实验操作手册NP测定
WHO人类精液检验与处理实验手册第五版
致谢本手册的出版由UNDP/UNFPA/WHO/世界银行人类生殖研究、发展和研究培训特别规划署及WHO人类生殖健康与研究部共同完成。
我们对所有参与本手册筹备、编辑和校订的人员表示诚挚的感谢。
另外感谢：Ms Cathy Treece,Ms Charlene Tollner和Jim Overstreet教授(University of California,Davis,CA,USA)提供形态学显微照片以及对媒体文件的校对；Dr Rune Eliasson(Sophiahemmet Hospital,Stockholm,Sweden)帮助定义非精子细胞；Dr Gary N Clarke(The Royal Women´s Hospital,Carlton,Australia),Dr Roelof Menkveld(Tygerberg Academic Hospital and University of Stellenbosch, Tygerberg,South Africa)和Pieter Wranz教授(University of Stellenbosch,Tygerberg, South Africa)对本手册编译工作提供附注。
衷心感谢国际男科学会提供的经济支持。
这个版本的手册是为纪念已故前WHO男性生育调控方法学工作组负责人Geoffrey Waites(1928-2005)，他也是第二、第三和第四版实验室手册的共同编辑。
编辑委员会全身心投入工作的动力来自于对Geoff诚实、公平和关心疾苦人格的欣赏。
缩写词Ab antibody抗体AI artificial insemination人工授精AID artificial insemination with donor semen供精人工授精AIH artificial insemination with husband’s semen夫精人工授精ALH amplitude of lateral head displacement头侧摆振幅ANOVA analysis of variance变量分析APAAP alkaline phosphatase:anti-alkaline phosphatase complex碱性磷酸酶:抗碱性磷酸酶复合物AR acrosome-reacted顶体反应ART assisted reproductive technology辅助生殖技术ASA anti-sperm antibody抗精子抗体BCF beat-cross frequency(Hz)交打频率BSA bovine serum albumin牛血清白蛋白BWW Biggers,Whitten and Whittingham试液CASA computer-aided sperm analysis计算机辅助精子分析CASMA computer aided sperm morphometric assessment计算机辅助精子形态评估CBAVD congenital bilateral absence of the vas deferens先天性双侧输精管缺失CD compact disk压缩盘CD cytoplasmic droplet胞质小滴CD45cluster of determination45(pan-leukocyte marker)决定簇45(全白细胞标记物)CD46cluster of determination46(acrosomal antigen)决定簇46(顶体抗原)CI confidence interval可信区间CL confidence limits可信界限CO2carbon dioxide二氧化碳DMSO dimethyl sulfoxide二甲基亚砜DNA deoxyribonucleic acid脱氧核糖核酸DPBS Dulbecco’s phosphate-buffered saline Dulbecco’s磷酸缓冲盐溶液DVD digital versatile disc数字多用盘EDTA ethylenediamine tetra-acetic acid乙二胺四乙酸（依地酸）EQA external quality assurance外质量保险EQC external quality control外质量控制ERC excess residual cytoplasm残余胞质FITC fuorescein isothiocyanateFMLP formyl-methionyl-leucyl-phenylalanine甲酰-甲硫氨酰-亮氨酰-苯丙氨酸GIFT gamete intrafallopian transfer输卵管内配子移植术GPC glycerophosphocholineH2O2hydrogen peroxide过氧化氢HBSS Hanks’balanced salt solution Hanks’平衡盐溶液HBV hepatitis B virus乙肝病毒hCG human chorionic gonadotrophin人绒毛膜促性腺激素HCV hepatitis C virus丙肝病毒HIV human immunodefciency virus人免疫缺陷病毒HOP hamster oocyte penetration仓鼠卵穿透HOS hypo-osmotic swelling低渗肿胀试验HPF high power field高倍视野HRP horseradish peroxidase辣根过氧化物酶HSA human serum albuminxiv人血清白蛋白IVHTF human tubal fuid人输卵管液IB immunobead免疫珠IBT immunobead test免疫珠试验ICSI intracytoplasmic sperm injection胞浆内精子注射Ig immunoglobulin免疫球蛋白IM immotility不动IQC internal quality control内质量控制IU international unit国际单位IUI intrauterine insemination宫腔内人工授精IVF in vitro fertilization体外受精KRM Krebs-Ringer Medium Krebs-Ringer培养液LIN linearity线性LLQ lower limit of quantifcation定量下限LPF low power field低倍视野MAD mean angular displacement平均角位移MAI multiple anomalies index复合异常指数MAR mixed antiglobulin reaction混合抗球蛋白反应NA numerical aperture数值孔径NP non-progressive(motility)非前向的（活力）PBS phosphate-buffered saline磷酸缓冲盐溶液PDCA plan,do,check,actPMA phorbol12-myristate13-acetate(12-)十四酸佛波酯(-13-)乙酸盐PMSG pregnant mare serum gonadotrophin孕马血清PNPG p-nitrophenol glucopyranoside对硝基苯酚吡喃葡萄糖苷PR progressive(motility)前向的（活力）PSA Pisum sativum agglutinin碗豆凝集素QA quality assurance质量保险QC quality control质量控制RCF relative centrifugal force相对离心力RI refractive index屈光指数RNA ribonucleic acid核糖核酸ROS reactive oxygen species活性氧类物质rpm revolutions per minute每分钟转速SD standard deviation标准差SDI sperm deformity index精子畸形指数SDS sodium dodecyl sulfate十二烷基硫酸钠SE standard error标准误SOP standard operating procedure标准操作流程STR straightness(VSL/VAP)直向TBS Tris-buffered saline Tris缓冲盐溶液TGG Tyrode’s glucose glycerolTZI teratozoospermia index畸形精子症指数VAP average path velocity平均轨道速率VCL curvilinear velocity曲线速率VSL straight-line(rectilinear)velocity直线速率WHO World Health Organization世界卫生组织WOB wobble(VAP/VCL)摆动第1章背景1.1导言鉴于人类精液检查标准化需求的日益增加，世界卫生组织于1980年首次出版了《世界卫生组织人类精液及精子-宫颈粘液相互作用实验室检验手册》。
气相色谱仪氮磷检测器(NPD)使用手册
气相色谱仪氮磷检测器（NPD）使用手册1 结构上部是收集极，直径为6mm带栅网的圆筒，通过信号探头与放大器连接，铷珠在中部，由铷珠探头直接插入，下部是喷嘴，装在主体中央用黄铜压环密封。
载气和氢气在检测器主体内混合均匀后进入喷嘴。
助燃气空气通入主体后由喷嘴下方均匀喷出。
图8-1仪器结构示意图2 原理氮磷检测器（NPD）是无火焰的离子化质量流量型检测器，对氮和磷化物灵敏度高，选择性好，又称热离子检测器。
NPD工作时，氢气流量每分钟仅几毫升，这样低的流量在喷嘴上不足以形成火焰，也不能把铷珠加热。
外加一个恒定电流，把铷珠加热到700℃～900℃，使氢气在红热的铷珠表面燃烧。
当含氮及硫化物随载气由喷嘴流出，围绕铷珠的气体混合物分解产生离子，这些离子被收集，用放大器把离子放大，并输出响应信号。
3 主要技术数据检测限：M N=5×10-13g/s（进口铷珠）M P=5×10-13g/s（进口铷珠）M N=1×10-12g/s（国产铷珠）M P=1×10-12g/s（国产铷珠）时间常数范围：0.2s珠加热电流：（0～4）A最高使用温度：400℃4 操作4.1 气体的种类与纯度载气用氦气比用氢气灵敏度高，载气和氢气的纯度要高于99.995%，空气应除去有机化合物，无机杂质。
4.2 氢气的流速在气流中氢气与载气和空气相比对氮与磷，氮与碳及磷与碳的选择性影响最大，氢气不是定值，只有在操作中用测试样品在不同的氢气流速下的响应选择。
4.3 铷珠的表面温度铷珠的表面温度是铷珠的加热电流所产生热量和铷珠周围气体的对流和传导损耗热量间的热平衡。
铷珠的表面温度由空气、氢气和载气流速及检测器温度决定。
铷珠的表面温度按需要，通过调节铷珠加热电流来设定。
铷珠的温度越高基流越大，灵敏度越高但噪声也增加，超过一定温度反而减小，并影响铷珠的使用寿命。
不宜在高电流下长时间操作，通常铷珠灵敏度随时间逐渐减小。
NPW150使用手册
开始(a)真诚感谢使用本产品。
对氮·磷/COD自动测量装置—NPW-150型，自动测量工矿企业的排水以及河川、湖泊的排水中含氮·磷/COD浓度。
試料水例：氮·磷/COD自动测量系统(b)这个产品，作为财富营养化防止对策在水质污浊防止法中被规定，氮·磷与环境基准及排水基准的测量对应着。
(c)本产品采用120℃二硫酸钾分解法—紫外线吸光光度法对氮素测定或者120℃二硫酸钾分解法—钼青吸光光度法对磷的测定。
COD测定采用紫外线吸光光度法。
(d)本产品的测定采用１流路自动采水系统，氮·磷/COD自动测定。
(e)贩卖品和纯水器组合的时，请参照下一项目。
参照８．１内藏型纯水器 ８．２设备以外的纯水注入对下面的表现主要的方法。
主要的方法方法项目内容測定対象水中的氮·磷/COD浓度測定方法TN ：由于120℃peruokiso二硫酸钾分解法-紫外线吸光光强法的全氮的测量TP ：由于120℃peruokiso二硫酸钾分解法-钼青(Ascorbic acid)吸光光强法的全Rin的测量COD ：2波长吸光光强法(紫色户外的光线254nm/可见光546nm)測定範囲从TN :0～20～200mg/L从(超越0～5mg/L的时候稀释试料水测量)TP :0～0.50～20mg/L从(超越0～2mg/L的时候稀释试料水测量)COD :0～200～500mg/L測定周期同时测量,1小时/1测量的间歇测量(1～6小时设定可)流路1点(f)这个产品，在分析构筑该系统时，需要根据该系统的特性，避免不必要的退化和损伤，电缆的绝缘不良，周围的电的噪音，不恰当的运转条件的设定和校对操作,其他不预期的现象做异常的动作。
(g)｢为了安全｣，因为重要的事记载着，请特别很好地读。
(h)对产品和药品的管理维护，需要专业的技术人员负责。
对于技术方面的修理则由此产品制造商进行修理，或者由产品制造商制定的公司进行修理。
羟丙氧基测定法标准操作规程
羟丙氧基测定法标准操作规程目的：制订羟丙基测定法标准操作规程。
适用范围：羟丙基测定。
责任：检验室检验人员按本规程操作，检验室主任监督本规程的实施。
程序：1.操作步骤1.1取各药品项下规定量的供试品，精密称定，置蒸馏瓶D中，加入30%（g/g）三氧化铬溶液10ml。
1.2于蒸汽发生管B中装水近接头处，连接蒸馏装置。
1.3将B与D均浸入油浴中，油浴面应与D瓶中液面相一致。
开启冷却水，通入氮气流，并控制流速为每秒种约1个气泡，于30分钟内将油浴升温至155℃，并维持反应温度至收集馏液约为50ml。
将冷凝管自分馏柱上取下，并用水冲洗，洗液并入收集液中。
1.4在上述收集液中，用氢氧化钠滴定液（0.02mol/L）滴定至pH为6.9～7.1（用酸度计），记录消耗的容积V1（ml）；然后加碳酸氢钠0.5g与稀硫酸10ml，静置至不再产生二氧化碳为止，加碘化钾1.0g，密塞，摇匀，暗外放置5分钟，加淀粉指示液1ml，用硫代硫酸钠滴定液（0.02mol/L）滴定至终点，记录消耗的容积V2（ml）。
1.5另做空白试验，分别记录消耗氢氧化钠滴定液（0.02mol/L）的容积V a（ml）与消耗硫代硫酸钠滴定液（0.02mol/L）的容积V b（ml）。
2.注意事项2.1整个装置连接应紧密。
2.2称样后，应小心移入蒸馏瓶中，供试品不应粘附在瓶颈壁上，避免供试品未参加反应，使含量偏低。
2.3反应过程中，升温速度不宜太快，油浴温度宜控制在30分钟内升温至155～160℃左右，并一直控制在160℃以下。
通入氮气的速度不能太快，避免生成的醋酸来不及冷却而挥发，影响测定结果。
2.4第一步用氢氧化钠滴液滴定时，一定要严格控制终点，否则影响测定值。
3.记录与计算3.1记录天平型号及室温和相对温度，供试品与试药品的名称，规格及取用量，滴定液的名称、浓度（mol/L）及其消耗量（ml）。
3.2计算OCH2CHOHCH3%＝（V1M1-KV2M2）×(0.0751/W)×100%式中K为空白校正系数，M1V a/M2V b；V1、V a分别为供试品与空白试验消耗氢氧化钠滴定液的体积（ml）；V2、V b分别为供试品与空白试验消耗硫代硫酸钠滴定液的体积（ml）；W为供试品的重量（g）；M1为氢氧化钠滴定液的浓度（mol/L）；M2为硫代硫酸钠滴定液的浓度（mol/L）；0.0751 羟丙氧基（-OC3H6OH）的毫摩尔供试品应测定两份，相对偏差不得过。
氨丁三醇检验操作规程
氨丁三醇检验操作规程一、目的本操作规程旨在规范氨丁三醇的检验过程，确保检验结果的准确性和可靠性。
二、适用范围本操作规程适用于氨丁三醇的化学分析、样品处理、数据记录和报告编写等环节。
三、职责1.实验室管理员负责安排实验室使用和设备维护，确保检验工作顺利进行。
2.检验人员负责按照本规程进行氨丁三醇的检验操作，并对检验结果进行分析和报告。
四、检验操作流程1.准备工作（1）确认实验室安全，穿戴好防护用品，如防护眼镜、手套等。
（2）准备所需的试剂和设备，包括氨丁三醇标准品、样品、反应瓶、试剂瓶、滴管、搅拌器等。
2.样品处理（1）按照取样标准进行样品选取和前处理，确保样品具有代表性。
（2）将样品放入反应瓶中，加入适量的试剂进行反应。
3.化学分析（1）观察反应过程，记录反应温度、时间等参数。
（2）使用滴管逐滴加入试剂，并观察反应变化。
（3）在规定时间内完成反应，记录实验数据。
4.数据处理和报告（1）对实验数据进行处理和分析，计算氨丁三醇的含量。
（2）编写检验报告，记录检验结果和相关信息。
五、安全注意事项1.操作过程中需佩戴防护眼镜、手套等防护用品。
2.避免皮肤接触氨丁三醇及其溶液，如不慎接触，应立即用清水冲洗。
3.注意实验室通风，保持空气流通。
4.废液需按照规定进行处理，不得随意排放。
5.在使用高压设备或易燃试剂时，需特别注意安全操作规程。
6.实验结束后，应对实验室进行清理和消毒。
7.废弃物处理需符合环保要求。
8.在进行实验前，应仔细阅读相关安全手册和操作规程。
9.在实验过程中如遇紧急情况，应立即停止实验并采取相应措施。
10.实验结束后，应对实验数据进行复核以确保准确性。
NPP的测定
实验十森林群落第一性生产力的测定与分析一实验原理通过植物群落光合作用生产的有机物质，称为第一性生产力。
第一性生产又称总生产和净生产两个概念。
生产力通常以单位土地面积和单位时间里，由植物生产的有机物质量（干物质量或除去灰分的干物质量）来表示，也可以用碳量，或者热能量来表示。
总生产量是指一定期间里植物光合作用所产生的有机物同化量。
其中，包括同一期间内植物体因呼吸而失去的有机物质消耗量。
而净生产是指从总生产量（＝总光合量）中，减去植物各器官中呼吸作用消耗的有机物质的量。
此外，净生产量在植物群落中还指植物的全部有机物生产量，包括经济上未必有用途的地下部分。
这应该与经济上有用的部分（例如，牧草的地上部分）的产量和农林牧业中往往称为生产力的产量区别开来。
二实验目的群落第一性生产力是整个生物圈中生命部分对太阳能第一次固定后，保留在生态系统有机体中能力的描述。
这部分能量是生态系统中能量流动的源泉，在生态系统中具有重要的实用价值。
测定植物第一性生产力，使我们能够了解群落中不同植物种的生长特点，生产力的大小，为我们提供了比较不同植物经济、生态、社会价值的参考依据。
据此，通过分析植物生产力的大小，参考植物在群落中的位置和生态作用，可以揭示不同种植物在群落中的作用，从而为人类利用和改造生态系统提供了理论上的依据。
三仪器与设备铁铲、锄头、标本夹、记录本、剪刀、海拔仪、光度计、望远镜、GPS，罗盘仪、坡度计、烘干箱、天平、测高仪、电刨、锯刀、放大镜等。
四方法与步骤1 森林群落现存量的测定与分析现存量是某一特定观察时刻，某一空间范围内现有有机体的数量。
①确定调查样地在研究的森林群落中，确定有代表性的样地，面积可取20m×20m或30m×30m等，根据具体群落而定。
选择样地的原则是结构、种类复杂的应大些，一般不应小于群落的最小面积。
在斜坡上可采用长方形的样地，长边和山坡等高线平行。
样地确定后，记录群落的层次结构、郁闭度、板根、藤本、附生植物等，画出群落剖面图。
中性蛋白酶(NP)活性检测试剂盒说明书 微量法
中性蛋白酶（NP）活性检测试剂盒说明书微量法注意：正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定货号：BC2295规格：100T/48S产品内容：提取液：液体55mL×1瓶，4℃保存。
试剂一：粉剂×1瓶，4℃保存。
临用前加4mL蒸馏水溶解。
试剂二：粉剂×1瓶，4℃避光保存。
临用前加入4mL提取液，沸水浴中磁力搅拌溶解。
试剂三：液体20mL×1瓶，4℃保存。
试剂四：液体4mL×1瓶，4℃保存。
标准品：液体1mL×1支，0.25μmol/mL标准酪氨酸溶液，4℃保存。
产品说明：NP在一定的温度和中性pH条件下，催化水解蛋白质。
由于其安全无毒、水解能力强、作用范围广等特点，中性蛋白酶常用于食品、饲料、化妆品和营养保健品生产。
中性条件下，NP催化酪蛋白水解产生酪氨酸；在碱性条件下，酪氨酸还原磷钼酸化合物生成钨蓝；在680nm有特征吸收峰。
试验所需自备仪器和用品：研钵、台式离心机、可见分光光度计/酶标仪、微量玻璃比色皿/96孔板、水浴锅、磁力搅拌器、可调式移液枪、1.5mL EP管和蒸馏水。
操作步骤：一、粗酶液提取：称约0.1g组织，加入1ml提取液，冰上充分研磨，10000rpm4℃离心10min，取上清，即粗酶液，置冰上待测。
或直接称取0.1g酶制品，加入1mL提取液，置冰上待测。
二、测定：1.分光光度计预热30min以上，调节波长到680nm，蒸馏水调零。
2.试剂一、试剂二和试剂三置于30℃水浴保温30min以上。
3.样本测定（在1.5mLEP管中依次加入下列试剂）试剂名称（µL）对照管测定管空白管标准管粗酶液2020试剂一40试剂二40混匀后30℃水浴保温10min试剂一40试剂二40混匀后10000rpm4℃离心10min，取上清上清4040蒸馏水40标准品40试剂三200200200200试剂四40404040混匀后30℃水浴保温20min取200μL于微量玻璃比色皿/96孔板，于680nm测定光吸收，分别记为A对照管、A测定管、A空白管、A标准管，并计算△A测定=A测定管-A对照管、△A标准=A标准管-A空白管。
通用气相色谱仿真实训操作说明
通用气相色谱仿真实训操作说明点击界面中左下角功能钮“流程图界面”，直接进入实验操作。
主界面如图6。
学员做气相色谱定量分析仿真实验“白酒中甲醇的测定”，可按以下步骤操作（对此软件有一定程度的熟悉后，并不需要严格按以下步骤操作，学员完全可以根据对所学知识的理解，进行些创造性的操作）。
下面说明部分只以一个实验的完整操作讲解，其他实验灵活运用，操作方法类似。
（图6）“实验讲义”钮：点击查看实验讲义。
“电源”钮：操作电源开启和关闭。
“功能钮”：点击进入所需界面。
“状态提示栏”：在操作过程中提示实验相关信息。
“流程图操作区”：点击图形部分，在弹出窗口中设置该图形代表设备元件相关实验参数。
“参数设置状态区”：文字灰色表示没有对该参数进行设置。
暗红色表示已经对其设置过。
“参数查看区”：查看相关实验参数设置值。
具体的实验操作请点击“实验讲义”，可以按上面的步骤进行操作。
下面以“气相色谱技能大赛”目录下的“白酒中甲醇的测定”为例：1．开机操作（1）单击电源开关打开电源。
点击“检测器”图形区，弹出“检测器”窗口，在“检测器选择”中选择“FID检测器”。
点击“确定”。
（2）设定载气流量：鼠标光标放在“气体钢瓶”上，单击弹出“气体设置”窗口。
在载气输入框中写入50（可自行设计载气流量）。
点击“确定”。
如下图（3）设定柱温和进样口温度：鼠标光标放在“色谱柱”上。
出现手形后点击弹出“气相色谱柱”窗口，在柱温设定中输入180（可自行设计柱温）。
点击“确定”钮。
点击“汽化室”弹出“进样口设置”，在“温度设置”中输入210（可自行设计汽化室温度），点击“确定”。
如下图。
（4）单击“升温”钮，开始升温。
点击“气体钢瓶”图形区，在“气体设置窗口中”，设定空气流量为500ml/min（可自行设计），氢气流量为80ml/min（可自行设计）。
如下图。
单击，如果点火成功，在按钮旁出现火点燃的示意图标。
点火成功后，将氢气流量调到50 ml/min（可自行设计，最终目的是得到最佳氮氢比，提高检测灵敏度）。
海水中NP含量的测定
海水中N，P含量的测定——厦门海域富营养化情况组长：刘鹏组员：刘明玮，黄云清，黄超，吴火星，郑慧坤一．富营养化概述1.1.富营养化的产生及概况：氮、磷是水生植物生长必需的营养元素，但是，水体所含氮、磷过多，停留时间过长，将使藻类及浮游生物过量生长而引起水体的富营养化。
水体出现富营养化现象时，水中溶解氧迅速减少，水体呈现不同颜色，死亡的动植物腐烂发臭，释放出硫化氢等难闻气体，使水质进一步恶化。
海水中的主要营养物质包括氮、磷、碳等物质，其中磷的主要影响是在叶绿素的光合作用中体现出来，氮和碳主要通过一些化学反应影响海水质量。
1.2.氮和磷引起富营养化的原因：水中的氮主要以Ｎ2、ＮH4+、ＮO3—、ＮO2—和有机氮等几种形式存在,除从空气中溶解少量游离氮外,主要是来源于有机氮。
有机氮在生物体经过代谢又以ＮH3的形式排出,后者在环境中经亚硝化菌和硝化菌的作用,依次转变为ＮO3—和ＮO2—,然后又经过反硝化细菌的作用,最终转变为Ｎ2。
在大量缺氧条件下,硝化过程不能进行,(ＮO3-)- NO2在微生物作用下,发生反硝化作用;使硝酸盐又还原为ＮH3。
这样，通过各种生物反复循环反映，就产生了大量的离子，从而产生大量的营养盐。
水体中磷的存在形式主要以正磷酸盐((PO4)3-、(HPO4)2-、(H2PO4) )、多聚磷酸盐((P2O7)4-、(P3O10)5-、(P3O9)3-、(HP3O9)2-)、有机磷酸物(葡萄糖—6—磷酸、2—磷—甘油酸,磷肌酸等)、胶态成颗粒态存在的磷化合物组成。
水中可溶磷的含量很少,易与Ca2+、Fe3+、Al3+等生成难溶性沉淀物(如Ca5OH(PO3)3、AlPO4、FePO4)多沉积于水体底泥。
无机磷在微生物作用下被改造成ATP和ADP进入生物体,它是生物体中生物化学反应的能源。
PO43- ATP 甘油磷酸酯糖 + ADP甘油PO43- + 糖大家都知道ATP是生物体能量的直接来源，磷在生物体内的一个重要作用就是合成ATP，过量的磷存在，就会使植物获得大量的能量，使植物大量繁殖，从而导致富营养化。
海水中NP含量的测定-推荐下载
海水中N，P含量的测定——厦门海域富营养化情况组长：刘鹏组员：刘明玮，黄云清，黄超，吴火星，郑慧坤一．富营养化概述1.1.富营养化的产生及概况：氮、磷是水生植物生长必需的营养元素，但是，水体所含氮、磷过多，停留时间过长，将使藻类及浮游生物过量生长而引起水体的富营养化。
水体出现富营养化现象时，水中溶解氧迅速减少，水体呈现不同颜色，死亡的动植物腐烂发臭，释放出硫化氢等难闻气体，使水质进一步恶化。
海水中的主要营养物质包括氮、磷、碳等物质，其中磷的主要影响是在叶绿素的光合作用中体现出来，氮和碳主要通过一些化学反应影响海水质量。
1.2.氮和磷引起富营养化的原因：水中的氮主要以Ｎ2、ＮH4+、ＮO3—、ＮO2—和有机氮等几种形式存在,除从空气中溶解少量游离氮外,主要是来源于有机氮。
有机氮在生物体经过代谢又以ＮH3的形式排出,后者在环境中经亚硝化菌和硝化菌的作用,依次转变为ＮO3—和ＮO2—,然后又经过反硝化细菌的作用,最终转变为Ｎ2。
在大量缺氧条件下,硝化过程不能进行,(ＮO3-)- NO2在微生物作用下,发生反硝化作用;使硝酸盐又还原为ＮH3。
这样，通过各种生物反复循环反映，就产生了大量的离子，从而产生大量的营养盐。
水体中磷的存在形式主要以正磷酸盐((PO4)3-、(HPO4)2-、(H2PO4))、多聚磷酸盐((P2O7)4-、(P3O10)5-、(P3O9)3-、(HP3O9)2-)、有机磷酸物(葡萄糖—6—磷酸、2—磷—甘油酸,磷肌酸等)、胶态成颗粒态存在的磷化合物组成。
水中可溶磷的含量很少,易与Ca2+、Fe3+、Al3+等生成难溶性沉淀物(如Ca5OH(PO3)3、AlPO4、FePO4)多沉积于水体底泥。
无机磷在微生物作用下被改造成ATP 和ADP进入生物体,它是生物体中生物化学反应的能源。
PO43-甘油磷酸酯糖 + ADP甘油PO43- + 糖大家都知道ATP是生物体能量的直接来源，磷在生物体内的一个重要作用就是合成ATP，过量的磷存在，就会使植物获得大量的能量，使植物大量繁殖，从而导致富营养化。
NP_HPLC法测定三七药材中总皂苷含量_高瑛
中国药品标准 2011 年第 12 卷第 5 期 347
图 1 HPLC 色谱图
A. 甲醇； B. 混合对照品； C. 三七药材
表 1 4 种皂苷线性关系测定结果
指标成分
回归方程
人参皂苷 Rg1 人参皂苷 Re 人参皂苷 Rb1 三七皂苷 R1
Y = 310 127X － 9 443. 2 Y = 322 747X + 1 898. 9 Y = 277 376X － 35 807 Y = 328 372X + 3 866. 9
精密吸取“2. 3”项下供试品溶液，在制备后 0， 1，2，4，8，12，24 h 进样测定，结果人参皂苷 Rg1 ，人 参皂苷 Re，人 参 皂 苷 Rb1 ，三 七 皂 苷 R1 峰 面 积 的 RSD 分 别 为 1. 98% ，1. 73% ，2. 06% ，2. 43% ； 表 明 供试品溶液在 24 h 内稳定。 2. 7 重复性试验
29不同规格三七药材的含量测定的加样回收率结果n6称样量g样品中含量mg加入量mg测得量mg回收率平均回收率rsd02011791604243212282410290019937845142434122052102750199878648435351232541024610255082020047888442538123004103720199778609417941208791011401991783734198012132910233人参皂苷re的加样回收率结果n6称样量g样品中含量mg加入量mg测得量mg加样回收率平均回收率rsd0201123096101353321999890199322889091083179697790199822946089673151695579732196020042301509033316849596019972293509041318999915019912286608934314039555的加样回收率结果n6称样量g样品中含量mg加入量mg测得量mg回收率平均回收率rsd020115328440030925999821019935280740669931709925019985293941035939751000099260780200453098407419364299520199752913413809432910009019915275440185923289848的加样回收率结果n6称样量g样品中含量mg加入量mg测得量mg回收率平均回收率rsd020111176210831225479958019931165710004216419980019981168610340216589644993817202004117211070722272985401997116801102922796100780199111645112322300310112称取不同规格的三七粉末过四号筛按23项下方法制备供试品溶液依上述色谱分析条件测定各规格三七药材中所含4种皂苷及总皂苷含量结果见表6
氮磷检测器(NPD)及检测方法
第三章氮磷检测器及检测方法氮磷检测器(NPD)是气相色谱检测器的后起之秀。
它是电离型检测器之一，检测低基流背景下信号电流的增加。
NPD对氮磷化合物灵敏度高，专一性好，专用于痕量氮、磷化合物的检测。
NPD由碱火焰电离检测器(AFID)发展而来。
1964年Karman和Ciuffrida首次报道了钠火焰电离检测器，对含磷和卤素化合物有选择性的响应，以后又有多种形式。
它们均是用氢火焰加热挥发性的碱金属盐，产生碱金属蒸汽，表现山对含磷、卤素和氮化合物均有极高的灵敏度和选择性。
遗憾的是其背景信号和样品信号均不稳定，噪声大、热离子源寿命短，难以实用。
1974年Kolb和Bischoff提出了一种新的碱源改造方案，使检测器稳定性显著改善，灵敏度明显提高。
它对含卤素化合物不敏感，而对氮、磷化合物的响应比烃类大10000倍，达专一性响应，故以后通称氮磷榆测器。
实际上，由于碱源的差异，有些对含卤、含氧化合物也有较高的灵敏度。
所以现有的文献仍称AFID，或热离子检测器(TID)、热离子电离检测器(TID)或热离子专一（灵敏）检测器( TSD)，或无火焰热离子检测器（FTD>、无火焰碱敏化检测器(FASD)等。
NPD与AFID比较，有以下三个主要区别：①用非挥发性的硅酸铷玻璃珠作热电离源，而不是挥发性碱盐；②硅酸铷玻璃珠是熔融在一根螺旋铂丝上，用电加热珠，而不是用火焰加热；③氢气流仅几毫升／分，为“冷氢焰”，而不是‘热氢焰”。
由于有了这些改进，NPD使用寿命长、稳定性、重复性好，且背景基流由以前的10-9A降到了10 - 13A，最小检测极限大大降低。
操作方便易控制，使该检测器跃为最常用的检测器之一。
氮是有机化学中第二大类杂原子，有机磷化合物也是十分重要的有机物。
NPD最适于对复杂样品中痕量氮磷化合物的检测。
第一节工作原理和响应机理一、工作原理NPD系统由电离室和检测电路组成，如图3-3 -1所示。
它FID系统相似，但有两点不同：一是NPD较FID多一热离子电离源(1)（以下简称电离源）及其加热系统(2)；二是FID微电流放大器中之电源E，对喷嘴的极性是固定的，而NPD中是可变的。
大肠菌群mpn检验法的流程
大肠菌群mpn检验法的流程大肠菌群MPN检验法是一种用于测定水样和食品中大肠菌群浓度的方法。
其原理基于数值分析法，通过对3杯平行称量水样的不同稀释液进行培养并观察其菌落形态和数量，从而计算出大肠菌群的数量。
以下是大肠菌群MPN检验的详细流程。
步骤一：准备试管、试剂和培养基1. 选择三个或更多的试管，标记上每个试管的编号。
2. 准备9 ml 0.1％碳酸钠液，并在每个试管中加入 10 ml。
3. 在每个试管中加入 1 ml 稀释液1。
4. 在每个试管中加入 1 ml 稀释液2。
5. 在每个试管中加入 1 ml 稀释液3。
6. 在每个试管中加入 9 ml 液体培养基。
可以使用多种不同的培养基，如McConkey 培养基和E.coli/coliforms双层营养琼脂板。
步骤二：制备稀释液1. 制备初次稀释液。
将被测水样取10 ml，加入90 ml稀释液1中，充分混合得到10-1（即1/10）的初次稀释液。
2. 制备第二次稀释液。
在稀释液1中各取1 ml，加入9 ml稀释液2中，充分混合得到10-2（即1/100）的第二次稀释液。
3. 制备第三次稀释液。
在稀释液2中各取1 ml，加入9 ml稀释液3中，充分混合得到10-3（即1/1000）的第三次稀释液。
步骤三：测定大肠菌群1. 从每个试管中取10 ml水样或者是不同浓度的稀释液，加入液体培养基中。
2. 在培养基中进行培养。
大肠菌在摄氏35-37度下，48小时内可以在大部分培养基上生长。
这非常重要因为不同的培养基其菌群生长的时间和数量可能会有所不同。
3. 观察培养结果。
如果在试管中形成了典型的大肠菌落，就说明这个营养基中含有大肠菌。
如没有形成典型菌落，可能需要重新试验。
4. 根据试管中出现大肠菌的情况，使用MPN表来计算每毫升水样中的大肠菌数量。
MPN表是一种标准表格，可以用来对菌落数量进行估算。
步骤四：分析结果MPN值是指每毫升水样中大肠菌群数量的估计值。
P-V—T测定实验方法与步骤PPT课件
密度为
i
pi ZiRT
1 NiART
Burnett法的优点是不需要测量密度，只需要测量等
温线上一系列膨胀压力即可确定压缩因子，推算出气
体密度，而不用测定容积和气体质量，但其特有的数
据处理方法使得压力测量的任何偏差会随着膨胀次数
的增大而被放大，尤其是在低压下，而且试样消耗量
大。定容积法虽然不会把压力测量偏差放大，但需要
10第i次膨胀前后容器内的试样量是相同的因此11若装置容积常数为并根据递推关系可得上式中只和充气状态有关因此定义充气常数为12一定温度下对于待定气体的统一系列膨胀把维里方程中berlin展开式代入上式整理得则充气系数为bpcp13当容积常数和充气常数确定后每次膨胀的相应密度为burnett法的优点是不需要测量密度只需要测量等温线上一系列膨胀压力即可确定压缩因子推算出气体密度而不用测定容积和气体质量但其特有的数据处理方法使得压力测量的任何偏差会随着膨胀次数的增大而被放大尤其是在低压下而且试样消耗量大
只需测定各级膨胀后压力，就获得了压缩因
子随压力变化的曲线。
.
8
定温膨胀法实验步骤
❖ 将实验本体抽高真空，关闭两容器间的膨胀 阀。向A容器中注入一定质量的试样。
Z0p0VA/(n0RT)
❖ 打开阀门进行第一次膨胀，当温度和压力平 衡后，测量容器中的压力 P 1
Z 1p 1(V A V B )/(n 0R T )
p-v-T测定的原理与步骤
———第二组
1
.
测量原理
1
在准平衡状态下， 工质的压力P、比 容V和温度ｔ之间 存在某种确定关系 ，即状态方程
F(P,V,t)0
2
理想气体的状态方 程具有最简单的形 式：PV=RT
实验室异戊烯醇含量测定操作规程
实验室异戊烯醇含量测定操作规程引言：异戊烯醇，化学式为C5H10O，具有特殊的结构和化学性质，广泛应用于化学工业。
因此，实验室中准确测定异戊烯醇的含量对于合成和分析工作具有重要意义。
本实验室操作规程旨在规范实验人员在测定异戊烯醇含量时的操作流程，确保实验结果的准确性和可靠性。
一、实验所需材料和设备：1.异戊烯醇样品2.水浴锅3.烧杯4.镇静剂5.离心机6.超高效液相色谱仪（UHPLC）配备蒸馏水7.空白试剂二、实验操作步骤：1.准备样品：a.取一定的异戊烯醇样品，放在烧杯中，并使用镇静剂将其密封。
b.离心样品，以去除任何杂质。
c.将上述样品置于水浴锅中，以温度为70-80℃的水浴中加热20分钟。
2.超高效液相色谱测定：a.取出一个清洁干燥的小瓶，放入样品的1mL。
b.倒入相应的有机溶剂至刻度线。
c.使用纸巾封紧瓶口，并均匀摇动瓶子，以混合有机溶剂和样品。
d.将液体过滤进超高效液相色谱仪中。
e.设置超高效液相色谱仪的参数以测定异戊烯醇的含量。
3.配置标准曲线：a.准备一系列已知浓度的异戊烯醇溶液。
b.按照之前的超高效液相色谱参数测定每个标准溶液的峰面积。
c.绘制异戊烯醇浓度与峰面积的标准曲线。
4.样品测定：a.根据之前绘制的标准曲线，使用相同的超高效液相色谱参数测定样品的峰面积。
b.使用标准曲线计算样品中异戊烯醇的浓度。
5.结果记录和分析：a.将实验测定数据记录在实验记录表中。
b.根据测定结果进行数据分析，计算实验样品中异戊烯醇的含量。
三、实验注意事项：1.在进行操作前，确保所有的设备和材料都是干净且无杂质的。
2.在实验中，应遵守所有安全操作规范，包括佩戴实验室安全眼镜和手套。
3.对于实验材料和设备，应注意避免与水接触以防止水分的干扰。
4.在通过超高效液相色谱仪测定异戊烯醇峰面积时，应确保仪器有足够的稳定性，以保证结果的准确性。
5.在样品加热过程中，应注意不要过热并避免未密封。
结论：通过本实验操作规程，实验人员可以准确测定异戊烯醇的含量。
实验室异戊烯醇含量测定操作规程
实验室异戊烯醇含量测定操作规程
一、方法原理
采用气相色谱法，在选定的工作条件下，样品经气化通过色谱柱，使其中的各组分分离，用火焰离子化检测器检测，采用校正面积归一化法定量。
二、仪器及载气
1、气相色谱仪：配有火焰离子化检测器，灵敏度和稳定性应符合规定。
2、色谱数据处理机或积分仪。
3、微量注射器：1μL。
4、色谱柱及典型操作条件。
推荐的色谱柱和色谱操作条件见表。
5、氮气：体积分数大于99.95%，经硅胶或分子筛干燥、净化。
6、氢气：体积分数大于99.5%，经硅胶或分子筛干燥、净化。
7、空气：经硅胶或分子筛干燥、净化。
表1-推荐的色谱柱和色谱操作条件
三、操作步骤
1、打开各路气体阀门，启动色谱仪，待仪器三温稳定至设定温度时按转换键及点火键点火；查看点基线响应值以确定点火成功。
2、点火成功后按下进样口控制按钮进行空白样测试，检查色谱柱是否有残留，若有残留应进行下一次空白测试以老化色谱柱至无高于0.2mv峰出现。
按复位键仪器回到初始状态。
3、点击采样按钮并迅速注入0.3uL样品启动程序升温进行样品分离。
4、采用面积归一化法进行定量分析。
四、结果计算
主组分质量分数w1,数值以%表示，按公式计算：w1=Ai/∑Ai
式中：Ai──组分i色谱峰的面积；
Ai──i个组分色谱峰的面积和。
取两次平行测定结果的算术平均值为测定结果。
np-237碳氢气体测量仪操作步骤
np-237碳氢气体测量仪操作步骤
第一步：检查气体检测仪
在我们使用气体检测仪准备进入检测现场时，我们一定要对气体检测仪做相应的检测，需要检测的是气体检测仪是否能正常工作，如传感器是否正常，电量是否充足、各种报警功能是否正常，这些都是必须要检测的项目，不过现在很多仪器都自带检测功能，开机就会自检。
第二步：确定检测现场位置
在使用气体检测仪进入现场前我们需要确定现场情况，如有可能泄漏的气体，和我们需要检测的气体，根据各种气体我们提前做好相应的防护措施，如果是有毒气体我们就更要做好防护措施，如空气呼吸器，防毒面具等。
第三步：开始检测
在进入检测现场后，我们对环境中所需检测的气体进行检测，将便携式气体检测仪探头置于待测环境中，当有被测气体泄漏时，浓度显示的数值变大，当超过报警设定值时，报警指示灯亮，同时发出报警声。
当探头移动到泄漏源时，气体检测仪浓度显示屏显示的数值增大，记录下读数。
第四步：检测完毕
在对环境中的各项检测完毕后，我们需要将检测数据传输出来方
便后期研究及管理，有的气体检测仪可以通过蓝牙及无线等传输数据直接将检测数据传输到电脑等电子产品中，数据传输后将气体检测仪关闭即可。
第五步：充电
当气体检测仪电量不足时，我们不能使用气体检测仪进行检测，且气体检测仪会发出电量不足报警信号，这是我们样关闭电源并使用充电器给电池充电，每次充电约为10-14小时!待充电完毕后即可继
续使用。
第六步：保养及标定
气体检测仪使用完毕后，我们应定期对气体检测仪进行清洁保养，使用半年、一年我们应当对气体检测仪进行标定，进行标定是为了使气体检测仪没有检测误差，因此需要定期对气体检测仪进行标定。
实验操作手册NP测定
实验操作手册NP测定（二）植物全N测定植物全氮的测定包括样品的分解和待测液中氮的定量。
分解植物的方法通常采用开氏法，即用硫酸-混合加速剂（K2SO4+CUSO4+Se）或氧化剂如H2SO4-HClO4、H2SO4-H2O2消煮分解样品。
对于某些含硝态氮较高的植物样品，则需要在消煮前用水杨酸-浓硫酸将样品中的硝态氮转化为硝基水杨酸，再用Na2S2O3或锌粉将其还原为氨基水杨酸，然后用硫酸-混合加速剂消煮，把全部有机氮转化为铵盐。
消煮液中单的测定可采用蒸馏法、比色法、扩散法。
由于，H2SO4-HClO4、H2SO4-H2O2消煮法经一次消煮，可以同时测定全氮、磷、钾等多种元素，十分不方便，目前在植物营养元素分析中广泛采用。
但是由于高氯酸是强氧化剂，作用过于剧烈，在高温氧化时容易引起氮的损失；H2SO4-H2O2消煮法，如果控制好H2O2用量、滴加次数和滴加速度，使氧化作用不要太强，可以防止氮的损失。
采用H2SO4-HClO4法消煮植物样品，蒸馏法测定氮。
1 方法原理植物样品经浓硫酸和氧化剂消煮，有机物经历脱水碳化、氧化等一系列作用，变成CO2和H2O,使有机氮、磷转化成无机铵盐和磷酸盐，钾也全部释出。
消煮液经定容后，可用于氮、磷、钾等元素的定量。
2 主要实验仪器和设备2.1主要仪器设备K9860凯氏定氮仪，消煮管，消煮炉2.2 试剂1）硫酸（密度1.84g/ml, 分析纯）2）氢氧化钠溶液（c=10ml.L-1）：300g氢氧化钠溶于1000ml 无CO2蒸馏水中。
（贮存期间避免和大气中的CO2接触，储存于塑料瓶中。
3）硼酸（H3BO3, c=20g.L-1或2%质量体积比，分析纯）：20g硼酸溶解在1000ml 水中。
4）混合指示剂：0.5g溴甲酚绿和0.1g甲基红用100ml 95%乙醇溶解。
使用前每升硼酸加10ml混合指示剂，并用稀酸或稀碱调节至紫红色（PH 约4.5）。
此混合液放置时间不宜过长，如在使用过程中PH有变化，需随时用稀酸或稀碱调节PH，建议现配现用。
用于XRF测量微量Np的磁助分离制样方法
用于XRF测量微量Np的磁助分离制样方法张彤;全葳;郑维明;吴继宗;康海英;邓惟勤;邵少雄【摘要】建立磁助捕集分离制样法,使用超顺磁性TiOA固相捕集剂捕集溶液中的镎,利用外加磁场快速分离制样,实现捕集、分离及制样同时完成,可直接使用X射线荧光测量样品中Np的含量.研究了反应时间、固相捕集剂用量、液相体积及酸度等因素对测量的影响,给出了推荐测量分析流程.使用磁助捕集分离制样,对Np的质量检出下限为0.12 μg,质量浓度检出下限为0.04 mg/L,满足Purex流程3EU工艺点测量Np的要求.【期刊名称】《核化学与放射化学》【年(卷),期】2015(037)004【总页数】5页(P215-219)【关键词】磁助分离制样;微量镎;X荧光【作者】张彤;全葳;郑维明;吴继宗;康海英;邓惟勤;邵少雄【作者单位】中国原子能科学研究院放射化学研究所,北京102413;环境保护部核与辐射安全中心,北京100082;中国原子能科学研究院放射化学研究所,北京102413;中国原子能科学研究院放射化学研究所,北京102413;中国原子能科学研究院放射化学研究所,北京102413;中国原子能科学研究院放射化学研究所,北京102413;中国原子能科学研究院放射化学研究所,北京102413【正文语种】中文【中图分类】O614.352镎在水溶液中价态复杂多变、多价态共存，在Purex流程中走向分散。
流程多处工艺点都有Np存在，需要对部分工艺点的Np含量进行测量，准确掌握Np在流程中的走向。
所有工艺点中，3EU工艺点的镎含量极低，约为1.5×10-4g/L，铀质量浓度约为70 g/L，ρ（U）/ρ（Np）高达4.7× 105。
因此，3EU中Np的测量在Purex流程中测量难度最大。
目前可用于微量镎的测量方法主要有α能谱法、液体闪烁计数法［1］、电感耦合等离子体质谱（ICP-MS）法及X射线荧光技术等。
使用放射性测量方法，如α能谱法及液体闪烁计数法测量微量镎时，会受到Pu和234U的干扰，难以得到准确数值。
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（二）植物全N测定植物全氮的测定包括样品的分解和待测液中氮的定量。
分解植物的方法通常采用开氏法，即用硫酸-混合加速剂（K2SO4+CUSO4+Se）或氧化剂如H2SO4-HClO4、H2SO4-H2O2消煮分解样品。
对于某些含硝态氮较高的植物样品，则需要在消煮前用水杨酸-浓硫酸将样品中的硝态氮转化为硝基水杨酸，再用Na2S2O3或锌粉将其还原为氨基水杨酸，然后用硫酸-混合加速剂消煮，把全部有机氮转化为铵盐。
消煮液中单的测定可采用蒸馏法、比色法、扩散法。
由于，H2SO4-HClO4、H2SO4-H2O2消煮法经一次消煮，可以同时测定全氮、磷、钾等多种元素，十分不方便，目前在植物营养元素分析中广泛采用。
但是由于高氯酸是强氧化剂，作用过于剧烈，在高温氧化时容易引起氮的损失；H2SO4-H2O2消煮法，如果控制好H2O2用量、滴加次数和滴加速度，使氧化作用不要太强，可以防止氮的损失。
采用H2SO4-HClO4法消煮植物样品，蒸馏法测定氮。
1 方法原理植物样品经浓硫酸和氧化剂消煮，有机物经历脱水碳化、氧化等一系列作用，变成CO2和H2O,使有机氮、磷转化成无机铵盐和磷酸盐，钾也全部释出。
消煮液经定容后，可用于氮、磷、钾等元素的定量。
2 主要实验仪器和设备2.1主要仪器设备K9860凯氏定氮仪，消煮管，消煮炉2.2 试剂1）硫酸（密度1.84g/ml, 分析纯）2）氢氧化钠溶液（c=10ml.L-1）：300g氢氧化钠溶于1000ml无CO2蒸馏水中。
（贮存期间避免和大气中的CO2接触，储存于塑料瓶中。
3）硼酸（H3BO3, c=20g.L-1或2%质量体积比，分析纯）：20g硼酸溶解在1000ml 水中。
4）混合指示剂：0.5g溴甲酚绿和0.1g甲基红用100ml 95%乙醇溶解。
使用前每升硼酸加10ml混合指示剂，并用稀酸或稀碱调节至紫红色（PH约4.5）。
此混合液放置时间不宜过长，如在使用过程中PH有变化，需随时用稀酸或稀碱调节PH，建议现配现用。
5）盐酸（0.1mol.L-1）:12mol.L-1 浓盐酸取8.33333ml定容于1000ml3操作步骤3.1 植物样品的消煮H2SO4-HClO4消煮法：称取植物样品（0.5mm）0.1~0.5g（精确至0.0001g）装入100ml消煮管底部（勿将样品黏附在瓶颈上）。
先滴入少许水润湿样品，在加农硫酸5ml，摇匀放置30min（或放置过夜，可缩短消煮时间），然后加入60%高氯酸5~6滴，消化炉上低温加热消煮（硫酸不能冒白烟，以防氮损失），直至消煮液转为无色，表示消化完全。
如长时间消煮溶液仍为黑色或棕色，则可将消化管取下，冷却，补加高氯酸1~2滴（切忌多加，应视消化液颜色深浅而定，以免引起氮的损失），置电炉上消至溶液完全清澈无色为止。
取下，冷却，将消煮液无损的转移至100ml容量瓶，冷却至室温后定容，用干燥滤纸过滤，或放置澄清后吸取清夜供氮、磷、钾的测定。
注意：每批消煮的同时，进行空白试验，以校正试剂和方法的误差。
3.2 标准曲线的绘制主要有两个作用：首先是检验该仪器的性能，其次是计算样品含氮量。
具体操作步骤没有参考，在摸索中。
目前做了一条r2=1的标准曲线，可以借鉴。
(NH4)2SO4溶液（2mol.L-1—NH4+）：取132.0676g (NH4)2SO4（105℃烘2~3h），定容到1000ml去离子水中，分别取0、1.25、2.5、5、7.5、10、12.5、15ml定容到100ml容量瓶，取5ml用K9860凯氏定氮仪测定含氮量如下图所示：3.3测定将消化好的样品放在K9860凯氏定氮仪上进行测定，每次测定前都要输入参数0.014。
4注意事项1)72%的高氯酸试剂非常危险，温度超过200℃即有爆炸的可能。
在使用前应将其稀释至60%后再用，这样可使危险性大大降低。
干燥的有机物被高氯酸浸过后也具有爆炸性，不能接触火焰或高温。
2)真正的氮含量要用测出的百分数乘以0.014g，因为所有的结果都是相对于0.014g，计算出来的。
采用H2SO4-H2O2法消煮植物样品，蒸馏法测定氮。
3 操作步骤3.1植物样品的消煮称取植物样品（0.5mm）0.1~0.5g（准确至0.0001g）装入100ml消煮管底部（勿将样品附在瓶壁上）。
先滴入少许水润湿样品，再加浓硫酸5ml，摇匀（最好放置过夜），在消化炉上先小火加热，待H2SO4分解冒出大量白烟后在升高温度，当溶液呈均匀的棕黑色时取下，稍冷滴加10滴H2O2 ，并不断摇动消煮管，以利于反应充分进行。
在加热至微沸，消煮约5min，取下稍冷，重复加5~10滴H2O2，在消煮。
如此重复3~5次，每次添加的H2O2应逐次减少，消煮至溶液呈无色或清亮，在加热约十分钟，出去剩余的H2O2（否则影响氮、磷比色测定）。
取下，冷却，将消煮液无损的转移至100ml容量瓶，冷却至室温后定容，用干燥滤纸，或放置澄清后吸取清夜供氮、磷、钾的测定。
注：划线处若只是为了测定氮含量，可以省去，直接放在K9860凯氏定氮仪上测定。
4 注意事项1）加H2O2时，要直接滴入瓶底部溶液中，如果滴在瓶壁上，H2O2很快分解，失去氧化能力。
2）H2O2不宜过早加入，每次用量不可过多，加入后的消煮温度不要太高只要保持消煮液微沸即可。
（浓硫酸沸点338℃）。
3）30%H2O2易烧伤皮肤，使用时注意安全4）该方法的优点是对高有机质含量的样品消化极为有利，所以，该方法也是植物样品全N测定的常规方法。
硫酸-混合加速剂（K2SO4+CUSO4+Se）消化法参考文献：《中国森林生态系统固碳现状、速率和潜力的研究调查》3 操作步骤称取磨细的植物样品（叶0.1g，树叶、树皮、根或枯枝落叶层0.2g，木材0.3g），放在65℃恒温箱中烘干（24h），用减量法称入消煮管（精确至0.0001g）。
加1.0g混合催化剂，摇匀，加数滴水使样品湿润，然后加5ml浓硫酸，过夜。
在烟柜厨中加热消煮，最初用小火，待无泡沫发生后，提高温度，但要控制瓶内缕状白烟回流高度约瓶颈上部的三分之一处，并经常摇动，勿使烧干，直到消煮液呈清亮，再消煮20min左右，取出冷却。
同时做两个试剂空白试验，以矫正试剂误差。
（经验：280℃30min，450℃2h）4 注意事项1）CuSO4的催化效率虽然低，无毒，价格低廉，具有催化前后颜色的明显变化（消化完成前显褐色，消化完成后显蓝绿色），因此，本身可以指示消化终点。
2）此方法一次消煮也可以用来测定全磷。
（三）植物全P测定（钼锑抗比色法）1 方法原理a)植物样品消煮分解原理同植物全氮测定实验。
b）溶液中的磷在钼酸铵和酒石酸锑钾的作用下，形成磷钼锑三元杂多酸被抗坏血酸还原为磷钼蓝，可用比色法定量磷。
2 主要仪器设备和试剂2.1主要仪器设备K9860配套消煮管，消煮炉，通风厨。
1.2试剂1）硫酸（密度1.84g/ml, 分析纯）2）高氯酸（c=60%）：取86ml高氯酸（HClO4,w=70%，ρ=1.66g.cm-3，分析纯）,稀释为100ml。
3）过氧化氢[w( H2O2)=约30%，分析纯4）钼锑贮存液：取蒸馏水约400ml，放入1000ml烧杯，将烧杯浸在冷水中，然后缓慢注入分析纯浓硫酸153ml，并不断搅拌，冷却至室温。
另称取10.0g磨细钼酸铵[(NH4)6Mo7O24.4H2O,分析纯]溶于约60℃的300ml水中，冷却。
然后将配好的硫酸溶液徐徐倒入钼酸铵溶液中，不断搅拌，再加入100ml 5g.L-1酒石酸锑钾溶液(KSbOC4H4O6.1/2H2O,分析纯)，最后用蒸馏水稀释至1000ml，摇匀，贮于棕色瓶中。
此贮存液含1%钼酸铵及2.8mol.L-1硫酸5）钼锑抗显色剂：在100ml钼锑贮存液中，加入1.50g抗坏血酸（C6H8O6，左旋，旋光度+21~+22。
分析纯），此试剂有效期24h，宜用前配制。
6）氢氧化钠溶液（c=2mol.L-1）:80g氢氧化钠（NaOH，分析纯）溶于水，稀释至1000ml。
7）硫酸（c=0.5mol.L-1）:28ml浓硫酸（分析纯）用水稀释至1000ml。
8）2,6-二硝基酚（或2,4-二硝基酚）指示剂：0.2g该指示剂溶于100ml蒸馏水中。
9）磷标准液[c（P）=100ppm或100mg.L-1]: 0.4390g磷酸二氢钾（KH2PO4,分析纯，105℃烘2h）溶于水，加5ml浓硝酸，于1L容量瓶中定容，此溶液可长期保存。
10）磷标准溶液：取10ml 100ppm的磷标准贮存液于200ml容量瓶中，用水稀释至刻度。
（取5ml 100ppm的磷标准贮存液于100ml容量瓶中，用水稀释至刻度。
）3 操作步骤3.1 植物样品的消煮同氮测定消煮方法。
3.2 待测液中磷的测定吸取定容、过滤或澄清后的消煮液2.00~5.00ml（含P 5~25ug），放入50ml 容量瓶或比色管中，加2滴二硝基酚指示剂，用2mol/L的NaOH溶液和0.5mol/L 稀硫酸调节PH至溶液刚呈微黄色（指示剂酸方色为无色，在显色酸度时，指示剂本身不会带来颜色干扰。
）摇匀，加入钼锑抗显色剂5ml，用水定容至刻度，摇匀。
在室温高于15℃的条件下放置30min后，在分光光度计上以700（882）nm的波长比色，以空白试验溶液作为参比液调零点，读取吸收值，在工作曲线上查出显色液的P mg.L-1数，溶液颜色在8h内可保持稳定。
准确加入10.00ml钒钼酸铵试剂，用水定容。
15min后用1cm光径的比色杯在波长450nm处进行比色测定，以空白溶液（空白试验消煮液按上述步骤显色）调节仪器零点。
3.3 工作曲线的绘制准确吸取100mg.L-1P标准液0, 1, 2,3,4, 5, 6ml分别放入50ml容量瓶中，加水稀释至约30ml，加2,4-二硝基酚指示剂2滴，用2mol/L的NaOH溶液和0.5mol/L 稀硫酸调节PH至溶液刚呈微黄色（再稀释后呈无色），摇匀，加入钼锑抗显色剂5ml，用水定容至刻度，摇匀，即得0, 0.1, 0.2,0.3,0.4,0.5,0.6mg/L -1 P的标准系列溶液，与待测液同样进行比色测定，读取吸光度，然后绘制工作曲线。
4 结果计算植物全磷含量（P,%）= 100×（ρ×V×ts）/（m×106）注：Ρ: 从工作曲线求得的显色液中磷浓度，mg.L-1V: 显色液的体积，50mlTs：分取倍数，ts=消煮待测液定容体积（ml）与吸取测定的消煮液体积（ml）比值m: 称样量，g106: 将ppm或mg/L换算成g的除数5 注意事项1）最后显色液中含磷量在20-30ug最好，可通过称样重和最后显色时吸取待测液体积进行控制。
2）本法钼蓝显色液比色时用880nm比700nm更灵敏，一般721分光光度计只能选用700nm。