抗原的制备

抗原的制备方法

一．细胞性免疫原的制备

1. 红细胞抗原的制备

取静脉血，加肝素的生理盐水，轻轻摇匀，离心2000r/min，红细胞被压积于管底，弃去上清，用生理盐水洗3次。

2. 白细胞抗原的制备

抗凝血的试管中加入全血，37℃静置30-60min，自然沉降后，血液分为三层，上层为淡黄色血浆，底层为红细胞，中间有一白细胞薄层，用尖吸管吸取，移入另一试管中，加无钙镁的缓冲液，离心，洗涤制得。

二．组织细胞抗原

在无菌条件下，取组织，切成小块，用无菌缓冲液洗涤，再用25%胰蛋白酶水解，4℃过夜（37℃，30-60min）用吸管轻轻吹打，使成细胞悬液，用80目不锈钢过滤，离心，洗涤制得。

三．细菌细胞抗原的制备

在无菌条件下，接种于平板上，取单菌落置于三角瓶中，培养，灭菌后，离心（5000r/min），洗涤。

四．原虫和多细胞寄生虫细胞性抗原的制备

寄生虫一般都远较细菌或病毒为大，构造与成分复杂，它的成分与分泌物一般都是较强的抗原，寄生虫有一个复杂的生活周期，不同周期中的虫体会诱发不同的免疫反应，又能诱发细胞免疫反应，有些寄生虫的表面组成和抗原成

分能够不断的变化，以抵御和逃避宿主的免疫攻击。

1．提取孢子制备抗原

2．虫卵抗原的制备

五．可溶性抗原制备

蛋白质、糖蛋白、脂蛋白、酶类、补体、脂多糖、细菌外毒素等可溶性抗原中相当部分来源于组织细胞，成分比较复杂，通常需要将组织和细胞破碎，经一定的方法纯化才能获得所需要的抗原。

1．组织和细胞混合抗原成分的制备

（1）酶处理法

（2）冻融法

（3）超声破碎法

（4）表面活性剂处理法

2.蛋白质抗原的制备

①离心分离法

②盐析法

③分子筛效应

④离子交换色谱

六．半抗原免疫原的制备

1．常见的半抗原种类及性质

属于半抗原的物质是低分子量的化学物质。如多糖、多肽、甾体激素、脂肪酸、类脂质、核苷酸、药物（包括抗生素）以及其他化学物品。

2．载体的种类和常见载体的性质

载体有蛋白质类，多肽聚合物，大分子聚合物和某些颗粒。

常用的蛋白有BSA，HSA。

多肽有多聚赖氨酸（poly-L-lysine）

3．半抗原甾体连接方法

①原理：带有游离氨基酸或游离羧基以及2种基团

都有的半抗原，可直接与甾体连接。其他不带有

游离氨基酸或羧基的半抗原须加以适当的改造，

使其转变为带有游离氨基酸或羧基的衍生物，才

能与载体连接。

②连接方法

⑴碳化二亚胺

⑵戊二醛法

⑶氯甲酸异丁脂法

⑷琥珀酸酐法

⑸重氮法

⑹一氯醋酸钠法

⑺羧甲基羟胺法

⑻MBS法