goosecoid在斑马鱼早期发育中的作用.doc
敲除SOCS1a引起斑马鱼肝脏脂肪变性和胰岛素抵抗
分类号学号 D********* 学校代码10487密级博士学位论文敲除SOCS1a 引起斑马鱼肝脏脂肪变性和胰岛素抵抗学位申请人： 戴梓茹学科专业：生物化学与分子生物学指导教师：刘木根教授 殷战研究员答辩日期：2015年05月10日Dissertation Submitted in Partial Fulfillment of the Requirements for the Degree of Doctor of Philosophy in Biochemistry and Molecular BiologyDepletion of Suppressor of Cytokine Signaling-1a Causes Hepatic Steatosis and Insulin Resistance inZebrafishPh.D.Candidate: Ziru DaiMajor: Biochemistry and Molecular BiologySupervisor: Prof. Mugen Liu Prof. Zhan YinHuazhongUniversity of Science and Technology Wuhan, Hubei 430074, P. R. China,May, 2015独创性声明本人声明所呈交的学位论文是我个人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。
尽我所知，除文中已经标明引用的内容外，本论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的研究成果。
对本文的研究做出贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明。
本人完全意识到本声明的法律结果由本人承担。
学位论文作者签名：日期：年月日学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅。
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斑马鱼g型溶菌酶基因序列分析及其原核表达
斑马鱼g型溶菌酶基因序列分析及其原核表达作者：陈华林晨韬陈曦葛均青来源：《南方农业学报》2022年第01期摘要：【目的】實现斑马鱼g型溶菌酶在大肠杆菌中表达，以获得高纯度且具溶菌活性的融合蛋白，为探究g型溶菌酶在斑马鱼抗菌过程中的作用机制及其开发利用打下基础。
【方法】通过ClustalW、ExPASy、SignalP-5.0 Server及PSIPRED等在线软件对斑马鱼g型溶菌酶进行生物信息分析，经密码子优化后合成斑马鱼g型溶菌酶基因，亚克隆至pET-28a（+）表达载体并转化大肠杆菌BL21（DE3）感受态细胞，以IPTG进行诱导表达，并通过非干扰型蛋白浓度测定试剂盒和溶菌酶测定试剂盒（比浊法）测定其浓度及溶菌活性。
【结果】从GenBank检索获得的斑马鱼溶菌酶基因g1（NM_001002706.1）和g2（XM_002664371.5）分别命名为Zeb-Lys-g1和Zeb-Lys-g2。
Zeb-Lys-g1基因开放阅读框（ORF）长591 bp，共编码196个氨基酸残基，其编码蛋白分子量约21.6 kD;Zeb-Lys-g2的ORF长576 bp，共编码191个氨基酸残基，其编码蛋白分子量约21.1 kD;2种斑马鱼g型溶菌酶序列中均含有2个半胱氨酸残基及3个保守的催化残基位点（Glu、Asp和Asp）。
Zeb-Lys-g1的N端含有17个氨基酸的信号肽，而Zeb-Lys-g2不存在典型的信号肽结构，但其三级结构均具有多个α-螺旋结构。
在基于溶菌酶序列相似性构建的系统发育进化树中，Zeb-Lys-g1序列与金鱼g型溶菌酶序列的亲缘关系最近，而Zeb-Lys-g2序列与鲈形目和鲽形目鱼类的g型溶菌酶序列亲缘关系较近。
将合成的斑马鱼 g型溶菌酶基因（Zeb-Lys-g1和Zeb-Lys-g2）亚克隆至pET-28a（+）表达载体并转化BL21（DE3）感受态细胞，20 ℃下经IPTG（终浓度0.5 mmol/L）诱导16 h，可获得融合蛋白Zeb-Lys-g1和Zeb-Lys-g2，纯化后的浓度分别为1.01和1.66 mg/mL，对应的溶菌活性分别为689.68和44.39 U/mg。
甲基睾酮对斑马鱼成鱼的影响
甲基睾酮对斑马鱼成鱼的影响刘晓红2010444033 摘要：用含雄性激素甲基睾酮(MT)的饲料饲喂斑马鱼(Danio rerio)来探讨外源激素对其性腺发育的影响。
本文一斑马鱼为研究对象，探讨了甲基睾酮对斑马鱼性腺发育的影响。
试验中将斑马鱼随机分为4组：空白对照组，95%乙醇溶剂对照组，两个30μg/l甲基睾酮实验组。
每组30尾斑马鱼，放置在室内饲喂7天，每天记录斑马鱼的生长情况，7天后取其性腺等器官，采用石蜡切片技术，在显微镜下观察其性腺发育及生物学变化。
结果表明甲基睾酮对斑马鱼性腺的发育受到抑制,卵巢结构变化明显。
但是对其成活率等无明显影响。
关键词：斑马鱼甲基睾酮卵巢生长发育斑马鱼(Brachydanio rerio)属鲤科，短担尼鱼属，俗称蓝条鱼、花条鱼、斑马担尼鱼，是一种典型的亚热带观赏鱼类。
具有产卵量大、繁殖周期快、突变表现型明显、胚体透明、胚胎发育同步且发育速度快等特点，被喻为理想的分子生物学和免疫学研究的脊椎动物模型，具有很高的科研价值和广泛的应用前景，是四大模式生物之一。
目前国内外对斑马鱼的研究涉及到胚胎学、内分泌学、生物学、毒理学、遗传学、分子生物学等多个方面 J，但对于斑马鱼卵巢发育的研究在国内还未有报道。
本文对斑马鱼卵巢发育进行了研究，以期能丰富斑马鱼发育生物学、繁殖生物学内容，也为其它小型热带观赏鱼的养殖与繁殖提供一些理论参考[1]。
本次实验采用用含有30μg/g甲基睾酮饲料饲喂斑马鱼来探究甲基睾酮对雌性斑马鱼性腺的影响，旨在对其性别控制的生物学基础及性逆转机制进行理论上的探讨，为斑马鱼养殖生产提供科学依据[2]。
1材料与方法：1.1实验试剂仪器和30μg/g甲基睾酮的饲料，生物显微镜，切片机，电热恒温干燥箱，电子天平，甲基睾酮，布温氏固定液，石蜡，代氏苏木精染液，0.5%伊红染液，二甲苯，不同浓度梯度的乙醇，0.1%盐酸，0.1%NaOH。
1.2实验材料实验动物：同步受精的斑马鱼1.3试验方法1.3.1斑马鱼的饲喂实验设置3个处理组（阴性对照组，空白对照组，实验组），其中设置两个实验组。
谷甾醇对斑马鱼生长发育和生殖的影响
谷甾醇对斑马鱼生长发育和生殖的影响作者：冯子懿侯丽萍郑果梁艺聪何骏驹来源：《湖南农业科学》2017年第02期摘要：为了研究谷甾醇（sitosterol）暴露对斑马鱼（Barchydanio rerio var）内分泌的干扰效应，通过不同浓度的谷甾醇（50、100、150、200μg/L）对雌性斑马鱼进行为期60 d的水浴暴露，同时设乙醇对照，分别于60 d后测定各组分雌性斑马鱼的生长指标，对部分组织进行切片观察，从组织病理学和毒理学方面评估谷甾醇暴露的毒性效应。
结果表明：在200μg/L谷甾醇暴露下，斑马鱼全部死亡，其他各浓度处理与对照组相比，除臀鳍数随谷甾醇浓度的增加呈现倒“U”型趋势，以及肝重随谷甾醇浓度的增加而上升外，其他各生长指标均不同程度受到抑制，抑制作用与暴露浓度呈明显的剂量效应。
此外，性腺指数（GSI）呈下降趋势，肝体指数（HSI）呈上升趋势，各组织切片也表现出明显的毒性反应。
因此，可初步判断谷甾醇对斑马鱼的生长发育和繁殖系统会产生较大影响。
关键词：谷甾醇；斑马鱼；暴露；生长繁殖中图分类号：S949 文献标识码：A 文章编号：1006-060X（2017）02-0074-06内分泌干扰物（Endocrinemsruptors chemicals，EDCs）是指能够干扰体内天然激素合成、分泌、传输、键合或清除的激素类似物，在环境中含量很低。
谷甾醇（sitosterol）是植物雌激素（Phytoestrogen，PE）类中一种最常见的内分泌干扰物，由于在牛皮纸或纸浆中的漂白污水中广泛检出而受到人们的关注。
研究表明，多种鱼类的发育异常与污水中的环境雌激素有关。
环境中的雌激素通过生物富集作用，造成鱼类生长发育迟缓、生殖器和性腺形态功能异常等。
其中，β-谷甾醇对血液中卵黄蛋白原水平、性别分化以及肝细胞病变程度均具有明显干扰效应，可使成熟精母细胞和精子的比例失衡。
斑马鱼（Barchydanio rerio vat）是辐鳍亚纲（Actinopterygii）鲤形目（Cypfiniformes）鲤形科（Cyprinidae）短担尼鱼属（Danio）的一种硬骨鱼。
寡义反核苷酸的设计及使用
Morpholino的设计及使用发育生物学家们（他们所使用的模型动物在遗传学方面的研究往往还不完善，当然有的动物已经研究得很完善了）所面临的很重要的问题之一是如何在生物体发育时期抑制他们所感兴趣的基因的活动——这样一来生物学家们就可以研究这个基因的正常的生物学功能了。
一项被广泛接受的方法是反义技术——尤其是反义寡核苷酸（morpholino，简称MO）技术。
在本文中，我们将简述该药物（指MO）的使用，并举例说明它们如何应用于发育机制的研究。
我们还将讨论怎样应用MO就会导致产生错误的结果——包括没能将目的基因靶向敲除，同时我们建议研究人员使用对照实验，这样就能对MO实验作出正确的解释。
简介为了理解发育早期的分子机制，发育生物学家们长期以来一直希望能有这样一种技术，即：可以在特定的发育时期、在特定的细胞中阻断特定的基因的表达。
这一目标目前还没有实现，尽管研究人员在小鼠胚胎上已经很接近这一最终目标了——他们使用的方法是靶向突变和Cre重组酶。
即便如此，仍有很多困难没有克服：试图干扰某一个基因的功能往往会对另一个基因产生不希望发生的“副作用”，而使用Cre重组酶则需要警惕Cre基因表达时所具有的潜在的毒性作用。
其它物种又如何呢？毫无疑问，对其它脊椎动物和无脊椎动物的研究已经深入到了研究在发育早期的基本机制的地步，而且与使用哺乳动物胚胎为研究对象相比，使用这些动物具有很多明显的优势——包括可接受性、成本、时间，此外这些动物本身就很令人感兴趣。
在所有这些动物中，目前都还没有建立常规的基因打靶技术。
尽管传统的遗传筛查技术在理解某一特定的过程方面具有不可估量的价值，但它既不能保证具体到特定的目的基因，也不能保证使生物体产生一种无效突变。
总之，研究人员需要一种能阻断基因功能的方法。
显性抑制方法有一定的应用价值，但不是最佳的选择。
最佳的选择是具备较高特异性的反义RNA 技术。
反义RNA技术不但可以用于脊椎动物，还可以应用于组织细胞中，而且它们在寻找新药方面正在发挥越来越大的作用。
斑马鱼作为研究营养与生长的模式生物：向水产鱼类的营养基因组学的研究提供参考
斑马鱼作为研究营养与发育的模式生物：为水产鱼类的营养基因组学的研究提供参考摘要斑马鱼是最普遍的用来研究毒理学、发育生物学、神经生物学和分子遗传学的模式生物。
人们提出把它当做一个可能的研究鱼类营养与发育的模型。
斑马鱼用于这一领域研究的好处是它们尺寸小、生殖周期短（12-14周）可以产出大量的卵。
后来有了大量的分子工具，同时可以通过基因分析获得相关信息，但是斑马鱼仍然在鱼类的营养基因组学的研究中当做模式生物使用。
作为模式生物，对其每一个特点的研究都是细微的，这是因为这些特点是用来推理几个生物过程是如何在相关生物身上发生的，同时为扩增我们在鱼类营养和发育机制方面的知识做出重大的贡献。
这篇综述的目的是展示斑马鱼在营养和发育方面的相关研究，从而说明斑马鱼作为研究鱼类营养基因组学的模式生物的价值。
我们特别强调斑马鱼中由营养因素导致的基因表达和遗传变异可以用来阐明水产养殖鱼类中的类似过程。
关键字：斑马鱼，发育，营养，营养基因组学，比较基因组学前言斑马鱼已经成为研究在个体发育、神经生物学分子遗传学研究的十分普遍的模式生物(Driever et al. 1994; Roush 1996; Bergeronet al. 2008)。
近来，人们提出在鱼类营养和发育的研究方面斑马鱼可以作为一种模式生物(Alestro m etal.2006; Dahm andGeisler 2006; De-Santis and Jerry 2007; Wright et al.2006; Johnston et al. 2008)。
人们一个主要的研究兴趣就是生长发育的特点。
因为这与水产养殖行业中，鱼类的生产量和可获取的利益密切相关(De-Santis and Jerry 2007)。
这些特点中，表型性状是基因控制的，但也取决于环境因素，这些因素中，又直接由营养条件影响(Moriyama et al.2000)。
基因研究工具的发展，使我们有机会去弄清楚数量性状相关的基因的变化，随着那些影响养殖生物生长特征的QTL基因座图谱的建立，在生长发育中鉴别候选基因变得非常有效的(Davis and Hetzel2000; Fjalestad et al. 2003; Reid et al. 2005; Aranedaet al. 2008; Lo Pestri et al. 2009; Dumas et al. 2010)。
甲基睾酮对斑马鱼成鱼的影响
3.4实验结论
通过此次实验，可以得出结论：甲基睾酮对斑马鱼的生长发育会产生一定的影响，而且导致斑马鱼的性发育受到影响，在一定程度上会影响成活率。对于斑马鱼性腺的影响具体为：甲基睾酮外源激素的使用，使卵巢发育受到一定程度的抑制，以至于使卵巢的结构变化明显，促进精巢的发育。
1.2实验方法：
1.2.1甲基睾酮饲料的配制
乙醇喷雾法：按照30μg/g剂量称取甲基睾酮溶于95%乙醇中，充分溶解后喷洒在饵料中，放入40℃烘箱中烤干。
1.2.2组别设计与处理方法
本实验设置四个组：实验一组，实验二组，空白对照组、阴性对照组。每组有30尾斑马鱼。
实验组用配置好的30μg/g甲基睾酮饲料饲喂，空白对照组用普通饲料饲喂，阴性对照组用95%乙醇饲喂，并且要定时适量的饲喂，看情况及时换水，处理一周，各组员按上午、下午各一次，观察鱼的活性，记录存活率，随机捞取10条斑马鱼称重，测量4条鱼的体长，均求取平均值记录一条鱼的体重和体长变化。
1材料与方法
1.1仪器和试剂：
1.1.1实验用鱼——斑马鱼
斑马鱼是一种小型热带观赏鱼。由于其具有个体小、产卵量大、繁殖周期快、体外受精、胚胎透明、突变表现性明显、易于观察、胚胎发育同步且发育速度快、饲养简便等优点，除了具有经济、观赏价值外，还以其自身独有的优势被广泛的应用与发育生物学、遗传学等领域的研究，有很高的科研价值和广泛的应用前景，也因此成为研究最广泛的脊椎动物模式生物之一。
3.2实验组结果
实验组一组和二组都用30μg/g甲基睾酮进行饲喂，结果见表三、表四，附图五、附图六。
器官发育过程中斑马鱼secl3基因之功能研究.doc
器官发育过程中斑马鱼secl3基因之功能研究第一章前言科学的发展大致可以分为三个时期：1) 16世纪以前的古代科学时期；2) 16-19世纪的近代科学时期；3)20世纪以来的现代科学时期。
16世纪以前的科学大都是描述性，经验性以及猜测性的，例如亚里士多德的《动物志》以及中国的阴阳五行说。
16-19世纪是以物理学和化学为主导的科学快速发展的阶段，这一时期产生了许多物理学和化学的重大发现，例如能量转化与守恒定律，麦克斯韦电磁理论，原子论以及元素周期表的确立。
生命科学的喊起也是从这个时期开始的，主要的发现有细胞理论的建立、遗传定律的发现和进化论的提出。
20世纪以来的科学强调系统性，目的性。
其结论的获得大都建立在全面而又缜密的实验基础上。
这一时期的科学重点逐渐从物理学和化学转向了生命科学。
生命的起源乃至多细胞生物的形成一直以来都是一个谜，不过随着生命科学的快速发展这个谜正被一步一步的揭开。
现在知道多细胞生物是从一个受精卵发育而来的。
但是，关于这个受精卵如何受精，如何发育，有多少基因和信号通路参与这一过程等问题都还没有得到完满的解答。
因此，寻求代表性的生物并以此为载体开展个体发育的研究便成为亟待解决的问题。
正是在这一需求和背景下，许多代表性的生物，即模式生物应运而生。
例如秀丽隐杆线虫，果绳，斑马鱼，爪蟾，鸡胚，小鼠以及植物学研究中常用到的拟南界，水稻和大麦。
模式生物由于其进化上的保守性以及实验上的可操作性，巳经逐渐成为科研人员用以回答生命问题和解释生命现象的重要工具。
斑马鱼Daniorerio)原产于印度，盂加拉国，是一种热带淡水鱼类。
不同于其他脊推模式生物，例如爪蟾，鸡胚以及小鼠，斑马鱼有其突出的优点：1)世代时间短；2)雌雄成鱼每周都可以交配产卵；3)每对雌雄成鱼交配产卵多，大概100?300粒；4)胚胎体外受精，体外发育；5)整个胚胎早期发育透明可见；6)许多生物化学，遗传学，发育生物学以及分子生物学的实验方法在斑马鱼身上极其容易实现；7)斑马鱼基因组测序也已基本完成。
斑马鱼的软骨发育及其矿化过程
清华大学毕业设计论文摘要斑马鱼，作为发育生物学研究的最佳脊椎动物模型，为人类的相关研究提供了重要的参考依据。
本文主要讨论了斑马鱼幼体的软骨，特别是脊椎软骨的发育过程及其软骨的超微结构特点。
为转基因、基因突变鱼类的研究提供了对比依据。
本文主要讨论了斑马鱼脊椎软骨的发育进程，以及软骨细胞特别是脊索旁软骨的排列，形貌，大小及其显微结构特点和中胚层分化的显微形貌。
斑马鱼脊椎软骨在配卵后2～3天开始发育，围绕在脊索周围，并逐渐向神经管和血管方向延伸。
斑马鱼脊椎软骨沿体节发育，腹部以前的体节在6天已基本分化为软骨细胞，并且随着时间的推移，沿体节向尾部方向的生骨节逐步分化为软骨细胞，在1个半月左右的时间，软骨组织的分化基本完成。
斑马鱼的软骨组织排列整齐，大多数细胞大小在5－20μm范围内。
斑马鱼的软骨组织为透明软骨，胶原纤维为II型胶原，没有典型的周期结构，含量很少。
在TEM的观察中发现，斑马鱼的肌肉组织分化较早，在3天已基本分化完成。
而体干部的脊索旁仍为中胚层的间叶细胞，为软骨细胞的原基，在分化成软骨细胞的过程中，首先是在形状和排列上趋于整齐和规则。
斑马鱼的骨化方式为软骨骨化。
软骨细胞的细胞质中富含大量的线粒体和内质网。
在细胞质中还有大量直径为100-400nm的囊泡，紧密排列在一起，起传输物质的作用。
此外，脊髓处的细胞，其细胞核较大，细胞质很少，有别于软骨细胞。
并且该处细胞有部分已死亡，被其它细胞所代替。
关键词：软骨细胞，发育，显微结构- 1 -清华大学毕业设计论文AbstractZebrafish provides an important referenced foundation for the relative research as the best pattern of vertebrate in developing biology. In this paper the process of development and the ultrastructure of the cartilage especially the parachordal cartilage in zebrafish larva are investigated . And that supply the contradistinctive basis for the research about transgenic and gene mutation fishes.Here we investigate the developing process of parachordal cartilage and chondrocyte arrangements,shapes ,size,and ultrastrcture .In zebrafish parachordal cartilage begin to form at 2-3 days postfertilization ,and surround the notochord and extend gradually to spinal cord and dorsal aorta. Parachordal cartilage develop along somite and at 6 days postfertilization the somite before venter have differentiated and all accomplish differentation on the whole about at one and a half month postfertilization .The chontrocytes arrange regular .The size of chontrocytes is between 5-20μm mostly. In zebrafish the cartilage is hyaline cartilage and the collagen fibrils is predominantly II type fibrils. And that are relatively thin and do not display the characteristic 67nm banding.We discovered that the differentiation of musculature is more earlier than cartilage by TEM and that accomplished basically at 3 days postfertilization. During the differentiation of cartilage the shape and arrangement of mesenchymal cell in mesoblast go to orderliness and regular gradually at first. With the electron microscope ,the active cartilage cell is seen to contain numerous slick endoplasmic reticulum,mitochondria and vesicles which arrange together in order and the diameter of these vesicles is about 100-400nm, transmitting the substance. Furthermore, the nucleolus of spinal cord cells is more larger and we also can observe that some cells have dead.Keywords : cartilage ,development, ultrastrcture- 2 -清华大学毕业设计论文第一章. 前言由于软骨细胞所致的成骨活动发生较早，所以对斑马鱼软骨发育的研究在骨损伤修复过程中对骨力学功能恢复有较大意义。
斑马鱼早期胚胎神经形成过程中SOD表达特点研究
摘 要： 为了解 以超氧化物歧化 酶（ｕ ｅｏｉｅｄｓ ｔｓ，Ｏ 为代表 的抗氧化酶系统在胚胎发育过程 中的建立及 Ｓ ｐｒｘ ｉ ａｅＳ Ｄ） ｄ ｍｕ 其对胚胎发育的影响 ， 通过免疫组化方法 ， 研究 了Ｓ Ｄ 斑马鱼早 期胚 胎发育神 经系统 中的表达特点 。结果表明 ， Ｏ在 在
体 节 分 化 的 不 同 时期 ，Ｏ 在 脊 索 、 经 管 、 ＳＤ 神 眼等 部 位 呈 不 同 程度 的表 达 ； 弓形 成 时 期 ，Ｏ 在 咽 弓 中表 达 微 弱 ， 脑 咽 ＳＤ 在
ห้องสมุดไป่ตู้
ｅ ｐ ｅ ｓｏ ｆＳ ｘ ｒ ｓ ｉｎ ｏ ＯＤ ｎ ｎｅ ｖ ｕｓ ｓ ｓｅ ｗａ ｂ ｅｖ ｒｎｇ ｅ ｒｙ ｅ ｉ ｒ ｏ ｙ ｔ ｍ ｓ ｏ ｓ ｒｅｄ ｄｕ ｉ ａ ｌ ｍｂｒ ｎ ｃ ｄ ｖ ｌｐｍｅ ｔｓａ ｅ ｕ ｉ ｍ ｍｕ —ｈ ｓｏ ｈｅ ｃ ｌ ｙｏ ｉ ｅ ｅｏ ｎ ｔ ｇ ｓｎｇ ｉ ｎｏ ｉｔｃ ｍｉａ
组织 中表达较强 ； 至孵化期 ，Ｏ 在终末器官 中的表达程度不 尽相 同， ＳＤ 其在大脑区域的表达略强于间脑 区域 。说 明在
斑 马鱼 早 期 胚 胎 神 经 形 成 过 程 中 ， 以Ｓ Ｄ 代 表 的抗 氧 化 酶 系 统 已经 开 始 逐 步 形 成 ，维持 胚胎 组 织 细 胞 中 活 性 氧 Ｏ 为 （ｏ ） Ｒ ｓ 的正 常 浓 度 ， 保 胚胎 正 常发 育 。 确 关 键 词 ： 马 鱼 ； 期胚 胎 ； Ｏ 表 达 斑 早 Ｓ Ｄ； 中图 分 类 号 ：９ ５１９ ￥６． ９ 文献标识码 ： Ａ 文 章 编 号 ：０ ２ ８ ６ （ ０ ０ １ — １７ ０ １０ — １１ ２ １ ）０ １ １— ４
Ｅｘ ｒ ｓ ｎ ｏ Ｕ ｒ ｘ ｅ ｄ ｓ ｕｔ ｓ ｕｒｎｇ ｔ ｅ ｄ ｖ ｌ ｐｍ ｅ ｌ ｐｒ ｓ ｍ ｆＳ ｐｅ ｏ ｉ ｉｍ ａ ｅ ｄ ｉ ｈｅ ｅ ｅｏ ｅ ｛ ＂ Ｏ ｌ Ｐｅ ｄｅ ｌ ｌ ｌ ｎｔＯ。
文献综述-斑马鱼及其应用
斑马鱼及其研究应用作者：杜颖指导老师：张源淑摘要：斑马鱼作为一种新兴的重要模式动物之一，体外受精、胚胎透明，因此可在显微镜下直接观察发育过程及检测药物引起的内脏组织变化，在生命科学领域中应用前景十分广阔。
斑马鱼体型小,适合高通量研究,还具有生长繁殖周期短及其与人类高度相似的基因组等优点，已经广泛用于人类疾病模型的建立、新药研发和药物的筛选，此外，斑马鱼还被应用于毒理学、发育生物学和遗传学等的研究。
因为斑马鱼对污染物反应灵敏，现已用于监测环境污染物及污水检测。
本文主要从几个方面对斑马鱼的研究进展进行了整理和归纳。
关键字：斑马鱼模式动物科学研究发育感染药物Zebrafish and Its ApplicationAbstract:Zebrafish as an important model animal emerging, its in vitro fertilization, transparent embryo, internal organs can be directly observed during the development and testing organ change caused by drugs under the microscope, has very broad application prospects in the field of life sciences. zebrafish also has a live, high-throughput, growth and short reproduction cycles and highly similar to the human genome, etc., it is widely used in modeling human diseases, drug screening, and secondly, zebrafish also is applied in toxicology research, developmental biology and genetics, etc.. Because of its sensitivity, it has been used to monitor environmental pollutants and water testing.This paper mainly from several aspects of zebrafish research progress has been collated and summarizedKey words:zebrafish Animal models Scientific research Development Infection Drug斑马鱼(Danio rerio)又名蓝条鱼、花条鱼、蓝斑马鱼、印度鱼、印度斑马鱼,产于孟加拉、印度东部、巴基斯坦、缅甸、尼泊尔等地,是一种常见的热带淡水硬骨鱼。
斑马鱼的性腺发育
斑马鱼的性腺发育
第2页
繁殖期，V期精巢
斑马鱼的性腺发育
第3页
III期精巢；小叶腔显著，初级精母细胞排列多层，百 分比尺示24μm
Sg，精原细胞；ScⅠ，初级精母细胞；ScⅡ，次级精母细胞；St， 精子细胞；Sz，精子；LL，小叶腔；LC，间质细胞；SC，支持细 胞；ST，精小囊
斑马鱼卵巢一对，左右两叶， 大个别对称；成熟卵巢呈囊 状，位于体腔内，外被由平 滑肌和结缔组织形成卵巢膜， 卵巢膜不发达。
卵巢位于腹中线两侧，在鱼 体后端汇合成一短输卵管， 进入泄殖腔，由泄殖腔开口 于体外。
卵母细胞直径、核径和核质 比在不一样时相中改变:
斑马鱼的性腺发育
•卵母细胞在Ⅱ时相增加不显著，在Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ时相期增加 快速 •胞核直径在Ⅱ时相增加快速，在Ⅲ时相中期、Ⅳ时相增加 迟缓，几乎没有改变 •核质比在第Ⅱ时相最大，伴随卵母细胞发育，核质比越来 越小
第9页
卵巢壁:由两层被膜组成， 外层为腹膜，内层为白膜。 白膜由外到内依次为扁平上 皮细胞、疏松结缔组织、间 质组织和生殖上皮。
产卵板:白膜中结缔组织向 卵巢内部伸展与卵巢生殖上 皮共同组成板层状结构，称 产卵板，是卵子产生地方。
卵巢腔:存在于卵巢内部空 腔，与输卵管相通。
SB产卵板
斑马鱼的性腺发育
在精小叶内由许多精小囊组成，伴随精巢发育，精小叶内各精小囊间 生精细胞发育不一样时，而在同一精小囊内生精细胞发育是同时。
精小叶中央为小叶腔，小叶腔在精巢内相互连接成网状，最终通到输 精管，精原细胞位于精小叶边缘处，在分化过程中，当生殖细胞在精 小囊内发育成为成熟精子时，精小囊破裂，成熟精子释放到小叶腔中， 各小叶腔内精子最终聚集到输精管内并可借助于输精管排出，所以成 熟精子只在小叶腔和输精管内存在。
实验三 斑马鱼促性腺成熟机器早期发育模式
第10次卵裂 中期囊胚转换
囊胚早期
囊胚中期 囊胚晚期
囊胚早期 囊胚中期
50％下包
囊胚晚期
Gastrula Period (5.3-10 h)
50％下包
Segmentation Period (10-24 h)
Pharyngula Period (24-48 h)
Hatching Period (48-72点
➢ 斑马鱼胚胎发育时期的记录【选取6个以上 不 同 时 期 的 胚 胎 照 片 ， 并 注 明 时 间 hours post-fertilization (hpf)、温度，并对发育过程 做一简单描述，如卵裂类型，原肠作用中的 细胞运动】
实验二 环境因子对斑马鱼胚胎发育的影响（
自主设计实验）
1. 每组选取以下其中一种环境因子
酒精， 洗衣粉，重金属离子（ZnSO4或GuSO4） 葡萄糖，阿斯匹林等
2。稀释到不同浓度（建议3-5个浓度梯度）， 以正常发育为对照，观察对斑马鱼胚胎发育的
影响。
提供如下母液：
• 洗衣粉：3%母液 • 酒精：20% • 重金属：1g/L • 阿司匹林1g/L • 葡萄糖：10g/L
Zygote Period (0-.75h)
——卵质向动物极流动，形成胚盘
2-cell
Cleavage Period (0.75-2.2 h)
—— 6次卵裂，15-20 min间隔分裂一次
4-cell
8-cell
Blastula Period (2.25-5.25 h) ——卵黄合胞体层(yolk syncytial layer, YSL) 、表胚层(enveloping layer, EVL)、深层细胞(deep cells)
金雀异黄素诱导斑马鱼肝细胞合成VTG的作用机理研究.pdf
ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｌｅｖｅｌ Ｗａｓ ｄｅｔｅｃｔｅｄ ｔｏ ｆｕｒｔｈｅｒ ｓｔｕｄｙ ｗｈｅｔｈｅｒ ｔｈｅ ｔｒａｎｓａｅｔｉｖａｔｉｏｎ ｏｆ ｖｔｇ ｗａｓ
－３－
ＥＲｆｌ，ｍｅａｎｗｔｆｉｌｅ ｔｈｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ＥＲｆｌ ｍＲＮＡ ｗａｓ １．９－ｆｏｌｄ．ｈｉｇｈｅｒ ｔｈａｎ ＥＲａ． （５）ＰＰＡＲｓ ｉｓ ａｌｓｏ ｔｈｅ ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｔａｒｇｅｔ ｆｏｒ ｇｅｎｉｓｔｅｉｎ．ｆｏｒ ｔｈｅ ｐｕｒｐｏｓｅ ｏｆ
ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅ ｗｈｅｔｈｅｒ ＰＰＡＲｓ ｐａｒｔｉｃｉｐａｔｅ ｉｎ ｔｈｅ ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ ｏｆ ＶＴＧ ｂｙ ｇｅｎｉｓｔｅｉｎ，ｔｈｒｅｅ
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金雀异黄素诱导斑马鱼肝细胞合成ＶＴＧ的作用机理研究
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本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究
成果。据我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已
经发表或撰写过的研究成果，也不包含未获得
斑马鱼：前脑控制行为驱动的社会定向
斑马鱼：前脑控制行为驱动的社会定向社交参与不足可诊断多种神经发育障碍，包括自闭症和精神分裂症。
像斑马鱼这样的遗传易处理动物模型可以对这些社会障碍背后的发展因素提供宝贵见解，但是这种方法的前提是能够准确，可靠地量化细微的行为变化。
同样，表征局部分子和形态表型需要了解社会行为的神经解剖学相关性。
我们利用斑马鱼中的行为和遗传工具来加深我们对社会行为的了解，并确定对推动其行为的重要大脑区域。
我们描述了成年斑马鱼对之间的视觉社会互动，并发现他们表现出一种刻板的定向行为，反映出社会的关注。
此外，在成对的鱼中，一个个体的定向行为是驱动另一个个体相同行为的主要因素。
我们使用人工和遗传损伤来研究前脑对这种行为的贡献，并确定了腹侧端脑中的神经元群，其消融抑制了社会互动，同时保留了其他运动和视觉行为。
这些神经元是胆碱能的，并表达编码小鼠前脑胆碱能神经元所需的转录因子Lhx8a的基因。
斑马鱼中鉴定出的神经元种群位于与哺乳动物前脑区域同源的区域，该区域涉及社会行为。
我们的数据表明，进化上保守的神经元群体控制了斑马鱼的社会定向。
斑马鱼的社会互动：成年斑马鱼在野外和实验室都有很强的聚集和学习的动机。
由于斑马鱼具有这种天生的社交能力，因此它越来越成为了解影响社会行为的潜在遗传和发育机制的流行模式。
当斑马鱼成对居住时，它们表现出类似于平行游动和转向伴侣的行为。
众所周知，斑马鱼会根据社会刺激的参数（如数量、位置和速度）来改变它们的行为，这些社会互动在多大程度上是由同一特定刺激的行为所驱动的，这还不清楚。
现有指标（例如距特定对象的距离）可能对社交互动的更细微部分的中断（例如行为刺激的重要性）不敏感。
为了解决这个缺点，我们设计了一个严格的视觉测试来诱导社会行为，它由一个单独的容器和一块电致变色膜组成，，电致变色膜可以从不透明变为透明。
我们在成年鱼身上发现了一种刻板的定向模式，类似于先前在幼鱼身上描述的行为，这种现象发生在个体鱼受到社会刺激时出现，即邻近鱼缸中的鱼。
斑马鱼在发育生物学中的应用
斑马鱼在发育生物学中的应用作为一种小型、容易繁殖和生命周期短的鱼类，斑马鱼越来越被广泛应用于不同领域的研究中，尤其是在发育生物学中的应用越来越受到重视。
本文将从斑马鱼的发育特点、基因篡改技术以及在生物医学和药物研究中的应用等方面进行探讨。
一、斑马鱼的发育特点斑马鱼在人类疾病模型建立、药物筛选等研究中被广泛使用，其主要原因是该种鱼对外界环境的敏感性高，且其胚胎发育过程与人类相似。
斑马鱼的生长速度较快，从受精卵到成年仅需3个月左右。
同时，斑马鱼的生殖能力也很强，每对成年斑马鱼每天能产生1000个卵子以上。
这使得研究人员在斑马鱼身上进行大量实验成为可能。
此外，斑马鱼也具有一些特殊的发育特点，如胚胎的透明度和快速发育过程，使得观察其发育过程更加容易。
此外，在分子生物学技术方面，斑马鱼的基因组已经被完整测序，且其基因组大小与人类相似，这意味着斑马鱼可以作为人类基因的模型研究。
二、基因篡改技术在斑马鱼的研究中，基因篡改技术是一项必不可少的技术，这些技术能够使研究人员将特定的基因进行特定的修改，从而调控其在斑马鱼生长发育过程中的表达。
基因转录研究中，两个特定的基因一旦发生拼接错误，往往会导致人类疾病的发生。
通过基因篡改技术可以模拟这些基因的突变，并进一步了解其发育过程的细节。
同时，基因篡改技术也能够将人类基因表达到斑马鱼体内，使得斑马鱼成为人类基因表达的一个模型。
目前，有两种主要的基因篡改技术被广泛使用。
一种技术是利用ZOETI 或CRISPR-Cas9系统进行基因修饰，另一种则是通过转基因鱼、或者利用微注射等技术来实现基因篡改。
三、斑马鱼在生物医学和药物研究中的应用1. 斑马鱼在药物研究中的应用斑马鱼在药物研究中可以扮演重要角色。
其快速发育和繁殖的特点，使得微观变化较容易观察，更重要的是，斑马鱼的发育过程在各方面与人体极其相似，因此用斑马鱼进行动物实验相对于小鼠等动物而言更加便捷。
例如，研究者可以利用斑马鱼从多个维度验证某一特定类药物的有效性和安全性。
斑马鱼胚胎胚盾特异表达基因的鉴定
斑马鱼胚胎胚盾特异表达基因的鉴定万传璐;闫一芳;曹羽;王强【摘要】Objective During zebrafish gastrulation, dramatic movements rearrange cells into three germ layers and contribute to the formation of the shield organizer, which acts as a dorsal signal center to pattern the body axis.Global identification of shield organizer-specific genes in early gastrulas will be valuable for studying the regulatory cascades during organizer formation and body axis establishment.Methods Tg( gsc:GFP) transgenic embryos express GFP in the shield organizer, which is controlled by a 1.8 kb gsc promoter.Flow cytometry technology and RNA deep sequencing analysis were applied to isolate GFP positive cells from theTg( gsc:GFP) transgenic embryos and systematically uncover the genes highly expressed in the dorsal organizer.Subsequently, the expression of shield organizer-specific genes was further con-firmed by quantitative real-time PCR and whole mount in situ hybridization method during zebrafish embryonic develop-ment.Results GFP-positive cells exceeding 96%purity were isolated from shield-stage Tg(gsc:GFP) transgenic embryos and 657 organizer highly expressed genes were identified through RNA deep sequencing analysis.The results of in situ hy-bridization experiments revealed that a number of genes including KIAA1324, ripply1, twist2, isthmin1, nme4, zgc174153 and rrbp1b were expressed in shield organizer during zebrafish gastrulation.Conclusions The identification of these shield organizer-specific genes in the current study provides useful clues toexplore the zebrafish developmental functions in further studies.%目的：由于原肠期细胞的剧烈运动，在斑马鱼胚胎的背侧汇聚形成了称为胚盾（ shield organizer）的结构，是胚胎发育的信号组织中心，在背腹轴建立和胚层诱导过程中具有关键作用。
斑马鱼骨骼生长调节机制的研究
斑马鱼骨骼生长调节机制的研究斑马鱼作为一种热带淡水鱼类，近年来备受生命科学研究者的关注。
由于其短的生命周期、易于繁殖以及高度的遗传同质性，斑马鱼成为了许多生物和医学研究的模型生物之一。
在这其中，研究斑马鱼骨骼生长调节机制具有特别的重要性。
骨骼生长调节主要由内分泌和生长因子两大类调控，内分泌包括甲状腺激素、抗生素、皮质醇以及性激素等，而生长因子主要涉及到胰岛素样生长因子、成骨细胞分泌的骨形态发生蛋白、成纤维细胞生长因子以及促排卵素等。
在众多内分泌和生长因子中，骨形态发生蛋白(opg)是一种热门的研究对象。
该蛋白基因位于13号染色体，由3个外显子和2个内含子组成。
Opg是一个9.8kDa的膜蛋白，分子量约为60kDa，具有抑制成骨细胞向骨表面膜下沉积钙盐的作用。
Opg在人体内的分布位置非常广泛，包括骨骼、肺、肠道、心室和淋巴结等。
近年来研究发现，Opg还可促进肿瘤细胞到达骨骼，从而导致肿瘤的骨转移。
这使得Opg在骨骼发育和肿瘤治疗领域具有广泛的应用前景。
早在20世纪90年代初期，科学家就发现斑马鱼的骨骼结构与人类相似，且其骨骼的生长与发育时间表也非常接近。
近年来，研究人员利用这一模型生物，探究了斑马鱼骨骼生长调节机制中Opg的作用。
研究表明，斑马鱼的骨骼生长调节精确控制，其中内分泌和生长因子共同调节了骨组织的营养供应和骨骼再生过程。
Opg作为一种关键的生长因子，通过抑制骨吸收细胞中的受体激活因子Kb-RANKL信号通路，抑制了骨吸收细胞的活性，从而促进了骨形态的发生和修复。
同时，研究发现当胚胎斑马鱼受到X射线辐射后，其骨骼发育时间表和生长速率远低于未受到辐射的斑马鱼，而给予Opg处理后，骨骼的生长速率得到了显著的恢复。
除了研究Opg的作用外，还有其他很多因子在斑马鱼骨骼的发育和生长调节中也发挥着重要的作用。
例如，最近一项研究利用斑马鱼作为模型生物，发现了一种新型的生长因子Fibroblast growth factor 23（Fgf23），它通过调节磷酸盐的平衡，影响了骨骼的生长发育。
斑马鱼胚胎发育时期
斑马鱼胚胎发育的分期CHARLES B. KIMMEL, WILLIAM W. BALLARD, SETH R. KIMMEL等原著俄勒冈大学神经生物学学院；达特茅斯学院生物系黄万旭译浙江大学生命科学学院摘要：我们对斑马鱼（zebranfish, Danio rerio）胚胎发育的分期作了一系列的阐述。
我们定义了胚胎发育的七段时期（period）——合子（zygote）、卵裂（cleavage）、囊胚（blastula）、原肠（gastrula）、分节（segmentation）、咽囊（pharyngula），以及孵化期（hatching period）。
这一划分强调了发生于受精后头3天的主要发育过程中的变化情况，同时我们也回顾了发生于每一时期的诸如形态发生及其他主要事件。
时期的下一划分单位是分期（stage）。
各分期都有名称，而非标号，反映了分期序列的灵活性和持续演变过程，因为我们从这一物种中还能得到更多。
各分期的命名是基于用解剖立体显微镜（dissecting stereomicroscope）观察活体胚胎所容易观察到的形态学特征为依据的，同时也充分利用了活体胚胎的透明性，这一性质使我们可以用组合显微镜（compound microscope）和Nomarski干涉相差照明（Nomarski interference contrast illumination）观察到即使很深层的结构。
显微照相（photomicro-graphs）和组合显微描图（composite camera lucida line drawings）则以图片刻画了每一分期。
此外还有一些图像则显示了发育过程中一些可用作分期辅助标志的显著特征。
关键词：斑马鱼，形态发生，胚胎发生，合子，卵裂，囊胚，原肠，分节，咽囊，孵化精品目录概述 (2)全文组织结构 (3)步骤 (5)温度与标准发育时间 (13)合子期（0-0.75h） (15)卵裂期（0.75-2.25h） (15)囊胚期（2.25-5.25h） (20)原肠期(5.25-10h) (28)体节期（10-24h） (37)咽囊期（24-48h） (56)孵化期（48-72h） (71)早幼期 (80)谢辞 (80)感谢下载载概述概述分期为发育研究提供了准确度。
斑马鱼性腺促熟及早期发育模式
年月日姓名：专业年级：同组者科目：发育生物学实验题目：斑马鱼性腺促熟及早期发育模式一【目的要求】1、通过实验操作掌握斑马鱼性腺促熟和产卵调控技术2、通过斑马鱼早期发育的观察，巩固对硬骨鱼胚胎发生的认识二【实验材料】（一）器材培养缸、控温棒、解剖镜、显微镜(二)试剂经太阳晒过至少一天的自来水（三）动物斑马鱼（Danio sp.）三【实验内容】（一）亲鱼培育和性腺促熟挑选体长大于4厘米的斑马鱼放养于鱼缸中，水温保持在28℃左右，放养数量根据鱼缸中水体体积而定，密度5尾\L左右。
饲喂亲鱼用的饲料有活性饲料和配合饲料两种，直接购自于观赏鱼市场，要求每天投喂4次，及时清除残饵，隔天换水，快到繁殖季节时将雌雄分养，加强管理。
（三）繁殖繁殖前一天中午，将雌雄合养于繁殖缸里，要求雌雄比例为2:1。
由于斑马鱼有食卵的习性，为防止亲鱼吞噬鱼卵，可用网孔为2-3毫米的网将亲鱼限制在繁殖缸的上半部活动，以防止亲鱼吞吃鱼卵。
一般次日凌晨到中午可以产卵和受精，受精卵便沉降于缸底，将繁殖后的亲鱼及时转移至别的培养缸中，吸取缸底受精卵，剔除异物以及眼观有白色小斑点、畸形异常卵。
（三）斑马鱼胚胎发育模式孵化期间，培养用水温度控制在25-28℃，每天要及时清除败育卵，并换水1-2次。
按时观察记录斑马鱼胚胎的早期发育过程，绘制斑马鱼的胚胎发育模式图。
1、受精卵：斑马鱼的卵呈圆球形，橙黄色、微透明，直径0.8-0.9 mm。
在水中，受精卵卵膜(壳膜)迅速膨胀，出现透明的卵周隙，在壳膜上可以看到呈漏斗状的卵膜孔。
2、卵裂：卵子受精后，细胞质迅速向动物极流动，并集中形成帽状的胚盘。
卵裂即在胚盘范围内进行，卵裂属于不全裂，盘状卵裂。
第一次分裂为经裂，分裂沟自上而下，但不到达底部，结果分为两个相等的不完整分裂球。
第二次分裂仍为经裂，分裂面与第一次垂直，仍是不完全分裂，于是分成大小相似的四个分裂球。
第三次分裂亦为经裂，两个分裂面在第一次分裂面两侧，并与第一次分裂面平行，形成两排，每排四个，共八个分裂球。
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goosecoid在斑马鱼早期发育中的作用
Wnt/β catenin信号通路在早期胚胎发育中起到非常重要作用,它调控胚胎背腹图式发生。
goosecoid(gsc)基因是经典Wnt信号通路的下游靶基因之一,同时对Wnt信号起负反馈抑制作用。
之前报道中,gsc在小鼠和人中突变之后都会产生骨骼发育不全等症状,而目前关于gsc在斑马鱼中的具体生理功能还不是很清楚。
之前研究表明,用吗啡基-吗啉基技术(Morpholino,MO)敲低斑马鱼gsc,无明显缺陷。
MO由于其作用时间短的限制,不能很好的研究基因在后期发育中的功能。
而近年来的出现的基因编辑技术如TALENs,有着靶向高,操作方便的优点,成为可以用于基因功能的研究的新工具。
为了研究gsc在斑马鱼中的具体功能,我们利用TALENs技术,构建了斑马鱼gsc突变体模型,用于研究gsc在斑马鱼中的早期发育中的作用。
得到的结果如下:(1)利用TLANEs技术敲除斑马鱼gsc,筛选得到移码缺失7bp的突变体。
(2)gsc杂合突变体自交结果显示,突变体早期无明显背腹缺陷,但发育至受精后第五天(5 dpf)时,鱼鳔发育缺陷。
测序表明鱼鳔缺失个体为纯合突变体,经统计其占全部胚胎的21%。
表明gsc 突变与鱼鳔缺陷是相关的。
(3)对gsc突变体进行石蜡切片及苏木精伊红(HE)染色,结果显示,突变体鱼鳔结构存在。
(4)gsc突变体中,鱼鳔标记基因hb9原位杂交结果显示,鱼鳔发生未受到影响。
表明突变体鱼鳔结构正常,但未充气。
(5)充气由口、咽、鳔管等多个器官协调完成,而gsc后期特异表达在咽部。
gsc突变体咽部软骨阿尔新蓝染色,及石蜡切片,苏木精伊红染色,结果均表
明突变体咽部结构正常。
表明gsc突变后,鱼鳔未充气不是咽部异常导致的。
(6)鱼鳔充气还受到神经调控,gsc后期表达在头部端脑和间脑,因此可能与鱼鳔充气有联系。
利用LiCl处理野生型胚胎,发育至第五天时,头部端脑和间脑缺失,鱼鳔不充气。
结果表明,头部神经缺失会导致鱼鳔不充气。
进一步工作需要证明gsc突变体头部神经是否异常,这样就能建立gsc突变后,头部神经缺失从而导致鱼鳔不充气的联系。