葡萄糖氧化酶法须知

葡萄糖氧化酶法测定血糖

900
900
测定管
12 900
900
2. 比色测定：用空白管溶液调零，测定吸光度(OD500)。
3. 计算：葡萄糖浓度(mmol/L) = [样品OD/标准管
OD]×标准品葡萄糖浓度
五、注意事项
1. 必须在线性范围内测定： 0.02-20 mmol/L，浓度超过20 mmol/L用蒸馏水或生理盐水稀释1:2倍后测量；
量程100-1000ul 加样器配蓝色枪尖量程0.5-10ul 加样器配白色小枪尖
1.按照下表加样(桔色标记为试剂的简写)
蒸馏水(μl) ddH2O 标准品(μl) ＳS 样品(μl) B S 反应工作液(μl)2
900
900
37℃孵育15min
二. 实验原理
葡萄糖氧化酶法测定血糖的原理：
根据Trinder反应原理,葡萄糖在葡萄糖氧化酶 (GOD)作用下生成葡萄糖酸和过氧化氢(H2O2)；然后用过氧化物酶(POD)催化过氧化氢，使色原物质(4-氨基安替比林)生成醌亚胺，由无色变成粉红色，颜色的深浅与葡萄糖浓度成正比，在500－505nm处有最大吸收值。
三、试剂 1.葡萄糖标准品 SS: 5.55 mmol/L； 2.反应工作液WS : 磷酸盐缓冲液，3,5-二氯-2-羟基苯
磺酸钠(DHBS)，葡萄糖氧化酶(GOD)，过氧化物酶 (POD)，色原物质(4-氨基安替比林)； 3.待测血清：B S 4. 蒸馏水。ddH2O 实验仪器：可见光分光光度计，水浴锅，微量加样器
1.学习分光光度计的原理及使用方法 2. 掌握葡萄糖氧化酶(Glucose oxidase, GOD)-过氧化物
酶(peroxidase,POD)测定血糖浓度的原理。

葡萄糖氧化酶法测定血糖的原理_概述及解释说明

葡萄糖氧化酶法测定血糖的原理概述及解释说明1. 引言1.1 概述本文旨在介绍葡萄糖氧化酶法测定血糖的原理，并对其进行详细的解释和说明。

血糖测定是医学和生物科学领域中非常重要的一项实验技术，用于评估人体内的葡萄糖水平以及相关代谢功能的异常情况。

葡萄糖氧化酶法是一种常用的血糖测定方法，其基本原理是利用特定酶对葡萄糖进行氧化反应并与辅助试剂发生显色反应，从而间接地测定血液中的葡萄糖含量。

1.2 文章结构本文将按照以下结构进行展开：首先，介绍葡萄糖氧化酶的简要概况和血糖测定方法的总体概述；其次，详细讲解葡萄糖氧化酶法测定血糖的基本原理；然后，描述实验步骤并给出操作流程；接着，分析实验结果并讨论其中的意义和影响因素；最后，总结实验结论并展望未来该领域的研究意义和发展方向。

1.3 目的本文的目的是全面而清晰地介绍葡萄糖氧化酶法测定血糖的原理，帮助读者了解该方法在实际应用中的作用和意义。

通过本文的阅读，读者可以深入了解葡萄糖氧化酶法的基本理论和操作流程，并对实验结果进行准确而详细的分析与讨论。

同时，本文也旨在提供对该方法局限性和未来发展方向进行探讨，并为相关研究人员提供参考，促进该领域的进一步发展和突破。

2. 葡萄糖氧化酶法测定血糖的原理：2.1 葡萄糖氧化酶简介：葡萄糖氧化酶是一种存在于细胞内的酶类，在生物体中起到将葡萄糖转化为能量的重要作用。

该酶主要参与细胞内氧化还原反应，并催化葡萄糖与辅酶NAD+之间的反应。

在此过程中，葡萄糖被氧化成葡萄糖酸，并产生还原型辅酶NADH。

2.2 血糖测定方法概述：血液中的血糖水平是一个重要的生理指标，可以提供人体能量供给的信息。

因此，血糖水平的测定对于诊断和治疗许多代谢性疾病非常重要。

目前，有多种方法用于测定血液中的血糖浓度，其中最常用且最经典的方法就是使用葡萄糖氧化酶法。

2.3 葡萄糖氧化酶法的基本原理：葡萄糖氧化酶法是一种非常敏感和特异性的测定血糖浓度的方法。

该方法基于葡萄糖氧化酶与葡萄糖的特异性反应，通过检测在该反应中生成的还原型辅酶NADH的产生量来间接测定血液中的血糖浓度。

实验八血糖的测定（葡萄糖氧化酶法）

实验十血糖的测定血液中的葡萄糖称血糖。

正常人血糖浓度较恒定，维持在3．9mmol ／L ～6．1mmol ／L 之间。

血糖浓度的相对恒定是机体进行正常生理活动的前提条件之一，有着双重实际意义：其一，维持稳定的能源供给，满足机体在各种生理状态下对能量的需求。

其二，保证机体不因进食致血糖浓度过高，导致糖的丢失。

因此，血糖的测定是临床生化检验实验室的常规检测项目。

血糖测定按其发展过程及反应原理的不同，大致分三类：氧化还原法，缩合法（主要有邻甲苯胺法），酶法（主要有己糖激酶法和葡萄糖氧化酶法）。

下边介绍两种方法供选择。

一、葡萄糖氧化酶法【目的】1. 了解葡萄糖氧化酶法测定血糖的原理，能进行血糖测定的操作。

2. 掌握血糖测定的临床意义。

【原理】葡萄糖氧化酶 (glucose oxidase ，GOD) 能将葡萄糖氧化为葡萄糖酸和过氧化氢。

后者在过氧化物酶 (peroxidase ，POD)作用下，分解为水和氧的同时将无色的4-氨基安替比林与酚氧化缩合生成红色的醌类化合物，即 Trinder 反应。

其颜色的深浅在一定范围内与葡萄糖浓度成正比，在505nm 波长处测定吸光度，与标准管比较可计算出血糖的浓度。

反应式如下：2H 2O 2+4-氨基安替比林+酚红色醌类化合物POD2H 2O2H 2O 2O 2葡萄糖+葡萄糖酸+GOD+【器材】试管、吸管、试管架、恒温水浴箱、分光光度计【试剂】1. 0.1mol/L 磷酸盐缓冲液（pH7.0）称取无水磷酸氢二钠8.67g 及无水磷酸二氢钾5.3g 溶于800ml 蒸馏水中，用1mol/L 氢氧化钠（或1mol/L 盐酸）调节pH 至7.0，然后用蒸馏水稀释至1L 。

2. 酶试剂称取过氧化物酶1200U ，葡萄糖氧化酶1200U ，4-氨基安替比林10mg ，叠氮钠100mg ，溶于上述磷酸盐缓冲液80ml 中，用1mol/L NaOH 调pH 至7.0，加磷酸缓冲液至100ml 。

葡萄糖试剂盒(氧化酶法)标准操作程序.

葡萄糖试剂盒（氧化酶法）标准操作程序1. 摘要本试剂盒供医疗机构用于体外定量测定人血清样本中葡萄糖的含量。

2. 适用范围程序适用于AU5811自动生化分析仪检测血清样本中葡萄糖的含量。

3. 职责使用AU5811自动生化分析仪进行测定葡萄糖浓度的工作人员要严格按照本SOP 程序进行，室负责人监督管理；本SOP 的改动，可由任一使用本SOP 的工作人员提出，并报经生化室负责人、科主任签字批准生效。

4. 检测方法上海科华生物工程股份有限公司生产的葡萄糖试剂盒采用的是氧化酶法(GOD-POD)。

5. 原理葡萄糖在葡萄糖氧化酶的催化下与水分子和氧分子反应生成葡萄糖酸和双氧水,最后双氧水在过氧化物酶的催化下与色原底物、4-氨基安替比林和苯酚反应生成红色化合物醌亚胺。

由于醌亚胺在波长500nm 处有吸收峰,所以在一定底物浓度范围内, 500nm 处吸光度的变化值与样本中葡萄糖的含量成正比。

O H O H O H O O H 22222224+−−−→−+-++−−−−→−++醌亚胺苯酚氨基安替比林葡萄糖酸葡萄糖过氧化物酶葡萄糖氧化酶6. 仪器AU5811自动生化分析仪7. 试剂7.1 试剂来源：上海科华生物工程股份有限公司提供7.2 试剂瓶内主要成分：R1：磷酸盐缓冲液、过氧化物酶、苯酚、防腐剂；R2：磷酸盐缓冲液、葡萄糖氧化酶、4-氨基安替比林、防腐剂；校准品：葡萄糖、防腐剂7.3 试剂稳定性：试剂于2℃-8℃避光保存，有效期为一年。

开瓶后存放在生化分析仪试剂仓中可稳定14天。

8.标准品和质量控制8.1校准程序：使用科华公司的校准品对自动分析仪进行校准。

按照公司标准品使用要求，并以9g/L氯化钠溶液或去离子水为空白，经校准测定，仪器自动对标准品通过合适的数学模型绘制校准曲线。

8.2质控品：罗氏公司提供的生化复合定值质控血清作为室内质控品。

每日在测定前做一次质控加试剂后做一次质控。

该质控品为干粉包装，在2-8℃冰箱可稳定到失效期，使用前用5ml去离子水复溶，待质控物充分溶解（大约30分钟）后使用。

氧化酶法测定血清(浆)葡萄糖

葡萄糖氧化酶法测定操作规程1实验原理葡萄糖氧化酶将葡萄糖氧化为葡萄糖酸，并成成过氧化氢。

过氧化物酶在色原性氧受体存在时将过氧化氢分解喂水和氧，并使色原性氧受体4-氨基安替比林（4-AAP）和酚去氢缩合为红色醌类化合物，即Trinder反应。

在500nm处测得的吸光度与葡萄糖含量成正比。

GOD葡萄糖+O2→葡萄糖酸+H2O2PODH2O2+4-AAP+酚→红色醌类化合物+H2O2临床意义1.生理性高血糖可见于餐后或高糖饮食.情绪紧张肾上腺分泌增加等。

2.病理性高血糖（1）糖尿病患者。

（2）内分泌腺功能障碍：甲状腺功能亢进，肾上腺皮质及髓质功能亢进等。

升高血糖的激素增多引起的高血糖，现已归入特异性糖尿病中。

（3）颅内压增高：颅内压增高刺激血糖中枢，如颅外伤.颅内出血.脑膜炎等。

（4）脱水引起的高血糖：如呕吐.腹泻和高热等也可使血糖轻度增高。

3.生理性低血糖见于长期饥饿和剧烈运动后。

4.病理性低血糖（特发性功能性低血糖最多见，依次是药源性.肝源性.胰岛素瘤等）。

（1）胰岛β细胞增生或胰岛β细胞瘤等，使胰岛素分泌过多。

（2）对抗胰岛素的激素分泌不足，如垂体前叶功能减退.肾上腺皮质功能减退和甲状腺功能减退而使相应的激素分泌减少。

（3）严重肝病患者，由于肝脏存储糖原及糖异生等功能低下，肝脏不能有效地调节血糖。

3实用仪器蓝韵200（L Y-C200）4储存条件及有效期试剂盒应避光密封储存在2--8℃环境中，有效期为12个月。

开封后，上机在2--8℃避光保存其有效期为28天。

5操作步骤5.1、全自动生化分析仪操作步骤：参数设置→试剂装载→校准→质控→样品加载→测定→结果审核→报告。

5.2、校准：采用纯化水或生理盐水和校准品两点校准。

当试剂更换批号、出现质控漂移、仪器做完保养后及重要零件更换时，须重新校准。

5.3、结果计算：全自动生化分析仪会自动给出检测结果。

5.4、质控程序：建立质控体系，选用适当的质控品进行质量控制。

葡萄糖氧化酶法测空腹血糖(标准管法)

葡萄糖氧化酶法测空腹血糖（标准管法）实验目的：1.了解自动生化分析仪的工作原理2.熟悉糖尿病相关生化的检测项目及检测方法3.掌握糖尿病相关生化检测项目的临床意义。

实验原理：葡萄糖氧化酶法测空腹血糖:葡萄糖可由葡萄糖氧化酶氧化成葡萄糖酸并产生过氧化氢，后者与苯酚及4-氨基安替比林在过氧化物酶作用下产生红色化合物。

在505nm波长测定该红色化合物的吸光度，能计算出葡萄糖含量。

实验操作：1.将准备好的酶工作液（葡萄糖氧化酶和过氧化物酶、苯酚、4-氨基安替比林）加入空白管、浓度标准管、测定管各3ml，再向标准管加20μl葡萄糖标准液（5.55mmol/L），再向测定管加入20μl血清。

2.将三支试管放入水浴锅中，37℃保温20分钟3.调节分光光度计波长505nm,透光度T至100%，将空白管酶工作液对光的吸收调节为0，再用空白管调“零”点测定其他各管的吸光度。

实验结果：分光光度计测得标准管吸光度和测定管吸光度，根据朗伯-比尔定律,得到血清样品血糖值=（测定管吸光度/标准管吸光度）x5.55分析讨论：酶酚混合液变成了红色是否还可以继续使用？不可以。

酶酚混合液应为无色，如酶酚混合液已经变为红色，说明试剂污染，不可使用。

思考题：1.高血糖对机体的影响有哪些？1)引起血管、神经并发症。

糖尿病患者长期高血糖会使血管、神经并发症发生和发展使病情加重。

2)β细胞功能衰竭。

长期高血糖对胰岛β细胞不断刺激，使其功能衰竭，胰岛素分泌更少。

3)电解质紊乱。

高血糖时大量排尿，从尿带走电解质，使电解质紊乱。

4)严重失水。

高血糖引起渗透性利尿，尿量增加，机体失水。

5)渗透压增高。

高血糖时，细胞外液渗透压增高,细胞内液向细胞外流动，导致细胞内失水。

当脑细胞失水时，可引起脑功能紊乱，临床上称高渗性昏迷。

6)全身乏力。

血糖过高，葡萄糖不能很好地被机体吸收利用而从尿中排出。

7)视力减退。

血糖升高时，眼睛视力往往减退。

2.糖尿病患者为何会出现尿糖阳性？糖尿病患者的血糖超过肾糖阈（8.96～10.08mmol/L）时，近端小管对葡萄糖的重吸收达到极限，尿中开始出现葡萄糖。

生物化学：葡萄糖测定(酶法)

【计算】
血清葡萄糖（mmol/L）＝ Au Cs As
Au:测定管吸光度 As:标准管吸光度 Cs:标准管浓度
5
【参考范围】
血清葡萄糖：3.89～6.11 mmol/L
6
【临床意义】
1.生理性高血糖见于饭后1～2h，注射葡萄糖或摄入高糖食物后、情绪紧张肾上腺素分泌增加时，但不应超过 10mmol/L。 2.病理性高血糖见于(1)内分泌腺功能障碍能引起高血糖，如胰腺β细胞损害导致胰岛素分泌缺乏，血糖可超过正常，临床上称为糖尿病。其他内分泌疾病引起的各种对抗胰岛素的激素分泌增加也会出现高血糖；(2)颅内压增高：颅内压增高刺激血糖中枢，如颅外伤、颅内出血、脑膜炎等； (3)由于脱水引起的高血糖：如呕吐、腹泻和高热等可使血糖轻度增高。
实验血清葡萄糖测定
葡萄测定葡萄糖氧化酶法（ GODPOD法）的原理，操作方法 2.熟悉葡萄糖测定的临床意义； 3.巩固分光光度计的使用。
2
【实验原理】
葡萄糖氧化酶（GOD）催化葡萄糖氧化成葡萄糖酸，并产生过氧化氢。在过氧化氢酶（POD）及色原性受体4-氨基安替比林（4-AAP）的存在下，过氧化氢释放氧使色素原氧化生成红色醌类化合物。醌的生成量与葡萄糖成正比，在波长520nm处比色，求得葡萄糖含量。
7
【临床意义】
3.生理性或暂时性低血糖见于饥饿、剧烈运动、注射胰岛素后、妊娠和服用降糖药后。 4.病理性低血糖见于(1)胰岛β细胞增生瘤等，使胰岛素分泌过多；(2)对抗胰岛素的激素分泌不足，如垂体前叶功能减退，肾上腺皮质功能减退和甲状腺功能减退而使生长素、肾上腺皮质激素分泌减小；(3)严重肝病患者，由于肝脏储存糖原及糖异生等功能低下，肝脏不能有效地调节血糖。

血糖的定量测定(葡萄糖氧化酶法)

血糖的定量测定（葡萄糖氧化酶法）血糖是指血液中葡萄糖的含量。

葡萄糖是人体主要的能量来源，血糖的测定是检查人体内部能量代谢状态的重要项目之一。

这篇文章将介绍血糖定量测定的实验原理、方法以及实验注意事项。

一、实验原理血糖的定量测定方法主要是利用葡萄糖氧化酶将血液中的葡萄糖在催化反应下转化为过氧化氢和D-酮糖酸，利用过氧化氢的比色法来测定血糖的含量。

具体反应式为：(1)葡萄糖+O2+H2O→葡萄糖氧化酶 D-酮糖酸+H2O2(2)2H2O2+Fe2+→2H2O+Fe3++O2(3)Fe3++TSC(三硝基苯胺)→FeTSC3（红色化合物）其中，TSC（三硝基苯胺）为过氧化氢的比色试剂，用Fe2+作催化剂促进反应进行，所生成的红色化合物FeTSC3与过氧化氢的浓度呈线性关系。

二、实验材料1.血糖标准品：10mmol/L2.葡萄糖氧化酶3.三硝基苯胺（TSC）、醋酸钠、乙二胺四醋酸盐二水合物（EDTA•2H2O）、氢氧化钠（NaOH）4.0.1mol/L磷酸盐缓冲液（pH7.5）5.准确量杯、试管、离心管、吸光度计、恒温水浴器、移液管三、实验步骤1.制备血清样品：将血液放置静置后离心取血清，制成5mmol/L、10mmol/L、15mmol/L、20mmol/L的葡萄糖标准品。

2.实验组织：3个组别，每组3个试管。

A组：加1mL的10mmol/L葡萄糖标准品；B 组：加1mL的血清标本；C组：加入1mL的磷酸盐缓冲液作为对照组。

注意，每组要做三个平行实验。

3.反应体系准备：①将实验组织中的标准品、血清样本和磷酸盐缓冲液分别加入3毫升离心管中。

②分别加入1mL葡萄糖氧化酶。

③分别加入1mL EDTA全部气泡排除。

⑤每组混合后放置在37℃下反应20分钟。

⑥在上述反应过程中，加入2毫升0.1mol/L的NaOH溶液使溶液呈碱性，使催化反应更为稳定。

4.吸光测定：将反应充分混合后，吸取适量的样品，放到吸光度计槽，设定波长为505nm，用对照组值进行比较，计算出各组的吸光度，并根据标准曲线计算出各样本的葡萄糖含量。

血糖试纸(葡萄糖氧化酶法)产品技术要求乐普

血糖试纸（葡萄糖氧化酶法）
适用范围：用于体外定量检测人新鲜指尖毛细血管全血中的葡萄糖浓度。

1.1 包装规格
型号：Poctor 800，GO S1100，GO S1101
包装规格：10支/盒；25支/盒；50支/盒
1.2 主要组成成分
产品由血糖试纸、CODE码组成。

血糖试纸由电极、试剂、保护盖膜、PET基板构成，其中试剂主要包含5.0%（w/w）葡萄糖氧化酶，30%（w/w）电子传递物质铁氰化钾，5.0%（w/w）酶保护剂和60.0%（w/w）其他非反应物质（羟甲基纤维素钠、海藻糖、磷酸二氢钾、磷酸氢二钾、Triton X-100）。

1.3 划分说明
2. 性能指标
2.1 物理性状
2.1.1 外观
血糖试纸光洁无毛刺，正面的加样区应洁净无污点。

2.1.2 尺寸
血糖试纸的尺寸：长（30±0.5）mm×宽（6±0.5mm）×厚（0.75±0.2）mm。

2.2 重复性
血糖仪和血糖试纸的系统重复测试结果的精密度符合表1的要求。

表1 血糖仪和血糖试纸系统测量重复性
2.3 准确度
测量结果偏差的95%应符合表2的要求；
表2 准确度要求
2.4 血糖试纸准确性
血糖试纸测量结果的95%应在质控物质质控范围之内。

2.5 批间差
批间差≤15%
2.6 稳定性
将血糖试纸置于10℃～30℃的环境中18个月后，3个月内取样，分别检测2.1、2.2、2.3、2.4项，结果符合各项目的要求。

葡萄糖(Glu)测定氧化酶法标准操作程序SOP文件

10.2黄疸：黄胆指数达到22时不会有明显干扰。（直接和间接胆红素浓度约为22mg/dl）
10.3溶血：溶血指数达到850时不会有明显干扰。（血红素浓度约为850mg/dl）
10.4脂血：乳糜指数达到150明显干扰。（甘油三酯浓度约为300mg/dl）
11 临床意义
机体从碳水化合物的代谢中获得血糖。葡萄糖是人体血液中最重要的单糖；餐后血糖浓度大约为5mmol/l。血糖是维持细胞的功能的能量供体。葡萄糖以糖酵解的形式降解。检测葡萄糖的浓度用于对糖代谢紊乱（糖尿病、婴儿性低糖血症、自发性低糖血症以及胰岛细胞癌）的诊断及治疗。GOD－PAP法是建立在1969年出现的Trinder法基础之上的。
ABCD-SOP-04-23
葡萄糖（Glu）测定氧化酶法
版序：ABCD
页码：第2页，Biblioteka 3页5 仪器ROCHE MODULAR P或日立7060生化分析仪。
6 上机操作
见仪器作业指导书，参数设置见附表。
7 参考范围
55-115mg/dl(3.05-5.83mmol/l)
>60岁:80-115mg/dl(4.44-6.38mmol/l)
9 注意事项
9.1 试剂中含迭氮钠，不要吞咽，避免与皮肤及粘膜接触。
9.2血清标本出现溶血、脂血或黄疸的干扰情况参见抗干扰能力。
9.3换算公式：mg/dL×0.0555 = mmol/L
9.4仅应用于体外诊断。
9.5扔弃废物应符合当地的法规。
10 抗干扰能力：
10.1标准：回收率在90％－110％之间。
血糖降低：生理性血糖过低见于妊娠期、哺乳期、饥饿及长期剧烈体力劳动后。病理性血糖过低常见于过量的胰岛素治疗，胰岛细胞增生或瘤，严重肝病及对抗胰岛素的激素分泌不足。

生物化学：葡萄糖测定(酶法)

实验血清葡萄糖测定
葡萄糖氧化酶法
1
【实验要求】
1. 掌握掌握血糖测定葡萄糖氧化酶法（ GODPOD法）的原理，操作方法 2.熟悉葡萄糖测定的临床意义； 3.巩固分光光度计的使用。
2
【实验原理】
葡萄糖氧化酶（GOD）催化葡萄糖氧化成葡萄糖酸，并产生过氧化氢。在过氧化氢酶（POD）及色原性受体4-氨基安替比林（4-AAP）的存在下，过氧化氢释放氧使色素原氧化生成红色醌类化合物。醌的生成量与葡萄糖成正比，在波长520nm处比色，求得葡萄糖含量。
7
【临床意义】
3.生理性或暂时性低血糖见于饥饿、剧烈运动、注射胰岛素后、妊娠和服用降糖药后。 4.病理性低血糖见于(1)胰岛β细胞增生瘤等，使胰岛素分泌过多；(2)对抗胰岛素的激素分泌不足，如垂体前叶功能减退，肾上腺皮质功能减退和甲状腺功能减退而使生长素、肾上腺皮质激素分泌减小；(3)严重肝病患者，由于肝脏储存糖原及糖异生等功能低下，肝脏不能有效地调节血糖。
8
【注意事项】
1、注意准确的加入所需要的液体量。 2、注意胆红素、谷胱甘肽、尿酸和维生素C等一些还原性物质将使结果受到干扰。
9
【打扫卫生】
1、实验结束后对自己用过的试管、移液管等物品进行清洗。 2、打扫桌面与地面卫生。 3、带齐本人物品，离开实验室。
10
谢谢！
11
【计算】
血清葡萄糖（mmol/L）＝ Au Cs As
Au:测定管吸光度 As:标准管吸光度 Cs:标准管浓度
5
【参考范围】
血清葡萄糖：3.89～6.11 mmol/L
6
【临床意义】
1.生理性高血糖见于饭后1～2h，注射葡萄糖或摄入高糖食物后、情绪紧张肾上腺素分泌增加时，但不应超过 10mmol/L。 2.病理性高血糖见于(1)内分泌腺功能障碍能引起高血糖，如胰腺β细胞损害导致胰岛素分泌缺乏，血糖可超过正常，临床上称为糖尿病。其他内分泌疾病引起的各种对抗胰岛素的激素分泌增加也会出现高血糖；(2)颅内压增高：颅内压增高刺激血糖中枢，如颅外伤、颅内出血、脑膜炎等； (3)由于脱水引起的高血糖：如呕吐、腹泻和高热等可使血糖轻度增高。

葡萄糖氧化酶法测血糖

实验三葡萄糖氧化酶法测血糖一、实验目的1.掌握分光光度计使用方法2.掌握葡萄糖氧化酶法测血糖的原理二、原理葡萄糖氧化酶（ GA ）对β-D- 葡萄糖的特异性的很强。

溶液中的葡萄糖有α-D- 葡萄糖和β-D- 葡萄糖两型，二者处于动态平衡。

当β-D- 葡萄糖不断受酶催化而减少时，α-D- 葡萄糖便依靠平衡移动，全部转变为β-D- 葡萄糖参与反应。

GA 催化β-D- 葡萄糖分子中的醛基氧化生成葡萄糖酸和 H 2 O 2 ，后者在过氧化物酶（ PA ）作用下放出氧，其可将色原性氧受体“4- 氨基安替吡啉偶联酚” 的酚氧化，并与 4- 氨基安替吡啉缩合生成红色化合物，其反应如下。

于505nm 与同样处理的标准葡萄溶液比色，可测得葡萄糖含量。

3、器材1.分光光度计2.恒温水浴3.微量加样器4.刻度吸量管5.中号试管【试剂】1 ． 0.01mol/L pH7.0 磷酸盐缓冲液无水 Na2HPO418.5g 和 KH2PO45.3g 溶于 800ml 蒸馏水中，用少量 1mol/L 的NaOH 或 HCl 调 pH 至 7.0 ，再加蒸馏水稀释至 1L 。

2 ．酶试剂取 GA1200 单位、 PA1200 单位， 4- 氨基安替吡啉 10mg 、叠氮钠 100mg ，加上述磷酸盐缓冲液至 80ml 左右，调 pH 至 7.0 ，再加同上缓冲液至 100ml ，混匀。

冰箱内保存可稳定 3 个月。

3 ．酚试剂酚 100mg 溶于 100ml 蒸馏水中。

因酚易在空气中氧化成红色，可先配制成 50g /dl ，贮棕色瓶中，用前稀释。

4 ．酶 - 酚混合试剂将试剂 2 、 3 等量混合。

冰箱内保存可稳定 1 个月。

5 ．葡萄糖标准贮存液（ 20mg/ml ）无水 D- 葡萄糖于80 ℃ 烤箱内干燥恒重，冷却后，称取 2.0g 以 0.25% 苯甲酸溶解、稀释定容至 100ml 。

6 ．葡萄糖应用标准液（ 100mg/dl ）取葡萄糖标准液 5ml ，加 0.25% 苯甲酸溶液稀释定容至 100ml 。

葡萄糖氧化酶法测血糖实验报告

一、实验目的学习和掌握葡萄糖氧化酶法测定血糖含量的方法，了解该方法的原理、操作步骤及注意事项，并通过实验验证其准确性和可靠性。

二、实验原理葡萄糖氧化酶法是一种检测血糖含量的常用方法，其原理为：葡萄糖在葡萄糖氧化酶的催化作用下氧化成葡萄糖酸，同时产生过氧化氢。

过氧化氢在过氧化物酶的催化作用下，与色原性氧受体缩合生成红色化合物。

该红色化合物的吸光度值与葡萄糖浓度成正比，通过比色法测定吸光度值，即可计算出样品中的葡萄糖浓度。

三、实验材料1. 试剂：- 葡萄糖标准溶液- 葡萄糖氧化酶试剂- 过氧化物酶试剂- 色原性氧受体试剂- 水浴箱- 分光光度计- 试管- 移液管- 吸量管- 比色杯2. 仪器：- 恒温水浴箱- 分光光度计- 移液管- 吸量管- 试管四、实验步骤1. 准备工作：- 标准溶液的配制：根据实验要求，配制不同浓度的葡萄糖标准溶液。

- 试剂的配制：按照试剂说明书配制好葡萄糖氧化酶试剂、过氧化物酶试剂和色原性氧受体试剂。

2. 样品处理：- 将待测血清或血浆置于试管中，加入适量的葡萄糖氧化酶试剂，混匀后置于水浴箱中保温反应。

3. 吸光度测定：- 反应结束后，取出试管，加入适量的过氧化物酶试剂和色原性氧受体试剂，混匀后置于分光光度计中，在特定波长下测定吸光度值。

4. 结果计算：- 根据标准曲线，将样品的吸光度值转换为葡萄糖浓度。

五、实验结果1. 标准曲线绘制：- 以葡萄糖浓度为横坐标，吸光度值为纵坐标，绘制标准曲线。

2. 样品测定：- 将样品的吸光度值代入标准曲线，计算样品的葡萄糖浓度。

六、实验讨论1. 葡萄糖氧化酶法具有操作简便、准确度高、特异性强等优点，是临床上常用的血糖测定方法。

2. 在实验过程中，应注意以下几点：- 试剂的配制要准确无误。

- 样品处理过程中要避免污染。

- 保温时间要适中，避免反应过度或不足。

3. 实验结果与正常值相比，无明显差异，说明本实验方法准确可靠。

七、结论葡萄糖氧化酶法是一种操作简便、准确可靠的血糖测定方法，适用于临床诊断和科研工作。

葡萄糖氧化酶操作规程

葡萄糖氧化酶操作规程1. 引言葡萄糖氧化酶（Glucose Oxidase，简称GOx）是一种常用于生物化学和生物分析学实验中的酶。

它具有将葡萄糖氧化为葡萄糖酸的能力，同时产生还原型辅酶Q10（ubiquinone 10），在氧气存在的条件下，GOx还能将还原型辅酶Q10再氧化回氧化型辅酶Q10。

由于GOx对葡萄糖的选择性和高效性，使其广泛应用于食品工业、医药领域以及科学研究，如血糖测试、葡萄糖检测等。

本文档旨在提供葡萄糖氧化酶操作规程，以指导实验操作者正确而安全地使用葡萄糖氧化酶进行实验。

2. 实验材料•葡萄糖氧化酶（GOx）粉末•储存于2-8℃的干燥密封容器中的葡萄糖氧化酶溶液•蒸馏水3. 实验操作步骤3.1 葡萄糖氧化酶的制备与稀释1.取适量的葡萄糖氧化酶粉末，按照实验需求将其溶解在储存于2-8℃的蒸馏水中，制备葡萄糖氧化酶溶液。

根据实验要求，可选择不同浓度的葡萄糖氧化酶溶液，需进行相应的稀释。

2.确保葡萄糖氧化酶溶液pH值在合适范围内，通常维持在6.5-7.5之间。

3.2 葡萄糖氧化酶的实验应用1.准备样品：根据实验要求，准备包含葡萄糖的待测样品，并进行必要的处理。

2.依据实验方案，将一定量的葡萄糖氧化酶溶液加入样品中，并充分混匀。

3.根据实验要求，调整反应温度、反应时间等参数，进行葡萄糖氧化酶催化反应。

4.在反应完成后，可通过不同方法进行测定，如测定产生的还原型辅酶Q10的吸光度、检测产生的葡萄糖酸等。

3.3 葡萄糖氧化酶的储存与保存1.使用后，将剩余的葡萄糖氧化酶溶液存放在2-8℃的冰箱中，避免暴露在高温或阳光下。

2.注意避免葡萄糖氧化酶溶液受到冻结。

如遇到低于0℃的温度，应将葡萄糖氧化酶溶液转移到-20℃的冰箱中储存。

3.根据葡萄糖氧化酶供应商提供的信息，保持葡萄糖氧化酶粉末或溶液的最佳储存条件。

4. 实验安全注意事项1.葡萄糖氧化酶溶液仅用于科研实验目的，禁止用于其他非科研用途。

葡萄糖氧化酶法测血糖实验报告

葡萄糖氧化酶法测血糖实验报告葡萄糖氧化酶法测血糖实验报告引言：血糖是人体内能量的重要来源之一，它对人体的正常运作至关重要。

因此，准确测量血糖水平对于疾病的诊断、治疗以及健康管理具有重要意义。

本实验旨在通过葡萄糖氧化酶法测量血液中的葡萄糖含量，以了解该方法的原理和应用。

实验步骤：1. 实验前准备：准备好实验所需的血糖试纸、葡萄糖标准溶液、葡萄糖氧化酶试剂等。

2. 取一滴指尖血：使用消毒棉球清洁手指，用无菌针刺破手指的一侧，轻轻挤压手指，使血液形成一滴。

3. 涂抹血液：将取得的血液滴在血糖试纸上，确保试纸完全吸收血液。

4. 加入试剂：将葡萄糖氧化酶试剂滴在试纸上，与血液充分混合。

5. 反应时间：根据试纸说明书上的时间要求，等待一定时间，让试剂与血液中的葡萄糖发生氧化反应。

6. 读取结果：将试纸放入专用的血糖仪中，等待仪器显示血糖浓度。

实验结果：通过实验测量，我们得到了不同血液样本的血糖浓度。

根据实验数据，我们可以得出以下结论：1. 血糖水平与时间的关系：我们发现血糖水平在不同时间段内有所变化。

通常情况下，饭后血糖浓度会升高，而空腹时血糖浓度较低。

这与人体对葡萄糖的代谢过程有关。

2. 血糖水平与饮食的关系：我们还观察到不同饮食对血糖水平的影响。

高糖饮食会导致血糖浓度升高，而低糖饮食则相对较低。

这提示我们在日常生活中要注意饮食结构的合理安排。

3. 血糖水平与运动的关系：运动对血糖水平也有一定影响。

剧烈运动会使血糖浓度下降，而适量运动则有助于维持血糖水平的稳定。

这表明运动对于血糖控制的重要性。

实验原理：葡萄糖氧化酶法是一种常用的测量血糖浓度的方法。

其原理是葡萄糖氧化酶能将葡萄糖催化氧化为葡萄糖酸，并伴随着还原型辅酶NAD+的还原为NADH。

通过测量NADH的光学密度变化，可以间接地测量血液中的葡萄糖浓度。

该方法的优点是操作简单、结果准确可靠。

然而，也存在一些局限性，如对于血液中其他物质的干扰较为敏感，需要进行进一步的校正和排除。

glucose kit (glucose oxidase method)

glucose kit (glucose oxidase method)一、简介葡萄糖试剂盒（葡萄糖氧化酶法）是一种常用的测定血糖浓度的实验室工具。

该方法基于葡萄糖与葡萄糖氧化酶的相互作用，所产生的过氧化氢在过氧化物酶的作用下产生有色物质，其浓度与葡萄糖浓度成正比。

这种方法具有准确性高、灵敏度高、稳定性好等优点，因此在医学、食品、饮料等领域得到了广泛应用。

二、试剂和材料1. 葡萄糖试剂盒：包括显色剂、底物、催化剂等成分。

2. 蒸馏水：用于配制试剂。

3. 酶标仪：用于测定有色物质浓度。

三、操作步骤1. 准备试剂：按照说明书将葡萄糖试剂盒中的各种成分配制好。

2. 样品处理：取适量血液或尿液样品，加入适量的缓冲液稀释，摇匀。

3. 加入试剂：分别加入显色剂和底物，摇匀，静置一定时间。

4. 加入酶标抗：加入过氧化物酶标记的抗体，摇匀。

5. 酶标仪检测：在特定波长下测定有色物质的吸光度，即可得到葡萄糖浓度。

四、结果分析根据实验得到的吸光度值，对照标准曲线即可得到葡萄糖浓度。

标准曲线的建立可以通过测定不同浓度葡萄糖标准品的吸光度值，绘制曲线得到。

五、注意事项1. 样品处理时，应避免样品污染和变质。

2. 实验过程中，要保证试剂和溶液的准确配制和保存。

3. 实验仪器要定期校准，以保证测量结果的准确性。

4. 实验过程中要保持环境清洁，避免污染。

六、准确性和灵敏度葡萄糖试剂盒（葡萄糖氧化酶法）具有较高的准确性和灵敏度，测量误差在允许范围内。

在实际应用中，应根据具体情况选择合适的试剂盒，并严格按照说明书操作，以保证测量结果的准确性。

七、适用范围葡萄糖试剂盒（葡萄糖氧化酶法）适用于测定血清、血浆、尿液等样本中的葡萄糖浓度，适用于医学、食品、饮料等领域的研究和检测。

在临床诊断、糖尿病监测、食品工业质量控制等方面具有广泛的应用价值。

八、总结葡萄糖试剂盒（葡萄糖氧化酶法）是一种常用的测定血糖浓度的实验室工具，具有准确性高、灵敏度高、稳定性好等优点。

血糖的定量测定(葡萄糖氧化酶法)

血糖的定量测定（葡萄糖氧化酶法）
实验目的及要求
掌握葡萄糖氧化酶法测定血糖含量的原理和方法。
学会取液器及自外可见分光光度计的使用
实验原理
D-葡糖糖
GOD
D-葡萄糖酸
+ H2O2
H2O2+4-AAP+苯酚POD红色醌化物+H2O
实验仪器及试剂
试管移液管 UNICO-2000型分光光度计恒温水浴锅
3 样本在4℃-8℃可稳定24h,样本放置时间过长会使结果偏低。
—— 1.50 1.50
测定管 ——
1.50 1.50
混匀，37℃保温15min，以空白管调零， 505nm波长处测定各管吸光度值。
计算血糖含量=A样/A标×标准溶液浓度
[实验注意事项]
1 分离血清要求使用未溶血样品，否则测定结果偏大。
2要求在30 min内分离血清，糖酵解在全血中以7%/h进行。
酶试剂：葡萄糖氧化酶（GOD）过氧化物酶（POD） 4-氨基安替吡啉（4-AAP）
酚试剂：苯酚标准葡萄糖溶液：100 mg/dL (5.55 mmol/L)
实验步骤
按下表加入各反应物：
加入物（ml）
空白管
葡萄糖标准
酚试剂
1.50
标准管
0.020

葡萄糖氧化酶法

葡萄糖氧化酶法葡萄糖氧化酶法是指将葡萄糖（Glc）作为底物，由某种特殊酶（G6Pase）催化氧化而产生氢氧化物（H2O2），该反应又称为微量氢氧化物（MDA）生成反应。

由于葡萄糖氧化酶法具有灵敏度高、反应时间短、反应简便、检测量程广等特点，近些年来在生物医药领域的研究应用越来越广泛，因此对于葡萄糖氧化酶法的介绍显得尤为重要。

一、葡萄糖氧化酶法的原理葡萄糖氧化酶法是通过由某种特殊酶（G6Pase）催化葡萄糖氧化而产生氢氧化物（H2O2），再由过氧化氢酶（H2O2ase）催化H2O2反应，最后将H2O2转化为电荷被电极检测，测定其等效电导率，来判断溶液中glc浓度。

该过程简称为G6Pase-H2O2ase流程。

二、葡萄糖氧化酶法的性能特点①灵敏度高。

以G6Pase酶为催化剂利用葡萄糖氧化酶法检测浓度非常低的葡萄糖，其灵敏度可达1μM。

②反应时间短。

由于采用了G6Pase酶催化葡萄糖氧化，所以在H2O2ase催化下，在室温下其反应时间仅为几分钟。

③反应简便。

葡萄糖氧化酶法的解决方案简单，只需要简单的试剂和仪器，实验过程也很简单，不用配制和稳定各种溶液，只需几步就可完成检测。

④检测量程广。

葡萄糖氧化酶法可从0.5μM到10.0mM范围内检测葡萄糖浓度。

三、葡萄糖氧化酶法的实际应用葡萄糖氧化酶法广泛应用于药物研发、疾病检测以及抗病毒活性等领域，由于其具有灵敏度高、反应时间短、反应简便以及检测量程广等特点，受到了广大科研人员的关注。

（1）药物研发。

葡萄糖氧化酶法可以方便快捷地检测药物活性，从而为药物研发提供重要依据。

（2）疾病检测。

葡萄糖氧化酶法可用于检测血液中的葡萄糖浓度，可以快速有效地诊断糖尿病。

（3）抗病毒活性的检测。

葡萄糖氧化酶法可用于检测抗病毒药物的活性，以便快速有效地诊断抗病毒药物的抗病毒活性。

综上所述，葡萄糖氧化酶法的发展为广大科研人员提供了一种新的检测技术，在药物研发、疾病检测以及抗病毒活性等领域均有着重要的应用价值。

葡萄糖氧化酶法须知

因氧化酶方法的反应过程需要氧气参与，所以海拔高度试验应按相应的要求进（奥咨达医疗器械咨询）行。 • 葡萄糖脱氢酶法 • 葡萄糖脱氢酶法一般有三种方法:NAD-GDH、FAD-GDH、PQQ-GDH。因为葡萄糖脱氢酶方法反应过程不需要氧气参与，因此海拔高度试验无需进行，但该方法的特异性较差。如NAD-GDH、FAD-GDH 方法在测量过程中会与木糖、PQQ-GDH方法会与麦芽糖、木糖及半乳糖等非葡萄糖发生交叉反应，可能会使测定的血糖浓度过高导致患者注射胰岛素过量发生危险。因此凡是采用此种方法设计的血糖监测系统，必须在说明书中明确注明“该方法在何种情况下可能导致血糖检测值过高，有可能因胰岛素注射过量发生危险”。 • 其它工具酶或检测方法应关注的可能干扰因素。

葡萄糖氧化酶法测定血糖浓度

结果分析
一.结果可报告范围：本法对葡萄糖的检测范围为0.06～22.2 mmol/L。当样品测定值超过上限时，应将样品用9 g/L氯化钠溶液作1+ 4稀释，重新测定，结果乘以5。
二.当样品中抗坏血酸浓度≤ 852 µmol/L，胆红素浓度≤ 684 µmol/L ，血红蛋白浓度≤ 2.00 g/L，甘油三酯浓度≤ 22.6 mmol/L时没有观察到干扰。
三.测定的血糖浓度异常：反应不彻底引起的（偏低）葡萄糖标准溶液浓度有问题（偏高或偏低）移液器引起的（偏高或偏低）
【讨论】
本法测定葡萄糖非常特异，从原理反应式中可知第一步是特异反应，第二步特异性较差。误差往往发生在反应的第二步。一些还原性物质如尿酸、维生素C、胆红素和谷胱甘肽等，可与色原性物质竞争过氧化氢，从而消耗反应过程中所产生的过氧化氢，产生竞争性抑制，使测定结果偏低。（1）葡萄糖＋O2＋H2O 葡萄糖酸＋H2O2
标准浓度法 A标=KC标L A样=KC样L
C 样=
A样
A标
× C标
实验前准备
【标本】 1.血浆应在血液采集1小时内尽早分离。
【试剂】酶酚混合试剂（PH7.0） 5mmol/L葡萄糖标准应用液班氏试剂【器材】试管、试管架、吸量管、移液枪、恒温水浴、722型分光光度计。
具体操作
（1）称重；（2）取血： •找到耳缘静脉，二甲苯擦拭，涂薄层凡士林（有何作用）。 •用三棱针刺破耳缘静脉放血(自然血流)，将血液收集于草酸钠抗凝管内（边接边摇,以防凝固），取约5ml 。 •离心，2000rpm，10min，取上清，编号；（3）注射激素后再取血: •皮下注射肾上腺素(0.4mg/kg体重)，记录在注射时间。 •30min后取血5ml于抗凝管内, 离心，2000rpm，10min ，取上清，编号。