牛乳中细菌数的检查

牛乳中细菌数的检查

摘要：【目的】采用两种方法检测牛乳中细菌数目，鉴定牛乳卫生等级。【方法】采用美蓝还原酶试验法和

标准平板计数法检测不同种类牛乳中细菌数目，确定质量等级。通过对照试验鉴定巴斯德消毒法是否符合卫生标准。【结果】美蓝还原酶试验法可以快捷简便地对牛乳质量等级进行定性检测；标准平板法可以对牛乳中细菌数量进行定量检测，结果准确。【结论】通过标准平板法平行测定，可确定样品牛乳等级为中等和差。通过对照试验，确定巴斯德消毒法可靠性强。

关键词：牛乳；美蓝还原酶；标准平板计数；细菌数；检查

The Inspection of the Number of Bacteria in Milk

Yongqing Xue, Wenjing Sun, Xiangchen Fan, Na Li, Junyi Li, Hongzhou Zhao,

Tongyang Chen, Chunyan Hu

(College of Life Sciences, Shandong Agricutual University, Tai’an, 271000, China)

Abstract:[Objective]Using two methods to detecting the quality of cow’s milk and the number of bacteria in milk and to dentifying the hygienic level of milk. [Methods] Using the methylene blue reductase method and the standard plate counting method to carry on the detection of the number of bacteria in different milk, therefore to determine the quality of milk. Through controlled trails to determine whether Pasteurization of milk meets the quality standards. [Results] Methylene blue reductase test method can be easy and quick for the qualitative detection of milk quality levels; while standard plate counting method can quantify the number of bacteria in milk and the results of the test are commonly accurate. [Conclusion] Measured by the standard plating count method, the milk samples being determined are at a middle and some even low level. By the controlled trials to determine that Pasteurization is reliable.

Key words:the cow’s milk; the methylene blue reductase method; the standard plate counting method; the numble of bacteria; inspection

1 引言

牛乳富含蛋白质，长期饮用有助于增强体质。同时，牛乳也是许多疾病传播的一种重要的非生命载体，富含微生物生长繁殖的丰富营养[1]。从健康母牛体内刚取出的牛奶含有少量正常的起始微生物，在牛乳的采取、加工、分装与运输过程中，可能由于操作不规范而使牛乳污染杂菌。由于牛乳营养丰富，其中污染的杂菌会快速繁殖，饮用后对身体有极大危害。

牛乳的细菌学检查一般有显微镜直接计数法、美蓝还原酶试验、检测大肠菌群和标准平板计数法[2]，本次试验通过后两种方法分别定性、定量检测牛乳样品的细菌数含量，同时通过对照试验，确定在牛乳消毒中被广泛应用的巴斯德消毒法的卫生标准是否达标。

2 材料与方法

2.1 试验时间与地点

2011年11月7日-8日，9号楼522试验室。

2.2 试验材料

材料：亚奥特鲜牛奶；亚奥特纯牛奶；牛肉膏蛋白胨培养基；

试剂：美蓝溶液（1:250 000）；无菌水；蒸馏水等；

仪器和用具：试管，试管架，三角瓶，5mL移液枪及枪头，1mL移液枪及枪头，培养平板，高温蒸汽灭菌锅，恒温水浴锅，微波炉，显微镜，载玻片，标记笔等。

2.3 试验方法

2.3.1 牛肉膏蛋白胨培养基和无菌水的制备与灭菌

制备牛肉膏蛋白胨培养基400mL，分装在两个三角瓶中；取9支试管，每支试管加9mL 蒸馏水。将牛肉膏蛋白胨培养基与装有蒸馏水的试管及21个平板一起灭菌，121℃维持20min。

牛肉膏蛋白胨培养基的配方（每1000mL）为：牛肉膏3g，蛋白胨10g，NaCl5g，琼脂4.4g，水1000mL，pH=7.0~7.2。

2.3.2 美蓝还原酶试验法测定牛乳质量

（1）取三支无菌试管，标记为1号、2号和3号，1号试管加入10mL亚奥特鲜牛奶，2号、3号试管分别加入10mL亚奥特纯牛奶，1号、2号试管分别加入1mL美蓝溶液，分别加棉塞塞紧。

（2）轻轻摇动试管，置于37℃水浴锅中温浴，记录开始时间；

（3）试管在水浴锅中稳定5min后取出，轻轻摇动后再放回水浴锅；

（4）每隔30min取出试管观察美蓝与牛乳混合液颜色变化，直至3-6h，记录试管中牛乳4/5变白时的时间。

2.3.3 巴氏消毒法消毒牛乳

（1）将亚奥特鲜牛奶摇匀，使其中的微生物充分混匀；

（2）取一支无菌试管，标记A，加亚奥特鲜牛奶5mL；

（3）将A试管置于80℃水浴锅中，使水面超过试管内牛乳液面，保持15min，不断摇动试管使加热均匀；

（4）加热至15min时立即取出试管，用流水冲洗试管外壁，使牛乳迅速冷却；

2.3.4 标准平板计数法检测牛乳中细菌数

（1）将亚奥特鲜牛奶摇匀，使其中的微生物充分混匀；

（2）取一支无菌试管，标记B，加亚奥特鲜牛奶5mL；

（3）摇匀A、B试管中牛乳，从A试管中吸取1mL牛乳用无菌水稀释，稀释度依次为10-2，10-3，10-4；从B试管中吸取1mL牛乳用无菌水稀释，稀释度依次为10-3，10-4，10-5。

（4）取21个无菌平板并标明稀释度、溶液名称（消毒前牛乳、消毒后牛乳和无菌水），其中分别取不同梯度的牛乳各1mL依次注入相应标记的平板，每个梯度做三个平行；取无菌水1mL注入平板，做三个平行；

（5）取出灭菌后的牛肉膏蛋白胨培养基，用微波炉熔化为液体，冷却到45℃左右后摇匀，向21个平板中各加15mL，静置。

（6）待平板中培养基凝固后倒置，置于37℃培养箱中培养24h；

（7）选择菌落数为30-300左右的平板计数，计算每毫升牛乳中细菌数。

3 结果与分析

3.1 试验结果

3.1.1美蓝还原酶试验法结果见表1。

表1 美蓝还原酶试验法结果

Table1 the results of methylene blue reductase test

注：表格中“——”表示无数据。

3.1.2 标准平板计数法结果见表2。

表2 标准平板计数法结果