fam荧光基团激发波长
三种荧光定量PCR检测方式比较
三种荧光定量PCR检测方式比较：以参照物为标准，对PCR终产物进行分析或对PCR进程进行监测，从而达到评估样本中靶基因的拷贝数，称为定量PCR。
定量PCR的可行性定量一样是在PCR扩增的指数期进行的。
常见检测方式可分为以下几类：(1) SYBR Green I 检测模式SYBR Green I 是一种能与双链 DNA 结合发光的荧光染料。
其与双链 DNA 结合后，荧光大大增强。
因此，SYBR Green I 的荧光信号强度与双链 DNA 的数量相关，能够依照荧光信号检测出 PCR 体系存在的双链 DNA 数量。
SYBR Green I 的最大吸收波长约为 497nm，发射波长最大约为 520nm。
PCR 扩增程序一样为 94℃～55℃～72℃三步法，40 个循环。
SYBR Green I 的缺点：由于 SYBR Green I 没有特异性，不能识别特定的双链，只若是双链就会结合发光，对 PCR 反映中的非特异性扩增或也会产生荧光，通常本底较高，因此在临床上利用可能会有假阳性发生。
SYBR Green I 的优势：SYBR Green I 的优势是因为其缺点产生，由于它能所有的双链相结合，因此对不同模板不需专门定制不同的特异性探针，通用性较好，而且价钱相对较低。
这对科研是很有利的，因此国内外在科研中利用比较普遍。
(2) 水解探针模式(man探针)TaqMan 探针是一种探针，荧光基团连接在探针的5’结尾，而淬灭剂那么在3’结尾。
当探针与靶序列配对时，荧光基团发射的荧光因与3’端的淬灭剂接近而被淬灭。
在进行延伸反映时，聚合酶的5’外切酶活性将探针切断，使得荧光基团与淬灭剂分离，发射荧光。
一分子的产物生成绩伴随着一分子的荧光信号的产生。
随着扩增循环数的增加，释放出来的荧光基团不断积存。
因此 Taqman 探针检测的是积存荧光。
PCR 扩增程序一般是：94℃～60 ℃ 40 个循环。
经常使用的荧光基团是 FAM，TET，VIC，HEX。
荧光探针和荧光染料
荧光探针和荧光染料来源：互联网 作者：未知 发布时间：2006-10-18实时荧光PCR 定量包括探针类和非探针类两种，探针类是利用与靶序列特异杂交的探针来指示扩增产物的增加，非探针类则是不利用杂交原理，而利用其他的一些理化特征指示扩增产物的增加。
前者由于增加了探针的识别步骤，特异性更高，但后者则简便易行。
1．TaqMan 探针TaqMan 探针是一种寡核苷酸探针，荧光基团连接在探针的5’末端， 而淬灭剂则在3’末端。
当探针与靶序列配对时，荧光基团发射的荧光因与3’端的淬灭剂接近而被淬灭。
在进行延伸反应时，聚合酶的5’外切酶活性将探针切断， 使得荧光基团与淬灭剂分离，发射荧光。
一分子的产物生成就伴随着一分子的荧光信号的产生。
随着扩增循环数的增加，释放出来的荧光基团不断积累。
因此Taqman 探针检测的是积累荧光。
常用的荧光基团是FAM ，TET ，VIC ，HEX 。
2．分子信标（molecular beacon）分子信标是一种呈发夹结构的茎环双标记寡核苷酸探针，两端的核酸序列互补配对，因此标记在一端的荧光基团与标记在另一端的淬灭基团紧紧靠近。
荧光基团被激发后产生的光子被淬灭剂淬灭，由荧光基团产生的能量以红外而不是可见光形式释放出来。
分子信标的茎环结构中，环一般为15-30 个核苷酸长，并与目标序列互补；茎一般5-7 个核苷酸长，并相互配对形成茎的结构。
荧光基团标记在探针的一端，而淬灭剂则标记在另一端。
在复性温度下，因为模板不存在时形成茎环结构，当加热变性会互补配对的茎环双链解开，如果有模板存在环序列将与模板配对。
与模板配对后，分子信标将成链状而非发夹状，使得荧光基团与淬灭剂分开。
当荧光基团被激发时，因淬灭作用被解除，发出激发光子。
由于是酶切作用的存在，分子信标也是积累荧光。
常用的荧光基团：FAM ，Texas Red 。
3．SYBR Green ISYBR Green I 是一种能与双链DNA 结合发光的荧光染料。
实时荧光定量PCR简介及其在食品监测领域中的应用要点
实时荧光定量PCR简介及其在食品检测领域中应用摘要：实时荧光定量PCR 是在定性PCR 技术基础上发展起来的核酸定量技术；该技术不仅实现对DNA 模板定量，且具有灵敏度高、特异性强、无污染性、及实时性和准确性等特点。
该文主要介绍实时荧光定量PCR 原理和在食品检测中应用，及其在食品领域发展前景。
关键字：荧光定量PCR；致病菌检测；转基因食品检测Abstract：Real–time fluorogenic quantitative polymerase Chain Reaction is a quantitative nucleic acids technology based on quanlity PCR，with characteristics of high sensitivity and specificity，pollution–free，instantaneity and accuracy as well as realization for quantitation of DNA template. its principle and application in food detection have been introduced in this article，and its prospect in food field predicted.Key word：real–time quantitative PCR；pathogen detection；genetically modified food detection一、实时荧光定量PCR技术原理实时定量荧光PCR技术是从传统PCR技术发展而来，其基本原理是相同的，主要不同之处是其定量的体系。
PCR反应过程产生DNA拷贝数，随反应循环数增加，以呈指数方式增加逐渐转入平台期。
在传统PCR中，用终点法对PCR产物定量有不足之处；而在实时荧光定量PCR反应中，引入了一种荧光化学物质，加入的荧光物质具有特定的波长，随着PCR反应的进行，PCR 反应产物不断累计，荧光信号强度也等比例增加。
以香豆素基团为荧光基团
以香豆素基团为荧光基团香豆素基团是一种常见的荧光基团，也被称为香豆酿基团。
它的化学结构是2-苯基苯并噻吩-2-甲酸酯，分子式为C13H8O2S。
香豆素基团具有较高的荧光效率和荧光稳定性，广泛应用于生物医药、分析化学和材料科学等领域。
香豆素基团的荧光产生机制是通过吸收光能激发电子，然后电子经过激发态和振动激发态的转变，最终从振动激发态跃迁回基态时释放出荧光。
香豆素基团的荧光波长通常在400-500纳米范围内，是蓝色和绿色光区域的发射光。
由于香豆素基团的荧光特性突出，它成为了许多领域中的重要工具。
在生物医药领域，香豆素基团被广泛应用于细胞成像、药物运输和疾病诊断等方面。
例如，科学家们通过将香豆素基团标记在分子探针上，可以实现对癌细胞、微生物和蛋白质等生物样品的高质量成像。
此外，香豆素基团还被用作荧光探针来研究生物分子的相互作用和代谢过程。
在分析化学领域，香豆素基团也发挥着重要的作用。
由于其很强的荧光信号和灵敏的荧光性质，香豆素基团常被用作分析试剂和荧光标记物。
利用香豆素基团的荧光特性，科学家们能够研究和测量生物样品中的化学物质，如氨基酸、蛋白质和核酸等。
此外，香豆素基团还被用于环境分析和食品安全等领域，具有重要的应用前景。
此外，由于香豆素基团具有较高的荧光稳定性和光化学稳定性，它也被广泛应用于材料科学领域。
科学家们利用香豆素基团的荧光性质，设计和制备了一系列具有特殊功能的荧光材料。
这些荧光材料在光电子器件、荧光显示器件、发光标记和荧光传感器等方面具有广泛的应用潜力。
总之，香豆素基团作为一种重要的荧光基团，在生物医药、分析化学和材料科学等领域发挥了重要作用。
它的荧光效率高、荧光稳定性好，广泛应用于生物成像、分子分析和材料制备等方面。
随着科学技术的不断发展，相信香豆素基团在未来将会有更广泛的应用前景。
fam分子量
fam分子量
FAM分子量是一个基础的化学概念，它是指荧光染料Fluorescein amidite的分子量。
FAM是一种广泛应用于分子生物学和生物医学研究中的荧光染料，它能够被用于标记DNA、RNA等生物大分子，进而在荧光显微镜下观察这些分子的运动、位置和构象等重要信息。
FAM的分子量是338.32 g/mol，它的化学结构式为C21H16O7N2。
FAM的化学结构是由一个荧光基团和一个硅烷羟基（Si-OH）团组成的。
硅烷羟基团能够和生物大分子中的羟基或氨基反应，从而将FAM标记在这些生物大分子上，并在荧光显微镜下发出明亮的绿色荧光。
这种荧光染料还可以通过引入其他化学基团来改变其荧光特性，如Kodak公司生产的JOE分子中引入了两个丙酰胺基团，使得其在荧光显微镜下表现为黄绿色荧光。
FAM分子量在分子生物学和生物医学研究中具有广泛的应用价值。
它可以被用于研究基因表达、蛋白质合成和细胞信号转导等过程中生物大分子的活动状态。
FAM标记的生物大分子可以通过荧光显微镜和相关技术手段进行监测和分析，为研究生命过程提供了重要的工具和手段。
总之，FAM分子量是分子生物学和生物医学研究中不可或缺的基础知识之一。
对于从事这个领域的科学家来说，理解FAM的结构和性质对于设计和实施相关研究具有重要的意义。
三种荧光定量PCR检测方法比较
三种荧光定量PCR检测方法比较定量pcr：以参照物为标准,对PCR终产物进行分析或对PCR过程进行监测,从而达到评估样本中靶基因的拷贝数,称为定量PCR。
定量PCR的可行性定量一般是在PCR扩增的指数期进行的。
常见荧光定量PCR检测方法可分为以下几类：<1> SYBR Green I 检测模式SYBR Green I 是一种能与双链DNA 结合发光的荧光染料。
其与双链DNA 结合后, 荧光大大增强。
因此, SYBR Green I 的荧光信号强度与双链DNA 的数量相关,可以根据荧光信号检测出PCR 体系存在的双链DNA 数量。
SYBR Green I 的最大吸收波长约为497nm,发射波长最大约为520nm。
PCR 扩增程序一般为94℃～55℃～72℃三步法,40 个循环。
SYBR Green I 的缺点：由于SYBR Green I 没有特异性,不能识别特定的双链,只要是双链就会结合发光,对PCR 反应中的非特异性扩增或引物二聚体也会产生荧光,通常本底较高,所以在临床上使用可能会有假阳性发生。
SYBR Green I 的优点：SYBR Green I 的优点是因为其缺点产生,由于它能所有的双链DNA相结合,所以对不同模板不需特别定制不同的特异性探针,通用性较好,并且价格相对较低。
这对科研是很有利的,因此国内外在科研中使用比较普遍。
<2> 水解探针模式<taq man探针>TaqMan 探针是一种寡核苷酸探针,荧光基团连接在探针的5’末端, 而淬灭剂则在3’末端。
当探针与靶序列配对时,荧光基团发射的荧光因与3’端的淬灭剂接近而被淬灭。
在进行延伸反应时,聚合酶的5’外切酶活性将探针切断,使得荧光基团与淬灭剂分离,发射荧光。
一分子的产物生成就伴随着一分子的荧光信号的产生。
随着扩增循环数的增加,释放出来的荧光基团不断积累。
因此Taqman 探针检测的是积累荧光。
PCR 扩增程序通常是：94℃～60 ℃40 个循环。
荧光定量PCR全攻略
荧光定量PCR完全攻略1、什么是定量PCR？以参照物为标准，对PCR终产物进行分析或对PCR过程进行监测，从而达到评估样本中靶基因的拷贝数，称为定量PCR。
定量PCR的可行性定量一般是在PCR扩增的指数期进行的。
2、定量PCR定量的理论依据是什么？特定的待扩增基因片段起始含量越大，则指数扩增过程越短，当扩增速率趋于稳定后，则无论原来样品中起始模板含量多少，最终扩增片段的含量通常是一样的。
理想的扩增结果：Y=X×2n其中Y代表扩增产物量，X代表PCR反应体中的原始模板数n为扩增次数；理论上PCR扩增效率为100%，PCR产物随着循环的进行成指数增长，但实际上：DNA的每一次复制都不完全，即每一次扩增中，模板不是呈2的倍增长；实际应为：Y= X(1+E)n，其中E 代表扩增效率：E = 参与复制的模板/总模板，通常E≤1，E在整个PCR扩增过程中不是固定不变的。
通常X 在1～105拷贝、循环次数n≤30时，E 相对稳定，原始模板以相对固定的指数形式增加，适合定量分析，这也就是所谓的指数期；随着循环次数n的增加（>30次），E值逐渐减少，Y 呈非固定的指数形式增加，最后进入平台期。
3、荧光定量PCR定量的理论模式又是什么？PCR是对原始待测模板核酸的一个扩增过程，任何干扰PCR指数扩增的因素都会影响扩增产物的量，使得PCR扩增终产物的数量与原始模板数量之间没有一个固定的比例关系，通过检测扩增终产物很难对原始模板进行准确定量。
近年来研究人员通过大量的实践，研究了相对准确的定量PCR方法，即荧光定量PCR。
PCR扩增通式：① T n=T0（1+E）n② T n=Tn-1（1+E）n 注：[0<E< 1]其中E表示扩增效率，n为循环数，T n表示在n个周期后PCR产物的数量，Tn-1表示在n-1个周期后PCR产物的数量，T0为原始模板数量。
设定PCR到达指数扩增期时，产生一定的荧光(荧光依赖于某一循环扩增产物的总量，即特定的拷贝数K，为常数，大约在1010左右)高于背景为仪器所识别，此时的循环数为CP（crossing point）,也就是K= T0（1+E）CP，取对数即： lg K=lg T0+CP*lg(1+E)CP=- 1/lg(1+E)*lg T0 +lgk/lg(1+E)由于对一特定的PCR而言，E与K均为常数，故上式为循环数（CP）对原始模板拷贝数的对数（lg T0）一次方程，其标准形式y=kx+b,该直线的斜率为- 1/lg(1+E)，在横坐标上的截距为lgk/lg(1+E)，也是荧光定量PCR所谓的标准曲线。
荧光定量PCR中探针的荧光修饰基团
荧光定量PCR中探针的荧光修饰基团1. 荧光定量PCR两种方法荧光定量PCR技术是为了测定样本中特异的PCR片段相对及绝对量，是一种测定特异的PCR片段含量的方式。
如测定病人样本中病原体的含量、实验样本中某一特定的mRNA 的含量等。
为了达到高效反应，应将实时PCR应用的引物设计为能生成短的扩增子。
常用的方法有SYBR Green的荧光染料法和TaqMan探针法，两种方法的特点及应用如下表：名称SYBR Green染料法TaqMan探针法引物一对特异性的引物一对特异性的引物和一条探针原理SYBR Green一种DNA结合染料，能非特异地掺入到DNA双链的小沟当中去，在游离状态下，它不发出荧光，但一旦结合到双链DNA中以后，便可以发出荧光。
探针的5’端有一荧光报告基团，3’端有一荧光淬灭基团，当两个基团相互先靠近的时候，由于发生能量传递作用，报告基团不能发出荧光，但随着扩增反应的进行，5’端的报告基团随着探针的水解而脱落下来，不再与淬灭发生能量传递作用，从而能发出荧光，被信号探测器所捕获。
特点从实验成本来讲，SYBR Green是最好的，普通PCR加上一点SYBR Green荧光染料即可，其信号强度也很好，还可以进行融解曲线分析等，但缺点是只能在一个反应管内进行一种PCR反应的检测，出现非特异扩增会影响到定量结果的可靠性与重复性。
由于增加了探针的特异性，因此其扩增曲线反映的就是特异性产物的扩增曲线，不含有非特异性扩增的成分，其敏感性要比SYBR Green高出10倍。
其缺点在于探针成本较高，有时设计的探针并不合适，有造成损失的可能性。
并且要进行较多的实验条件的优化。
扩增长度SYBR Green法不超过500 bp，一般选择250-400bp，过大会影响到PCR扩增的效率，过小则很难通过融解曲线与引物二聚体分开。
TaqMan法的扩增片段都很小，几十或是100多，一般不超过300，通常为80－150bp。
各种激发光和吸收光波长
各样激发光和汲取光波长此刻发现一个更全的相关激发光和发射光的波长图谱。
这对 CONFOCAL去做多重染色时是必不行少的参照资料。
所有文件Excitation and Emission Wavelengths of FluorophoresTavi\'s \"FluoroTable\": Common fluorophores(from )Fluorophore Absorption Emission Other info1,5 IAEDANS3364901,8-ANS3724804-Methylumbelliferone3855025-carboxy-2,7-dichlorofluorescein5045295-Carboxyfluorescein (5-FAM)4925185-Carboxynapthofluorescein (pH 10)512/598563/668Ratio Dye, pH5-Carboxytetramethylrhodamine (5-TAMRA)5425685-FAM (5-Carboxyfluorescein)4925185-HAT (Hydroxy Tryptamine)370-415520-5405-Hydroxy Tryptamine (HAT)370-415520-5405-ROX (carboxy-X-rhodamine)5786045675915-TAMRA (5-Carboxytetramethylrhodamine)5485525425686-Carboxyrhodamine 6G5185436-CR 6G5185436-JOE5205487-Amino-4-methylcoumarin3514307-Aminoactinomycin D (7-AAD)5466477-Hydroxy-4-methylcoumarin360449, 4559-Amino-6-chloro-2-methoxyacridine412, 430471, 474ABQ344445Acid Fuchsin540630ACMA (9-Amino-6-chloro-2-methoxyacridine)412, 430471, 474Acridine Orange + DNA502526Acridine Orange + RNA460650Acridine Orange, both DNA & RNA440-480520-650Acridine Red455-600560-680Acridine Yellow470550Acriflavin436520Acriflavin Feulgen SITSA355-425460Aequorin (Photoprotein)466PhotoproteinAFPs - AutoFluorescent Protein - (QuantumBiotechnologies) see sgGFP, sgBFPAlexa Fluor 350346442342441Alexa Fluor 430431540Alexa Fluor 488495, 492519, 520Alexa Fluor 532531, 532553, 554Alexa Fluor 546556, 557572, 573Alexa Fluor 568577, 578603Alexa Fluor 594590, 594617, 618Alexa Fluor 633632650Alexa Fluor 647647666Alexa Fluor 660668698Alexa Fluor 680679702Alizarin Complexon530-560,580,580624-645Alizarin Red530-560580Allophycocyanin (APC)630, 645655, 660AMC, AMCA-S345445AMCA (Aminomethylcoumarin)345425347444AMCA-X353442 Aminoactinomycin D555655Aminocoumarin346442350445 Aminomethylcoumarin (AMCA)345425347444Anilin Blue600Anthrocyl stearate360-381446APC (Allophycocyanin)630, 645655, 660APC-Cy7625-650755APTRA-BTC = Ratio Dye, Zn2+466/380520/530 Ratio Dye, Zn2+ APTS424505Astrazon Brilliant Red 4G500585Astrazon Orange R470540Astrazon Red 6B520595Astrazon Yellow 7 GLL450480Atabrine436490ATTO-TAG CBQCA465560ATTO-TAG FQ486591Auramine460550Aurophosphine G450580Aurophosphine450-490515BAO 9(Bisaminophenyloxadiazole)365395BCECF (high pH)492, 503520,528BCECF (low pH)482520Berberine Sulphate430550Beta Lactamase409447, 520BFP blue shifted GFP (Y66H)381,382,445, 447, blue shifted GFP (Y66H) Blue Fluorescent Protein383448Blue Fluorescent Protein BFP/GFP FRETBimane398490Bisbenzamide360461Bisbenzimide (Hoechst)360461bis-BTC = Ratio Dye, Zn2+455/405529/505Ratio Dye, Zn2+ Blancophor FFG390470Blancophor SV370435BOBO-1462481BOBO-3570602Bodipy 492/515490515Bodipy 493/503533549Bodipy 500/510509515Bodipy 505/515502510Bodipy 530/550528547Bodipy 542/563543563Bodipy 558/568558569Bodipy 564/570564570Bodipy 576/589579590Bodipy 581/591584592Bodipy 630/650-X625642Bodipy 650/665-X647665Bodipy 665/676605676Bodipy Fl504, 505511, 513Bodipy FL ATP505514Bodipy Fl-Ceramide505511Bodipy R6G SE528547Bodipy TMR542574Bodipy TMR-X conjugate544573Bodipy TMR-X, SE544570Bodipy TR589617Bodipy TR ATP591620Bodipy TR-X SE588616BO-PRO-1462481BO-PRO-3544570Brilliant Sulphoflavin FF430520BTC - Ratio Dye Ca2+464/401533/529Ratio Dye Ca2+BTC-5N - atio Dye, Zn2+459/417517/532Ratio Dye, Zn2+ Calcein494517Calcein Blue373440Calcium Crimson588, 589611, 615Calcium Green501, 506531Calcium Green-1 Ca2+ Dye506531Ca2+ DyeCalcium Green-2 Ca2+506/503536Ca2+Calcium Green-5N Ca2+506532Ca2+Calcium Green-C18 Ca2+509530Ca2+Calcium Orange549575576Calcofluor White385,395, 437,440,405445Carboxy-X-rhodamine (5-ROX)576601Cascade Blue377420398423399Cascade Yellow399550400552Catecholamine410470CCF2 (GeneBlazer)CFDA494520CFP - Cyan Fluorescent Protein430,433, 474,475, Cyan Fluorescent Protein436, (453)476, (501)CFP/YFP FRETChlorophyll480650Chromomycin A436-460470Chromomycin A445575CL-NERF (Ratio Dye, pH)504/514540Ratio Dye, pHCMFDA494520Coelenterazine Ca2+ Dye, bioluminescence(429)465Ca2+Dye,bioluminescence,native molecule Coelenterazine cp (Ca2+ Dye,)(430)442Ca2+Dye,bioluminescence Coelenterazine f(437)473Ca2+Dye,bioluminescence Coelenterazine fcp452Ca2+Dye,bioluminescence Coelenterazine h(437)464Ca2+Dye,bioluminescence Coelenterazine hcp(433)444Ca2+Dye,bioluminescence Coelenterazine ip441Ca2+Dye,bioluminescence Coelenterazine n(431)467Ca2+Dye,bioluminescence Coelenterazine O460575Coumarin Phalloidin387470C-phycocyanineCPM Methylcoumarin384469MethylcoumarinCTC400-450602CTC FormazanCy2489506Cy3.1 8554568Cy3.5581598Cy3514566552570554Cy5.1 8649666Cy5.5675695Cy5649666670Cy7710, 743767, 805Cyan GFP433 (453)475 (501)cyclic AMP Fluorosensor (FiCRhR)500517CyQuant Cell Proliferation Assay480520Cell Proliferation Assay Dabcyl453Dansyl340578Dansyl Amine337517Dansyl Cadaverine335518Dansyl Chloride372518Dansyl DHPE336517Dansyl fluoride356noneDAPI359461Dapoxyl403580Dapoxyl 2374574Dapoxyl 3373574DCFDA504529DCFH (Dichlorodihydrofluorescein Diacetate)505535DDAO463607DHR (Dihydorhodamine 123)505534Di-4-ANEPPS496705Di-8-ANEPPS (non-ratio)488605498713DiA (4-Di-16-ASP)456591 Dichlorodihydrofluorescein Diacetate (DCFH)505535DiD - Lipophilic Tracer644665Lipophilic TracerDiD (DiIC18(5))644665DIDS341415Dihydorhodamine 123 (DHR)505535DiI (DiIC18(3))549, 551565Dinitrophenol349DiO (DiOC18(3))484, 487501, 502DiR748780Lipophilic TracerDiR (DiIC18(7))750779DM-NERF (high pH)497/510540Ratio Dye, pHDNP349Dopamine340490-520DsRed558583Red fluorescent protein DTAF494520DY-630-NHS621660Hemicyanelabel for proteins and DNA DY-635-NHS634664Hemicyanelabel for proteins and DNA EBFP383447Enhanced BlueFluorescent ProteinECFP436474Enhanced CyanFluorescent ProteinEGFP488, 498507, 516Enhanced GreenFluorescent ProteinELF 97345530Eosin524545Erythrosin529, 532554, 555Erythrosin ITC529555Ethidium Bromide510, 523595, 605Ethidium homodimer -1 (EthD-1)528617Euchrysin430540EukoLightEuropium (III) chlorideEYFP513, 520527, 532Enhanced YellowFluorescent ProteinFast Blue360440FDA494520Feulgen (Pararosaniline)570625FIF (Formaldehyd Induced Fluorescence)405433FITC490, 494520, 525FITC Antibody493517Flazo Orange375-530612Fluo-3480506, 520, 527506Fluo-4494516Fluorescein (FITC)490, 494520, 525Fluorescein Diacetate494520Fluoro-Emerald495524Fluoro-Gold (Hydroxystilbamidine)361536Fluor-Ruby555582FluorX494520FM 1-43479598FM 4-46515640Fura Red(high pH)572657Fura RedFluo-3Fura-2, high calcium335505Excitation ratio dye Fura-2, low calcium363512Excitation ratio dye Fura-2/BCECFGenacryl Brilliant Red B520590Genacryl Brilliant Yellow 10GF430485Genacryl Pink 3G470583Genacryl Yellow 5GF430475GeneBlazer (CCF2)GFP (S65T)498516GFP red shifted (rsGFP)498516GFP wild type, non-UV excitation (wtGFP)475509GFP wild type, UV excitation (wtGFP)395509GFPuv385508Gloxalic Acid405460Granular Blue355425Haematoporphyrin530-560580Hoechst 33258345487Hoechst 33342347Filter sets installed on the Axiovert 200M:1)Brightfield filter cube contains DIC analyzerDIC:2)DAPI / BFP: Chroma set 31041, Ex at 380 nm (bandwidth 30 nm),Em at 460 nm (bandwidth 50 nm).3)FITC / GFP: Chroma set 41001, Ex at 480 nm (bandwidth 40 nm),Em at 535 nm (band width 50 nm).4)RHOD:Chroma set 41002c, Ex at 545 nm (bandwidth30nm), Em at 620 nm (bandwidth 60 nm).5)Cy5:Chroma set 41024, Ex at 620 nm (bandwidth60nm), Em 665 nm and above (long pass filter).Also available upon request:4)GFP:Chroma set 41017, Ex at 470 nm (bandwidth40nm), Em 525 nm (band width 50 nm).5)CFP:Chroma set 31044v2, Ex at 436 nm (bandwidth 20nm), Em 480 nm (bandwidth 40 nm).6)YFP:Chroma set 41028, Ex at 500 (bandwidth 20 nm), Em 535 (bandwidth 30 nm).7) CFP/YFP FRET:Chroma set 31052, Ex 436 (bandwidth 20 nm), Em535 (bandwidth 30 nm).。
fam荧光结构
Fam荧光结构引言Fam荧光结构是一种荧光染料的名称，该染料被广泛应用于分子生物学领域，用于DNA分析、PCR扩增和基因测序等实验。
本文将对Fam荧光结构进行全面、详细、完整且深入的探讨。
Fam荧光染料的基本特性Fam荧光染料，全称为6-羰基-4-甲基-二硫（4，5）咪唑[2，1-a]嘧啶-3-乙酸（5-（和 6-（2-[乙基(甲基)化氨甲基]乙基氨基））烷基）酰氯，是一种化学合成的染料。
其主要特性如下：1.荧光性质：Fam荧光染料在吸收紫外光后，能够发出绿色的荧光信号，可被常见的荧光分析仪器检测。
2.化学稳定性：Fam荧光染料具有良好的化学稳定性，能够在酸碱环境下保持较好的荧光性能。
3.生物相容性：Fam荧光染料对生物体无毒害，不会对实验样品造成影响。
Fam荧光染料的应用领域DNA分析Fam荧光结构在DNA分析中起到至关重要的作用。
DNA分析是对DNA序列和结构进行研究的技术手段，广泛应用于亲子鉴定、疾病诊断和基因变异研究等领域。
Fam 荧光染料可以标记DNA分子，使得在实验过程中能够方便地检测和分析DNA样本。
PCR扩增PCR（聚合酶链反应）是一种重要的分子生物学技术，用于快速扩增DNA片段。
Fam 荧光染料可以与PCR扩增反应中的引物结合，通过测量荧光信号的强弱来检测扩增产物的数量和质量。
基因测序基因测序是研究基因组的重要手段，可以获取基因序列信息。
Fam荧光染料在基因测序中被用作标记器，通过检测不同颜色的荧光信号来识别DNA链的碱基序列。
Fam荧光染料的合成方法一步法合成一步法合成是合成Fam荧光染料的一种常用方法。
它通过将对应的化合物与其他试剂在特定条件下反应，形成Fam荧光染料。
该方法操作简单，适用于一般的实验室合成。
多步法合成多步法合成是合成Fam荧光染料的另一种方法，也是一种较复杂的合成策略。
该方法需要经过一系列的反应步骤，每一步都需要进行严格的条件控制。
多步法合成能够合成更高纯度和更高产率的Fam荧光染料，适用于大规模合成。
荧光定量PCR技术简介
一、荧光定量PCR技术的基础理论
7、mRNA差异表达的相对定量分析
两种相对定量的分析方法：双标准曲线法和Delta-delta Ct法。
一、荧光定量PCR技术的基础理论
7、mRNA差异表达的相对定量分析
（1）、双标准曲线法 所谓的双标准曲线法就是对每个样品的内参基因和目的基因都做绝对 定量，求出每个样品中内参基因和目的基因的绝对数量，然后根据相 对定量的基本公式来求出目的基因的差异表达。
二、引物及Taqman探针的设计
4、Taqman探针及引物合成时注意事项
（1）、引物及探针设计好之后，委托一家放心的合成公司合成； （2）、先不要急于合成探针，先引物合成，引物合成好以后，做普通 PCR，电泳检测PCR产物，看是否和设计的长度吻合，再看看非特 异性扩增情况，必要时进行PCR产物的测序验证； （3）、确定引物没有问题后，再将探针送交合成，这样安排能避免很多 以外的损失； （4）、探针合成好后，先检测一下探针的质量，250nm的探针终浓度， 25ul水，反应体系中只有水和探针，在荧光定量PCR仪上检测， 95℃，2min; 95℃，20s，60℃，20s，40个cycles；看荧光本底 和光强度不会变化，假如荧光强度变化的比较大，说明探针合成质量 较差，建议重新合成。
一、荧光定量PCR技术的基础理论
1、荧光定量PCR技术概论
荧光定量PCR技术是在PCR反应体系中加入荧光基团，利用 荧光信号随着PCR反应的积累来实时监控PCR反应的进程，并通 过分析软件对PCR的反应进行检测分析的技术。 系统组成：定量PCR仪、电脑、分析软件、试剂及耗材。
一、荧光定量PCR技术的基础理论
相对定量： 2
-△△CT
法
二、引物及Taqman探针的设计
荧光标记的siRNA转染方法及步骤
荧光标记的siRNA转染方法及步骤一、荧光标记的siRNA转染效率的高低可以通过观察荧光标记(FAM、CY3、CY5)的siRNA转染细胞后的荧光强度判断。
荧光标记的siRNA转染细胞后，可以用荧光显微镜、激光共聚焦显微镜、流式细胞仪等检测，确定转染是否有效及转染条件。
荧光标记的siRNA还可用作siRNA胞内定位及双标记实验(配合标记杭体)来追踪转染过程中导入了siRNA的细胞，将转染与靶蛋白表达的下调结合起来。
二、使用荧光标记的siRNA检测转染效率荧光标记的siRNA的溶解及保存1.由于OligoRNA是很轻的干膜状附在管壁上，打开时极易散失，所以打开离心管前先离心，10000 rpm，2 min然后再慢慢打开管盖，溶解时加适量DEPC 水后盖上管盖，振荡溶解。
2.需要浓度20μM的样品，如何计算重悬siRNA缓冲液的量？1 OD的siRNA，加入125μl附送的DEPC水,溶解后终浓度为20μM。
3.贮存和稳定性：-20°C ,避光保存，冻干粉或液体。
液体(贮存浓度为20μM)避免反复冻融，GenePharma保证在上述条件下siRNA oligo冻干粉的稳定性可达到6个月，液体状态下建议3个月内使用完。
转染1.使用lipo fectamin2000转染的步骤(以贴壁细胞为例，仅供参考)a.以24孔培养板操作为例(其他孔板各种的试剂用量，请参照“Lipofectamine2000manual”)，转染前一天，将0.5-2×105个细胞接种于培养板中，每孔中加入约500μl含血清的完全培养基，使转染时的细胞密度能够达到70%；b.取1μl/孔Lipo fectamine2000(使用前轻轻摇匀)，用50μl Opti-MEM I ReducedSerum Medium稀释。
轻轻混和后在室温孵育5 min ;c.取2μl荧光-siRNA，用50μl Opti-MEM I Reduced Serum Medium稀释，轻轻混和均匀;d.稀释的Lipofectamine2000(步骤b)经过5min的孵育后，与稀释荧光-siRNA(步骤c)轻轻混和，室温静置20min，以形成荧光-siRNA-转染试剂混和物，如果溶液出现浑浊，属于正常现象，不会影响转染效果。
fam基团荧光淬灭温度
fam基团荧光淬灭温度Fam基团荧光淬灭温度是指Fam基团在溶液中发生荧光淬灭的温度阈值。
Fam基团是一种常用的荧光探针，常用于生物分子检测和荧光标记实验中。
Fam基团的荧光淬灭温度对于实验的设计和结果的解释具有重要的指导意义。
首先，荧光淬灭温度可以帮助我们确定合适的实验温度范围。
在高于荧光淬灭温度的温度下，荧光淬灭现象会显著增强，导致荧光强度的不可逆降低，从而影响实验结果的准确性。
因此，在选择实验温度时，应尽量选择低于荧光淬灭温度的温度，以保证荧光信号的稳定性和可靠性。
其次，荧光淬灭温度还可以帮助我们评估荧光标记物在实验条件下的稳定性。
荧光淬灭是由分子间相互作用引起的，包括分子碰撞、受体分子的非辐射能量转移等。
因此，荧光淬灭温度的高低可以间接反映荧光标记物和其他分子之间的相互作用强度。
在荧光标记实验中，如果荧光淬灭温度较低，则说明荧光标记物可能存在较强的非特异性结合或聚集现象，影响了实验的准确性。
可以通过优化实验条件或选择其他荧光探针来解决这一问题。
此外，荧光淬灭温度也为合成新的荧光探针提供了重要的参考。
荧光探针的设计通常需要考虑多种因素，如荧光强度、荧光光谱、结构稳定性等。
荧光淬灭温度的测定可以帮助选择合适的基团或染料，以实现较高的荧光稳定性。
通过合理设计荧光探针的结构，可以探究生物分子的结构、功能和相互作用等，为科学研究提供有力的工具。
综上所述，Fam基团荧光淬灭温度是一项重要的实验参数，在生物分子检测和荧光标记实验中具有重要的指导意义。
我们可以根据荧光淬灭温度选择合适的实验温度、评估荧光标记物的稳定性，并通过荧光淬灭温度的测定来指导新的荧光探针的设计。
这对于提高实验结果的准确性和可靠性，推动科学研究的进展具有重要的意义。
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fam荧光基团激发波长
FAM（6-羧基荧光素）是一种常用于分子生物学和生物化学研究的荧光染料。
当被蓝光或紫外光激发时，它的激发最大值为494 nm，发射最大值为519 nm。
这意味着FAM在494 nm左右波长的光下最有效地被激发或“激活”，并且在被激发时会发射519 nm左右波长的光。
FAM的发射最大值通常被用作涉及其他荧光染料或蛋白质的实验的参考，因为它提供了一个方便和众所周知的比较点。
FAM是标记DNA或蛋白质的常用选择，因为它相对稳定，荧光强度高，并且可以使用各种技术轻松检测。