
7q32
TRG
7p15
TRD 14q11.2
多样性与克隆性
正常淋巴细胞成熟过程/良性多病克变隆性
多种形式的基因重排
恶性淋巴瘤发生的过程 单克隆性 突出单一形式的基因重排
IGH, TRB & TRD: V,
D, and J
淋巴细胞克隆性基因重排检测的临床意义
5%～15%的病例表现复杂，即使做了大量的免疫标志也可能 难以鉴别其良恶性，需要进一步的手段区分。 利用▪分子鉴别生诊物断学：手明段确是分淋析巴Ig组和织T反C应R性基还因是的淋克巴隆细胞性恶重性排增被殖WHO 公认为该疾病诊断手段的重要补充。
Invivoscribe 公 司 的 IdentiCloneTM 系 列 产 品 是基于PCR的克隆性检测 产品，是BIOMED-2唯一 授权的商品化试剂，获得 CE认证，以其高度的灵敏 性和特异性，成为可疑淋 巴组织增生性疾病克隆性 分析的“金标准”。
IdentiCloneTM系列产
Biomed-2研究项目
结果分析
▪ （单）克隆性：扩增产物电泳在预期大小范围内一或双条带（峰） 送检组织中，淋巴细胞抗原受体基因的重排方式为单一性。表明组织中存在 单克隆性增生的细胞群。
▪ 多克隆性：扩增产物电泳呈弥散涂抹状(smear)或阶梯状(高斯分布）
送检组织中，淋巴细胞抗原受体基因的重排方式为多样性。表明组织中不存 在单克隆性增生的细胞群。
Biomed-2研究项目（IGH为例）
van Dongen, J. J. M., et al. (2003). Leukemia 17: 2257.
Biomed-2研究项目（IGH为例）
van Dongen, J. J. M., et al. (2003). Leukemia 17: 2257.
淋巴瘤应用基因重排检测进行辅助/鉴别诊断的方案
注意事项
▪ 检测到克隆性重排未必一定发生恶性病变 某些良性增生也可呈克隆性重排，如CD8+T细胞淋巴增 生性病变、良性单克隆性丙种球蛋白病、皮肤淋巴瘤样 丘疹病、免疫缺陷患者严重的EB病毒感染等；
▪ 检测不到克隆性重排也不能排除恶性病变 某些明确恶性病变的免疫缺陷患者中偶尔检测不到克隆 性重排，NK/T细胞淋巴瘤中IG和TCR基因呈胚系结构， 即也无克隆性重排。
分子检测
检测基 因
方法
IG/TCR 基因重排
IGH， IGK， IGL， TRB， TRD， TRG
• GEL (PAGE)
• ABI (CE) • NGS
IGHV超 突变
来自百度文库• GEL
IGH
(PAGE) • ABI (CE)
• NGS
EZH2,
基因突变
DNMT3 A,
• •
Sanger NGS
IDH2…
基于不同方法的产品系列-Invivoscribe公 司
基于PCR检测技术，
基于PCR-毛细管电泳
简便、快速、成本较
检测技术，敏感性高，
低，所需DNA量少，
检测周期较长，结果更
对DNA质量要求不高。 加直观可靠
灵敏度高于10%，需 配制胶，安全清洁性 较差。
目前市场最被接受的检 测方法。灵敏度无法满 足MRD要求，难以定
▪ 辅助诊断：少见类型淋巴瘤，如肝脾T细胞淋巴瘤 ▪ 亚类分析：明确是B淋巴恶性增殖还是T细胞恶性增殖 ▪ 区分同一患者两种淋巴细胞恶性肿瘤，包括复发与继发淋巴瘤 ▪ 微小残留病灶监测，评估治疗效果或复发风险（NGS方法） ▪ 细胞免疫治疗监测，监测回输T细胞增殖状况和淋巴组织来源肿
瘤细胞清除效果（NGS）
淋巴瘤基因克隆性重排和 IGHV体细胞超突变检测
血液肿瘤（常规肿瘤）检测方案-
MICM综合分子检测(旌准方案)
形态学
（Morphology）
分子生物学
（Molecular） • 聚丙烯酰胺凝胶电泳 (PAGE) • 毛细管凝胶电泳(CE) • 荧光实时定量 PCR(RTQT-PCR) • 一代测序(Sanger) • 二代测序(NGS)
（IGH, IGK,）量和（得I到G序L列）。
（TRB ,TRD,）（ TRG）
BIOMED-2方案，唯一授权）
新兴技术，更高灵敏度 （10-6），更高分辨率， 更高的通量，更广泛的应 用。但成本高，仪器贵， 操作复杂，时间长。
IGH, IGK, TRB , TRG IGHV
从Biomed-2到Invivoscribe-唯一授权
胞
B-Cell Receptors (BCR) /Immunoglobulins (Ig) T-Cell Receptor (TCR)
蛋白
Ig重链 Ig轻链 Ig轻链
基因
IGH IGK IGL
染色体定 位
14q32 2p12 22q11
蛋白
TCRα TCRβ TCRγ TCRδ
基因 染色体定 位
TRA 14q11