白果蛋白质提取及SDS_PAGE分析_李莹莹

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果蝇总蛋白提取和SDS-PAGE

果蝇总蛋白提取和SDS-PAGE检测摘要：本次实验主要分为两大部分。

第一部分是分别以果蝇成虫和幼虫为材料，通过TBS 试剂提取果蝇总蛋白，第二部分是通过SDS-PAGE检测果蝇总蛋白表达，对果蝇的蛋白表达进行了分析。

关键字：果蝇；总蛋白；ＳＤＳ－ＰＡＧＥ1材料及仪器1.1实验材料果蝇成虫还有幼虫各6-10只，雌雄均等。

果蝇是一种非常重要的模式生物，通常所指的是黑腹果蝇，学名：Drosophila melanogaster，在分类学上所属动物界，节肢动物门，昆虫纲，双翅目，果蝇科，果蝇属。

果蝇以其繁殖迅速、生长周期短、易于养殖、相对性状丰富、基因组较为简单等显著特点成为了遗传学、分子生物学、发育生物学等重要学科的主要实验动物之一，对果蝇基因组的测序分析也较为透彻，因此，本实验选用果蝇为实验材料，可以使数据更加具有代表性和说服力。

1.2 试剂及仪器1.2.1 试剂TBS缓冲液（20 mM Tris-HCl，150 mM NaCl, pH7.9），蛋白上样缓冲液，染色液，脱色液1.2.2 器材1.5ml离心管，匀浆棒，高速台式离心机，10µl、200µl及1ml微量移液器及吸头，微波炉，电泳仪，电泳槽，扫描成像仪，水平摇床等2 实验方法及步骤2.1总蛋白提取分别取果蝇成虫、幼虫各约5只，加入200µl TBS缓冲液在匀浆器中匀浆，将匀浆液于4摄氏度条件下1000rpm离心十分钟，取出离心管，吸取上清液4µl，加入16µl蛋白上样缓冲液，沸水浴5分钟。

2.1凝胶制备安装夹心式垂直板电泳槽：目前，夹心式垂直板电泳槽有很多型号，虽然设置略有不同，但主要结构相同，且操作简单，不易泄漏。

同学们可根据具体不同型号要求进行操作。

主要注意：安装前，胶条、玻板、槽子都要洁净干燥；勿用手接触灌胶面的玻璃。

配胶：根据所测蛋白质分子量范围，选择适宜的分离胶浓度。

本实验采用SDS-PAGE 不连续系统，按下表的配制分离胶和浓缩胶。

蛋白提取相关实验报告

1. 掌握蛋白质提取的基本原理和方法。

2. 学习蛋白质提取过程中所涉及的实验操作技术。

3. 了解蛋白质提取过程中的注意事项，提高实验操作技能。

二、实验原理蛋白质是生物体内重要的生物大分子，具有多种生物学功能。

在生物化学、分子生物学等领域，蛋白质提取是研究蛋白质结构与功能的重要前提。

本实验以鸡蛋清为材料，采用酸沉淀法提取蛋白质。

三、实验材料与仪器1. 实验材料：鸡蛋、冰、盐酸、氢氧化钠、蒸馏水、硫酸铵、丙酮、酚酞指示剂等。

2. 实验仪器：研钵、研杵、离心机、电子天平、移液器、容量瓶、试管等。

四、实验步骤1. 鸡蛋清的制备：将鸡蛋打破，将蛋黄与蛋白分离，收集蛋白备用。

2. 蛋白质提取：取一定量的鸡蛋清，加入适量的蒸馏水，搅拌均匀。

加入2mol/L 盐酸，调节pH至4.5，使蛋白质发生酸沉淀。

用移液器取上清液，加入适量的硫酸铵，使蛋白质发生盐析沉淀。

离心分离，弃去上清液，收集沉淀。

3. 蛋白质复溶：将沉淀用蒸馏水洗涤2-3次，弃去洗涤液。

将沉淀转移到离心管中，加入适量的氢氧化钠溶液，使蛋白质复溶。

4. 蛋白质定量：取一定量的复溶蛋白质溶液，加入适量的酚酞指示剂，用氢氧化钠溶液滴定至溶液呈现微红色，记录滴定所用氢氧化钠溶液的体积。

5. 蛋白质浓度计算：根据滴定结果，计算蛋白质浓度。

五、实验结果与分析1. 实验结果：根据滴定结果，计算得到蛋白质浓度为0.5mg/mL。

2. 结果分析：通过酸沉淀法提取蛋白质，成功从鸡蛋清中提取出蛋白质。

实验结果表明，所提取的蛋白质浓度较高，说明实验操作较为成功。

1. 蛋白质提取过程中，选择合适的提取方法和试剂对实验结果有重要影响。

本实验采用酸沉淀法提取蛋白质，操作简单，效果较好。

2. 在蛋白质提取过程中，注意控制pH值和温度，以防止蛋白质变性。

3. 实验过程中，应尽量避免空气氧化和细菌污染，以保证蛋白质的纯度。

4. 蛋白质浓度计算时，应准确记录滴定所用氢氧化钠溶液的体积，以确保实验结果的准确性。

白果蛋白质的分离纯化理化特性及其抗氧化活性研究

２结果与分析
２．１白果中蛋白质组分分析
根据蛋白质在不同溶剂中溶解度不同的性质，可将白果蛋白分为清蛋白、球蛋白、醇溶蛋白、碱溶谷蛋白等。测定不同组分的蛋白质，了解白果蛋白的基本组成，结合不同组分的抗氧化活性研究，有助于确定目的蛋白。表 1 和图 1 表示的是白果各蛋白组分的分布情况。
蛋白质相对提取率＝
A 0 ×100%
A
A—蛋白提取液在 280 nm 处的吸光值。A0—相同体积条件下，最大程度提取蛋白时蛋白提取液在 280 nm 处的吸光值。１．４．３．２单因子试验分析浸提次数对提取率的影响按照正交试验确定的提取条件，在 6 h 内，分 1、2、3 和 4 次分别提取盐溶蛋白，并计算其提取率。１．４．４硫酸铵分段盐析白果盐溶蛋白的研究采用硫酸铵分段盐析[5]，可得到 6～10 个分级沉淀部分。绘制典型的盐析曲线。１．４．５白果清蛋白、球蛋白和盐溶蛋白的化学成分分析氨基酸组成采用日立 835-50 型氨基酸自动分析仪测定[6] ,多糖含量的测定采用蒽酮-硫酸法[6] ,核酸含量的测定采用定磷法[7]。
中国农业科学 2004，37(10):1537-1543 Scientia Agricultura Sinica
白果蛋白质的分离、纯化、理化特性及其抗氧化活性研究
黄文，谢笔钧，王益，杨尔宁，罗锐
（华中农业大学食品科学与技术学院，武汉 430070）
摘要：选用江苏省泰兴市大佛指白果为原料，采用盐溶和盐析的方法，从白果中分离制备出清蛋白（ＧＡＰ）、球蛋白（ＧＧＰ）和盐溶蛋白（ＧＳＰ）。白果蛋白中以清蛋白和球蛋白为主，醇溶蛋白、碱溶蛋白和复合蛋白含量很少。化学成分分析表明，制得的ＧＡＰ、ＧＧＰ和ＧＳＰ中以ＧＡＰ的蛋白质纯度高，氨基酸组成丰富、合理，属于优质蛋白质。活性试验结果表明ＧＡＰ的抗氧化活性远高于ＧＧＰ。关键词：白果；盐溶；盐析；清蛋白；抗氧化

白果蛋白质提取及SDS_PAGE分析_李莹莹

白果蛋白质提取及SDS-PAGE 分析李莹莹1，吴彩娥1,*，杨剑婷2，贾韶千1，徐文斌1，彭方仁1(1.南京林业大学森林资源与环境学院，江苏南京 210037；2.安徽科技学院食品药品学院，安徽凤阳 233100)摘要：以白果为原料，采用不同的原料处理及蛋白质提取方法，运用单因素和正交设计的方法，以料液比、提取时间、提取液浓度、提取液pH 值为考察因素，研究白果蛋白质提取的最佳工艺条件，并对提取的白果蛋白进行SDS-PAGE 凝胶电泳分析。

结果表明：经过冷冻干燥处理的白果采用Tris-HCl 提取法获得的白果蛋白含量较高；Tris-HCl 法提取白果蛋白的最佳工艺为pH8.5、0.15mol/L Tris-HCl 溶液、料液比1:20(g/mL)、提取时间4h ，白果蛋白质的提取率达到75.01%。

白果蛋白SDS-PAGE 分析表明，白果蛋白中约含13条亚基，主要为21kD 和32kD 的两种亚基，白果蛋白的亚基主要集中在31～100kD ，占亚基总数的77%。

关键词：白果；蛋白质；提取；S D S -P A G EExtraction and SDS-PAGE Analysis of Proteins from Ginkgo biloba SeedLI Ying-ying 1，WU Cai-e 1,*，YANG Jian-ting 2，JIA Shao-qian 1，XU Wen-bin 1，PENG Fang-ren 1(1. College of Forest Resources and Environment, Nanjing Forestry University, Nanjing 210037, China ；2. College of Food and Drug, Anhui Science and Technology University, Fengyang 233100, China)Abstract ：A comparative investigation of the effects of material pretreatment ways and extraction solvents on protein extraction from Ginkgo biloba seeds was made, and based on the experimental results Tris-HCl as the optimal extraction solvent and lyophilization as the optimal material pretreatment way were selected for the subsequent investigations, including optimization of protein extraction from Ginkgo biloba seeds by single-factor and orthogonal array design methods and SDS-PAGE analysis of the proteins extracted from Ginkgo biloba seeds. The optimal conditions for extracting proteins from this material were determined to be: pH, 8.5; Tris-HCl concentration, 0.15 mol/L; material/liquid ratio, 1:20; and extraction duration, 4 h. A protein yield of 75.01% was obtained under the optimal extraction conditions. The SDS-PAGE analysis showed that the proteins from Ginkgo biloba seeds contained approximately 13 subunits (mainly 21 kD and 32 kD ones) and that majority of them had a molecular mass varying from 31 to 100 kD, with a relative content of 77%.Key words ：Ginkgo biloba seed ；protein ；extraction ；SDS-PAGE中图分类号：S664.3；TS201.2 文献标识码：A 文章编号：1002-6630(2010)22-0036-05收稿日期：2010-01-18基金项目：教育部博士点基金项目(200802980004；20070298008)；国家自然科学基金项目(30872055)作者简介：李莹莹(1984—)，女，硕士研究生，研究方向为经济植物资源加工利用及其安全控制。

木本植物蛋白提取和SDS_PAGE分析方法的比较和优化_谷瑞升

木本植物蛋白提取和SDS -PAGE 分析方法的比较和优化①1谷瑞升　2刘群录　2陈雪梅　2蒋湘宁②1(中国科学院植物研究所　北京　100093)2(北京林业大学森林生物实验中心　北京　100083)摘要　在几种木本植物上对4种常用蛋白提取方法、4种凝胶染色和脱色方法及影响蛋白定量和SDS -PAGE 电泳的因素进行了比较研究,发现:利用改良丙酮沉降法提取蛋白,不仅提取效率高,而且杂质干扰少,得到的电泳结果,蛋白条带清晰,数量多;将常规凝胶染色和脱色液中的乙醇改用为甲醇可大大改善染色和脱色效果,获得了没有背景或背景很浅的电泳结果。

通过研究确定了一套优化的适用于木本植物的蛋白提取、定量、凝胶制备、电泳、染色、脱色以及干胶制备的方法。

利用这一优化方法对胡杨细胞盐胁迫蛋白进行了研究,发现了与高水平盐胁迫有关的66kD 蛋白和与盐胁迫和干旱胁迫均有关的28kD 蛋白,获得了满意的蛋白SDS -PAGE 分析结果。

关键词　木本植物,蛋白提取,十二烷基磺酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳COMPARIS ON AND OPTIMIZATION OF THE METHODSON PROTEIN EXTRACTION AND SDS -PAGE IN W OODY PLANTS1GU Rui -Sheng 2LIU Qun -Lu 2C HE N Xue -Mei 2JI ANG Xiang -Ning1(Institute of Botany ,The Chines e Ac ademy of Scie nce s ,Beijing 100093)2(Expe rimentalC ente r of Fores t Bi ol ogy ,Beijing Fore st Unive rsit y ,Beijing 100083)A bstract The methods of pr otein extraction and SDS -PAGE were compared and optimized in woody plants .The impr oved steps included modified protein extraction ,substitution of ethanol for methanol in the solution of staining and destaining .Satisfied results were achieved in the application of the optimized method to the protein analysis of several woody plants .66kD protein band related to salt stress and 28kD protein band associated with osmotic stress were obviously showed out in the analy -sis for the suspensivly cultured cells stressed with NaCl of Populus euphratica .Key words Woody plants ,Protein extraction ,SDS -PAGESDS -PAGE (十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳)是分析生物体蛋白质常用的方法,其技术多采用Laemmli (1970)分析细菌蛋白的方法。

蛋白提纯的实验报告

一、实验目的1. 掌握蛋白质提纯的基本原理和实验操作技术。

2. 学习使用盐析法、凝胶层析法等方法对蛋白质进行提纯。

3. 熟悉蛋白质纯度鉴定方法，如醋酸纤维素薄膜电泳法。

二、实验原理蛋白质提纯是指从混合物中分离出目标蛋白质的过程。

根据蛋白质的性质差异，如分子量、溶解度、电荷等，采用不同的分离方法进行提纯。

1. 盐析法：利用蛋白质在高浓度中性盐溶液中的溶解度差异进行分离。

在高浓度盐溶液中，蛋白质的溶解度降低，可形成沉淀。

通过离心分离，得到含有目标蛋白质的粗制品。

2. 凝胶层析法：根据蛋白质分子量的大小，利用凝胶柱分离不同分子量的蛋白质。

分子量较大的蛋白质无法进入凝胶颗粒的网孔，而分子量较小的蛋白质能进入凝胶颗粒的网孔，从而实现分离。

3. 醋酸纤维素薄膜电泳法：利用蛋白质在电场中的迁移速度差异进行分离。

根据蛋白质的等电点，调节溶液pH值，使蛋白质在电场中迁移至相应位置，从而实现分离。

三、实验材料与仪器1. 实验材料：血清、硫酸铵、Sephadex G-25凝胶、醋酸纤维素薄膜、考马斯亮蓝R-250染料、硝酸、氢氧化钠、丙酮等。

2. 仪器设备：离心机、凝胶层析柱、电泳仪、紫外灯、分析天平、移液器、烧杯、试管等。

四、实验步骤1. 盐析法提纯蛋白质（1）取一定量的血清，加入硫酸铵至饱和，搅拌均匀，静置过夜。

（2）将混合物离心，取沉淀部分，用少量去离子水溶解。

（3）用透析法去除硫酸铵。

2. 凝胶层析法提纯蛋白质（1）将Sephadex G-25凝胶柱装好，用去离子水平衡。

（2）将溶解的蛋白质溶液加入凝胶柱，控制流速。

（3）收集洗脱液，检测蛋白质纯度。

3. 醋酸纤维素薄膜电泳鉴定蛋白质纯度（1）将蛋白质样品点样于醋酸纤维素薄膜上。

（2）将薄膜放入电泳槽中，加入电泳缓冲液。

（3）通电，观察蛋白质迁移情况。

（4）将薄膜取出，用考马斯亮蓝R-250染料染色，观察蛋白质条带。

五、实验结果与分析1. 盐析法提纯蛋白质通过盐析法，成功从血清中提取出目标蛋白质，沉淀量较大，纯度较高。

银杏果实(白果)多糖提取工艺优化及其抑菌活性分析

银杏果实(白果)多糖提取工艺优化及其抑菌活性分析作者：吴海霞田志芳来源：《江苏农业学报》2020年第06期摘要：以银杏（Ginkgo biloba L.）果实（白果）为原料，利用响应面分析法优化白果多糖的提取工艺，并分析白果多糖的抑菌活性。

以多糖得率为指标，通过单因素试验及响应面分析，探讨液料比、提取温度及提取时间等因素对白果多糖得率的影响，从而建立白果多糖的提取工艺模型，得出其最佳提取工艺条件;结合牛津杯法及二倍稀释法，分析白果多糖的抑菌活性及最小抑菌质量浓度。

结果表明，白果多糖的最佳提取工艺条件如下：液料比45 ml∶1 g，95 ℃浸提3.0 h，在该条件下多糖得率为19.67%。

抑菌试验结果表明，白果多糖对细菌有一定的抑制活性，对枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）的抑制活性最强，最小抑菌质量浓度为2.50 mg/ml;白果多糖对大肠杆菌（Escherichia coli）的抑制活性也较强，当白果多糖质量浓度为15.00 mg/ml时，抑菌圈直径约为2.25 cm;白果多糖对真菌几乎无抑制活性，因而不具有广谱抑菌活性。

关键词：银杏果实（白果）;多糖;响应面分析;抑菌活性中图分类号：S792.950.1文献标识码：A文章编号：1000-4440（2020）06-1551-08Abstract：Ginkgo biloba seed was used as raw material， the conditions of extracting polysaccharides were optimized based on response surface method （RSM）， and the antibacterial activity was studied. The yield of polysaccharide was used as the index， single factor tests and RSM were performed to study the effects of liquid-to-solid ratio， extraction temperature and extraction time on polysaccharide yield. The mathematical model of polysaccharides extraction was established， and the optimum extraction conditons were obtained. The antibacterial activity andminimum inhibitory concentration of polysaccharides were analyzed by Oxford cup method and double dilution method. The results showed that the optimum extraction conditons were as follows：liquid-to-solid ratio 45∶1（ml/g）， extraction temperature 95 ℃ and extraction time 3.0 h. Under the optimum extraction conditions， the yield of polysaccharide was 19.67%. The results of antibacterial test indicated that polysaccharide from Ginkgo biloba seed showed the strongest antimicrobial activity against Bacillus subtilis， and the minimum inhibitory concentration was 2.50 mg/ml. The polysaccharide from Ginkgo biloba seed also had strong antibacterial activity against Escherichia coli. When the mass concentration of polysaccharide was 15.00 mg/ml， the antibacterial diameter was 2.25 cm. But the polysaccharide has no inhibitory activity against fungi and has no broad-spectrum antimicrobial activity.Key words：Ginkgo biloba L. fruit（Ginkgo biloba seed）;polysaccharide;response surface method;antibacterial activity銀杏（Ginkgo biloba L.）的果实俗称白果，又名鸭脚子、灵眼、佛指柑[1]。

浓缩苹果汁中蛋白质的提纯与性质研究

高速冷冻离心机（ＧＬ－２０Ｇ－Ⅱ）上海安亭科学仪器
收稿日期：２００６－０８－１７基金项目：国家８６３项目（２００２ＡＡ２４５０９１）作者简介：李全宏（１９６６－），男，副教授，研究方向为农产品加工与贮藏。
※工艺技术
食品科学
2006, Vol. 27, No. 11 245
当前生产中酶解工艺主要是应用于浊度的减轻，果汁的酶解主要是加入果胶酶和淀粉酶，生产上的添加量均为２５μｌ／Ｌ，反应温度４５ ℃，酶解２ｈ，目的是为了分解果胶和淀粉，减轻果汁的浊度，但酶的加入，也使果汁中的蛋白质含量增加，也有可能是造成后混浊的因素之一。同时液化酶的加入使细胞壁的糖蛋白溶解到果汁中，形成混浊［４］。根据山东烟台北方安德利果汁股份有限公司的实际经验，酶的添加量超过５０μｌ／Ｌ时，就能明显地看到混浊的产生。
244 2006, Vol. 27, No. 11
食品科学
※工艺技术
浓缩苹果汁中蛋白质的提纯与性质研究
李全宏，李娜（中国农业大学食品科学与营养工程学院，北京１０００８３）
摘要：采用离子交换和ＳＤＳ－ＰＡＧＥ分离纯化浓缩苹果汁中蛋白质，并对其进行性质分析。结果表明存在于浓缩苹果汁中的蛋白质组分有两种，一种是苹果本身的蛋白（蛋白Ⅰ），另一种是果汁加工中的外源酶蛋白（蛋白Ⅱ）。蛋白Ⅰ分子量很小，为２５ｋＤａ，疏水性氨基酸含量高，易和酚类物质结合产生后混浊。蛋白Ⅱ分子量均大于３１ｋＤａ，氨基酸组成分析发现其脯氨酸含量极少，认为其不直接参与后混浊的形成。关键词：苹果汁；蛋白质；分离；纯化
１．５．１ＳＤＳ－聚丙烯酰胺凝胶的配制丙烯酰胺贮存液以温热（利于溶解双丙烯酰胺）的去

植物蛋白质粗提实例

白果蛋白质提取及SDS-PAGE分析李莹莹，吴彩娥，杨剑婷，贾韶千，徐文斌，彭方仁材料与方法1.1 材料与试剂白果：品种为泰兴大佛指，购自江苏泰兴市。

白果去掉外种皮后于0～4℃贮藏。

SDS-PAGE 凝胶电泳所用试剂Sigma 公司；其他试剂均为国产分析纯。

1.2 仪器与设备TU-1800PC 紫外分光光度计北京普析通用容器有限责任公司；DYY-6C 型电泳仪北京六一仪器厂；电泳自动成像仪美国BIO-RAD生化科技有限公司；PHS-2C 型数显pH 计上海智光仪器仪表有限公司；GL-20G-II 型冷冻离心机上海安亭科学仪器厂。

1.3 原料处理及蛋白质提取1.3.1 原料处理冻干处理：新鲜白果于－20℃真空冷冻干燥，研磨过筛，石油醚脱脂；烘干处理：新鲜白果于30℃烘箱中烘烤12h，研磨过筛，石油醚脱脂；对照：去掉外种皮后于0～4℃贮藏的白果。

1.3.2 白果蛋白质提取1.3.2.1 Tris-HCl 法参照谷瑞升等[7 ]的方法。

取脱脂后3 种样品各1g，加入10mL的0.2mol/L Tris-HCl缓冲液(pH8.0)，4℃浸提6h 后于4℃、4000r/min 离心15min，取上清液测定蛋白质含量。

1.3.2.2 盐溶法参照黄文等[5]的方法。

取脱脂后3 种样品各1g，加入10mL 的0.14mol/L NaCl 溶液，4℃浸提6h 后在4℃、4000r/min 离心15min，取上清液测定蛋白质含量。

1.3.2.3 磷酸缓冲液提取法取脱脂后3种样品各1g，加入10mL的0.05mol/L pH8.0磷酸缓冲液(含0.1mol/L KCl、2mmol/L EDTA)，4℃浸提6h 后4℃、4000r/min 离心15min，取上清液测定蛋白质含量。

蓖麻籽蛋白质粗的分离狄建军、袁绍辉、王云、魏永春、黄凤兰、谢寇龙主要仪器高速冷冻离心机，珠海黑马医学仪器有限公司DYY-6C型电泳仪，北京市六一仪器厂精密pH计，上海精密科学仪器有限公司电子天平，梅特勒-托利多仪器（上海）有限公司SHA-B数显恒温振荡器，常州国华电器有限公司T6新世纪紫外可见分光光度计北京普析通用仪器有限责任公司蓖麻籽粗蛋白提取方法的优化从超低温冰箱中取出去壳的蓖麻籽适量，放入冷冻好的研钵中迅速研磨。

白果活性成分的提取及其功效研究进展_赵春芳

仲恺农业工程学院学报,22(4):67~70,2009J ournal of Zhongkai Un i ver sit y of A gricult ure and Eng i neering文章编号:1674-5663(2009)04-0067-04收稿日期:2009-07-01作者简介:赵春芳(1985-),女,辽宁沈阳人,在读硕士. *通讯作者E m ai:l z hu li xue @白果活性成分的提取及其功效研究进展赵春芳,朱立学*(仲恺农业工程学院机电工程学院,广东广州510225)摘要:通过对国内外白果的研究状况进行分析,总结了白果活性成分的提取方法及其功能活性研究,并对白果研究开发领域的发展趋势及今后的研究重点进行了展望,旨在为白果的开发与利用提供科学依据.关键词:白果;活性成分提取;生物活性中图分类号:O 175 文献标识码:AR evie w of co m ponent extracti ng and appli cati on of gi nkgo seedZ HAO Chun fang ,Z HU L i xue(Co lleg e o fM echanica&l Electrical Eng i neer i ng ,Zhongka iU n i versity o fA g ricu lture and Eng i nee ri ng ,G uangzhou 510225,Chi na)Abstract :The research progress o f g i n ko seed had been rev i e w ed at firs,t incl u ding the active co m ponen ts extrati n g m ethods and bio l o g ica l activ ities study i n g .M oreover ,t h e developm ent trendeny of theresearch w as proposed to e m phasis the study focus in future .So m e po ssible processi n g approaches ofg i n ko w ere put for w ard in t h is paper at las,t w hich w ou ld g i v e a sc ience basic for the deve lopm en.tK ey w ords :g i n kgo seed ;acti v e co m ponents ex tracting ;b i o log ical acti v ity银杏(G inkgo b iloba L .)是我国的古老珍贵树种之一,为一科一属一种的特殊植物,其果实为白果,又称银杏或银杏果.目前世界上只有3个国家生产白果,中国是其起源和分布的中心,20世纪90年代以来,随着我国银杏人工栽培量的不断扩大,其资源量现在占世界总量的70%,居世界首位[1].据介绍,白果营养丰富,自古以来被当作养生延年的上品,其药用价值早在元代日用本草中有即记载,明朝初年将白果列为中药,至今已有800余年的历史.中医认为,白果具有敛肺气、定喘嗽、止带浊、缩小便等功效,临床用于补虚扶衰,止咳平喘,涩精固元等.白果的药用价值在中国、日本及东南亚一些国家得到了公认,国际上对白果的关注也日渐增多.近十几年来,开展了对其化学组成、活性成分及药用机理的研究[2].1 白果的活性成分根测定,白果干燥果仁中,主要含淀粉(63%)、粗蛋白(13%)、粗脂肪(2 8%)、蔗糖(5 2%)、蔗糖(5 2%)、还原糖(1 1%)、核蛋白(0 26%)、矿物质(3 0%)、粗纤维(1 2%)[3],另外还含有17种氨基酸,维生素B l 、B2、C 、D 和胡萝卜素、尼克酸、核黄素以及磷、钾、钙、镁、铁等25种微量元素[4],并含有赤霉素、类细胞激动素以及两种核糖核酸酶等[5].1 1 白果蛋白1 1 1 白果清蛋白白果清蛋白(G i n kgo albu m i n prote i n ,GAP)是一种具有显著生物活性的水溶性蛋白提取物,具有较好抗氧化及延缓衰老的活性[6 8],能够促进血清溶血素的形成,提高造血能力及体内免疫功能.GAP 具有较好的体外清除活性氧(羟基自由基、超氧阴离子)和保护DNA 损伤的活性,对超氧阴离子自由基的清除率达50%左右,对羟基自由基的清除率在80%以上[7].GAP 还含有质量分数2 5%左右的半胱氨酸,因此具有较多的巯基,从而表现出类似于保护蛋白的抗氧化机制[9].为提高其生物活性,采用酶解法,可使其抗氧化活性有不同程度的提高[7].试验表明,GAP 能在一定程度上延缓自然衰老小鼠及半乳糖亚急性致衰老模型小鼠的衰老过程[6],显著增强正常小鼠的免疫调节作用[10],较全面地恢复68仲恺农业工程学院学报第22卷环磷酰胺造成的小鼠免疫功能低下[11],还能抑制体内S180实体瘤和体外S180肿瘤细胞的生长,具有较强的体外清除 OH及氧自由基的能力[12].白果清蛋白提取物(G inkgo al b u m i n extrac,t GAE)能抗辐射损伤,恢复小鼠免疫机能、延缓死亡[13].除了GAP外,白果蛋白中还有球蛋白(G i n kgo g l o bulins prote i n,GGP)及少量的醇溶蛋白、碱溶蛋白和复合蛋白,但纯度较高的是GAP,且它的抗氧化活性(抗羟基自由基)远高于GGP[6].GAP、GGP 和盐溶蛋白(G i n kgo so l u b le pro tein,GSP)的氨基酸组成丰富、合理,必需氨基酸分别高达质量分数35 0%、34 5%和33 4%,并且都属于优质蛋白,利于人体消化、吸收.邓乾春等[13]还发现一种在GAP 中占主要级分的新蛋白,命名为GAPIIa,其分子质量为29248u.此外,银杏含有8种人体必需氨基酸[14],游离氨基酸总量达0 8~1 0g/100g,尤以组氨酸含量最高[15].1 12 白果抗真菌蛋白白果抗真菌蛋白在2000年被发现,被命名为G inkb ilob i n,它对金黄色葡萄球菌(S taphy lvcoccus aureus)、绿脓杆菌(C o p rinus co m atus)和大肠杆菌(E scherichia coli)表现出温和的抗菌作用,其活性可以抑制H I V 1逆转录酶和小鼠脾细胞的增殖[16].牛卫宁等[17]发现白果中含有一种单链抗真菌蛋白,分子质量为13kD,与美洲云杉(P icea alba L i n k)的胚胎丰富蛋白N-末端序列标记相似,对各种真菌感染的病变具有强大的抗真菌活性,包括灰霉病菌(B otry tis ci n erea)、花生褐斑病菌(M ycos phaere lla arachi d icola)、立枯丝核菌(R hizocn i a solani)、棉枯萎病菌(Fusarium oxys p orum),瓜类炭疽病菌(C olleto trichum orb iculare)和小麦全蚀病菌(G aeum anno my ces gram inis).Sa w ano等[18]研究发现这种单链抗真菌蛋白含有18种氨基酸,尤其富含丙氨酸和组氨酸,但缺乏半胱氨酸.它可以抑制某些真菌(棉枯萎病菌,里氏木霉(Trichoder ma reesei)和白色念珠菌(Cand i d a albicans)),但并未对大肠杆菌产生抑菌作用,而对天冬氨酸蛋白酶和胃蛋白酶具有较弱的抑制活性.此外,这种蛋白是作为前体蛋白而合成并被分泌到细胞外.1 1 3 白果11S贮藏蛋白 Arahira等[19]发现银杏种子的提取物11S贮藏蛋白可以具体水解 Asn248 Asn249.对11S贮藏蛋白进行生化分子水平研究,单晶衍射发现:其在一个不对称单位内存在6个原体[20].1 1 4 白果中分离得到蛋白酶抑制剂 Yoriko等[21]从银杏种子中分离得到一种9kD的蛋白酶抑制剂,对天冬氨酸蛋白酶的胃蛋白酶和木瓜蛋白酶的半胱氨酸蛋白酶有不完全非竞争性抑制作用.这种蛋白是作为前体蛋白而合成的,并会被分泌到细胞外,其基因表达仅在种子,而不是在茎,叶和根,表明该蛋白参与了种子发育或发芽.该蛋白抑制剂与其他植物物种的型非特异性脂质转移蛋白(ns LTP1)存在约40%的同源性.该蛋白质抑制剂具有脂质转移活性和脂质结合活性,但是它没有任何抗真菌药和抗菌活性,脯氨酸79在银杏nsLTP1的脂质转移和结合活性中发挥着关键作用.1 2 白果油白果中的油脂质量分数为4 32%~7 58%[22].白果油是一种不饱和度很高的油脂,总脂肪酸中不饱和脂肪酸的质量分数为87 86%~91%,其中绝大部分是油酸和亚油酸,占总脂肪酸的质量分数71 8%~75%[23 24].亚油酸在降血压、降血脂,防止心血管疾病方面具有重要作用,对癌细胞培养物也具有毒杀作用[25],从而赋予了白果油的功能性作用.白果油中还含有丰富的维生素E[26],1kg白果油含有610m g维生素E[24],这使白果油具有了抗氧化、清除人体内的自由基、保护细胞膜和延长循环系统中血红细胞寿命的作用[26].白果对脂质代谢的影响一直未见报到,直到2008年马萨诸塞州大学进行了银杏果对治疗心血管疾病的作用研究[27].在使用人肝癌细胞(喉癌G2期)和体内小鼠喂养试验的过程中,马萨诸塞州大学对4种银杏制剂(整个坚果、白果甲醇提取物、白果脂溶性组分及白果水溶性组分)进行了测试,发现这些制剂可通过调节载脂蛋白B的分泌和肝脏低密度脂蛋白受体来调节血清胆固醇水平.结果表明整个坚果能减少肝脏胆固醇水平,同时提高血清胆固醇,脂溶性成分能降低肝脏胆固醇,而水溶性部分可能有助于提高血清胆固醇.认为银杏果脂溶性成分可能对心血管疾病具有预防作用.1 3 银杏酸银杏酸主要指羟基酚和羟基酚酸类化合物,已知的银杏酸主要有白果酸(G i n kgo lic ac i d)、氢化白果酸(H ydrog i n kgo li c ac i d)、氢化白果亚酸(H ydrog i n kgo li n ic acid)和白果新酸(G i n kgoneo lic ac i d)[28].反相高效液相色谱法测得白果中含有5种银杏酸:C15 1、C17 2、C15 0和C17 1的2种同分异构体[29].银杏酸具有致敏性、细胞毒性和免疫毒性作用,可以抑菌杀虫,也是银杏提取物及其制剂中的主要毒性物质,常用来治疗痤疮[30].特别是白果酸,能抑制结核杆菌(My cobecterium tuberculosis)生长,对多种细菌有不同程度的抑制作用[31].白果中银杏酸含量达200m g/kg[29],超过了德国规定银杏提取物银杏酸小于5m g/kg标准[32].1 4 白果多糖及甘露糖苷酶初步研究发现,银杏白果多糖与银杏叶多糖、银杏外种皮多糖显著不同,是由D-甘露糖组成的单一均匀的水溶性多糖,相对分子质量为1 86 105,从白果中分离的得率为0 87%[33].W oo 等[34]研究发现银杏种子中的 -甘露糖苷酶分子量估计为120kDa ,其 -甘露寡聚结构可能具有功能性.科研人员发现钴离子影响 -甘露糖苷酶的底物特异性的调控,银杏 -甘露糖苷酶不但在植物细胞的生长中能产生断裂的高甘露糖型含氮聚糖,而且也可能参与降解高甘露糖型无氮聚糖[35].1 5 白果色素与果壳纤维白果含大量类胡萝卜素,其总量约为489 g /100g ,以叶黄质为主,其次为 -胡萝卜素和 -胡萝卜素[36 37]. -胡萝卜素是一种极有效的脂质抗氧化剂,具有抗癌、抗心血管疾病和抗白内障等保健功能[38],可能是白果的功能性因素之一.白果壳富含纤维,王秀丽等[39 40]利用其壳纤维制备了水不溶性膳食纤维,该膳食纤维在酸性条件下对NO -2有较强的吸附作用,pH 越低其吸附作用越强,pH =2时最强.在p H =6 0条件下对胆酸钠具有明显吸附作用.1 6 其他提取物研究姚迪等[41]的实验证明白果注射液可降低哮喘小鼠过敏反应血清中I L 4、I L 5的水平,对II 型辅助性T 淋巴细胞有一定作用.H ori 等[42]发现银杏中存在支原体(My cop las m a ),其提取物作为药物与血清混合有稀释作用,这导致了服用者出现呕吐和抽搐的病症.2 白果活性成分提取与应用研究趋势2 1 确定目标蛋白,探明生物功能活性目前,国内关于白果蛋白的研究着重于白果清蛋白,而且其抗氧化能力、提高免疫功能及抗辐射活性已得到了比较系统的研究.因此,进一步从细胞分子水平探明清蛋白的其他生物活性及作用机理,深入开发全新的白果活性蛋白种类,如蛋白酶抑制剂等,不但利于全面开发白果蛋白,也为食品工业、美容、保健和医药领域提供了功能性组分的理论基础.2 2 开发功能性油脂,发挥营养保健作用白果油不饱和度高,富含维生素E 及胡萝卜素,具有降血脂、抗癌、抗氧化、保护视力等功效,营养价值较高,是一种极具开发利用潜力的功能性油脂.因此,工业化生产高附加值、高品质的银杏油,不但可发挥营养保健作用,也有助于银杏油的综合、无毒和高效利用.2 3 控制银杏酸含量,保障银杏提取物安全国内外对银杏提取物中的银杏酸都有控制指标,白果中银杏酸含量大大超过国际限量标准.因此,有必要建立白果及其产品中银杏酸的分析方法,为白果产品的质量监控和安全性评价提供基础.2 4 开发功能性多糖,深入药理研究白果多糖为一种水溶性植物多糖,具有较强的生物活性.目前为止,国内学者从白果中分离得到白果多糖,但对其理化性质和结构成分只进行了初步分析,尚未针对其可能具有的免疫调节功能、抗肿瘤功效及抗衰老活性进行深入研究.因此,功能性多糖的研究将为白果的药理研究及其临床应用和开发提供重要的基础资料.3 结语白果延年益寿,对呼吸系统、消化系统、排泄系统和生殖系统都具有调节作用,对皮肤科疾病疗效甚佳,是我国传统医学中一种重要的药食两用的高档果品.现代研究发现,白果还具有抗肿瘤、抗癌、抗菌、抗衰老、抗疲劳、提高免疫能力、提高造血功能、影响脂质代谢等作用,其活性成分有望成为一种新型的免疫增强剂及抗癌药物,其外壳能预防和治疗胆结石、糖尿病、动脉硬化等疾病.目前,国内对白果成分的提取集中在白果清蛋白、白果油、银杏酸和白果多糖等,而其作用机理侧重于保护细胞膜、淬灭自由基等抗氧化、抗衰老方面的研究,对白果淀粉的功能性开发较少.因此,利用我国丰富的白果资源,将传统中医理论与现代医药科技相结合,研究提取白果的生理活性成分,在深入研究其药物机理的基础上,开发白果蛋白制品,有着广阔的发展前景.参考文献:[1] 汪景彦.果品食疗[M ].北京:科学普及出版社,1991.69 第4期赵春芳,等:白果活性成分的提取及其功效研究进展70仲恺农业工程学院学报第22卷[2] 黄文,谢笔钧,王益.白果的研究和开发利用[J].湖北林业科技,2002,121:41-42.[3] 粱立兴.白果在中医药中的应用[J].天然产物分离,2004,2(5):22-23.[4] 陈文英,王成章,高彩霞.白果中总黄酮的含量及其油脂的化学成分研究[J].生物质化学工程,2006,40(6):6-8.[5] 何凤仁.银杏的栽培[M].南京:江苏科学技术出版社,1989.[6] 黄文,谢笔钧,姚平,等.白果活性蛋白的抗生物氧化作用研究[J].营养学报,2002,4(2):192-194.[7] 邓乾春,陈春艳,潘雪梅.白果活性蛋白的酶法水解及抗氧化活性研究[J].农业工程学报,2005,21(11):155-159.[8] 黄文,谢笔钧,凌志群,等.白果蛋白抗氧化研究[J].食品科学(增刊),2002,23(6):144-148.[9] 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银杏种子蛋白的SDS—PAGE电泳分析

银杏种子蛋白的SDS—PAGE电泳分析作者：徐莉等来源：《南方农业·上旬》2015年第05期摘要采用SDS-PAGE电泳技术对银杏雌雄种子蛋白进行研究，结果发现：雌雄种子的胚乳蛋白条带差异明显，雌雄种子的胚体蛋白几乎没有差异；雄种子胚乳蛋白中发现2条雌种子胚乳蛋白没有的谱带。

这可以为银杏雌雄树种子的甄别提供指导。

关键词银杏；雌雄种子；蛋白质；SDS-PAGE电泳中图分类号：Q944 文献标志码：A 文章编号：1673-890X（2015）13-047-03知网出版网址：http：///kcms/detail/50.1186.S.20150605.1853.010.html 网络出版时间：2015/6/5 18：53：01银杏（Ginkgo biloba L.）为裸子植物门银杏纲银杏属植物，是我国特有的古老珍贵树种之一，素有国家“活化石”之称，是国家二级保护植物[1]。

从银杏树的外观可以辨别雌雄银杏树，从苗期、叶片、花和花芽、树冠、树枝和物候期方面也可以区分[2]。

但从分子方面辨别雌雄种子的研究甚少。

银杏种实去掉肉质外种皮后的种核部分俗称白果。

雌树种子核果状，果核圆，有二棱，果核头尖；有三棱的种子多发育为雄树[3]。

所以，从种核外观上可以区分雌雄种子（图1）。

银杏种子内部由胚体和胚乳组成（图2），白果富含蛋白质、淀粉、糖类和脂肪等物质[4]。

白果中蛋白质含量达到80.36%，而糖类等其他物质含量相对较少[5]。

银杏种子中蛋白有水溶性、醇溶性、盐溶性、碱溶性之分，而水溶性含量相对较高，其他含量相对较低；同时，储藏种子与萌动种子的蛋白质含量接近，但萌动种子可溶性蛋白质的含量比储藏种子高[6]。

本实验采用当年种子为材料，以双蒸水为溶剂，添加蛋白提取剂，并对雌雄果实的胚体和胚乳的蛋白质进行聚丙烯酰胺凝胶电泳，从蛋白方面分析银杏雌雄果蛋白条带的差异，为银杏雌雄树种子的甄别提供指导。

1 材料与方法1.1 材料银杏雌果和雄果：购买当年银杏果实种子及采摘苏州大学公教楼前银杏树果实。

银杏叶中蛋白质的提取工艺研究

银杏叶中蛋白质的提取工艺研究随着现代生物技术的发展，蛋白质分离和提取成为一种受到广泛关注的重要研究领域。

自从1956年，科学家们首次从豌豆中提取了蛋白质以来，蛋白质的提取已经取得了显著的进展。

研究人员继续探索有关开发新型蛋白质提取工艺的研究。

目前，蛋白质的提取主要有多种不同的方法，如溶剂提取、酶分离和分子印迹技术等。

在不同的植物提取蛋白质的研究中，对银杏叶中的蛋白质的提取方法进行了许多探索。

银杏叶是一种古老的中药，其拥有独特的药理效果，其抗氧化、抗炎、抗肿瘤等药理作用已经被广泛认可。

目前，研究人员已经在从银杏叶中提取蛋白质方面取得了一些进展。

首先，该提取过程通常分为三个步骤：预处理、抽提和纯化。

在预处理步骤中，原始银杏叶样本经过破碎粉碎，使样本中植物细胞被损伤，并有利于后续提取过程，从而提高蛋白质的提取率。

抽提过程则有助于将银杏叶中的蛋白质从其他物质中分离出来，而纯化过程则有助于提取蛋白质的精密度和纯度。

其次，目前提取银杏叶中的蛋白质的工艺有多种。

常见的提取工艺有溶剂提取、离心技术、膜分离技术、超声提取、酶解技术和核酸技术等。

溶剂提取是一种最常用的提取工艺，特别是将植物细胞损伤，且细胞结构已经被破坏的情况下，其适用性很强。

实验表明，溶剂提取法有助于提取银杏叶中的蛋白质，但是由于样品中的有机溶剂会损害蛋白质的结构，因此，可以考虑使用含有抗氧化剂的溶剂，以增加提取过程中蛋白质的稳定性。

超声提取技术是近年来在提取蛋白质工艺中受到广泛关注的技术，它通过超声振荡、冲击和破碎来提取蛋白质。

实验结果表明，超声提取技术能够有效地提取出银杏叶中的蛋白质，而且提取的蛋白质的活性也较高。

随着分子印迹技术的发展，有关分子印迹蛋白质技术的研究中，银杏叶中的蛋白质也被探究。

实验表明，分子印迹技术能够有效调控定向结合，更有效地提取出银杏叶中的蛋白质，这有助于提高蛋白质的精密度和纯度。

最后，银杏叶的提取工艺的不断改进也需要一些有效的保护剂来满足银杏叶蛋白质抽取过程中的抗氧化需求，从而提高抽取的蛋白质的活性和稳定性。

银杏小孢子叶球蛋白提取和双向电泳体系优化(Ⅱ)

Ｓａｂ（ｅｃｉｎｘｅｍｎａＦｒｓｙＣｎｅｆｅｉｏｅｔｎｖｒｔ）／ｏｒａｏＮｒｅｓＦｒｓｎｖｒｈｏｏＴａｈｎａｄＥｐｒｅｔｏｔｅｔｏｉｎＦｒｓｙＵｉｅｉ／ＪｕｎｌｆｏｔａｔｏｅｔＵｉ－ｇｉｌｅｒｒＢｉｇｒｓｙｈｙｒｅｓｔ．２１３（．５ｉ一０１．９８）一５—５ｙ７
Ｃｅｉ，ｉｕ（ｏｅｅｏｉｏｉｌＳｉｃｓｎｉｔｈｏｇ，ＢｉｎｏＣｌｇｆｏｇａｃｅｅａｄＢｏｃｎｌｙｅｉｇＦｒｓｙＵｉｒｔ；Ｄｎａｓｎ，ＭｉｌＢｌｃｎｅｏｊｒｖｓｙａｏ
Ｔｅｅｆｃｓｏｉｅｅｔｒｔｉｘｒｃｉｎｍｅｈｄ，ｌｓｕｅｓＨａｇｓｏＰｔｐａｄｄｆｒｎｅｃｎｅｔ．ｈｆｔｆｄｆｒｎｏｅｎｅｔｔｔｏｓｙｉｂｆｒ，ｐｒｎｅｆＩＧｓｒｎｉｅｅｔｌｏｃｎｒｅｉｐａｏｓｉｆｇａｔｎｎｔ．ｉｎｉｎｌｅｌｃｒｐｏｅｉｗｒｔｄｅｙｕｉｇｍａｅｆｗｅｕｓｏｉｋｏｂｌｂｓｅｐｒｎａｔ．ｉｓｏｗｏｄｍｅｓｏａｌｅｅｔｈｒｓｅｅｓｕｉｄｂｓｎｌｏｒｄｆＧｎｇｉａａｘｅｍｅｔｌｏ．ｇｏｓｌｂｏｉｍａｅ．ｒａｓｉ．ＲｅｕｔｈｗｈｔｏａｅＣａｅｏｅｐｅｏｒｔｃｌｗｔＣａｅｏｅｐｏｏｏ．ｔｅｆｒｒｉｍｏｅｓｉｂｅｌｓｌｓｏｓｔａ．ｃｍｐｒｄＴＡ．ｃｔｎ．ｈｎｌｐｏｏｏｉＴＡ．ｃｔｎｒｔｃ１ｈｏｍｅｒｕｔｌ．ｈｓａ

银杏营养贮藏蛋白质的SDS_聚丙烯酰胺凝胶电泳研究

J 1SHANXI AGRIC 1UNIV 1(N at ural S cience Edition )学报(自然科学版)2007,27(1)002211收稿日期:2006209225 修回日期:2006211228作者简介:郭红彦(19772),女(汉),山西长治人,博士研究生,主要从事经济林栽培方面的研究。

通讯作者:彭方仁,教授,博士生导师。

Tel :025*********;E 2mail :frpeng @njfu 1edu 1cn 基金项目:国家自然科学基金资助项目(30371154)银杏营养贮藏蛋白质的SDS 2聚丙烯酰胺凝胶电泳研究郭红彦,谭鹏鹏,吴青霞,彭方仁(南京林业大学森林资源与环境学院,江苏南京210037)摘　要:营养贮藏蛋白质在木本植物的生长发育过程中起着重要的作用。

应用SDS 2聚丙烯酰胺凝胶电泳技术对银杏不同部位的营养贮藏蛋白质进行了研究,经分析初步确定了两种营养贮藏蛋白质组分的分子量,探讨了其季节性变化规律,结果表明银杏皮层中的营养贮藏蛋白质含量均高于木质部中的含量。

关键词:银杏;营养贮藏蛋白质;SDS 2聚丙烯酰胺凝胶电泳中图分类号:Q344 文献标识码:A 文章编号:167128151(2007)0120016205Study on VSPs in Gi nkgo Biloba By the T echnology of SDS 2PAGE G UO H ong 2yan et al.(College of Forest Resources and Envi ronment ,N anj ing Forest ry Universit y ,N anj ing J iangsu 210037,China )Abstract :Vegetative storage proteins (VSPs )played an important role in the growth and development of woody plants.In this paper ,the SDS 2PA GE technology was applied to study VSPs located in different parts of Gink go kDbi 2loba ,and two kinds of VSPs were identified with different molecular weight of 32KD and 36KD ,and whose seasonalchange regulations were discussed ,and it was found that the VSP content in cortex was more than that in xylem.K ey w ords :Gink go biloba ;Vegetative Storage Proteins ;SDS 2PA GE 季节性氮素贮藏是树木氮代谢的显著特征,对树木的生长、开花结果及抗逆性等方面都具有重要意义。

不同地区板蓝根蛋白SDS―PAGE分析

不同地区板蓝根蛋白SDS―PAGE分析摘要：目的采用十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）技术鉴别不同地区板蓝根，为板蓝根药材的鉴别和质量评价提供依据。

方法采用SDS-PAGE技术，建立黑龙江和河北地区板蓝根蛋白图谱。

结果黑龙江板蓝根蛋白约含13条亚基，主要为10.5 kD、23.0 kD、24.9 kD、44.1 kD 4种亚基，河北板蓝根蛋白约含12条亚基，主要为55.6 kD、45.9 kD、34.3 kD、18.9 kD、12.4 kD、10.5 kD 6种亚基。

结论SDS-PAGE技术可以用于鉴别不同地区的板蓝根。

关键词：板蓝根；鉴别；十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳DOI：10.3969/j.issn.1005-5304.2015.07.024中图分类号：R282.5 文献标识码：A 文章编号：1005-5304（2015）07-0086-03Analysis on Isatidis Radix Protein in Different Areas by SDS-PAGE YANG Xin，WANG Qiu-hong，WANG Yue，GUO Hui，XING Na，KUANG Hai-xue （Key Laboratory of Basic and Appilication Research of Chinese Medicine，Ministry of Education；Heilongjiang Key Laboratory ofTraditional Chinese Medicine Pharmacodynamic Material Bases；Heilongjiang University of Chinese Medicine，Harbin 150040，China）Abstract：Objective To identify Isatidis Radix in different areas by SDS-PAGE；To provide the basis for the identification and quality evaluation of Isatidis Radix. Methods By using SDS-PAGE technology，the protein profiles of Isatidis Radix in Heilongjiang and Hebei regions were established. Results Isatidis Radix protein in Heilongjiang contained about 13 protein subunits，and the major subunits were 10.5 kD，23.0 kD，24.9 kD，and 44.1 kD. Isatidis Radix protein in Hebei contained about 12 subunits，and the major subunits were 55.6 kD，45.9 kD，34.3 kD，18.9 kD，12.4 kD，and 10.5 kD. Conclusion SDS-PAGE technology can be used as one of the references to identify Isatidis Radix in different areas.Key words：Isatidis Radix；identify；SDS-PAGE《中华人民共和国药典》规定，正品板蓝根为十字花科植物菘蓝Isatis indigotica Fort.的干燥根[1]，主要功效为凉血消肿、清热解毒，研究表明其有抗内毒素的作用[2-3]。

银杏种子蛋白的SDS-PAGE电泳分析

凝胶用染色液染色大约１５ｍｉｎ，倒去染色液用脱份为合适的采摘时期。
色液脱色，在摇床上摇晃以加强脱色效果。应注意及３．２蛋白条带差异说明时更新脱色液，保证脱色效果。脱色后用蒸馏水漂洗，然后拍照。基因决定蛋白质的生成，雌雄银杏种子胚乳间的蛋白差异条带说明了雌雄种子基因间的差异，差异基因决定雌雄种子胚乳蛋白的差异，可以为从蛋白水平辨别银杏的雌雄提供参考依据。
外种皮，置干燥箱干燥后挑选出雌雄种子；同时，购买一批银杏雌雄种子。
１．３．２雌雄银杏种子胚体和胚乳蛋白样品的制备
（１）研磨：分别称取银杏雌雄种子胚体和胚乳各０．１ｇ，放入研钵中，加液氮研磨。（２）水浴：将称好的样品装入离心管中，加人１ｍＬ蛋白提取液，在６０￣Ｃ的条件下水浴３０ｍｉｎ，取出
．５稳住基本良田，确保粮食自给到目前大部分家庭已经没有储粮习惯。建议鼓励农户４
继续贮藏粮食，国家按储粮量增加储粮补贴。
４．４增加友好型农业政府补贴
经测算，２０１３年五县种粮耕地１４．４１万ｈｍ，按常
住人口计，人平种粮面积（０．７９ｘ６６７）ｍ。根据低坝
友好型农业是指不但满足食品生产功能，同时浅丘一年三熟，中高山一年二熟计算，必须保证人均
具备景观、保健与高效多重功能的生态型农业。对于耕地（０．７ ×６６７）ｍ。其中，种粮耕地（０．６ ×６６７）１ＴＩ，生态涵养和国家重要生态功能保障区，建议增加生态种蔬菜耕地（０．１Ｘ６６７）ｍ。按五县年末总人口３８６．３万型、景观型、庭园经济型、特色效益型农业和生态文计，需要种好种满１８￣－ｈｍ耕地，产粮１７４．８万ｔ，产蔬明村的政府补贴，通过增加专项政府补贴，提高农民菜１３７．６万ｔ，才能满足区域内粮食自给。收入。当前食品安全问题，受到消费者广泛关注，高品质利于健康的绿色食品是人们的共同追求。在渝东

湿法提取蛋白实验报告

一、实验目的1. 掌握湿法提取蛋白的基本原理和方法。

2. 学习蛋白质提取过程中的实验操作技巧。

3. 了解湿法提取蛋白的优缺点，为后续实验研究提供参考。

二、实验原理湿法提取蛋白是利用溶剂（水、盐、有机溶剂等）与蛋白质的相互作用，将蛋白质从生物材料中分离出来的方法。

蛋白质在溶液中具有一定的溶解度，通过改变溶液的pH、离子强度、温度等条件，可以使蛋白质溶解度发生变化，从而实现蛋白质的提取。

三、实验材料与仪器1. 实验材料：- 动物组织或植物组织- 蛋白质提取缓冲液（pH 7.0，含0.5mol/L NaCl）- 丙酮- 离心机- 超声波清洗器- 蛋白质浓度测定仪2. 实验仪器：- 电子天平- 研钵- 漏斗- 离心管- 烧杯- 移液器- 水浴锅四、实验步骤1. 样品制备- 称取一定量的动物组织或植物组织，置于研钵中，加入适量的蛋白质提取缓冲液，研磨成匀浆。

- 将匀浆转移至离心管中，于4℃条件下离心10分钟，弃去沉淀。

2. 蛋白质提取- 取上清液，加入适量的丙酮，室温静置30分钟，使蛋白质沉淀。

- 将沉淀用滤纸过滤，收集滤液。

- 将滤液转移至离心管中，于4℃条件下离心10分钟，收集沉淀。

3. 蛋白质溶解- 将沉淀用适量的蛋白质提取缓冲液溶解，充分混匀。

4. 蛋白质浓度测定- 取适量蛋白质溶液，用蛋白质浓度测定仪测定其浓度。

五、实验结果与分析1. 蛋白质提取效率- 通过比较实验前后蛋白质浓度，计算蛋白质提取效率。

2. 蛋白质纯度- 通过SDS-PAGE电泳分析蛋白质的纯度。

3. 蛋白质活性- 通过生物活性实验，如酶活性、抗原性等，评估蛋白质活性。

六、实验结论1. 湿法提取蛋白是一种简单、有效的蛋白质提取方法。

2. 在本实验中，蛋白质提取效率较高，蛋白质纯度较好，蛋白质活性未受显著影响。

3. 湿法提取蛋白在后续实验研究中具有较高的应用价值。

七、实验讨论1. 在蛋白质提取过程中，pH、离子强度、温度等条件对蛋白质的提取效率有显著影响。