7章 食用菌菌种生产(4)

以6~8m2、高度2m左右。 接种室一般要求有内、外两间，内间接种用，外间
作缓冲室用来放置消毒药品、接种衣帽，以及接种前消 毒菌种、换戴衣帽等。
接种室与缓冲室都应装推拉门，且两门要错开，以 减少室内空气流通，减少污染。
有条件的可在进缓冲室门处安装风淋门，屋顶安 装排风扇。
接种室要求密闭程度高，墙及地面要光滑，墙角最 好成弧形，便于清扫。
采用塑料袋成本低，操作容易。
装料要松紧适度，装好后要在料的中间 打一洞至瓶底，塞好棉塞，用牛皮纸包好。及 时灭菌：0.15MPa ，1~2h。
四、消毒灭菌的方法
为了能顺利地进行食用菌的生产，必须对食用菌 栽培的各个环节进行消毒灭菌，这是食用菌生产的一 项基本技术。
（一）加热灭菌
加热灭菌是用高温杀死微生物的方法。高温可引 起微生物蛋白质和核酸不可逆变性，细胞原生质凝固， 酶被破坏，引起微生物细胞死亡。
2.培养料的配制 （1）常用培养料 a.木屑(saw dust) 锯木生产的下脚料，或用树
枝经切削、破片、晒干、粉碎而成。
除了针叶树种和某些特殊的具有芳香物质的阔叶 树种的木屑之外，绝大部分阔叶树的木屑均可用。
b.棉籽壳(cotton seed hull) 又叫棉籽皮，为脱戎 棉籽的中种皮，是粮油加工厂的下脚料，质地松软， 持水性大，容氧量较高，接种易成活，棉籽壳是食用 菌代料栽培中使用最广的一种天然培养料。
此法是在常压下加热到100℃,保持20~30min，以杀死其中的微生物， 然后将培养基在恒温箱中（28~37℃）培养，使芽孢长成营养体;
第7章 菌种生产
食用菌的菌种包括固体菌种和液体菌种两大类， 两者对生产设备和场所的要求是截然不同的。
食用菌的栽培一般包括几个步骤。 首先是制作菌种，即通过孢子或组织分离出菌丝 体，菌丝体扩大繁殖成为生产菌种；其次是将菌种接种 于基质中，生产出食用菌的子实体。
第一节 菌种的制作
要获得产量高，质量好的食用菌产品，必须有适 合生产条件的优良品种，有了优良品种还要有质量高的 菌种。
它是利用湿热蒸气灭菌的一种高压灭菌器。市 售的有手提式、立式、卧式三种（图7-7）。
手提式与立式的容量较小，一般用于制备一级 种培养基的灭菌；
卧式的则容量大，用于二级种、生产种培养基 的灭菌，热源可用电或蒸汽。
另外还有自制
种、生产种培养基的灭菌，同样可以达到灭菌目 的。材料可以是木材或水泥砖砌。
这种方法简便易行、经济有效，是食用菌生产中 常用的方法。它有干热和湿热灭菌两种。
1.干热灭菌 采用灼烧和热空气进行的灭菌，称干热灭菌(dry
heat sterilization)。
它又分为两种方法：
（1）焚烧灭菌（incineration) (2)烘烤灭菌(baking sterilization)：160℃，2h。 2.湿热灭菌 通过蒸气杀死微生物的方法，称为湿热灭菌(moist heat sterilization)。在同一温度下湿热灭菌的效果比干热 灭菌好。
spawn) 3个类型（图7-1）。 （1）一级种 一级种又称为母种、试管种，这是将孢子分
离法或组织分离法得到的纯培养物，移接到 斜面培养基上得到的纯种。
除单孢子分离的外，一般获得母种纯 菌丝具有结实性。
一般将菌丝再次转接到新的斜面培养基上，进行 繁殖可得到更多的母种，称为再生母种，即可用于生 产，也适用于菌种保藏。
一、菌种类型及制作程序 1.菌种类型
菌种(spawn)是指以保藏、试验、栽培等用途为 目的，具有繁衍能力，遗传特性相对稳定的菌类孢 子、组织或菌丝体及其营养性或非营养性的载体。
根据使用目的不同，可以把菌种分为保藏菌种、 实验菌种和生产菌种三大类。
目前我国生产菌种按生产程序可分为：一级种 （母种，mother culture)、二级种（原种，primary spawn)、三级种（栽培种，culture
调节低于宝温的培养温度。
5.菌种保藏设备 多数菌种常用的保藏设备是冰箱、干燥器等，高
温型菌类要用电热恒温培养箱。
三、菌种培养基质的制备
（一）一级种培养基
制备流程：
配方 材料煮沸或溶解
调节pH值 分装
灭菌
琼脂溶解 倒斜面
定容
1.一级种常用的培养基配方
（1）马铃薯葡萄糖琼脂培养基（PDA培养基）
马铃薯(去皮)200g，葡萄糖20g，水l000mL，琼脂20g。
常压灭菌灶要求有较高的密闭度，这样灭 菌效果好，又可节省燃料，密闭程度高的，温度 可达105℃，反之则达不到100℃（图7-8）。 （3）电热恒温干燥箱
它是利用干热空气灭菌，主要用于玻璃器 皿及金属工具等的灭菌，不能用于培养基的灭菌。
7-8 常压灭菌灶
3.接种设备 （1）无菌室 无菌室是用于接种的房间，该房间不宜太大，一般
废棉是平菇、草菇等食用菌培养料的主要原料 之一，但在配制时需加木屑等疏松物，以增强培养料 的透气性。
e.甘蔗渣(bagasse) 为甘蔗榨糖后的下脚料，是 食用菌代料栽培的主要原料，也是制药工业用以栽培 猴头、灵芝的药典指定原料。
f.稻草(rice straw)
水稻茎叶，是蘑菇、草菇等草腐型菌类的主要栽 培原料。
（二）二级种、三级种培养基
制作流程为：
培养基配方 棉籽壳、木屑的预处理
混合 调节含水量 装入容器 灭菌 冷却 备用
1.常用配方 (1)麦粒菌种 小麦1kg，碳酸钙5g，石膏30g，pH 7.2。 (2)棉籽壳菌种 棉籽壳100kg，过磷酸钙1kg，尿素2kg, 石膏1kg，石灰
3kg。 (3)木屑菌种 木屑78％，麸皮20％,蔗糖1％，石膏1％。
图7-11 接种工具
4.培养设备 （1）恒温箱
在制作一级种和少量二级种时，可采用电热恒温 箱培养。它能调节温度，并自动控制。有的培养箱 还可以调节湿度。
（2）培养室 培养室要求清洁、干燥、通风、保温性能好。室
内安放培养架，层架的设置既要充分利用空间，同 时便于检查杂菌。
架子可用角铁、木材、毛竹等材料制作，上面 铺板，层次以5~7层为宜。
过筛机是用于清除木块中 的块、碎木等杂物的装 置。
(4)搅拌机 型号为MJ-70型， 如图7-5，
主要技术指标: 生产率800~ 1000kg／h； 动力：3kw。
(5)装瓶装袋两用机
图7-6，主要技术指标：生产率300~400瓶／h或 400~500袋／h；动力：750w。
2.灭菌设备 （1）高压蒸汽灭菌器
两室内安装日光灯与紫外线灯，以改善接种环 境。 （2）接种箱 常用的接种箱是用木材和玻璃制成的， 形状和规格见图7-9。
（3）净化工作台
净化工作台是一种局部流程装置(平行流或 垂直流)，能在局部形成高洁净度的环境（如图710所示）。
它是利用过滤除菌的原理，将空气经过装置 在净化工作台内的预过滤器及高效过滤器除尘， 洁净后再以层流状态通过操作区，加上上部狭缝 中喷选出的高速空气流所形成的空气幕，使操作 区呈无菌状态。
c.米糠或麸皮(rice bran or wheat bran)
主要为菌丝生长提供氮源，米糠含大量的生长因 子和粗蛋白。
麸皮不如米糠细，遇湿易结团，先和主料干混后 再加水调节，并力求新鲜。
d.废棉(waste cotton) 棉纺厂、轧花厂生产的下 脚料。其主要成分为短纤维和尘埃，吸水性强，加水 后结团。
通常一支长满菌丝的试管母种可分移成10多支 新试管。
（2）二级种 二级种又称原种，这是由母种转接到麦粒等固
体培养基的专用菌种瓶中经过培养后的培养物。
原种可采用750 mL菌种瓶或500mL罐头瓶作为 培养容器。一般一支母种可扩大繁殖成6~8瓶原种。 （3）三级种
三级种又称栽培种，它是由二级种进一步扩 大培养而成的。
图7-10 净化工作台 1.高效过滤器；2.工作台面； 3.侧玻璃；4.电源
净化工作台要求安置在洁净的房间里，室内安 装紫外线杀菌灯。
净化工作台使用方法：接通电源，按下通风键 钮，开启紫外线杀菌灯，约30min后即可接种操作。
净化工作台有双人操作的也有单人操作的，可 根据需要选用。
（4）接种工具 接种工具如图7-11所示。
栽培种的培养基与二级种相似，更接近于栽培 基质。
三级种成本低，一般用聚乙烯塑料袋或玻璃瓶 作培养容器。通常一瓶原种可接30~50袋栽培种。 2.制种程序
菌种生产是通过无菌操作，大量培养菌种的过 程。食用菌菌种是通过一级种、二级种、三级种的 顺序来完成生产菌种的制作。
其程序包括：
准备材料 培养基的混合配制 分装于培养 容器中 消毒或灭菌 接种 培养 检验 使用（图7-2）
部排尽。灭菌锅内空气排除程度对温度的影响如下 表。
（2）常压蒸气灭菌法(normal pressure steam sterilization)
一般自然压力的蒸气，其温度一般为100℃，杀 菌时间为８~１２h。
特点：灶简单，成本低，使用普遍；但灭菌时 间长，能耗大，可能有灭菌不彻底的现象。
（3）间歇灭菌法(tyndllization) 间歇一定时间，连续消毒几次的灭菌方法。适 合于不耐高温的培养基的灭菌。
可在室内安装加热设备或空调机等，一般维持空气相 对湿度在65%~70%。
在寒冷的地区，可在培养室培壁的夹层中间填充保 温材料，如棉花、木屑、玻璃纤维、泡沫塑料等，把火 炉的烟道通入室内加热保温。
培养室的门应装纱窗，以防止害虫进入，冬天最 好挂棉帘保温。
（3）生化培养箱 它是装有制冷装置和照明设备电热恒温培养箱能
（2）配制方法 以棉子壳、木屑为主的干培养料，应将其加水120
%~130%，充分拌和，使其充分吸透水，使混合培养料 含水量在55%~65%。
其含水量可用手握法简单测量。
以小麦等为主料的，则应先加水浸泡4~6h，然后 加热煮沸15~20min，以粒心尚有干白部分为度，然后捞 出备用。