实验4 植物细胞骨架的观察

中国海洋大学实验报告姓名：常天易系年级：海洋生命学院2012级专业：生物科学

科目：分子细胞生物学实验学号：12050011006

植物细胞骨架的观察

一、实验目的：

1. 掌握植物细胞骨架处理及染色方法。

2. 对细胞骨架的形态和分布有一个初步认识。

二、实验原理：

真核细胞胞质中存在的纤维网状结构称为细胞骨架，包括：微管（直径20-25nm）、微丝（直径6-7nm）、中间丝（直径10nm）、和粗丝等。考马斯亮蓝R250是一种普通的蛋白质染料，它可以使各种细胞骨架蛋白着色，显示微丝组成的张力纤维。张力纤维（直径40nm）在体外培养细胞中普遍存在，与细胞对基质的附着，维持细胞扁平铺展的性状有关。

三、实验材料

洋葱表皮细胞

试剂：

1、0.01mol/L的磷酸盐缓冲液

2、M-缓冲液

3、1%Triton X-100/M-缓冲液

4、30%戊二醛-PBS溶液

四、实验方法

五、实验结果

核骨架

六、思考题：

1．洋葱表皮细胞中，质膜下，核围，胞质中的细胞骨架分布有无不同？

答：

质膜下细胞骨架比较稀疏，细胞膜骨架膜骨架(membrane skeleton)是质膜下与膜蛋白相连的由纤维蛋白构成的网架结构，普遍存在于各种细胞中，参与维持质膜的形状, 并协助质膜完成多种生理功能。

胞质中的细胞骨架比较均匀，主要有微管和纤丝组成，参与物质的运输，维持细胞的形态，参与细胞的运动，参与纺锤体的形成等作用。

细胞核中染色最深，是因为细胞核骨架的存在，细胞核骨架包括染色体骨架，细胞质基质和核纤层。在图2中可以观察到细胞核中有好几处染色特别深（箭头所指处），为核仁的致密纤维成分。

2．为什么实验中所看到的洋葱表皮细胞中的细胞骨架有的呈纤维状，有的呈串珠状？

答：

实验中所看到的洋葱表皮细胞中的细胞骨架有的呈纤维状，呈纤维状的细胞骨架主要成分是张力纤维的成分，用于维系整个细胞。

呈念珠状的成分有：1.由于在处理条件下，细胞骨架不可避免的存在解聚，由于细胞骨架的解聚，呈现念珠状的细胞骨架。2.在微管

上有运输的囊泡，也可以被染成蓝色。3.有的细胞器也可以沿着细胞而运动，所以也有可能被染成蓝色。

七、总结与讨论

观察到的细胞骨架为张力纤维，由微丝组成，直径40nm，参与细胞对基质的吸附

1、实验中各个试剂的作用为：

①、PBS溶液：保持细胞的形态

②、TritonX-100通透细胞膜，溶解细胞膜，利于细胞内物质的释放，有利于染液的进入

③、M-缓冲液，含有咪唑基，起到缓冲作用，其中含有的EDTA，螯合溶液中的Ca2+，在低钙条件下，骨架纤维保持聚合状态并且较为舒张

④、戊二醛，固定细胞。之所以不用甲醛溶液，是因为戊二醛的固定效果更好，不会破坏细胞骨架

2、由于细胞核中含有丰富的细胞核骨架包括核纤层、细胞核基质与染色体骨架构成，在考马斯亮蓝的染色下可以呈现蓝色