单克隆抗体在狂犬病预防治疗中的研究进展概要
抗狂犬病毒单克隆抗体的研制及应用
ｉ ｍ ｎｆ ｏｅｅｎ ａｓｙ ＩＡ 结 果 表 明 ： ４株 单 抗 对 Ｒ 有 良好 的 特 异 性 ， 正 常 Ｖ ｒ 胞 及 人 白蛋 白 和 其 ｍ ｕ ｏ ｕｒｓｅｔ ｓ ，Ｆ ） ｌ ａ 该 Ｖ 对 ｅｏ细 他 细胞 培 养物 无 非特 异性 反 应 。将 这 些 单抗 腹 水 进 行 Ｐｏｅ 亲 和层 析 纯 化 后 获 得 的 纯 化 抗 体 用 于制 备 反 ｒｔ ｎＧ ｉ
相 亲和层析 柱， 并以反 相亲和层析法纯化 Ｒ Ｖ以获得 高纯度 Ｒ Ｖ抗原 。应用纯化的 Ｒ Ｖ建立胶体金免疫层析法
（ｏｄｉ ｍ ｎｃｒｍ ｔ ｒｐｙａｓｙ ＧＣ 检 测 Ｒ ｇｌ— ｕ ｏｈｏ ａ ｇａｈ ｓａ ， Ｉ Ａ） ｍ ｏ Ｖ抗 体 血 清 ， 果 显 示 ， ＩＡ 与 标 准 Ｅ ＩＡ 法检 测 比较 的 总 符 结 ＧＣ ＬＳ
Ｉ ＦＡ ｅ ｔ ，ａｌｏ ｏ Ａｂ ｐ ｃｆｃ ｌｙｒ ａ ｔｄ ｗｉｈ ｒｂｉｓｖ ｒ ｕ ｉ ｏ ｅ ｃ ｔ ｒ ｅｌ ｔ ｓｓ ｌ ｆｆｕｒＭｃ ｓｓ ｅ ｉ ａｌ ｅ ｃｅ ｔ ａ ｅ ｉｕｓｂ ｔｄｄ ｎ ｔｒ ａ ｔｗｉｈ Ｖｅｏ ｃ ｌｓ．ｈ ｍ ａ ａｂ ｉ ｕ ｎ ｌ ｕｍｉ ｎ ｔ ｅ ｅ ｌ ｎ ａ ｄ ｏ ｈ ｒｃ ｌ
ＱＩ Ｈｏ ｇ ｇ ｎ Ｎ ｎ —ａ ｇ，ＱＩＳ ｉｈ ａ ｈ —ｕ ，ＷＥＮ ｎ ｓ ｅ ｇ Ｗｅ —ｈ ｎ
狂犬病病毒的研究现状及其进展
Ｇ蛋 白也 是 狂 犬 病 病 毒 唯 一 的表 面 蛋 白， 可结 合 细胞 受体 ， 导病 毒侵 入 ， 定病 介 决 毒 的致 病性 和 组织 嗜性 ， 病毒 的 主要 表面 是 抗原， 且是 Ｒ 并 Ｖ与 细胞 受体 结合 的结构 ， 因 此是 Ｒ Ｖ的 主要保 护 性抗 原 ．能诱 导 产 生 中
ｒ ｐ ａ ａ ｉ ｕ ） 分 别 为 基 因 ５和 ６型 。 ｏ ｅ ｎｂ ｔｖ ｒ ｓ
狂 犬 病 病 毒 属 弹 状 病 毒 科 （ｈ ｂ Ｒ ａ－ ｄ ｖ ｒ ｄ ｅ ，狂 犬病 病 毒 属 （ｙ ｓ ｖｒ ｓ 。 ｏ ｉ ｉａ ） Ｌ ｓ ａ ｉ ｕ ） 病 毒颗 粒一 端呈 平坦 或 略 凹状 ， 一端 为半 另
３
作 者 简 介 ： 伟 燕 （９ ０ ） 男 ， 肃 甘 谷 人 ， 张 １８～ ， 甘
助 理兽 医师 ，主要从 事动 物卫 生监督 及行 政
执 法工作 。
甘龠葛哎兽厦
的改变 ，可 以 引起 Ｇ蛋 白抗原 性 的变 化 ， 尤
２１ ０ ２年ｆ ２ ６期 总 ２）
密结 合 成核 糖 核 蛋 白 （ｉ ｏ ｕ １ ｏ ｒ ｔ ｉ ， ｒ ｂｎｃｅ ｐｏｅｎ
患者 多 因病畜 咬伤 而感 染 ，出现 以恐 水 、 畏
光 、 咽 困难 、 躁 等 为 主要 特 征 的 中枢 神 吞 狂 经 系统感 染症状 。
１ 狂 犬 病 病 毒 结 构 及 类 型
１ １ 结 构 ．
ｖｒ ｓ Ｕ Ｖ ） ｉ ｕ Ｖ ． 。血 清 Ｉ型 的疫 苗株 对其 他血 Ｄ
旋 状核 衣壳 ， 直径 约 ５ ｍ 由单链 Ｒ Ａ基 因 ０ｎ ， Ｎ
组 、 核 蛋 白 （ｕ ｌ ｏ ｒ ｔ ｉ ） 大 蛋 白 Ｎ ｃｅｐ ０ｅｎ 、 （ａ ｇ ｐ ｏ ｅ ｎ 和 磷 酸 化 蛋 白 （ｈ ｓ ｈ — Ｌｒ ｅｒ ｔｉ） Ｐ ｏｐｏ
狂犬病病毒糖蛋白单克隆抗体的制备
狂犬病病毒糖蛋白单克隆抗体的制备米立娟;王永志;刘晔;张守峰;扈荣良【摘要】用狂犬病病毒BD06株脑毒免疫BALB/c小鼠,制备G蛋白单克隆抗体.将灭活的BD06脑毒免疫BALB/c小鼠,取其脾细胞与骨髓瘤细胞(SP2/0)进行融合,通过间接ELISA法和荧光抗体病毒中和试验法进行4轮筛选,获得6F12、1B12共2株具有中和活性的糖蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞.通过Western blotting分析和直接免疫荧光检测结果显示,获得一株针对狂犬病病毒糖蛋白构象表位的单抗6F12和一株针对糖蛋白线性表位的单抗1B12.小鼠中和试验结果显示,两株杂交瘤细胞分泌的抗体均具有狂犬病病毒中和活性.结果表明,获得了两株针对狂犬病病毒G蛋白不同抗原表位的中和活性单克隆抗体,为狂犬病病毒特性研究和检测奠定了基础.%Two monoclonal antibodies against rabies virus glycoprotein were produced by immunization with rabies virus strain BD06 in BALB/c mice. Splenocytes from the immunized mice were fused with SP2/0 mouse myeloma cells. After fusion, antibodies in the supernatant of the hybrid cells were respectively detected by ELISA and FAVN tests. Two hybrid cells secreting antibody binding to rabies virus, i. e. 6F12 and 1B12 strains, were analyzed by Western blotting and FAT methods. Results showed that conformational and linear epitopes of the glycoprotein were repectively recognized by neutralizing monoclonal antibody 6F12 and 1B12.【期刊名称】《中国畜牧兽医》【年(卷),期】2012(039)008【总页数】4页(P35-38)【关键词】狂犬病病毒;糖蛋白;中和抗体;单克隆抗体【作者】米立娟;王永志;刘晔;张守峰;扈荣良【作者单位】军事医学科学院军事兽医研究所,吉林长春130122;吉林省农业科学院,吉林长春 130133;军事医学科学院军事兽医研究所,吉林长春130122;军事医学科学院军事兽医研究所,吉林长春130122;军事医学科学院军事兽医研究所,吉林长春130122【正文语种】中文【中图分类】S852.4狂犬病(rabies)是由狂犬病病毒感染导致的致死性人兽共患传染病。
抗狂犬病毒中和抗体研究进展
生物技术进展２０２０年㊀第１０卷㊀第４期㊀３３９~３４４ＣｕｒｒｅｎｔＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ㊀ＩＳＳＮ２０９５￣２３４１进展评述Ｒｅｖｉｅｗｓ㊀收稿日期:２０１９￣１０￣１０ꎻ接受日期:２０２０￣０４￣２２㊀基金项目:国家自然科学基金项目(８１７０２０７２)ꎮ㊀联系方式:卞论Ｅ￣ｍａｉｌ:１２６１７２５６９２＠ｑｑ.ｃｏｍꎻ∗通信作者吴英松Ｅ￣ｍａｉｌ:ｙｉｎｇｓｏｎｇｗｕ＠ｈｏｔｍａｉｌ.ｃｏｍ抗狂犬病毒中和抗体研究进展卞论ꎬ㊀林冠峰ꎬ㊀吴英松∗南方医科大学检验与生物技术学院ꎬ广州５１０５１５摘㊀要:狂犬病是一种人兽共患传染病ꎬ人和动物一旦发病后死亡率几乎百分之百ꎬ而有效的暴露后预防措施可以将死亡风险降至零ꎮ根据ＷＨＯ推荐的狂犬病暴露后预防方案ꎬ一般狂犬病暴露者需要进行疫苗注射ꎬ严重者则需在进行疫苗注射的同时注射抗狂犬病毒中和抗体ꎮ常用的中和抗体有马抗狂犬病毒免疫球蛋白和人抗狂犬病毒免疫球蛋白ꎬ然而两者都存在引起过敏反应或血液疾病的风险ꎮ人源抗狂犬病毒中和抗体则因为具有安全性高㊁成本低㊁可量产等优点有望代替免疫球蛋白用于暴露后预防ꎮ基因工程抗体技术的发展加速了抗体人源化的进程ꎮ就抗狂犬病毒中和抗体的发展历程ꎬ不同类型中和抗体的优缺点以及中和抗体的未来研究方向作了综述及展望ꎬ以期为新一代狂犬疫苗的研发提供参考ꎮ关键词:狂犬病毒ꎻ暴露后预防ꎻ中和抗体ＤＯＩ:１０.１９５８６/ｊ.２０９５￣２３４１.２０１９.００９９ＡｄｖａｎｃｅｓｏｎＡｎｔｉ￣ｒａｂｉｅｓＶｉｒｕｓＮｅｕｔｒａｌｉｚｉｎｇＡｎｔｉｂｏｄｉｅｓＢＩＡＮＬｕｎꎬＬＩＮＧｕａｎｆｅｎｇꎬＷＵＹｉｎｇｓｏｎｇ∗ＳｃｈｏｏｌｏｆＬａｂｏｒａｔｏｒｙａｎｄＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙꎬＳｏｕｔｈｅｒｎＭｅｄｉｃａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙꎬＧｕａｎｇｚｈｏｕ５１０５１５ꎬＣｈｉｎａＡｂｓｔｒａｃｔ:Ｒａｂｉｅｓｉｓａｚｏｏｎｏｔｉｃｉｎｆｅｃｔｉｏｕｓｄｉｓｅａｓｅ.Ｔｈｅｍｏｒｔａｌｉｔｙｒａｔｅｏｆｈｕｍａｎｓａｎｄａｎｉｍａｌｓｉｓａｌｍｏｓｔ１００％ａｆｔｅｒｏｎｓｅｔꎬａｎｄｅｆｆｅｃｔｉｖｅｐｏｓｔ￣ｅｘｐｏｓｕｒｅｐｒｅｖｅｎｔｉｖｅｍｅａｓｕｒｅｓｃａｎｒｅｄｕｃｅｔｈｅｒｉｓｋｏｆｄｅａｔｈｔｏｚｅｒｏ.ＡｃｃｏｒｄｉｎｇｔｏｔｈｅＷＨＯｒｅｃｏｍｍｅｎｄｅｄｒａｂｉｅｓｐｏｓｔ￣ｅｘｐｏｓｕｒｅｐｒｏｐｈｙｌａｘｉｓｐｒｏｇｒａｍꎬｇｅｎｅｒａｌｒａｂｉｅｓ￣ｅｘｐｏｓｅｄｐｅｏｐｌｅｎｅｅｄｔｏｂｅｖａｃｃｉｎａｔｅｄꎬａｎｄｉｎｓｅｖｅｒｅｃａｓｅｓꎬｔｈｅｙｍｕｓｔｂｅｉｎｊｅｃｔｅｄｗｉｔｈａｎｔｉ￣ｒａｂｉｅｓｖｉｒｕｓｎｅｕｔｒａｌｉｚｉｎｇａｎｔｉｂｏｄｉｅｓａｔｔｈｅｓａｍｅｔｉｍｅ.Ｎｅｕｔｒａｌｉｚｉｎｇａｎｔｉｂｏｄｉｅｓｔｈａｔｃｏｍｍｏｎｌｙｕｓｅｄａｒｅｅｑｕｉｎｅａｎｔｉ￣ｒａｂｉｅｓｖｉｒｕｓｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎａｎｄｈｕｍａｎａｎｔｉ￣ｒａｂｉｅｓｖｉｒｕｓｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎꎬｂｕｔｂｏｔｈｈａｖｅｔｈｅｒｉｓｋｏｆｃａｕｓｉｎｇａｌｌｅｒｇｉｃｒｅａｃｔｉｏｎｓｏｒｂｌｏｏｄｄｉｓｅａｓｅｓ.Ｈｕｍａｎｉｚｅｄａｎｔｉ￣ｒａｂｉｅｓｖｉｒｕｓｎｅｕｔｒａｌｉｚｉｎｇａｎｔｉｂｏｄｉｅｓａｒｅｅｘｐｅｃｔｅｄｔｏｒｅｐｌａｃｅｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎｓｆｏｒｐｏｓｔ￣ｅｘｐｏｓｕｒｅｐｒｏｐｈｙｌａｘｉｓｂｅｃａｕｓｅｏｆｔｈｅｉｒａｄｖａｎｔａｇｅｓｏｆｈｉｇｈｓａｆｅｔｙꎬｌｏｗｃｏｓｔꎬａｎｄｍａｓｓｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ.Ｔｈｅｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔｏｆｇｅｎｅｔｉｃｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇａｎｔｉｂｏｄｙｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙｈａｓａｃｃｅｌｅｒａｔｅｄｔｈｅｐｒｏｃｅｓｓｏｆａｎｔｉｂｏｄｙｈｕｍａｎｉｚａｔｉｏｎ.Ｔｈｉｓａｒｔｉｃｌｅｒｅｖｉｅｗｅｄｔｈｅｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔｏｆａｎｔｉ￣ｒａｂｉｅｓｖｉｒｕｓｎｅｕｔｒａｌｉｚｉｎｇａｎｔｉｂｏｄｉｅｓꎬｔｈｅａｄｖａｎｔａｇｅｓａｎｄｄｉｓａｄｖａｎｔａｇｅｓｏｆｄｉｆｆｅｒｅｎｔｔｙｐｅｓｏｆｎｅｕｔｒａｌｉｚｉｎｇａｎｔｉｂｏｄｉｅｓꎬａｎｄｔｈｅｆｕｔｕｒｅｒｅｓｅａｒｃｈｅｘｐｅｃｔａｔｉｏｎｓｏｆｎｅｕｔｒａｌｉｚｉｎｇａｎｔｉｂｏｄｉｅｓꎬｗｈｉｃｈｗａｓｅｘｐｅｃｔｅｄｔｏｐｒｏｖｉｄｅｒｅｆｅｒｅｎｃｅｆｏｒｒｅｓｅａｒｃｈｏｆｔｈｅｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔｏｆｎｅｗｇｅｎｅｒａｔｉｏｎｒａｂｉｅｓｖａｃｃｉｎｅ.Ｋｅｙｗｏｒｄｓ:ｒａｂｉｅｓｖｉｒｕｓꎻｐｏｓｔ￣ｅｘｐｏｓｕｒｅｐｒｏｐｈｙｌａｘｉｓꎻｎｅｕｔｒａｌｉｚｉｎｇａｎｔｉｂｏｄｙ㊀㊀狂犬病是由狂犬病毒属(Ｌｙｓｓａｖｉｒｕｓ)的嗜神经病毒引起的能感染人类和其他哺乳类动物的传染性疾病ꎬ发病后死亡率几乎百分之百ꎮ每年均有６００００人死于狂犬病ꎬ而且这个数字还在持续增长[１￣２]ꎬ但是在感染病毒与发病之间进行有效的暴露后预防可以将死亡率降低至几乎零ꎮ因此有效的狂犬病暴露后预防方法在提高狂犬病患者生存几率方面极为重要ꎮ狂犬病暴露后预防方式与暴露程度有关ꎬ狂犬病的暴露程度可分为三种:Ⅰ类暴露为接触猫狗等动物时皮肤被舔ꎬ但依然保持完整ꎬ如能确认接触的动物并未感染狂犬病毒ꎬ则不需要进行处理ꎻⅡ类暴露为皮肤被咬伤或轻微抓伤ꎬ但是并未出血ꎬ这种情况只需要主动免疫ꎬ即进行狂犬病疫苗注射ꎻⅢ类暴露为皮肤被咬. All Rights Reserved.伤或抓伤或者粘膜与已破损的皮肤被动物体液污染ꎬ这种情况则需要以暴露后预防(ｐｏｓｔ￣ｅｘｐｏｓｕｒｅｐｒｏｐｈｙｌａｘｉｓꎬＰＥＰ)方式进行处理[３]ꎬ主要有三个步骤:①使用清水冲洗伤口ꎬ尽量避免伤口残留狂犬病毒ꎻ②采取主动免疫措施ꎬ即注射狂犬病毒灭活疫苗ꎻ③使用抗狂犬病毒中和抗体浸润注射ꎬ以达到在主动免疫产生足量抗体之前ꎬ快速及时地中和患处及体内狂犬病毒的目的ꎬ避免狂犬病毒入侵中枢神经系统ꎮ在国内就曾发生过Ⅲ类暴露后仅接种狂犬病疫苗并未注射抗狂犬病毒中和抗体而死亡的案例[４￣５]ꎬ这也证明了及时注射中和抗体在狂犬病防治中的重要性ꎮ中和抗体是Ｂ淋巴细胞产生的抗体ꎬ能够与病原微生物表面的抗原结合ꎬ从而阻止该病原微生物黏附靶细胞受体ꎬ防止其侵入细胞ꎮ由于中和抗体有着成本高㊁产量小等局限ꎬ难以在基层地区生产和普及ꎮ历代科学家致力于改进抗体技术并应用于中和抗体研制ꎬ提高中和抗体生产效率ꎮ中和抗体经由多抗血清㊁单克隆抗体及基因工程抗体等技术的发展历程ꎬ其研制趋于成熟ꎬ本文就抗狂犬病毒中和抗体的发展历程㊁不同类型中和抗体的优缺点以及中和抗体的未来研究期望作了综述ꎬ以期为新一代狂犬疫苗的研发提供参考ꎮ１㊀狂犬病疫苗简史作为人类历史中出现的最早的疾病之一ꎬ对于狂犬病的相关记载可以追朔至古埃及[６]ꎮ１７世纪的英文文献中以这种传染病的症状(该病的患者会过度口渴和害怕水)为其命名恐水症(ｈｙｄｒｏｐｈｏｂｉａ)[７￣１０]ꎮ１８８５年路易斯 巴斯德通过将狂犬病动物的脊髓进行干燥处理制备出世界上第一支用于预防狂犬病的疫苗[１１]ꎬ开启了暴露后狂犬病预防的新时代ꎮ在之后的五十年里ꎬ研究者们采用了不同的措施对巴斯德最初通过简单而粗糙的干燥方式制备出的狂犬病疫苗进行了改进ꎬ以提高安全性和治疗效果ꎮ疫苗的制造工艺发展至今ꎬ目前已处于细胞培养疫苗的时代ꎮ其中以人二倍体细胞培养狂犬病疫苗作为基准ꎬ这是一种使用人类二倍体细胞接种固定病毒后进行培养繁殖ꎬ再经过浓缩㊁灭活等步骤制成的疫苗[７]ꎮ这类疫苗治疗效果好ꎬ注射后较少产生副反应ꎬ是理想的疫苗[８]ꎮ作为第一种纯化浓缩无佐剂的冻干狂犬病疫苗ꎬ人二倍体细胞狂犬疫苗(ｈｕｍａｎｄｉｐｌｏｉｄｃｅｌｌｒａ￣ｂｉｅｓｖａｃｃｉｎｅꎬＨＤＣＶ)从１９７４年上市以来ꎬ因其较高的安全性㊁较好的免疫原性㊁极少产生副作用等优点ꎬ被评价为最理想的狂犬病疫苗ꎮ但由于ＨＤＣＶ细胞培养技术难度大㊁成本高ꎬ主要应用在发达国家ꎮ目前国内狂犬病疫苗市场占比前三的辽宁成大公司㊁宁波荣安公司和广州诺诚公司的产品也主要是以非洲绿猴肾细胞(Ｖｅｒｏ细胞)狂犬病疫苗为主ꎮ而以ＨＤＣＶ作为主要产品的成都康华公司[９]㊁辽宁迈丰公司[１０]市场占比还不足３％ꎬ这也说明ＨＤＣＶ其在发展中国家普及率较低的窘境ꎮ２㊀狂犬病毒中和抗体的功能狂犬病毒中和抗体的作用方式主要分为三种:①中和抗体能够在补体的参与作用下使病毒感染的细胞溶解破碎ꎮ当狂犬病毒在宿主体内的细胞中进行复制增殖时ꎬ细胞膜会表达病毒蛋白抗原ꎬ而这种抗原会被中和抗体识别并产生相互作用ꎬ在补体的协助下发生溶解破碎ꎻ②中和抗体会结合体内的游离病毒ꎬ这会阻断病毒进入细胞的过程ꎬ二者组成的免疫复合物也会被吞噬细胞识别并吞噬和清除ꎻ③抗体依赖的细胞介导的细胞毒性作用ꎬ即表达有ＩｇＧ抗体的Ｆｃ受体的ＮＫ细胞和巨噬细胞等ꎬ通过和已结合于病毒感染细胞表面的ＩｇＧ抗体Ｆｃ段结合ꎬ以此来杀伤病毒感染的靶细胞[１２]ꎮ３㊀狂犬病毒中和抗体发展历程中和抗体的发展历程大概分为三个阶段:第一代抗体的发展始于２０世纪初期ꎬ早在１８９５年ꎬＨｅｒｉｃｏｕｒｔ和Ｒｉｃｈｅｔ[１３]就通过将癌细胞注入动物体内ꎬ取其产生的抗血清ꎬ用于治疗癌症病人ꎬ即使用抗原免疫动物获取的能中和对应抗原的多抗血清ꎻ第二代抗体ꎬ即单克隆抗体ꎬ是１９７５年由Ｋöｈｌｅｒ与Ｍｉｌｓｔｅｉｎ利用杂交瘤技术制备[１４]ꎬ与第一代抗体相比ꎬ单克隆抗体由于均由同一Ｂ细胞分裂得到的子细胞产生而拥有高纯度㊁仅针对抗原单一表位㊁生产量较大等优点ꎮ但是由于单抗０４３生物技术进展ＣｕｒｒｅｎｔＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ. All Rights Reserved.大部分来自于鼠的杂交瘤细胞ꎬ注射后会被免疫系统识别产生人抗鼠抗体从而被中和掉ꎬ导致效果锐减[１５]ꎬ同时还会引起人体产生过敏反应ꎻ第三代抗体ꎬ也就是基因工程抗体ꎬ其发展始于２０世纪８０年代中期ꎮ基因工程抗体是使用分子生物学技术对鼠源抗体进行改造ꎬ从而降低人体对其产生的免疫反应ꎬ例如使用ＤＮＡ重组技术对单克隆抗体的鼠源部分进行替换从而构建人鼠嵌合抗体ꎬ以实现鼠源单抗的人源化[１６]ꎬ甚至通过噬菌体展示技术[１７]与转基因鼠技术[１８]对抗体进行了彻底人源化处理ꎮ３.１㊀抗狂犬病毒多克隆抗体(抗血清)抗狂犬病毒多克隆抗体为第一代抗体ꎬ即通过使用抗原免疫动物获取的能中和对应抗原的多抗血清ꎮ目前常用于ＰＥＰ的抗狂犬免疫球蛋白主要为抗狂犬病马血清(ｅｑｕｉｎｅａｎｔｉ￣ｒａｂｉｅｓｉｍｍｕ￣ｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎꎬＥＲＩＧ)和抗狂犬病人血清(ｈｕｍａｎａｎｔｉ￣ｒａｂｉｅｓｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎꎬＨＲＩＧ)[１９]ꎮ虽然这两种免疫球蛋白都很有效ꎬ但是各自都有缺点ꎮ首先ＥＲＩＧ有着非常严重的副反应ꎬ譬如严重的过敏反应等[２０]ꎬ而且还会抑制某些疫苗诱导产生的抗体ꎮ尽管有着很多缺点ꎬＥＲＩＧ在很多发展中国家仍是供不应求[２１]ꎮ相比之下ꎬＨＲＩＧ则无副反应ꎬ但是由于ＨＲＩＧ需从免疫过的人血清中提取ꎬ而且需要供体的抗体滴度达到一定水平ꎬ因此产量有限且价格昂贵ꎮ同时由于其供体不稳定ꎬ导致其存在着血液制品有潜在致病性㊁批次间有质量差异等问题ꎮ３.２㊀鼠源抗狂犬病毒单克隆抗体为了寻找一种可以克服ＥＲＩＧ和ＨＲＩＧ缺陷的新产品ꎬ科学家们开始着眼于研制抗狂犬病毒单克隆抗体ꎮ从杂交瘤单克隆抗体技术[１３]出现以来ꎬ单克隆抗体技术发展迅猛ꎬ利用单克隆抗体技术生产的抗体拥有高特异性ꎬ能够解决多抗血清的部分缺陷ꎬ此外还拥有着高安全性㊁低成本㊁可量产等优点[２２]ꎮ在临床诊断㊁预防以及治疗等方面的应用也日益广泛ꎬ其中对治疗性单克隆抗体的研究尤为深入ꎮ但由于传统的单克隆抗体为鼠源性ꎬ易引发人体抗鼠抗体产生ꎬ甚至引发超敏反应ꎮ因此直到基因工程抗体出现后ꎬ单克隆抗体作为药物才显示出了巨大的应用前景ꎮ１９８９年Ｓｃｈｕｍａｃｈｅｒ等[１４]利用杂交瘤单克隆抗体技术制备了多株针对狂犬病毒糖蛋白(ｇｌｙｃｏ￣ｐｒｏｔｅｉｎꎬＧ蛋白)与核蛋白(ｎｕｃｌｅａｒｐｒｏｔｅｉｎꎬＮ蛋白)的鼠源单克隆抗体ꎬ将这些抗体混合使用即为单克隆抗体鸡尾酒疗法(ｃｏｃｋｔａｉｌｏｆａｎｔｉ￣ｒａｂｉｅｓｍｏｎｏｃｌｏｎａｌａｎｔｉｂｏｄｉｅｓꎬＭｃＡｂ￣Ｃ)ꎬ对小鼠和地鼠进行的保护性试验证明这种方法不仅能够在被动免疫之后抵抗致死量狂犬病毒的攻击ꎬ还拥有暴露后保护作用ꎮ１９９０年Ｄｉｅｔｚｓｃｈｏｌｄ等[２３]研究证明糖蛋白是抗狂犬病毒主要的中和抗原蛋白ꎬ为之后以糖蛋白为目的蛋白制备新疫苗及抗体的研究提供了指导方向ꎬ也为现代的狂犬病预防奠定了基础ꎮ１９９１年Ｆｕ等[２４]将狂犬病毒ＥＲＡ毒株编码Ｎ蛋白基因克隆至杆状病毒中ꎬ随后在昆虫细胞中大量表达ꎬ经过亲和色谱法纯化之后制备出了３２株单克隆抗体ꎬ其中３１株能够正确识别狂犬病毒株ꎮ直到２００７年ꎬＭｕｈａｍｕｄａ等[２５]制备了数株针对狂犬病毒Ｇ蛋白的鼠源单克隆抗体ꎬ并使用动物模型验证了其对于狂犬病暴露后预防的效果ꎮ快速荧光灶抑制试验的结果显示抗体的中和效价达到１６５０~７５０００ＩＵ ｍＬ－１ꎬ能够保护７０％~１００％接种了狂犬病毒的小鼠或豚鼠ꎮ这些单克隆抗体在有效蛋白浓度及中和效价方面高于商业ＥＲＩＧ约２０００倍ꎮ３.３㊀人－鼠异源骨髓瘤杂交技术１９９１年Ｅｎｓｓｌｅ等[２６]通过ＥＢ病毒使人源Ｂ淋巴细胞实现永生化ꎬ再与小鼠骨髓瘤杂交细胞融合制备出人源化抗狂犬病毒特异性单克隆抗体ＴＷ￣１ꎬ并在之后的快速荧光灶免疫试验和体内实验中均能中和病毒及保护小鼠免受感染ꎮ２０００年Ｃｈａｍｐｉｏｎ等[２７]将接受过商品化疫苗接种的人Ｂ淋巴细胞通过人－鼠异源骨髓瘤杂交技术进行细胞融合并制备了数株人源化抗狂犬病毒单克隆抗体ꎮ虽然这种异源杂交瘤细胞能获得比较稳定的细胞克隆ꎬ但是会产生丢失抗体的情况ꎬ这个现象可能与染色体丢失有关[２８]ꎮ３.４㊀抗狂犬病毒基因工程抗体由于鼠源性的单克隆抗体对于人体来说属于异源蛋白ꎬ容易刺激免疫系统产生抗鼠抗体并对其进行清除ꎬ还极易产生超敏反应[２９]ꎬ因此很难在临床上进行应用ꎮ而人源化单克隆抗体则拥有着副反应小㊁不易产生超敏反应等优点ꎬ更有机会应用于临床治疗ꎮ基因工程抗体分为如下几种:１４３卞论ꎬ等:抗狂犬病毒中和抗体研究进展. All Rights Reserved.人鼠嵌合抗体㊁互补决定区(ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔａｒｉｔｙｄｅ￣ｔｅｒｍｉｎｉｎｇｒｅｇｉｏｎꎬＣＤＲ)移植抗体㊁完全人源性抗体㊁单链抗体㊁噬菌体抗体(表１)ꎮ３.４.１㊀人鼠嵌合抗体㊀１９８４年Ｍｏｒｒｉｓｏｎ等[３０]通过获取能够分泌与已知抗原结合的特异性抗体的骨髓瘤杂交细胞系ꎬ提取其编码抗体可变区域的基因ꎬ并使用重组ＤＮＡ技术将其连接至人类免疫球蛋白恒定区域基因ꎬ创造出了有抗原结合特异性的人鼠嵌合抗体分子ꎬ这也是人类历史上第一次研究出人源化的单克隆抗体ꎮ人鼠嵌合抗体有着很多优点:①能够自由地选择抗体的亚型㊁大小㊁结构域等ꎻ②其不但保留了亲本鼠源单克隆抗体的高特异性及亲和力ꎬ而且减少了其中７０％的鼠源成分ꎻ③其中的人源Ｆｃ段能够有效地介导各种生物学效应ꎬ例如抗体依赖细胞介导的细胞毒作用等ꎮ表１㊀几种基因工程抗体的优缺点Ｔａｂｌｅ１㊀Ａｄｖａｎｔａｇｅａｎｄｄｉｓａｄｖａｎｔａｇｅｏｆｇｅｎｅｔｉｃａｌｌｙｅｎｇｉｎｅｅｒｅｄａｎｔｉｂｏｄｙ抗体类型优点缺点人鼠嵌合抗体免疫原性降低ꎬ人抗鼠反应(ｈｕｍａｎａｎｔｉ￣ｍｏｕｓｅｒｅｓｐｏｎｓｅꎬＨＡＭＲ)减少仍有诱导产生ＨＡＭＲ的可能性ＣＤＲ移植抗体免疫原性基本消除结合抗原能力下降完全人源性抗体保留亲和力和特异性ꎬ降低异源性抗体特异性和亲和力有所下降单链抗体分子量小ꎬ穿透力强ꎬ易达到靶点位置亲和力极低３.４.２㊀ＣＤＲ移植抗体㊀虽然嵌合抗体的恒定区已经改造为人源化ꎬ但是由于其可变区仍是鼠源的ꎬ因此仍会引起机体不同程度地产生人抗鼠抗体[３１]ꎮ而ＣＤＲ移植抗体则是将人抗体的互补决定区置换为鼠源性单克隆抗体的互补决定区ꎬ这种方法制作的抗体仅有极少部分仍为鼠源性ꎮ但是这种抗体与抗原的亲和力会下降ꎬ大概仅有原抗体的３０％~５０％ꎮ３.４.３㊀完全人源性抗体㊀完全人源性抗体是使用基因敲除技术敲除掉小鼠的免疫球蛋白基因ꎬ并以人免疫球蛋白基因进行取代ꎬ然后再采用抗原免疫小鼠ꎬ经过杂交瘤技术生产得到ꎮ２００７年Ｓｌｏａｎ等[３２]利用携带人类免疫球蛋白基因的转基因小鼠ꎬ得到了数株具有中和活性的人源性单克隆抗体ꎬ其中的人源性抗体１７Ｃ７能够识别狂犬病毒Ｇ蛋白的构象表位ꎬ并通过建立暴露后预防小鼠模型证实该抗体能够保护仓鼠免受致死量狂犬病毒的感染ꎮ３.４.４㊀单链抗体㊀Ｆｖ片段(ｖａｒｉａｂｌｅｆｒａｇｍｅｎｔ)是结合抗原的最小功能片段ꎬ是由重链可变区与轻链可变区通过疏水作用结合而成ꎬ而由于其重链可变区与轻链可变区是由非共价键连接ꎬ因此其在体内很不稳定ꎮ而随着分子生物学的发展ꎬ人们利用ＤＮＡ重组技术对Ｆｖ片段进行了改进ꎬ其中研究最多的就是单链抗体ꎮ１９８８年Ｈｕｓｔｏｎ与Ｂｉｒｄ等[３３￣３４]最早制备了单链抗体(ｓｃＦｖꎬｓｉｎｇｌｅｃｈａｉｎｖａｒｉａｂｌｅｆｒａｇｍｅｎｔａｎｔｉ￣ｂｏｄｙ)ꎬ单链抗体是使用一条短肽将重链可变区与轻链可变区连接而成ꎬ这种肽链结构不但能够在大肠杆菌表达中更有利于基因重组操作ꎬ同时也相应地解决了Ｆｖ不够稳定的缺点ꎮ单链抗体的优点主要在于其由重链可变区与轻链可变区组成ꎬ因此保留了完整的抗原结合部位ꎮ而且由于其分子量小ꎬ仅有标准抗体的１/６左右ꎬ因此拥有较强的穿透力ꎬ能更迅速地到达靶向部位ꎮ但是相比较于天然抗体的双价结构ꎬ单链抗体是单价的ꎬ因此其亲合力有所下降ꎮ３.４.５㊀噬菌体展示技术㊀噬菌体展示技术是把外源蛋白或者多肽的ＤＮＡ序列插入至噬菌体外壳蛋白结构基因的合适位置ꎬ从而使外源基因随着外壳蛋白一同表达ꎬ同时通过噬菌体的重新组装而展示到其表面的技术ꎮ大量获取的人源基因工程抗体也因为噬菌体展示技术的出现成为可能[３５]ꎮ１９９７年Ｍｕｌｌｅｒ等[３６]通过噬菌体展示技术从分泌糖蛋白单克隆抗体的３０ＡＡ５杂交瘤细胞中分离出了能够中和狂犬病毒的单链抗体片段ꎮ２００５年Ｋｒａｍｅｒ等[３７]从接种疫苗的献血者血液中提取抗体基因ꎬ成功构建了人源抗狂犬病毒噬菌体抗体库ꎬ最终得到了２１株全长人免疫球蛋白ꎮ３.５㊀鸡尾酒单克隆抗体疗法事实上ꎬ由于狂犬病毒拥有较多基因型[３８]ꎬ２４３生物技术进展ＣｕｒｒｅｎｔＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ. All Rights Reserved.且Ｇ蛋白序列并不保守ꎬ因此针对单一抗原表位的中和抗体并不能达到广谱疗效ꎮ因此怎样将针对不同抗原表位的中和抗体联合使用也就成为了治疗性抗狂犬病毒抗体研究的重心ꎮ早在１９８９年Ｓｃｈｕｍａｃｈｅｒ等[３９]就将针对Ｎ蛋白与Ｇ蛋白的单克隆抗体进行联用并称之为单克隆抗体鸡尾酒疗法ꎮ２００５年Ｇｏｕｄｓｍｉｔ等[４０]把针对狂犬病毒糖蛋白Ⅰ号位点的ＣＲ５７中和抗体和Ⅲ号位点的ＣＲ４０９８中和抗体混合使用ꎬ中和了２６种经典毒株ꎬ证明了鸡尾酒疗法的可行性ꎮ２００９年Ｍüｌｌｅｒ等[４１]开发了一种由５种鼠源性单克隆抗体联用的鸡尾酒疗法ꎬ有望取代ＨＲＩＧ在发展中国家得到广泛使用ꎮ２０１８年Ｘｉ等[４２]使用ＣＲ５７和ＣＲ４０９８制备了一系列的单链Ｆｖ片段和亮氨酸拉链Ｆｖ片段ꎬ并使用小鼠和仓鼠模型证明了亮氨酸拉链Ｆｖ鸡尾酒疗法比单链Ｆｖ鸡尾酒拥有更好的保护效果ꎮ４ 展望虽然已经有很多关于抗狂犬病毒治疗性抗体的专利ꎬ但是至今仍没有一种治疗性抗体投放市场ꎮ目前用于暴露后预防注射的抗体仍主要为ＥＲＩＧ和ＨＲＩＧꎬ亟需一种能够量产并且拥有较好的稳定性㊁安全性和经济性的治疗性抗体投入市场ꎮ此外ꎬ已经有研究表明ꎬ血脑屏障在防治狂犬病毒方面发挥着重要作用[４３]ꎬ而狂犬病毒则可以通过维持血脑屏障的完整性来逃逸免疫[４４]ꎮ因此能否利用一些细胞因子帮助治疗性抗体穿越血脑屏障或者通过改造治疗性抗体本身使其能穿过血脑屏障ꎬ这些都是值得研究的ꎬ这也为科学家们对抗狂犬病毒抗体的研究提供了新的方向ꎮ２０１９年Ｍａｒｏｓｉ等[４５]使用免疫调节抑制剂和ＨＲＩＧ同时应用于狂犬病小鼠模型ꎬ最后证实无论是暴露前还是暴露后处理组ꎬ免疫抑制剂与ＨＲＩＧ联用处理都展现出了更高的保护效果ꎮ实验还证实了促炎症细胞因子与分子通路抑制剂可以提高小鼠模型的生存率ꎬ并且配合ＨＲＩＧ效果更好ꎮ这些研究结果说明抗狂犬病毒抗体在一些物质的协同作用下可以发挥更好的预防作用ꎬ也为狂犬病抗体研究提供了新的方向ꎮ目前已上市的抗体药物主要为针对肿瘤或自身免疫疾病方面ꎬ用于抗病毒的抗体药物仅有三种ꎬ其中用于狂犬病治疗的单抗药物仅有一种 Ｒａｂｉｓｈｉｅｌｄꎮ而由于狂犬病毒Ｇ蛋白的不保守性ꎬ单独一种抗体的使用并不能有效地进行狂犬病防治ꎮ因此ꎬ针对不同抗原表位的狂犬病抗体的研究也是未来狂犬病抗体研究的主要方向之一ꎮ总的来说ꎬ狂犬病的防治不仅要做好暴露前预防ꎬ同时要在提高暴露后预防有效性㊁延长暴露后患者存活时间等方面加强研究ꎮ科学家们也需要在这些方面更加努力ꎬ使狂犬病的防治措施更加成熟㊁有效㊁经济ꎮ参㊀考㊀文㊀献[１]㊀ＦＯＯＫＳＡＲꎬＢＡＮＹＡＲＤＡＣꎬＨＯＲＴＯＮＤＬꎬｅｔａｌ..Ｃｕｒｒｅｎｔｓｔａｔｕｓｏｆｒａｂｉｅｓａｎｄｐｒｏｓｐｅｃｔｓｆｏｒｅｌｉｍｉｎａｔｉｏｎ[Ｊ].Ｌａｎｃｅｔꎬ２０１４ꎬ３８４(９９５１):１３８９－１３９９.[２]㊀ＨＡＭＰＳＯＮＫꎬＣＯＵＤＥＶＩＬＬＥＬꎬＬＥＭＢＯＴꎬｅｔａｌ..Ｅｓｔｉｍａｔｉｎｇｔｈｅｇｌｏｂａｌｂｕｒｄｅｎｏｆｅｎｄｅｍｉｃｃａｎｉｎｅｒａｂｉｅｓ[Ｊ/ＯＬ].ＰＬｏＳＮｅｇｌ.Ｔｒｏｐ.Ｄｉｓ.ꎬ２０１５ꎬ９(４):ｅ３７０９[２０２０－０６－２３].ｈｔｔｐｓ://ｄｏｉ.ｏｒｇ/１０.１３７１/ｊｏｕｒｎａｌ.ｐｎｔｄ.０００３７０９. [３]㊀ＲＵＰＰＲＥＣＨＴＣＥꎬＧＩＢＢＯＮＳＲＶ.Ｃｌｉｎｉｃａｌｐｒａｃｔｉｃｅ.Ｐｒｏｐｈｙ￣ｌａｘｉｓａｇａｉｎｓｔｒａｂｉｅｓ[Ｊ].Ｎ.Ｅｎｇｌ.Ｊ.Ｍｅｄ.ꎬ２００４ꎬ３５１(２５):２６２６－２６３５.[４]㊀兰宁ꎬ刘我鹏.狂犬疫苗全程及反复加强免疫后患狂犬病死亡１例报告[Ｊ].中国人兽共患病杂志ꎬ１９９１(０４):１７. [５]㊀樊哲江.狂犬疫苗全程免疫后患狂犬病死亡１例报告[Ｊ].中国人兽共患病杂志ꎬ１９８９(０６):５１－５２.[６]㊀ＲＯＳＮＥＲＦ.ＲａｂｉｅｓｉｎｔｈｅＴａｌｍｕｄ[Ｊ].Ｍｅｄ.Ｈｉｓｔｏｒｙꎬ１９７４ꎬ１８(２):１９８－２００.[７]㊀ＬＥＩＶＡＲ.Ａｂｒｉｅｆｈｉｓｔｏｒｙｏｆｈｕｍａｎｄｉｐｌｏｉｄｃｅｌｌｓｔｒａｉｎｓ[Ｊ].Ｎａｔｌ.Ｃａｔｈ.Ｂｉｏｅｔｈ.Ｑｕａｒｔ.ꎬ２００６ꎬ１７０９１５５１[２０２０－６－０６－２３].ｈｔｔｐｓ://ｄｏｉ.ｏｒｇ/１０.５８４０/ｎｃｂｑ２００６６３２８. [８]㊀ＰＥＤＲＯＬＭꎬＥＭＩＬＹＪＷꎬＷＥＮＤＹＰꎬｅｔａｌ..Ｐｏｓｔ￣Ｍａｒｋｅｔｉｎｇｓｕｒｖｅｉｌｌａｎｃｅｏｆｈｕｍａｎｒａｂｉｅｓｄｉｐｌｏｉｄｃｅｌｌｖａｃｃｉｎｅ(Ｉｍｏｖａｘ)ｉｎｔｈｅＶａｃｃｉｎｅＡｄｖｅｒｓｅＥｖｅｎｔＲｅｐｏｒｔｉｎｇＳｙｓｔｅｍ(ＶＡＥＲＳ)ｉｎｔｈｅＵｎｉｔｅｄＳｔａｔｅｓꎬ１９９０－２０１５[Ｊ].ＰＬｏＳＮｅｇｌ.Ｔｒｏｐ.Ｄｉｓ.ꎬ２０１６ꎬ１０(７):ｅ０００４８４６[２０２０－０６－２３].ｈｔｔｐｓ://ｄｏｉ.ｏｒｇ/１０.１３７１/ｊｏｕｒｎａｌ.ｐｎｔｄ.０００４８４６.[９]㊀赵志鹏ꎬ周蓉ꎬ蔡勇ꎬ等.一种人二倍体细胞培养狂犬病毒的工艺:ＣＮ１０６８３４２３７Ａ[Ｐ].２０１７－０６－１３.[１０]㊀袁若森ꎬ姜春来ꎬ杨旭ꎬ等.一种狂犬病疫苗病毒的筛选方法㊁狂犬病疫苗的制备方法:ＣＮ１０９６６６６５３Ａ[Ｐ].２０１９－０４－２３.[１１]㊀ＣＯＮＮＨＷ.Ｌｏｕｉｓｐａｓｔｅｕｒ[Ｊ].Ｓｃｉｅｎｃｅꎬ１８９５ꎬ２:６０１－６１０. [１２]㊀ＮＩＣＨＯＬＡＳＪꎬＡＤＡＭＦＣꎬＡＮＴＨＯＮＹＲＦ.Ｔｈｅｉｍｍｕｎｅｒｅ￣ｓｐｏｎｓｅｔｏｒａｂｉｅｓｖｉｒｕｓｉｎｆｅｃｔｉｏｎａｎｄｖａｃｃｉｎａｔｉｏｎ[Ｊ].Ｖａｃｃｉｎｅꎬ２０１０ꎬ２８(２３):３８９６－９０１.[１３]㊀郭亚军.新型抗肿瘤抗体药物的研究[Ｃ].//中国抗癌协会.第四届中国肿瘤内科大会论文集ꎬ２０１０:１４－２３. [１４]㊀ＫÖＨＬＥＲＧꎬＭＩＬＳＴＥＩＮＣ.Ｃｏｎｔｉｎｕｏｕｓｃｕｌｔｕｒｅｓｏｆｆｕｓｅｄｃｅｌｌｓｓｅｃｒｅｔｉｎｇａｎｔｉｂｏｄｙｏｆｐｒｅｄｅｆｉｎｅｄｓｐｅｃｉｆｉｃｉｔｙ.１９７５[Ｊ].Ｊ.Ｉｍｍｕ￣ｎｏｌ.ꎬ１９９２ꎬ２４:５２４－５２６.３４３卞论ꎬ等:抗狂犬病毒中和抗体研究进展. All Rights Reserved.[１５]㊀ＮＩＳＳＩＭＡꎬＣＨＥＲＮＡＪＯＶＳＫＹＹ.Ｈｉｓｔｏｒｉｃａｌｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔｏｆｍｏｎｏｃｌｏｎａｌａｎｔｉｂｏｄｙｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ[Ｊ].Ｈａｎｄｂ.Ｅｘｐ.Ｐｈａｒｍａｃｏｌ.ꎬ２００８(１８１):３－１８.[１６]㊀ＪＯＮＥＳＰＴꎬＤＥＡＲＰＨꎬＦＯＯＴＥＪꎬｅｔａｌ..Ｒｅｐｌａｃｉｎｇｔｈｅｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔａｒｉｔｙ￣ｄｅｔｅｒｍｉｎｉｎｇｒｅｇｉｏｎｓｉｎａｈｕｍａｎａｎｔｉｂｏｄｙｗｉｔｈｔｈｏｓｅｆｒｏｍａｍｏｕｓｅ[Ｊ].Ｎａｔｕｒｅꎬ１９８６ꎬ３２１(６０６９):５２２－５２５. [１７]㊀ＣＬＡＣＫＳＯＮＴꎬＨＯＯＧＥＮＢＯＯＭＨＲꎬＧＲＩＦＦＩＴＨＳＡＤꎬｅｔａｌ..Ｍａｋｉｎｇａｎｔｉｂｏｄｙｆｒａｇｍｅｎｔｓｕｓｉｎｇｐｈａｇｅｄｉｓｐｌａｙｌｉｂｒａｒｉｅｓ[Ｊ].Ｎａｔｕｒｅꎬ１９９１ꎬ３５２(６３３６):６２４－６２８.[１８]㊀ＧＲＥＥＮＬＬꎬＨＡＲＤＹＭＣꎬＭＡＹＮＡＲＤ￣ＣＵＲＲＩＥＣＥꎬｅｔａｌ..Ａｎｔｉｇｅｎ￣ｓｐｅｃｉｆｉｃｈｕｍａｎｍｏｎｏｃｌｏｎａｌａｎｔｉｂｏｄｉｅｓｆｒｏｍｍｉｃｅｅｎｇｉ￣ｎｅｅｒｅｄｗｉｔｈｈｕｍａｎＩｇｈｅａｖｙａｎｄｌｉｇｈｔｃｈａｉｎＹＡＣｓ[Ｊ].Ｎａｔ.Ｇｅｎｅｔ.ꎬ１９９４ꎬ７(１):１３－２１.[１９]㊀ＪＡＭＥＳＨＳ.ＲａｂｉｅｓｉｎｔｈｅＡｍｅｒｉｃａｓａｎｄｒｅｍａｒｋｓｏｎｇｌｏｂａｌａｓ￣ｐｅｃｔｓ[Ｊ].Ｒｅｖ.Ｉｎｆｅｃｔ.Ｄｉｓ.ꎬ１９８８(４):５８５－５９７. 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All Rights Reserved.。
狂犬疫苗的研究进展
狂犬疫苗的研究进展李岩异;戴碧璇;谭丽霞;张彩乔;李宏进;张卫婷【摘要】全球每年由狂犬病毒引起的死亡人数为50000例，狂犬病毒严重威胁着人类的健康。
目前狂犬疫苗是抵御狂犬病毒的最有效的手段，随着近些年生物技术的不断发展，人类对新型疫苗的研制取得了显著的成果，安全有效的人用狂犬疫苗的出现，为人类抵御狂犬病毒提供了更有效的保护。
细胞培养的狂犬疫苗还将是当前和未来一段时间人类抵御狂犬病毒主要手段，而单克隆狂犬病毒免疫球蛋白药物不久的上市，将为人类抵御狂犬病毒提供更安全有效的治疗。
%Every year, the number of deaths caused by rabies virus is 50 000. Rabies virus is a serious threat to hu-man health worldwide. The rabies vaccine is the most effective way against rabies virus in recent years. With the development of biotechnology, the new type of vaccines in humans has appear, which is safe and effective for human. Rabies vaccine prepared in cells would be the main method nowadays and in the near future, while monoclonal im-munoglobulin drugs will soon provide a safer and more effective way against rabies virus.【期刊名称】《生物产业技术》【年(卷),期】2017(000)001【总页数】5页(P100-104)【关键词】狂犬病毒;狂犬疫苗;糖蛋白【作者】李岩异;戴碧璇;谭丽霞;张彩乔;李宏进;张卫婷【作者单位】华北制药金坦生物技术股份有限公司，石家庄 050010;华北制药金坦生物技术股份有限公司，石家庄050010;华北制药金坦生物技术股份有限公司，石家庄 050010;华北制药金坦生物技术股份有限公司，石家庄 050010;华北制药金坦生物技术股份有限公司，石家庄 050010;华北制药金坦生物技术股份有限公司，石家庄 050010【正文语种】中文狂犬病毒属于弹状病毒科、狂犬病毒属。
狂犬病的研究进展及防治措施
狂犬病的研究进展及防治措施狂犬病是由一种病毒引起的，它可以通过被感染的动物的唾液传播。
这种病毒可以导致极度的神经系统疾病，如果不及时治疗，可导致死亡。
在发展中国家，狂犬病仍然是一种严重的公共卫生问题，每年有数千人死于这种病毒感染。
然而，近年来，科学家们已经取得了一些关于狂犬病的研究进展，并提出了更加有效的预防和治疗方法。
狂犬病是一种人和动物都可能感染的疾病。
人类最常见的感染来源是狗，但也有其他宠物或野生动物可能携带狂犬病病毒。
为了防止狂犬病的传播，目前主要采用的方法是将动物接种疫苗。
这些疫苗可以帮助动物建立免疫力，阻止狂犬病的扩散。
此外，对于已经感染狂犬病病毒的动物，也可以进行安乐死，以防止它们继续传播病毒。
然而，狂犬病的防治工作还存在一些问题。
首先，狂犬病的疫苗并不是所有地区都能够提供。
其次，动物疫苗接种率也不高，因此依然有很多动物携带狂犬病病毒。
此外，目前主要的治疗方法是使用疫苗和免疫球蛋白，但这些方法的价格昂贵，并且在一些发展中国家的医疗体系中并不容易实施。
这意味着需要探索更加有效和可行的狂犬病防治方法。
在研究领域，科学家们正努力探索新的方式来预防狂犬病。
有些科学家正在开发口服疫苗，这种疫苗可以更容易地分配给家养宠物和野生动物，从而增加接种率。
此外，有人提出采用基因编辑技术来改变动物的免疫系统，使之具有更强的抵御力，以防止感染狂犬病病毒。
这些新方法尚处于试验阶段，但是它们有潜力成为未来狂犬病防治的重要手段。
除此之外，还有一些其他的方法可以帮助减少狂犬病的传播。
一些研究表明，提高公共卫生意识并加强对狂犬病的宣传教育可以帮助人们更好地了解病毒传播的风险，从而采取更加谨慎的行动。
此外，加强动物管理和监管，规范宠物饲养，减少野生动物与人类接触也都有助于防止狂犬病的扩散。
总之，虽然狂犬病仍然是一个公共卫生问题，但是科学家们已经向着更加有效和可行的防治方法迈进了一步。
通过引入新的解决方案，例如口服疫苗和基因编辑技术以及加强公共卫生教育等措施，我们有望实现更好的狂犬病控制，降低狂犬病对人类和动物健康的风险，确保公共卫生健康。
单链抗体介导狂犬病毒shRNA靶向制剂的研究
单链抗体介导狂犬病毒shRNA靶向制剂的研究单链抗体介导狂犬病毒shRNA靶向制剂的研究随着生物技术的不断发展，研究人员在狂犬病毒治疗方面取得了一系列的突破。
其中，单链抗体介导的狂犬病毒shRNA靶向制剂成为近年来的研究热点。
该研究通过操纵狂犬病毒的基因组，减少病毒的复制能力，从而为治疗狂犬病提供了新的手段。
狂犬病是由狂犬病病毒感染引起的一种急性传染病。
全球范围内，每年有数万人因此病毒而死亡。
当前，预防狂犬病主要依靠疫苗注射和机械处理，然而这些方法存在一定的局限性，如发生疫苗不良反应的风险以及患者不能及时接种疫苗等。
因此，研发狂犬病的新型治疗手段是亟待解决的问题。
研究人员发现，狂犬病毒的基因组中包含有利于其复制和传播的基因。
因此，通过干扰这些基因的表达，可以有效减少病毒的复制能力，从而达到治疗的目的。
单链抗体作为一种具有高度特异性和亲和力的分子，能够与狂犬病毒的特定蛋白结合。
因此，研究人员将单链抗体引入狂犬病毒基因中，进一步构建了一种靶向狂犬病毒基因的shRNA靶向制剂。
单链抗体介导的狂犬病毒shRNA靶向制剂在研究中显示出了显著的抗病毒效果。
研究人员首先选择了狂犬病毒的复制关键基因，如病毒外壳蛋白基因。
然后，利用现有技术，构建了特异性抗狂犬病毒蛋白的单链抗体。
接下来，将shRNA靶向分子与单链抗体结合，构建了一种能够高效靶向狂犬病毒基因的复合物。
在体外实验中，将单链抗体介导的狂犬病毒shRNA靶向制剂加入感染了狂犬病毒的细胞培养基中，观察到病毒复制量的显著减少。
与此同时，在动物模型中的实验证明，该制剂能够有效降低感染小鼠的病毒载量，并延长小鼠的存活时间。
这些结果表明，单链抗体介导的狂犬病毒shRNA靶向制剂能够通过干扰狂犬病毒的基因表达，达到治疗狂犬病的效果。
虽然单链抗体介导的狂犬病毒shRNA靶向制剂在狂犬病治疗方面显示出了巨大的潜力，但该技术仍存在一些挑战和不足之处。
首先，狂犬病毒的基因组结构复杂，很难找到适合的靶点进行治疗。
【高中生物】我成功克隆出抗狂犬病毒新抗体 具潜在应用前景
【高中生物】我成功克隆出抗狂犬病毒新抗体具潜在应用前景【高中生物】我成功克隆出抗狂犬病毒新抗体具潜在应用前景近日，南京军区军事医学研究所研究人员制备了抗狂犬病病毒基因工程中和抗体Fab，证明该抗体与狂犬病疫苗联合应用对狂犬病病毒感染小鼠有良好的保护作用。
该研究论文发表在最近的《中国药理学杂志》上，由南京军区军事医学研究所研究员朱进、关晓红、冯振清教授、南京医科大学研究生李晨及其研究团队完成。
这是一个国家“863”资助的项目。
狂犬病是由狂犬病毒引起的人畜共患急性传染病，病死率极高，发病后进展速度快，至多10天内死亡，死亡率几乎为100%。
狂犬病毒基因组全长约12kb，具有5个结构基因，其中由g基因编码的糖蛋白，是病毒与宿主细胞结合的配体，介导了病毒与靶细胞的结合及病毒在神经系统中的分布，不但与病毒的毒力、致命性相关，而且是病毒的主要保护性抗原，能刺激机体产生中和抗体，抵抗病毒的感染。
目前临床使用的抗狂犬病病毒免疫球蛋白主要来源于狂犬病疫苗免疫的人或马的抗狂犬病病毒血清。
抗体生产有限，存在一定的安全隐患。
基因工程抗体技术的进步和发展为制备具有高亲和力的治疗性人类抗体提供了新的途径。
人类抗体由于其低免疫原性和良好的组织渗透性，可以更好地用于疾病的临床治疗。
研究小组从人源免疫型抗狂犬病毒抗体库中筛选出的一株针对狂犬病毒糖蛋白的单链抗体，克隆出可变区基因，运用重叠延伸拼接的方法，分别制备fd及l链，再进一步拼接成fab基因，构建fab表达载体，从而实现fab的可溶性表达。
研究通过间接elisa与竞争elisa、免疫共沉淀结合质谱分析及荧光抗体病毒中和实验(favn)分析抗体的免疫学特性。
建立狂犬病昆明种鼠(km鼠)模型，在个体水平比较分析fab抗体、疫苗和人免疫球蛋白等对小鼠暴露后的预防和保护作用。
研究组认为，小鼠接触狂犬病病毒后的体外研究和预防研究证实，抗体复合疫苗能有效预防狂犬病病毒感染，对接触狂犬病病毒的小鼠具有预防和保护作用。
抗狂犬病单克隆抗体调研报告1
抗狂犬病单克隆抗体调研报告WHO建议，III类暴露以及野生动物咬伤的II类以上的暴露，应同时进行主动和被动免疫治疗，以获得快速的保护作用。
（主动免疫即注射狂犬病疫苗，被动免疫即注射狂犬病中和抗体）1.被动免疫原理通过局部应用直接中和伤口处理时残留的病毒，这样最大程度降低伤口处病毒的含量，来降低发病率及延长潜伏期。
一般情况下初次接种狂犬病疫苗后，体内产生的狂犬病病毒中和抗体自第七天开始达到可检测水平，10—14天体内抗体滴度达到保护性水平。
因此，疫苗接种的早期，体内尚未产生足够滴度的中和抗体。
而狂犬病被动免疫制剂注射后能够立即中和大部分伤口局部的病毒，阻止病毒扩散并侵入神经系统。
狂犬病被动免疫制剂的半衰期为14—21天，可为疫苗诱发主动免疫赢得时间。
因此，狂犬病被动免疫制剂和疫苗联合使用，可以最大限度地防止狂犬病的发生。
2 狂犬病被动免疫制剂目前用于狂犬病被动免疫治疗的制剂主要有马抗狂犬病病毒免疫球蛋白(equinerabiesimmune globulin，ERIG)和人抗狂犬病病毒免疫球蛋白(human rabies inlmune globulin，HRIG)。
这两种生物制剂均为为抗R V多克隆免疫球蛋白，主要通过主动免疫人或马的外周血中分离提纯而得, 即人源或马源抗RV多克隆免疫球蛋白,含有抗RV 糖蛋白( GP)、核蛋白(N P) 等多种成分的抗体，多克隆免疫球蛋白主要通过饱和式结合R V-GP多表位而使病毒失活。
目前我国用于狂犬病预防的被动免疫生物制剂有两种：人源抗狂犬病免疫球蛋白(HRIG)和马抗狂犬病血清。
经检索，我国用于狂犬病预防的被动免疫生物制剂均为国产，未见进口。
两种制剂国内上市及申报情况见附表1-4。
两种狂犬病被动免疫制剂的优缺点狂犬病人免疫球蛋白（HRIG）马抗狂犬病血清（ERIG）理论上存在感染HIV/HCV的危险不存在感染HIV/HCV的危险免疫用制备疫苗要求高，价格高制备抗原容易且价格较低来源受限供应量保证存在伦理道德问题不存在伦理道德问题异源性小有异源性几乎无不良反应接种不良反应发生率高较为安全部需做皮试有过敏风险,必须做皮试半衰期为21天左右半衰期为14天左右由于ERIG 副反应比较严重，而且对某些疫苗的抗体反应有抑制，而HRIG价格昂贵，供应量有限并且有潜在的病原威胁。
应用单克隆抗体建立快速狂犬病毒抗原检测方法及其应用的研究
应用单克隆抗体建立快速狂犬病毒抗原检测方法及其应用的研
究
周镇先;李解权
【期刊名称】《江苏科技成果通报》
【年(卷),期】2000(000)009
【摘要】该项目运用单克隆抗体技术快速检测狂犬病毒抗原，采用狂犬疫苗作为
标准抗原，免疫动物，制备出抗狂犬病毒的单克隆抗体，再将获得的多株单抗混合，增加单抗的亲合力，捕捉狂犬病毒抗原，做成酶免疫双抗体夹心法试剂。
用该试剂对不同来源的狂犬病毒株和不同来源的狂犬疫苗进行检测，结果与法国巴斯德研究所生产的试剂测试结果相同，
【总页数】1页(P31)
【作者】周镇先;李解权
【作者单位】南京第二医院;南京医科大学
【正文语种】中文
【中图分类】R373.9
【相关文献】
1.猪伪狂犬病毒野毒株套式PCR检测方法的建立和应用 [J], 张志;樊雅婷;吴发兴;
刘爽;董雅琴;邵卫星;段纲;王树双;李晓成
2.猪伪狂犬病毒实时荧光定量PCR检测方法的建立及初步应用 [J], 温书香; 安利民; 赵协; 张军; 潘燕燕; 葛位西
3.基于SodC单克隆抗体的胞内劳森菌IPMA抗原检测方法的建立及应用 [J], 李敏雪;李剑男;周红;肖宁;蔺辉星;马喆;范红结
4.生殖支原体抗原快速检测方法的初步建立与应用 [J], 王蓓;崔玉明;赵季文;徐萃瑜;张莹
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抗狂犬病单克隆抗体调研报告1
抗狂犬病单克隆抗体调研报告WHO建议，III类暴露以及野生动物咬伤的II类以上的暴露，应同时进行主动和被动免疫治疗，以获得快速的保护作用。
（主动免疫即注射狂犬病疫苗，被动免疫即注射狂犬病中和抗体）1.被动免疫原理通过局部应用直接中和伤口处理时残留的病毒，这样最大程度降低伤口处病毒的含量，来降低发病率及延长潜伏期。
一般情况下初次接种狂犬病疫苗后，体内产生的狂犬病病毒中和抗体自第七天开始达到可检测水平，10—14天体内抗体滴度达到保护性水平。
因此，疫苗接种的早期，体内尚未产生足够滴度的中和抗体。
而狂犬病被动免疫制剂注射后能够立即中和大部分伤口局部的病毒，阻止病毒扩散并侵入神经系统。
狂犬病被动免疫制剂的半衰期为14—21天，可为疫苗诱发主动免疫赢得时间。
因此，狂犬病被动免疫制剂和疫苗联合使用，可以最大限度地防止狂犬病的发生。
2 狂犬病被动免疫制剂目前用于狂犬病被动免疫治疗的制剂主要有马抗狂犬病病毒免疫球蛋白(equinerabiesimmune globulin，ERIG)和人抗狂犬病病毒免疫球蛋白(human rabies inlmune globulin，HRIG)。
这两种生物制剂均为为抗R V多克隆免疫球蛋白，主要通过主动免疫人或马的外周血中分离提纯而得, 即人源或马源抗RV多克隆免疫球蛋白,含有抗RV 糖蛋白( GP)、核蛋白(N P) 等多种成分的抗体，多克隆免疫球蛋白主要通过饱和式结合R V-GP多表位而使病毒失活。
目前我国用于狂犬病预防的被动免疫生物制剂有两种：人源抗狂犬病免疫球蛋白(HRIG)和马抗狂犬病血清。
经检索，我国用于狂犬病预防的被动免疫生物制剂均为国产，未见进口。
两种制剂国内上市及申报情况见附表1-4。
两种狂犬病被动免疫制剂的优缺点狂犬病人免疫球蛋白（HRIG）马抗狂犬病血清（ERIG）理论上存在感染HIV/HCV的危险不存在感染HIV/HCV的危险免疫用制备疫苗要求高，价格高制备抗原容易且价格较低来源受限供应量保证存在伦理道德问题不存在伦理道德问题异源性小有异源性几乎无不良反应接种不良反应发生率高较为安全部需做皮试有过敏风险,必须做皮试半衰期为21天左右半衰期为14天左右由于ERIG 副反应比较严重，而且对某些疫苗的抗体反应有抑制，而HRIG价格昂贵，供应量有限并且有潜在的病原威胁。
狂犬病病毒减毒株的研究及应用进展
存在 空 白等 ｌ ） 有 必 要研 制狂 犬病 毒 口服 活疫 苗 。 ｌ ， ３
１ 现有 狂 犬病 病毒 减毒 株 的筛选 和应 用
１ １ 现 有狂 犬病 病 毒 减 毒 株 的 筛选 国外 最 早 于 ．
上世 纪 ６ ０年 代开 始研 制 狂犬 病毒 减毒 口服 活疫 苗 ，
中 国 人 兽 共 患 病 学 报
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文 章 编 号 ｉ０ ２ ６ ４ ２ １ ）３ ２ ３ ５ １ ０ —２ ９ （ ０ ２ ０ —０ ９ —０
狂犬病 病毒减毒株 的研究及应 用进 展
邹 剑 ， 永 新 俞
酸 由 Ｇｌ ｎ变 为 Ａｒ ， 未 发 现 毒 株 毒 力 的 改 变¨ ｇ但 １ 引。
最 近 Ａｕ ｔ ｓｉ ｎ等 人 运 用 分 子 进 化 遗 传 学 的 方 法 对
Ｓ １ ＡＤ Ｂ ９与 狂犬 病 病 毒 街 毒 株 的 种 系 发 生 分 析 显 示 ， 毒 株在 编码 区及非 编 码 区都 存 在 大 量 的 非 同 街 义替 换 ， 化 选 择 （ 向选 择 ） 大 于 Ｓ １ 净 负 远 ＡＤ Ｂ ９毒
作 方便 ， 于推 广 的 很 多 优 点 。 因此 Ｗ ＨＯ 推 荐 使 利
用 减毒 活疫 苗 用于 野生 动物 及流 浪犬 只 狂犬病 的防 治 。鉴 于 我 国狂犬 病 防治 的严 峻形势 （ 群数 量 大 ， 犬 约 ７５ ０ 只 ， 村 地 区 犬 只 免 疫 率 仅 为 １ ～ ０ 万 农 Ｏ ２ ， 则 几乎 没有 免疫 ， 生动 物狂 犬病 的防治 还 ０ 猫 野
体 的两 步加 压 筛选 ， １次 筛选 得 到 Ｓ 株 ， 第 Ｋ Ｇ蛋 白 第 ３ ３位氨 基 酸密码 子 由 ＡＧＡ 突变 为 ＡＡＡ， 码 ３ 编
狂犬病诊断的研究进展
原。其灵敏度高、 特异性强 ， 加之无需昂贵设备 ， 操作 简便 ， 因此便 于推广使用。余光开等 建立 了 Ｅ Ｉ ＬＳ Ａ 检测家犬唾液中的狂犬病病毒抗原 ， 并研制出检测狂 犬病病毒抗原试剂盒， 其方法敏感 、 特异 ， 已应用到犬
取样困难 ， 可靠性低 ， 因此不推荐使用。死后可做脑组
织检查 ， 在细胞 内病毒特异性荧光为黄绿色颗粒， 分布 在感染细胞的胞浆 内。根据特异性荧光颗粒 的多少、 荧光亮度、 阳性细胞在细胞总数中所占比例， 可将免疫 荧光反应分为“＋一＋＋＋＋ （ ” 阳性细胞数 ＜ ５ ２ ％为
“ ＋ ”
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ＷＡ Ｇ Ｘｎｗ ｉＤ ｐ ｒ ｅ ｔ ｆＩ ｅ ｉｕ Ｄｉ ａｅ， ｅＡ ｌ ｔ ｏ ｉ ｌｏ Ｌ ｚｏ ｄ ａ Ｃ ｌｇ ，ｕｈ ｕ Ｎ ｉ—ｅ（ ｅａｔ ｎ ｏ ｎ ｃ ｏｓ ｓ ｓ ｔ ｆ ｉ ｅ Ｈ ｓ ｔ ｕｈｕ Ｍｅｉ ｌ ｏ ｅｅ Ｌｚｏ ｍ ｆ ｔ ｅ ｓ ｈ ｆ ａ ｄ ｐａ ｆ ｉ ｃ ｌ ６ ６ ０ ， ｈｎ ） ４ ０ ０ Ｃ ｉａ
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1.1抗RV多克隆免疫球蛋白抗RV多克隆免疫球蛋白主要从主动免疫后的人或马的外周血中分离提纯而得,即人源或马源抗RV多克隆免疫球蛋白,含有抗RV糖蛋白(glycoprotein,GP、核蛋白(nucle-
oprotein,NP等多种成分的抗体。RV-GP镶嵌于病毒外膜上,表位多且结构复杂,可以和运动终板及神经元细胞上的相应受体结合,并使病
关键词:单克隆抗体;狂犬病;狂犬病毒;预防治疗
St udy of M o noclo nal Antibo dy in the Pro phylaxis and Tre atment of Rabies ZH ANG H ai-yu,L I Na,ZHANG Xue-m ei.(Medical C ollege of Dalian Univer sity,Dalian 116622,China
分子生物医学
单克隆抗体在狂犬病预防治疗中的研究进展
张海玉
△
,李娜
△
(综述,张学梅
※
(审校
(大连大学医学院,辽宁大连116622
中图分类号:R512.99文献标识码:A文章编号:1006-2084(201203-0321-03
基金项目:“十一五”国家科技支撑计划(2009BAK61B04
摘要:体液免疫是机体对抗病毒感染的自然选择之一,抗狂犬病毒(RV抗体在狂犬病的预防和治疗中都发挥着重要作用。现在,抗RV抗体已由传统的多克隆免疫球蛋白过渡到各种单克隆抗体(mAb、基因工程抗体,抗RV糖蛋白mAb主要应用于RV接触后预防及治疗中,其辅助狂犬病早期诊断,抗RV糖蛋白不同表位的mAb联合应用比多克隆免疫球蛋白更具优越性。目前,抗RV糖蛋白mAb在狂犬病治疗中还面临着很多困难,如血脑屏障的生理性阻隔、难以清除寄生在神经元细胞内部的病毒等。现就mAb在狂犬病预防治疗中的研究进展予以综述。
毒侵入细胞内Leabharlann [5-6],其对应抗体具有保护作用;RV-NP与核酸组成核衣壳,位于病毒内部,不能引起保护性免疫应答。多克隆免疫球蛋白主要通过饱和式结合RV-GP多个表位而使病毒失活,现在仍应用在RV接触后预防
中。然而,多克隆免疫球蛋
白的来源有限,易导致某些疾病传播,并且异源性多克隆免疫球蛋白还可引起变态反应性疾病,这些应用中的不足均促进了对抗RV m Ab的研究
Key words :Monoclonal antibody;Ra bies;Rabies vir us;Pr ophylaxis
狂犬病是由狂犬病毒(ra bies virus,RV引起的一种人畜共患疾病,临床表现为急性进展性脑脊髓炎,病死率接近100%。狂犬病主要在经济欠发达地区流行,据报道全世界每年约有55000人死于该病,
[7]
。
1.2抗RV-GP杂交瘤m Ab自1975年K hler等[8]
提出杂交瘤技术后,至今已产生几十种抗RV-GP mAb,并且根据这些m Ab结合RV-GP位点不同,将RV-GP上的抗原位点大致分为三类:抗原位点G Ⅰ、抗原位点G Ⅱ(氨基酸34~200、抗原位点G Ⅲ(氨基酸330~357。最近有研究还发现结合RV-GP氨基酸218~240[9]
其中多数为儿童[1]
。我国也是狂犬病流行区域之一,平均每年有1500多病例,约半数发生在广西、湖
南、贵州三省,在这三省犬携带RV率高达2.3%[2]
。目前应对狂犬病仍以预防为主,一旦有明显临床症状,即便按照经典的“M ilw aukee protocol ”治疗,也极
少有存活病例[3-4]
,因此迫切需要探索有效的治疗方法。体液免疫一直在机体对抗病毒感染中担任着重要角色,RV的接触前、后预防也是通过主动或被动增加机体的体液免疫来实现的。抗RV抗体用于防治狂犬病颇受关注,从传统的抗RV多克隆抗血清到现在的单克隆抗体(m onoclona l a ntibody,mAb、小分子抗体都做过多次尝试,有多种已用于临床预防治疗中。1抗RV抗体