实验化脓性球菌的分离鉴定 ppt课件
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化脓性球菌PPT课件
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3.抗原构造
➢ 核蛋白抗原：又称P抗原。无特异性。 ➢ 多糖抗原：又称C抗原。系群特异性抗原，是细
胞壁的多糖组分。 ➢ 蛋白质抗原：又称表面抗原。具有型特异性，
位于C抗原外层。与致病性有关的是M抗原。
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4.分类
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链球菌
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2.培养特性
➢ 营养要求较高。普通培养基中需加有血液、血 清、葡萄糖等才能生长。
➢ 在血清肉汤中易形成长链，管底呈絮状沉淀 ➢ 血琼脂平板上形成灰白、光滑、园形突起微小
菌落，不同菌株有不同溶血现象。
溶血素O：对氧敏感。抗原性强，感染后2～3周， 85%以上病上产生抗“O”抗体，病愈后可持续数月甚至数 年，可作为新近链球菌感染，或可能风湿活动的辅助诊断。
溶血素“S” ：对氧稳定，无抗原性。对热和酸敏感。 血平板所见透明溶血是由“S”所引起。
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（3）侵袭性酶类
➢ 1）透明质酸酶：能分解细胞间质的透明质酸，使组织疏 松，易于病菌扩散。又称为扩散因子。
发热、咳嗽、胸痛、咳痰为铁锈色。 ➢ 正常人群一般不致病，只能形成带菌状态，当机
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二、链球菌属
➢ 是化脓性球菌的另一类常见的细菌，广泛存在 于自然界和人及动物粪便和健康人鼻咽部。
➢ 引起疾病 ✓化脓性炎症、猩红热、新生儿败血症、细 菌性心内膜炎 ✓风湿热、肾小球肾炎等超敏反应性疾病
常见病原菌：化脓性细菌ppt课件
❖ 根据有无凝固酶 ▪ 凝固酶阳性 ▪ 阴性葡萄球菌
❖ 噬菌体分型 ▪ 凝固酶阳性葡萄球菌可分为4个噬菌体群和23个型
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三种葡萄球菌比较
主要性状
金葡菌
色素
金黄色
甘露醇发酵
+
血浆凝固酶
+（－）
Α溶血素 耐热核酸酶 磷壁酸类型 噬菌体分型
蛋白A 致病性
+ + 核糖醇型 能 + 强
新生霉素
敏感
侵袭性疾病
化脓性炎症
-皮肤软组织感染
-内脏器官感染
毒素性疾病 -全身感染
-食物中毒
-烫伤样皮肤综合征
-毒性休克综合征
-假膜性肠炎
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（二）葡萄球菌所致疾病 1.侵袭性疾病（化脓性感染） ： 局部化脓性炎症：如疖、毛囊炎、痈、伤口化脓
病灶较为局限且脓汁黏稠。 内脏器官感染：如肺炎、脓胸、中耳炎、脑膜炎、心包炎、心 内膜炎等。 全身感染：如败血症、脓毒血症等。
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2．所致疾病
2.产生表皮剥脱毒素，引起
烫伤样皮肤综合征等。患
者皮肤呈弥漫红斑、起皱继而 形成水泡，最后表皮上层脱落。
3.金黄色葡萄球菌的某些菌
株可产生毒性休克综合征
毒素-1，导致毒性休克综
合征
急性高热、低血压，严重者出现休 克。患者多为年轻妇女月经期使用 月经塞者，也见于儿童、绝经期妇 女和男性。
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微生物学检查法
标本 脓汁、血液、剩余食物、呕吐物等
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血浆凝固酶
概念 意义
使含有抗凝剂的人或兔血浆发生凝 固的酶类物质
❖ 噬菌体分型 ▪ 凝固酶阳性葡萄球菌可分为4个噬菌体群和23个型
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三种葡萄球菌比较
主要性状
金葡菌
色素
金黄色
甘露醇发酵
+
血浆凝固酶
+（－）
Α溶血素 耐热核酸酶 磷壁酸类型 噬菌体分型
蛋白A 致病性
+ + 核糖醇型 能 + 强
新生霉素
敏感
侵袭性疾病
化脓性炎症
-皮肤软组织感染
-内脏器官感染
毒素性疾病 -全身感染
-食物中毒
-烫伤样皮肤综合征
-毒性休克综合征
-假膜性肠炎
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（二）葡萄球菌所致疾病 1.侵袭性疾病（化脓性感染） ： 局部化脓性炎症：如疖、毛囊炎、痈、伤口化脓
病灶较为局限且脓汁黏稠。 内脏器官感染：如肺炎、脓胸、中耳炎、脑膜炎、心包炎、心 内膜炎等。 全身感染：如败血症、脓毒血症等。
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2．所致疾病
2.产生表皮剥脱毒素，引起
烫伤样皮肤综合征等。患
者皮肤呈弥漫红斑、起皱继而 形成水泡，最后表皮上层脱落。
3.金黄色葡萄球菌的某些菌
株可产生毒性休克综合征
毒素-1，导致毒性休克综
合征
急性高热、低血压，严重者出现休 克。患者多为年轻妇女月经期使用 月经塞者，也见于儿童、绝经期妇 女和男性。
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微生物学检查法
标本 脓汁、血液、剩余食物、呕吐物等
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血浆凝固酶
概念 意义
使含有抗凝剂的人或兔血浆发生凝 固的酶类物质
化脓性球菌ppt课件
▪ 阴性
DNA的相关性程度
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Staphylococcus
❖ 抵抗力 ▪ 强于其他无芽胞菌 ▪ 干燥脓汁、痰液中存活2-3个月 ▪ 加热60℃1h或80℃30 min才被杀死 ▪ 耐盐性强 ▪ 对碱性染料敏感 ▪ 对青霉素敏感，但易产生耐药株
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Staphylococcus
❖ 抗原结构 ▪ 荚膜抗原 ▪ 多糖抗原 ▪ 葡萄球菌A蛋白（SPA）
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Staphylococcus
❖ 毒性休克综合征毒素-1（TSST-1） 引起机体发热，增加对内毒素的敏感性 可引起多个器官系统的功能紊乱或毒性休克综合征（TSS）
❖ 表皮剥脱毒素 引起烫伤样皮肤综合征（staphylococcal scalded skin syndrome，SSSS）
肠毒素检查
幼猫试验
ELISA法
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Staphylococcus
直接涂片染色镜检：观察细菌形态、排列、染色性
标本
观察菌落性状、溶血性、色素
血琼脂平板
涂片、染色、镜检
培养 挑取可疑菌落 生化反应测定
纯培养
致病性测定
（凝固酶、耐热核酸酶）
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Staphylococcus
五、防治原则 ❖ 注意个人卫生，改善环境卫生，防止食物中毒。 ❖ 选用敏感抗生素，根据病情及药敏合理用药。 ❖ 医务人员工作中应严格注意无菌操作，防止医院内感
染。 ❖ 反复发作的疖病患者可试用自身疫苗。
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-
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第二节 链球菌属
Streptococcus
化脓性球菌教学课件ppt
01
02
03
蛔虫
咳嗽、喘息、呼吸困难、 胸痛
阿米巴虫
腹泻、腹痛、黏液脓血便
钩虫
贫血、消瘦、消化不良、 食欲减退
04
化脓性球菌的治疗方法
抗病毒治疗
总结词
采用抗病毒药物，如阿昔洛韦、泛昔洛韦等，可有效抑制病毒的复制和扩散。
详细描述
针对病毒感染，应尽早使用抗病毒药物，如阿昔洛韦、泛昔洛韦等，可有效抑制 病毒的复制和扩散，减少病毒对细胞的破坏，从而控制病情发展。
化脓性球菌教学课件ppt
xx年xx月xx日
目 录
• 介绍化脓性球菌 • 化脓性球菌的传播途径 • 化脓性球菌的感染症状 • 化脓性球菌的治疗方法 • 化脓性球菌的预防措施
01
介绍化脓性球菌
化脓性球菌的种类与特征
种类
化脓性球菌是一类常见的革兰氏阳性球菌，包括多种不同的 种类。
特征
化脓性球菌的细胞壁厚，肽聚糖含量高，具有较强的抵抗宿 主免疫系统的能力。
接种肺炎球菌疫苗可以有效预防肺炎球菌感染，建议高危人群前 往接种。
接种流感疫苗
接种流感疫苗可以预防流感病毒的感染，建议老年人、儿童、孕 妇和慢性病患者前往接种。
接种其他疫苗
根据个人情况和医生建议，可以考虑接种其他相关疫苗，如B型 流感嗜血杆菌疫苗、脑膜炎球菌疫苗等。
THANKS
谢谢您的观看
空气传播
呼吸道传播
化脓性球菌可以通过呼吸道飞沫、气溶胶等传播方式，在空气中长时间漂浮，易 感者若吸入这些含有病菌的飞沫，即可被感染。
空气尘埃传播
化脓性球菌可附着在尘埃颗粒上，通过空气流动传播，使易感者吸入后感染。
接触传播
直接接触传播
化脓性球菌可以通过人与人之间的直接接触传播，如握手、 拥抱等，造成病菌的传播。
化脓性球菌精选幻灯片
凝固酶阴性葡萄球菌(P102)
所致疾病（医源性感染的常见病原菌）
泌尿系感染 （仅次于大肠杆菌） 细菌性心内膜炎 败血症 （仅次于大肠杆菌和金葡菌） 术后及植入器械感染
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病例讨论
20岁，男性，工人。右手指碰伤伴有化脓性炎症， 破损后第6天出现发热、烦躁、腹痛，血压50/30mmHg， 皮肤呈猩红热样皮疹，间有出血点。当即进行抗休克治疗， 抽血培养，金黄色葡萄球菌阳性。第10天右膝关节肿痛， 抽出黄色脓液，金黄色葡萄球菌阳性，凝固酶实验阳性。 经抗生素治疗后好转。
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生物学性状 (P104)
革兰阳性，球菌，链状排列、有荚膜 培养特性：营养要求较高 血平板培养： α、 β溶血 生化反应： 甲链与肺炎球菌区别： 胆汁溶菌实验-
菊糖分解实验-
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防治原则
防 传 染 源：猩红热 隔离治疗
传播途径：保护皮肤黏膜、消毒 器械敷料
治 即时彻底治疗急性咽峡炎、扁桃体炎
丙型链球菌( γ-streptococcus)：
无溶血环，一般不致病
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不完全溶血
完全溶血
不溶血
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根据抗原结构分类 分20个群：A、B、C……. 对人致病的90%属A群
群别与溶血性间无平行关系
对人致病的A群链球菌多数呈现β溶血
根据生化反应分类 肺炎链球菌
草绿色链球菌
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毒 素：外毒素
肺炎链球菌溶素O：似SLO 溶解红细胞 活化补体经典途径 引起发热、炎症、组织损伤
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来源： 正常人口腔、鼻咽部带菌 机体免疫力下降时致病
化脓性球菌的分离鉴定
产生红色即为阳性，则该菌为A群链球菌；否则，该菌非A群链球菌。
A群链球菌的防治原则
A群链球菌
主要通过飞沫传播，应对病人和带菌者及时治疗，以减少传染源。另 外，还应对空气、器械和敷料等消毒。对急性咽喉炎和扁桃体的病人， 尤其是儿童，须彻底治疗。以防止急性肾小球炎、风湿热和亚急性细菌 性心内膜炎的发生。首选药物为青霉素G。
葡萄球菌的鉴定
2.生化反应检测
2.1 血浆凝固酶试验
原理：金葡菌能产生血浆凝固酶，可使血浆中可溶性的纤维 蛋白原变为不溶性的纤维蛋白，结合型血浆凝固酶附着于细菌 表面，在玻片上形成凝块；游离型的血浆凝固酶则可使试管中 的血浆发生凝固；
方法步骤（玻片法）：在在玻片两端各滴生理盐水1d，取肉 汤培养菌液与生理盐水混匀，在其中一端的菌液中滴加兔血浆 1d混匀，观察结果。因致病性葡萄球菌能产生血浆凝固酶，可 凝固兔血浆，故如血浆中明显小凝块出现，而生理盐水中无此 现象者为阳性，若血浆中无凝块时为阴性。
A群链球菌的鉴定
3.2 吡咯烷酮试验（PYR）检验方法
原理：特异检验A群链球菌氨基肽酶 方法步骤： • 用PYR缓冲液A液浸润PYR测试条末端滤纸； • 用接种环从适合的琼脂培养基上挑取可疑待测菌落，在末端滤纸上
涂抹开或直接蘸取菌落； • 放置于密闭容器；35℃±2℃，孵育5min~10min； • 滴加一滴PYR缓冲液B液至末端涂抹细菌处，观察是否有红色产生。
化脓性炎症是临床上常见病。但是除了 病原性球菌外，其他微生物也可以引起化脓 性感染。
常见的标本有脓汁、咽拭子、痰液、血 液、脑脊液等。
本次实验以脓汁标本进行病原性球菌的 分离鉴定。
脓汁中病原球菌的查程序
涂片： 革兰氏染色
血琼脂平板 （分离培养）
A群链球菌的防治原则
A群链球菌
主要通过飞沫传播，应对病人和带菌者及时治疗，以减少传染源。另 外，还应对空气、器械和敷料等消毒。对急性咽喉炎和扁桃体的病人， 尤其是儿童，须彻底治疗。以防止急性肾小球炎、风湿热和亚急性细菌 性心内膜炎的发生。首选药物为青霉素G。
葡萄球菌的鉴定
2.生化反应检测
2.1 血浆凝固酶试验
原理：金葡菌能产生血浆凝固酶，可使血浆中可溶性的纤维 蛋白原变为不溶性的纤维蛋白，结合型血浆凝固酶附着于细菌 表面，在玻片上形成凝块；游离型的血浆凝固酶则可使试管中 的血浆发生凝固；
方法步骤（玻片法）：在在玻片两端各滴生理盐水1d，取肉 汤培养菌液与生理盐水混匀，在其中一端的菌液中滴加兔血浆 1d混匀，观察结果。因致病性葡萄球菌能产生血浆凝固酶，可 凝固兔血浆，故如血浆中明显小凝块出现，而生理盐水中无此 现象者为阳性，若血浆中无凝块时为阴性。
A群链球菌的鉴定
3.2 吡咯烷酮试验（PYR）检验方法
原理：特异检验A群链球菌氨基肽酶 方法步骤： • 用PYR缓冲液A液浸润PYR测试条末端滤纸； • 用接种环从适合的琼脂培养基上挑取可疑待测菌落，在末端滤纸上
涂抹开或直接蘸取菌落； • 放置于密闭容器；35℃±2℃，孵育5min~10min； • 滴加一滴PYR缓冲液B液至末端涂抹细菌处，观察是否有红色产生。
化脓性炎症是临床上常见病。但是除了 病原性球菌外，其他微生物也可以引起化脓 性感染。
常见的标本有脓汁、咽拭子、痰液、血 液、脑脊液等。
本次实验以脓汁标本进行病原性球菌的 分离鉴定。
脓汁中病原球菌的查程序
涂片： 革兰氏染色
血琼脂平板 （分离培养）
化脓性球菌的鉴定流程
化脓性球菌的鉴定流程化脓性球菌可是一群调皮的小坏蛋呢，要是在咱们身体里捣乱，那可就得好好把它们鉴定出来，然后想办法对付它们啦。
一、标本采集。
这就像是抓特务，得先找到它们的踪迹呀。
可以从不同的地方采集标本呢。
如果是皮肤上的化脓性感染，那就从脓汁入手呗。
要是怀疑是呼吸道感染跟化脓性球菌有关，那痰液就是我们要找的宝贝啦。
要是泌尿系统被它们盯上了，尿液标本可不能少。
采集标本的时候一定要小心哦，就像对待稀世珍宝一样，要是不小心污染了，那后面的鉴定可就麻烦啦。
二、直接涂片染色镜检。
把采集来的标本放在载玻片上，就像给小坏蛋们拍照一样。
革兰染色是个很常用的方法哦。
如果看到革兰阳性的球菌，而且是成串或者成堆排列的，那葡萄球菌就很可疑啦。
要是看到革兰阳性、成双排列的球菌，那肺炎链球菌可能就在其中哦。
还有革兰阴性的双球菌，像咖啡豆一样的，那脑膜炎奈瑟菌或者淋病奈瑟菌就有嫌疑啦。
这一步就像是初步筛选，把嫌疑最大的几个家伙先挑出来。
三、分离培养。
不管是哪种可疑的化脓性球菌，都得让它们在适合自己的环境里生长，这样才能看清楚它们的真面目。
不同的化脓性球菌对培养基的要求可不一样呢。
比如说葡萄球菌，在普通的琼脂培养基上就能长得很不错。
肺炎链球菌就有点挑啦，得在血琼脂培养基上，还得有5% - 10%的二氧化碳环境，就像它是个娇贵的小宝贝一样。
把标本接种到合适的培养基上，然后就等着它们长成一个个小菌落啦。
四、生化试验。
等菌落长出来之后，就要开始对它们进行更深入的了解啦。
这就像是跟它们聊天，问它们一些特别的问题，看看它们怎么回答。
对于葡萄球菌来说，凝固酶试验是很重要的哦。
如果凝固酶阳性，那就是致病性的葡萄球菌啦。
肺炎链球菌呢，可以做胆汁溶菌试验，要是阳性的话，就更能确定是它啦。
还有其他的化脓性球菌，也都有各自的生化反应特点，就像它们各自有独特的个性一样。
五、血清学试验。
有些化脓性球菌，我们还得通过血清学试验来确定它们的身份呢。
比如说脑膜炎奈瑟菌和淋病奈瑟菌，通过血清学的方法，可以准确地知道是哪种血清型在捣乱。
血液标本中常见化脓性球菌的分离培养与鉴定一
会引起感染，如心内膜炎和血流感染等。
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分离培养与鉴定
表皮葡萄球菌在血平板上形成圆形、表面干燥、凸起、灰白色至棕色的
菌落。通过染色镜检和生化试验可对表皮葡萄球菌进行鉴定。
溶血葡萄球菌
生物学特性
溶血葡萄球菌为革兰氏阳性球菌，直径约1μm，常呈双排列。在固体培养基上生长的菌落直径约1mm，圆形、不透明， 边缘整齐，表面光滑、湿润、凸起、无色。
致病性
金黄色葡萄球菌是人类化脓感染中最常见的病原菌，可引起局部化脓感染，也可引起肺炎 、伪膜性肠炎、心包炎等，甚至败血症、脓毒症等全身感染。
分离培养与鉴定
金黄色葡萄球菌在血平板上形成圆形、表面光滑、湿润、凸起、不透明的菌落，菌落周围 可形成完全透明的溶血环。通过染色镜检和生化试验可对金黄色葡萄球菌进行鉴定。
接种工具
使用无菌接种环或针头将血液标 本接种到培养基上。
接种方法
将血液标本均匀涂布在培养基表面， 或用划线法接种，以促进菌落的生 长。
防止交叉污染
在接种过程中，要严格遵守无菌操 作规程，避免交叉污染。
培养条件
温度
化脓性球菌的生长需要适宜的温 度，一般为35-37℃。
湿度
保持培养箱内的湿度，以防止培 养基干燥。
致病性
溶血葡萄球菌可引起人类和动物感染，如尿道炎、前列腺炎、伤口感染和心内膜炎等。其致病力可能与产生毒素和其 他毒力因子有关。
分离培养与鉴定
溶血葡萄球菌在血平板上形成圆形、表面光滑、湿润、凸起、无色的菌落，菌落周围可形成完全透明的 溶血环。通过染色镜检和生化试验可对溶血葡萄球菌进行鉴定。
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血液标本中化脓性球菌的感 染与防治
血液标本中化脓性球菌的分离培养与鉴定是临床微生物学实验室的重要工作之一 ，对于及时诊断、治疗和预防疾病具有重要意义。
脓汁中球菌的分离与鉴定.ppt
甲型溶血 性链球菌
乙型溶血 性链球菌
丙型链球 菌
溶血现象 α溶血
溶血环的 特点血
2-4mm， 完全透明
致病强
无
无
无
甲链
乙链
丙链
肺炎双球菌
生物学性状：
G+ 双球菌,菌体呈矛头状 ,宽端
相对,尖端向外.有荚膜. 营养要求高,在含有血液或血
清的培养基中才能生长 最适温度为37度,最适pH为
7.4-7.8.
• 在 血琼脂平板上,菌落呈圆形稍扁,灰白色, 细小,半透明,直径0.5-1.5mm.α溶血环, 与甲型溶血性链球菌相似,孵育时间>48h, 菌落中央呈脐状下陷.
脑膜炎双球菌
生物学性状:
G肾形或豆形双球菌,两菌接触
面平坦或稍向内陷.
营养要求高,需在含有血清, 血液的培养基中才能生长.
• 2) 沙门菌和志贺菌只发酵葡萄糖,不发酵乳糖,分 解葡萄糖产的酸使培养基pH下降,酚红指示剂变
黄,但是培养基中的葡萄糖仅有0.1%,在斜面的
酸性物质被氧化成挥发性酸,且细菌氧化氨基酸 物质产生的氨的中和作用,是斜面变红,而底层则 为黄色.
双糖铁培养基的用途
• 用于观察细菌是否产生硫化氢及对糖的发 酵能力.
• 菌落特点: • 圆形,无色,半透明,中等大小
(四)常见培养基的特性
血琼脂平板
• 在普通琼脂培养基的 基础上加入血液制备 而成,是最常用的营养 培养基,可供营养要求 较高的细菌生长.
• 常用于分离培养和溶 血现象观察.
SS培养基
• 含有胆酸盐抑制G+, 枸橼酸钠和煌绿能部 分抑制大肠杆菌,致病 的沙门菌和志贺菌能 大量生长.
• 含有中性红指示剂和 乳糖,中性红遇酸变粉 红.
化脓性球菌PPT课件
㈡致病性 1.致病物质： ①血浆凝固酶： A.保护细菌的作用 B.可以依据葡萄球菌能否产生血浆凝固 酶来判定是否有致病性。 ②肠毒素：引起急性胃肠炎 2.所致疾病 ①侵袭性疾病：主要引起化脓性炎症
②毒素性疾病 ：食物中毒，发病率为首位 ③假膜性肠炎 ：菌群失调引起
㈢实验室检查 采取标本—染色---镜检或培养等---结果 ㈣防治原则 ⒈注意个人卫生。 ⒉加强食品卫生管理。 ⒊严格无菌操作防止医源性感染。 4.合理使用抗菌药物，根据药敏试验结果 选择药物。
㈡致病性 1.致病物质 ：M蛋白、致热外毒素、透明 质酸酶等。 2.所致疾病 ①化脓性感染： 引起化脓性炎症
②中毒性疾病： 猩红热（致热外毒素引起） ③超敏反应性疾病： 如急性肾炎、风湿热
㈢实验室检查 ㈣防治原则 三、肺炎球菌 主要的致病物质是荚膜，可引起大叶 性肺炎 四、脑膜炎球菌 经飞沫传播，引起流脑 五、淋球菌 经性接触传播、引起急性尿道炎，俗 称淋病
第五章
病性感染，可分为二大类： G+菌：葡萄球菌、链球菌、肺炎球菌
G-菌：脑膜炎球菌、淋球菌
一、葡萄球菌 ㈠生物学性状 1.形态与染色 球形、呈葡萄串状 、革兰氏阳性 2.培养特性 营养要求不高、可产生脂溶性色素
3.分类 产生色素不同，分为三种
①金黄色葡萄球菌： 产生金黄色色素 、致病菌 ②表皮葡萄球菌： 白色色素、条件致病菌 ③腐生葡萄球菌： 白色或柠檬色色素 、一般不致病 4.抵抗力： 较强，目前金黄色葡萄球菌对青霉素G的 耐药性高达90%以上。
二、链球菌 ㈠生物学特性 1.形态与染色： 菌体为球形或卵圆形，革兰氏阳性，呈链 状排列 2.培养特性：营养要求较高
3.分类 ： ①按溶血现象分类： A.甲型溶血性链球菌：条件致病菌 B.乙型溶血性链球菌：致病力强 C.丙型链球菌 ：一般无致病性
化脓性球菌的分离鉴定
球菌与正常血清感作的对照。 • iii.操作方法
试验时，取诊断试剂一滴和待检或已知菌苔或抗原置于玻片上，用白金环或玻棒 混匀，在数分钟内即可观察结果。如此为葡萄球菌，则凝集成清晰可见的颗粒。
葡防萄治球原菌的则防治原则
金黄色葡萄球菌
注意个人卫生，要做到：及时使用消毒药物处理皮肤创 伤；皮肤化脓者不宜从事餐饮行业；预防院内交叉感染； 治疗应根据药物敏感实验结果等。可使用红霉素、庆大霉 素等治疗。
4.镜检
光镜下观察细菌形态。
05
化脓性病原菌的鉴定
化脓性病原菌的鉴定
已学习的与讨论病案相关的能引起皮肤化脓性感染的球菌有：葡萄 球菌和A群链球菌 （与人类疾病密切相关的主要为化脓性链球菌） 。
葡萄球菌的鉴定
葡萄球菌的鉴定
1.直接观察
1.1 革兰染色镜检观察 光镜下观察为紫色葡萄串样排列，球形，G+菌。
纯化溶血素“O”用碳化二亚胺交联，离心洗涤后用pH7.6甲酸盐缓中液配成1‰ 悬液，加0.1‰ NaN₂防腐(即溶血素"O" 免疫微球)。②被检测血清中的ASO与 ASO胶乳试剂反应时，根据间接乳胶凝集试验的原理，可引起乳胶颗粒的聚集。 若预先将被检测血清(含ASO)用25结合单位/毫升的溶血素“O"中和，然后再与 ASO胶乳试剂反应，乳胶颗粒仍出现凝集者，说明被检测血清含ASO>250单位。 方法：取1:50稀释的患者血清与正常血清各1滴，分别滴于玻片的两侧，然后 于两侧各加1滴链球菌溶血素“O”，轻轻晃摇1分钟，使其充分混匀。于上述混 合液中各加1滴乳胶试剂，轻轻晃摇8分钟，使其充分混匀，将反应板放在实验桌 上。
2.1 触酶试验
原理：链球菌不能产ຫໍສະໝຸດ 过氧化氢酶，不能将H2O2分解成水、氧气
试验时，取诊断试剂一滴和待检或已知菌苔或抗原置于玻片上，用白金环或玻棒 混匀，在数分钟内即可观察结果。如此为葡萄球菌，则凝集成清晰可见的颗粒。
葡防萄治球原菌的则防治原则
金黄色葡萄球菌
注意个人卫生，要做到：及时使用消毒药物处理皮肤创 伤；皮肤化脓者不宜从事餐饮行业；预防院内交叉感染； 治疗应根据药物敏感实验结果等。可使用红霉素、庆大霉 素等治疗。
4.镜检
光镜下观察细菌形态。
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化脓性病原菌的鉴定
化脓性病原菌的鉴定
已学习的与讨论病案相关的能引起皮肤化脓性感染的球菌有：葡萄 球菌和A群链球菌 （与人类疾病密切相关的主要为化脓性链球菌） 。
葡萄球菌的鉴定
葡萄球菌的鉴定
1.直接观察
1.1 革兰染色镜检观察 光镜下观察为紫色葡萄串样排列，球形，G+菌。
纯化溶血素“O”用碳化二亚胺交联，离心洗涤后用pH7.6甲酸盐缓中液配成1‰ 悬液，加0.1‰ NaN₂防腐(即溶血素"O" 免疫微球)。②被检测血清中的ASO与 ASO胶乳试剂反应时，根据间接乳胶凝集试验的原理，可引起乳胶颗粒的聚集。 若预先将被检测血清(含ASO)用25结合单位/毫升的溶血素“O"中和，然后再与 ASO胶乳试剂反应，乳胶颗粒仍出现凝集者，说明被检测血清含ASO>250单位。 方法：取1:50稀释的患者血清与正常血清各1滴，分别滴于玻片的两侧，然后 于两侧各加1滴链球菌溶血素“O”，轻轻晃摇1分钟，使其充分混匀。于上述混 合液中各加1滴乳胶试剂，轻轻晃摇8分钟，使其充分混匀，将反应板放在实验桌 上。
2.1 触酶试验
原理：链球菌不能产ຫໍສະໝຸດ 过氧化氢酶，不能将H2O2分解成水、氧气
化脓细菌的分离鉴定
化
医脓 学性
微细
生 物
定菌
学的
实分 验离
鉴
化脓性球菌 革兰阳性菌：葡萄球菌，链球菌，肺炎链球菌 革兰阴性菌：脑膜炎奈瑟菌， 淋病奈瑟菌
staphylococcus
Streptococcus
S. pneumoniae
N.meningitidiiss
N. gonorrhoeae
1.
化 脓
第
特性 性球
菌
一 章
培
养
菌落形态
溶血现象
葡萄球菌：中等大小，圆形，表面 光滑湿润，不
透明，产各种色素 链球菌：针尖大小的微小菌落，圆
形，表面光滑
湿润，半透明
葡萄球菌：致病性葡萄球菌多数是 -溶血
链球菌： 产生不同的溶血现象
示教1 溶血现象平 板
2.
化
离 鉴 定
脓 性 球 菌
第 二 章
的
分
病原性球菌的鉴别方法
○ 完全溶血
乙型链球菌
○ 不溶血
丙型链球菌
○ 草绿色不完全溶血环
○ 菊糖发酵试验
-（紫色）
○ 胆汁溶菌试验
-（混浊）
○ 甲型链球菌
肺炎链球菌
+（黄色） +（澄清）
血浆凝固酶试验
凝固酶(coagulase)
游离凝固酶（试管法）示教
结合凝固酶（玻片法）
致病性的金黄色葡萄球菌产生凝固酶，所以血浆凝固酶实验是 鉴别葡萄球菌有无致病性的重要指标
血浆凝固酶试验
20 18
01
生理盐 水
2020
金黄色葡萄 球菌
2022
02
03
04
05
生理盐 水
医脓 学性
微细
生 物
定菌
学的
实分 验离
鉴
化脓性球菌 革兰阳性菌：葡萄球菌，链球菌，肺炎链球菌 革兰阴性菌：脑膜炎奈瑟菌， 淋病奈瑟菌
staphylococcus
Streptococcus
S. pneumoniae
N.meningitidiiss
N. gonorrhoeae
1.
化 脓
第
特性 性球
菌
一 章
培
养
菌落形态
溶血现象
葡萄球菌：中等大小，圆形，表面 光滑湿润，不
透明，产各种色素 链球菌：针尖大小的微小菌落，圆
形，表面光滑
湿润，半透明
葡萄球菌：致病性葡萄球菌多数是 -溶血
链球菌： 产生不同的溶血现象
示教1 溶血现象平 板
2.
化
离 鉴 定
脓 性 球 菌
第 二 章
的
分
病原性球菌的鉴别方法
○ 完全溶血
乙型链球菌
○ 不溶血
丙型链球菌
○ 草绿色不完全溶血环
○ 菊糖发酵试验
-（紫色）
○ 胆汁溶菌试验
-（混浊）
○ 甲型链球菌
肺炎链球菌
+（黄色） +（澄清）
血浆凝固酶试验
凝固酶(coagulase)
游离凝固酶（试管法）示教
结合凝固酶（玻片法）
致病性的金黄色葡萄球菌产生凝固酶，所以血浆凝固酶实验是 鉴别葡萄球菌有无致病性的重要指标
血浆凝固酶试验
20 18
01
生理盐 水
2020
金黄色葡萄 球菌
2022
02
03
04
05
生理盐 水
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➢ 灭菌(sterilization):杀灭物体上所有微生物的方 法。
➢ 防腐(antisepsis):防止或抑制细菌生长繁殖的方法， 细菌一般不死亡。同一种化学药品在高浓度时称 为消毒剂，低浓度时为防腐剂。
➢ 无菌(asepsis):不含活菌的意思。防止细菌进入人 体或其他物品的操作技术，称无菌操作。
思考题
1. 临床上耐药性菌株感染，如何确定其治疗用药？ 2. 抗生素耐药性实验的结果是如何判定？
高压蒸汽灭菌法：
高压蒸汽灭菌法的杀菌效果最好，运用广泛。
优点：1.能够达到较高的温度。 2.穿透力强。 3.蒸气遇冷物凝成水时可放出汽化热， 迅速提高冷物的温度。 4.高压蒸气不会使物品过分潮湿，避 免了水煮的缺点。
注意事项:
1.穿透力弱，一般玻璃、纸、布、尘埃、水 蒸气均能阻挡。
2.适用于空气、物体表面的消毒。 3.有效距离在2米左右（紫外灯的安装） 4.紫外线对人的眼睛、皮肤有损害作用。
操作步骤：
1. 取普通平板（1块/3人） 2. 取大肠杆菌斜面培养物在平板上密集划线 3. 用灭菌镊子取无菌黑纸片夹放到平板正中 4. 将平板放到紫外线下照射30分钟 5. 放37℃孵箱培养 6. 观察结果 7. 注意操作中始终保持无菌操作
药敏试验的常用方法：纸片法
操作：
敏感金葡
贴纸片
结果分析：
如果细菌对药物敏感，则在药片周围有抑菌圈形 成，敏感度越高抑菌圈直径越大：
>20mm： 极度敏感 15-20mm： 中度敏感 抑菌圈直径 10-15mm： 轻度敏感 <10mm: 不敏感 无抑菌圈：耐药
三、化脓性球菌分离鉴定（一）
➢ 化脓性炎症是临床上常见病，除了病原性球 菌外，其他微生物也可以引起化脓性感染。
紫外线杀菌实验操作
划线、盖纸、照射
电离辐射
➢ β射线和γ射线； ➢ 产生自由基或毒性基团，干扰DNA合成,导
致酶系统功能紊乱等; ➢ γ射线有较高穿透力； ➢ 常用于一次性医用塑料制品的消毒；也用
于食品消毒，不破坏其营养成分。
滤过除菌：
❖ 物理阻留； ❖ 用于不耐高温的血清、
抗生素、药液等的除菌。
微生物学实验三
化脓性球菌的分离鉴定
（综合性试验）
实验内容
录像：消毒灭菌 操作： 1. 紫外线杀菌实验（普通平板 1块/3人） 2. 抗生素敏感试验（普通平板 1块/3人） 3. 化脓性球菌分离鉴定（一）—— 接种血平板 材料：
1. 抗生素纸片（青霉素、链霉素、庆大霉素、黄连素 1套/6人） 2. 大肠杆菌、敏感金葡菌（1支/6人） 3. 脓汁标本（乙型链球菌、致病性金葡菌 各1支/6人） 4. 普通平板、血平板、黑纸片等
压力为15磅/寸2，30分钟可杀死一切芽胞，达到灭菌的目的。 （温度可达121℃ )
注意事项：
1. 高压的整个过程必须有专人守侯，并随时排气以 防压力表显示错误及其它原因引起高压锅内压力 剧增而导致爆炸。
2. 高压完毕需等待高压锅内压力降低至零时方可打开 取物。
紫外线杀菌原理:
波长200-300nm的紫外线具有杀菌作用，其中 以265-266nm最强，这与DNA的吸收光谱范围一 致。紫外线主要作用于DNA，使一条DNA链上相 邻的两个胸腺嘧啶共价结合而形成双聚体，从而改 变DNA的分子构型，干扰DNA的复制与转录，导 致细菌的死亡或变异。
[ 教学目标 ]
了解：各种消毒灭菌的方法及应用 无菌操作技术
掌握：1.化脓性球菌分离鉴定的方法和步骤 2.紫外线杀菌的原理 3.抗生素敏感实验的方法
[ 重点难点 ]
重点：化脓性球菌分离鉴定——接种血平板 难点：化脓性球菌分离鉴定——接种血平板
消毒与灭菌
概念：
➢ 消毒( disinfection):杀死物体上病原微生物，并 不一定能杀死含芽孢的细菌和非病原微生物。用 以消毒的药品称为消毒剂。
➢ 常见的标本有脓汁、咽拭子、痰、血液、脑 脊液等。
➢ 本次实验是以脓汁标本进行病原性球菌的分 离鉴定
化脓性球菌分离鉴定步骤
脓汁 接种
划线法
血平板
37℃
24h
菌落
革兰染色
葡萄状排列 链状排列
血浆凝固酶试验 甘露醇发酵试验 血清肉汤管
成对排列
操作：
1. 接种血平板（1块/人） 三线法接种分离单个菌落
2.干扰细菌的酶系统和代谢：氧化剂，如过氧化氢， 高锰酸钾，过氧乙酸等
3.损伤细菌细胞膜：表面活性剂，如新洁尔灭
二、抗生素敏感试验
随着抗生素的广泛应用，耐药变异菌株日益增 加（尤其是金葡、肠道杆菌），给医疗工作带来 了不少的困难。
为正确使用抗生素，临床上常在分离致病细菌 的同时做药物敏感试验，以了解该细菌对常用各 种抗生素的敏感性。
物理消毒灭菌法：
干热灭菌法：焚烧、烧灼、干烤（170℃/2h） 热力灭菌法
湿热灭菌法：巴氏消毒法、流动蒸汽消毒法、
煮沸法、间歇蒸汽灭菌法、高压蒸汽灭菌法
紫外线Βιβλιοθήκη 电磁波辐射杀菌法滤过除菌法
电离辐射
超声波杀菌
干燥
化学消毒灭菌法：使用消毒剂
原理：
1.使菌体蛋白质变性或凝固：酚类、醇类、重金属 盐等。如石炭酸、来苏、洗必泰
CTCCTTOHOOHHLILLIIRLRRLLDEDEDEGGGMMMEEEIIILOLOLOIIIFFTTFTAABBABRARARAYSYSYSIIIMMCCMCEMEMEMDDEEDEIIDDICDCCIIAAICCACLLALAALULULUNNSSNSCICICVIIVIVEIEEEEENRNRNRSCSCSCIEIETIETSTYSYSY
➢ 防腐(antisepsis):防止或抑制细菌生长繁殖的方法， 细菌一般不死亡。同一种化学药品在高浓度时称 为消毒剂，低浓度时为防腐剂。
➢ 无菌(asepsis):不含活菌的意思。防止细菌进入人 体或其他物品的操作技术，称无菌操作。
思考题
1. 临床上耐药性菌株感染，如何确定其治疗用药？ 2. 抗生素耐药性实验的结果是如何判定？
高压蒸汽灭菌法：
高压蒸汽灭菌法的杀菌效果最好，运用广泛。
优点：1.能够达到较高的温度。 2.穿透力强。 3.蒸气遇冷物凝成水时可放出汽化热， 迅速提高冷物的温度。 4.高压蒸气不会使物品过分潮湿，避 免了水煮的缺点。
注意事项:
1.穿透力弱，一般玻璃、纸、布、尘埃、水 蒸气均能阻挡。
2.适用于空气、物体表面的消毒。 3.有效距离在2米左右（紫外灯的安装） 4.紫外线对人的眼睛、皮肤有损害作用。
操作步骤：
1. 取普通平板（1块/3人） 2. 取大肠杆菌斜面培养物在平板上密集划线 3. 用灭菌镊子取无菌黑纸片夹放到平板正中 4. 将平板放到紫外线下照射30分钟 5. 放37℃孵箱培养 6. 观察结果 7. 注意操作中始终保持无菌操作
药敏试验的常用方法：纸片法
操作：
敏感金葡
贴纸片
结果分析：
如果细菌对药物敏感，则在药片周围有抑菌圈形 成，敏感度越高抑菌圈直径越大：
>20mm： 极度敏感 15-20mm： 中度敏感 抑菌圈直径 10-15mm： 轻度敏感 <10mm: 不敏感 无抑菌圈：耐药
三、化脓性球菌分离鉴定（一）
➢ 化脓性炎症是临床上常见病，除了病原性球 菌外，其他微生物也可以引起化脓性感染。
紫外线杀菌实验操作
划线、盖纸、照射
电离辐射
➢ β射线和γ射线； ➢ 产生自由基或毒性基团，干扰DNA合成,导
致酶系统功能紊乱等; ➢ γ射线有较高穿透力； ➢ 常用于一次性医用塑料制品的消毒；也用
于食品消毒，不破坏其营养成分。
滤过除菌：
❖ 物理阻留； ❖ 用于不耐高温的血清、
抗生素、药液等的除菌。
微生物学实验三
化脓性球菌的分离鉴定
（综合性试验）
实验内容
录像：消毒灭菌 操作： 1. 紫外线杀菌实验（普通平板 1块/3人） 2. 抗生素敏感试验（普通平板 1块/3人） 3. 化脓性球菌分离鉴定（一）—— 接种血平板 材料：
1. 抗生素纸片（青霉素、链霉素、庆大霉素、黄连素 1套/6人） 2. 大肠杆菌、敏感金葡菌（1支/6人） 3. 脓汁标本（乙型链球菌、致病性金葡菌 各1支/6人） 4. 普通平板、血平板、黑纸片等
压力为15磅/寸2，30分钟可杀死一切芽胞，达到灭菌的目的。 （温度可达121℃ )
注意事项：
1. 高压的整个过程必须有专人守侯，并随时排气以 防压力表显示错误及其它原因引起高压锅内压力 剧增而导致爆炸。
2. 高压完毕需等待高压锅内压力降低至零时方可打开 取物。
紫外线杀菌原理:
波长200-300nm的紫外线具有杀菌作用，其中 以265-266nm最强，这与DNA的吸收光谱范围一 致。紫外线主要作用于DNA，使一条DNA链上相 邻的两个胸腺嘧啶共价结合而形成双聚体，从而改 变DNA的分子构型，干扰DNA的复制与转录，导 致细菌的死亡或变异。
[ 教学目标 ]
了解：各种消毒灭菌的方法及应用 无菌操作技术
掌握：1.化脓性球菌分离鉴定的方法和步骤 2.紫外线杀菌的原理 3.抗生素敏感实验的方法
[ 重点难点 ]
重点：化脓性球菌分离鉴定——接种血平板 难点：化脓性球菌分离鉴定——接种血平板
消毒与灭菌
概念：
➢ 消毒( disinfection):杀死物体上病原微生物，并 不一定能杀死含芽孢的细菌和非病原微生物。用 以消毒的药品称为消毒剂。
➢ 常见的标本有脓汁、咽拭子、痰、血液、脑 脊液等。
➢ 本次实验是以脓汁标本进行病原性球菌的分 离鉴定
化脓性球菌分离鉴定步骤
脓汁 接种
划线法
血平板
37℃
24h
菌落
革兰染色
葡萄状排列 链状排列
血浆凝固酶试验 甘露醇发酵试验 血清肉汤管
成对排列
操作：
1. 接种血平板（1块/人） 三线法接种分离单个菌落
2.干扰细菌的酶系统和代谢：氧化剂，如过氧化氢， 高锰酸钾，过氧乙酸等
3.损伤细菌细胞膜：表面活性剂，如新洁尔灭
二、抗生素敏感试验
随着抗生素的广泛应用，耐药变异菌株日益增 加（尤其是金葡、肠道杆菌），给医疗工作带来 了不少的困难。
为正确使用抗生素，临床上常在分离致病细菌 的同时做药物敏感试验，以了解该细菌对常用各 种抗生素的敏感性。
物理消毒灭菌法：
干热灭菌法：焚烧、烧灼、干烤（170℃/2h） 热力灭菌法
湿热灭菌法：巴氏消毒法、流动蒸汽消毒法、
煮沸法、间歇蒸汽灭菌法、高压蒸汽灭菌法
紫外线Βιβλιοθήκη 电磁波辐射杀菌法滤过除菌法
电离辐射
超声波杀菌
干燥
化学消毒灭菌法：使用消毒剂
原理：
1.使菌体蛋白质变性或凝固：酚类、醇类、重金属 盐等。如石炭酸、来苏、洗必泰
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