血浆氨测定

特点：
优点: 能动态观测酶促反应进程，可以明显地找到反 应的线性期，结果准确可靠，标本和试剂用量少， 可在较短时间内完成测定。
缺点：
要求高，要求能够精确地控制温度、pH值和底物浓 度等反应条件，要求仪器具有恒温装置及自动监测 功能，半自动及自动生化分析仪都能达到这些要求。
连续监测法反应曲线
临床意义
肝昏迷的监测
儿科Reye综合症的诊断
注意事项
准确加样 严格控制反应时间 准确读数 避免氨污染
A单试剂连续监测法
B双试剂连续监测法
实验目的
掌握酶法测定血浆氨的原理及方法 熟悉工具酶的概念及应用 了解血浆氨测定的临床意义
实验原理

NH3+ H ++ NADH + α-酮戊二酸 GLDH L-谷氨酸 +NAD+ + H2O
氨在谷氨酸脱氢酶的作用下与α-酮戊二酸反应
生成谷氨酸,并将NADH 氧化为NAD+,测定 在340nm波长处的吸光度下降值，通过与标 准品340nm处吸光度的下降值比较,计算测定 样本中氨的浓度。
样品管 3.0ml
—— —— 1.5ml 60ul
各管混匀，37℃水浴放置10分钟 Ｒ２
各管混匀，20S和100S时读取各管吸光度值
结果计算
△A 标准=(A1-A2)标准-(A1-A2)空白
△A样品=(A1-A2)样品-(A1-A2)空白
氨浓度（umol/L）=△A 样品/△A 标准×标准浓度 血氨标准液=58.8 umol/L
测定条件（基本操作参数)
测定方法 两点法 读数时间 90S 试样比例 2:1 比色光径 1cm 实验温度 37℃ 测定波长 340nm
测定步骤
试剂R1加5ml新鲜去离子水溶解10min混匀
Ｒ１ 蒸馏水 标准 样品
空白管 3.0ml
1.5ml —— —— 60ul
标准管 3.0ml
—— 1.5ml —— 60ul
酶法测定血浆氨
华中科技大学附属协和医院检验科
Michaelis 和 Menten 根据 Henri 提出的酶-底 物复合物学说,推导了单底物酶促反应方程
V max[ S ] V0 Km [ S ]
酶促反应进程曲线
工具酶
定义： 工具酶：作为试剂用于测定待测酶活性或底物浓 度的酶。
分类： 工具酶有氧化还原酶类、转移酶类和水解酶类
底物浓度测定
与酶活性测定类似,利用酶催化反应的高效率和
专一性，可以测定底物浓度
测定方法
固定时间法 按照对酶 促反应时 间的选择 不同 连续监测法
（一）固定时间法
定义：测定酶促反应开始后一段时间内底物的减少 量或产物的增加量。
分类： 终点法：在反应进行到预定时间后要终止反应。
两点法：该方法反应时间的预定是从t1～t2 。
终点法特点：
优点是简单。
缺点是难以确定反应时间段酶促反应是否处于线性期。
注意：固定时间法时间段的预定不宜太长
（二）连续监测法
定义：测定底物பைடு நூலகம்产物随时间的变化量，又称为 速率法。
原理：
该方法每隔一定时间（10s～60s）测定一次底物 或产物的变化量，连续测定多点，然后将测定结果对 时间作图，绘制反应速度曲线。