生物素

第十一章生物素—亲和素免疫放大技术

第一部分目的要求和教学内容

一、目的要求

掌握：生物素—亲和素免疫放大技术、生物素、亲和素的概念，生物素—亲和素免疫放大技术的主要类型，原理和临床应用；

熟悉：生物素—亲和素免疫放大技术的类型、原理及临床应用；

了解：生物素及亲和素特性及其结合抗体的制备方法，各检测技术方法的技术要点。

二、教学内容

1．胶体金与免疫金制备：生物素及亲和素特性及其制备，生物素的制备。

2．生物素—亲和素免疫放大技术的类型、原理。

3．生物素—亲和素免疫放大技术临床应用与评价。

第二部分测试题

一、选择题

(一)单项选择题(A型题)

1.既能用于标记蛋白质氨基,又能标记蛋白质醛基的活化生物素是

A.BNHS

B.BCHZ

C.BHZ

D.MPB

E.BCNHS

2.间接法BA的反应模式为

A.Ag-(Ab-B)-A*

B.Ag-Ab1-(Ab2-B)-A*

C.Ag-(Ab-B)-A-B*

D.Ag-(Ab-B)-AB*C

E.Ag-Ab1-(Ab2-B)-A-B*

3 下列哪一项属于长臂活化生物素

A.BNHS

B.BHZ

C.BCNHS

D.BCHZ

E.MPB

4.MPB是氯化生物胞素与3-(N-马来酰亚胺-丙酰)-N-BNHS在什么溶液中反应后制得的

A.二甲基甲酰胺

B.碳二亚胺

C.N-羟基丁二酰亚胺

D.马来酰亚胺

E.水合肼

5.每个亲和素能结合多少个分子的生物素

A.1

B.2

C.3

D.4

E.5

6.生物素通过噻吩环戊酸侧链上的什么部位与多种大分子偶联

A.羰基

B.-NH

C.

羧基

D.-CH3

E.-NH2

7.常用于标记抗体的活化生物素是

A.BNHS

B.BHZ

C.BCNHS

D.BCHZ

E.MPB

8.在生物素标记抗体时,生物素:IgG 的比例(mg/mg)为多少时,效果较好

A.1:1

B.3:1

C.4:1

D.2:1

E.5:1

9.在用生物素标记酶时,酶活性会降低的是

A.HRP

B.葡萄糖氧化酶

C.β-Gal

D.AP

E.LDH

10.亲和素-生物素化碱性磷酸酶(ABAP)复合物的制备是将亲和素溶液与生物素化AP按多少浓度比反应后制得

A.1:1

B.2:1

C.3:1

D.4:1

E.5:1

11.标记蛋白质氨基的活化生物素是

A.BHZ

B.MPB

C.光生物素

D.生物素脱氧核苷三磷酸

E.BNHS

12.标记蛋白质巯基的活化生物素是

A.MPB

B.BNHS

C.BHZ

D.光生物素

E.生物素脱氧核苷三磷酸

13.制备ABC复合物时,亲和素的浓度不能高于

A.10ug/ml

B.20ug/ml

C.30ug/ml

D.35ug/ml

E.40ug/ml

14.标记核酸的活化生物素,下列哪项除外

A.MPB

B.光生物素

C.生物素脱氧核苷三磷酸

D.BNHS

E.BHZ

15.用活化生物素标记核酸的方法,下列哪项除外

A.缺口移位法

B.光化学法

C.化学偶联法

D.放射免疫法

E.末端标记法

16.下列说法不正确的是

A.标记反应时,活化生物素与待标记抗原或抗体应有适当比例

B.一般每个抗原或抗体分子标记1-3或3-5个生物素分子较为适宜

C.生物素与抗原、抗体等蛋白质结合后,不影响后者的免疫活性

D.生物素与酶结合后,酶活性不受影响

E.为减少空间位阻影响,常在生物素与被标记物间加入交联臂样结构

17.下列哪种方法不能用于制备生物素标记的核酸探针

A.缺口移位法

B.化学偶联法

C.光化学法

D.末端标记法

E.电化学法

二、填空题

1.不受位阻效应影响,更易发挥生物素活性作用的是（）。

2.用于标记蛋白质醛基的,适用范围较BHZ宽的活化生物素是（）。

3.在一定波长的光照射下,光敏基团可转变为芳香基硝基苯而直接与腺嘌呤N7位氨基结合

的是（）。

4.生物素化蛋白质衍生物有二类,一种是（）,另一种是（）。

5.用于亲和素标记的物质中,最常用的是（）, （）和（）。

三、名词解释

1.亲和素

2．BA法

四、简答题

1.简述常用于标记核酸分子的活化生物素有哪几种。

2.简述生物素化蛋白质衍生物的特性。

3.简述BAS的特点。

4.简述几种常用于标记不同类型生物大分子的活化生物素。

5.简述BAS在应用中的二种基本类型。

五、论述题

1.试述ABC法的原理。

2.试述BAB-ELISA夹心法测抗原的原理及过程。

第三部分参考答案与题解

一、选择题

（一）、单项选择题(A型题)

1 B

2 B

3 C

4 A

5 D

6 C

7 A

8 D

9 D 10 D

11 E 12A13.E 14.A 15.D 16.D 17.E

二、填空题

1 BCNHS

2 BCHZ

3 光生物素

4 生物素化的大分子生物活性物质(如抗原、抗体),标记材料(如酶)结合生物素后制成的标记

物

5.酶,异硫氰酸荧光素(FITC),胶体金

三、名词解释

1.亲和素:亲和素亦称抗生物素蛋白、卵白素，是从卵蛋白中提取的一种由4 个相同亚基组成的碱性糖蛋白，每个亲和素能结合4 个分子的生物素。

2．BA（或LAB）法是以标记亲和素（或链霉亲和素）直接与免疫复合物中的生物素化抗体连接进行检测。

四、简答题

1.①光生物素：是一种化学合成的衍生物，用于DNA或RNA的标记。生物素通过噻吩环戊

酸侧链上的羧基与多种大分子偶联活化后，可用于标记各种蛋白质形成生物素化蛋白质衍生物。而且一个蛋白质分子可联结多个生物素分子，从而使其具有较高的比活性，在和亲和素反应中成为多价。生物素化大分子的多价性，是BAS 多级放大作用的物质基础。生物素化蛋白质衍生物有二类，一种是生物素化的大分子生物活性物质（如抗原、抗体），另一种是标记材料（如酶）结合生物素后制成的标记物。

②生物素脱氧核苷三磷酸：先将生物素与某种脱氧核苷酸连接成活化生物素，再采用缺口移位法而掺入到双链DNA中。

③BNHS和BHZ：二者均可在一定条件下与核酸胞嘧啶分子中的N4氨基交联，使核酸分子

生物素化。

2.BAS 在反应中的基本类型有二种:一类以游离亲和素为中间物,分别连接包含生物素化大