免疫标记技术实验报告
蛋白质免疫印记技术实验报告
实验二蛋白质免疫印迹技术河北大学生命科学学院2010生物技术河北保定071002摘要：目的：学习掌握动物抗血清的制备原理及技术，通过实际操作学会动物抗血清的制备，掌握Western－blotting的基本原理，熟悉Western－blotting的实验操作。
方法：，使用鸡卵类粘蛋白对小白鼠进行常规免疫，获得抗血清，然后利用Western－blotting 检测抗血清。
结果：纯化的鸡卵类粘蛋白能引起小鼠的免疫反应.关键词：常规免疫抗血清免疫印记Abstract：objective：learn to master the theory and technology of preparing animals’antiserum by operating the experiment in person ,learn to prepare the animals’antiserum , mastering the basic principles of Western－blotting, and being familiar with the experiment operation of Western－blotting. Methods : using chicken ovomucoid operating the routine immunization of , and obtain the antiserum, then detecting the antiserumthrough Western－blotting.Result:Purified chicken ovomucoid can lead to the laboratory rat's immunoreaction Keywords: routine immunization antiserum Western－blotting前言免疫印迹(Western blotting)是一种检测固定在固相基质上的蛋白质的免疫化学方法该法是在凝胶电泳和固相免疫测定技术基础上发展起来的一种常规技术，是根据抗原抗体的特异性结合检测复杂样品中的某种蛋白的方法。
elisa实验报告范文
elisa实验报告范文篇一：Elia实验名称：酶联免疫吸附剂测定实验原理：酶联免疫吸附测定是一种免疫测定技术。
测定中，先使抗原吸附在固相载体上，然后加待测的抗体，再用某种酶标记抗体，形成抗原-抗体-酶标记抗体的“双抗体夹心”，此时酶仍保有活性，同时标记抗体亦有免疫活性。
之后再加入酶的底物，在酶的催化下产生反应并产生有色物，颜色深浅与待测物质的量直接相关。
至此，酶的催化放大作用与免疫反应的特异性相完美结合，提高了测定的准确性与灵敏度。
实验材料与试剂：1．聚苯乙烯微量细胞培养板(平板,96孔)。
2．酶联免疫检测仪。
3．辣根过氧化物酶羊抗兔IgG。
4．包被液：0.05mol/L碳酸缓冲液（pH9.6）：Na2CO30.15g,NaHCO30.293g，蒸馏水稀释至100ml。
5．稀释液（PBS-Tween）：NaCl8g,KCl0.2g，KH2PO40.2g,Na2HPO4·12H2O2.9g,Tween-20，0.5ml，蒸馏水加至1000ml。
6．洗涤液：同稀释液。
7．封闭液：0.5%（质量分数）BSA（用PBS配制）。
8．邻苯二胺溶液(底物)：配制：0.1mol/L柠檬酸(2.1g/100ml),取6.1ml，0.2mol/LNa2HPO4·12H2O(7.163g/100ml),取6.4ml,加蒸馏水12.5ml,取邻苯二胺8mg（溶解）；临用前加30%（体积分数）H2O240μl。
9．终止液：2mol/LH2SO4。
实验步骤：１．包被抗原：用包被液将抗原作适当稀释,一般为1~10μg/孔，每孔加200μl,37℃温育30min。
２．洗涤：倒尽板孔中液体，加200μl洗涤液，反复三次，最后将反应板倒置在吸水纸上，使孔中洗涤液流尽。
３．加封闭液200μl，37℃温育30min。
４．洗涤同2。
５．加被检血清：用稀释液将被检血清作几种稀释，每孔200μl。
同时作稀释液对照。
37℃温育30min。
免疫实验技术实验报告模板
免疫实验技术实验报告模板一、实验目的1. 掌握免疫实验技术的基本操作流程。
2. 学习如何通过免疫实验技术检测特定抗原或抗体。
3. 理解免疫实验技术在生物医学研究中的应用。
二、实验原理免疫实验技术是一种利用抗原-抗体反应的原理来检测和定量分析生物样本中的特定分子。
通过标记的抗体或抗原与目标分子结合，利用酶联免疫吸附测定（ELISA）、免疫荧光、免疫电泳等方法来检测和分析。
三、实验材料1. 待测样本：血清、组织匀浆等。
2. 试剂：特异性抗体、酶标记的二抗、底物溶液等。
3. 仪器：酶标仪、离心机、恒温水浴、显微镜等。
四、实验方法1. 样本准备：根据实验要求，将待测样本进行适当的处理和稀释。
2. 抗原-抗体反应：将待测样本与特异性抗体混合，进行孵育，使抗原与抗体结合。
3. 标记与检测：使用酶标记的二抗与一抗结合，通过底物反应产生可检测的信号。
4. 数据记录：记录实验过程中的各个时间点和条件，以及最终的检测结果。
五、实验步骤1. 样本稀释：将待测样本按照实验要求进行稀释。
2. 抗原-抗体孵育：将稀释后的样本与特异性抗体混合，放入恒温水浴中孵育一定时间。
3. 洗涤：使用缓冲液洗涤反应板，去除未结合的抗体。
4. 二抗标记：加入酶标记的二抗，再次孵育。
5. 显色反应：加入底物溶液，使酶催化底物产生颜色变化。
6. 光度测定：使用酶标仪测定各孔的吸光度，记录数据。
六、实验结果1. 数据展示：将测定的吸光度值以图表的形式展示。
2. 结果分析：根据吸光度值的变化，分析样本中目标分子的浓度或存在情况。
七、讨论1. 分析实验结果与预期的关系，讨论可能的原因。
2. 探讨实验条件对结果的影响，如孵育时间、温度等。
3. 提出实验中可能存在的问题及改进建议。
八、结论根据实验结果，得出结论。
说明免疫实验技术在检测特定抗原或抗体方面的有效性和准确性。
九、参考文献[1] 参考文献格式示例。
[2] 参考文献格式示例。
十、附录1. 实验原始记录。
医学免疫学实验报告
医学免疫学实验报告免疫学实验报告引言：免疫学是研究人体免疫系统的科学，通过实验研究可以更好地了解免疫系统的功能和应对机制。
本次实验旨在探究免疫系统对外来抗原的应答过程，并评估免疫细胞的活性和效能。
实验材料与方法：1. 实验动物：使用小鼠作为实验对象，因其免疫系统与人类相似度较高。
2. 抗原制备：选择一种常见的抗原，如牛血清白蛋白（BSA），通过纯化和浓缩得到高纯度的抗原溶液。
3. 免疫程序：将小鼠随机分为实验组和对照组，实验组注射抗原溶液，对照组注射生理盐水。
观察并记录两组小鼠的免疫应答情况。
4. 免疫指标测定：采集小鼠血液样本，使用酶联免疫吸附试验（ELISA）等技术测定血清中特定免疫球蛋白（如IgG、IgM）的水平。
实验结果与讨论：1. 免疫应答：实验组小鼠在注射抗原后，免疫系统迅速启动，产生针对抗原的特异性免疫应答。
对照组小鼠未注射抗原，免疫系统无明显应答。
2. 抗原特异性免疫球蛋白：ELISA结果显示，实验组小鼠血清中特定抗原特异性免疫球蛋白（如IgG）的水平显著升高，而对照组无明显变化。
这表明实验组小鼠的免疫系统成功识别并产生了针对抗原的免疫应答。
3. 免疫细胞活性：通过流式细胞术等技术，观察并比较实验组和对照组小鼠免疫细胞的活性。
实验结果显示，实验组小鼠的免疫细胞活性较高，表明其免疫系统对抗原的识别和攻击能力增强。
4. 免疫记忆效应：在实验组小鼠中，注射抗原后，免疫系统形成了对抗原的记忆效应。
再次注射相同抗原时，免疫应答更为迅速和强烈。
而对照组小鼠未形成明显的免疫记忆效应。
结论：本次实验结果表明，免疫系统对外来抗原具有高度的特异性和记忆性。
免疫细胞的活性和效能在免疫应答中起到关键作用。
这些实验数据为进一步研究免疫系统的功能和应对机制提供了重要依据。
展望：在未来的研究中，可以进一步探究免疫系统对不同类型抗原的应答差异，以及免疫细胞的分化和调控机制。
此外，可以结合其他技术手段，如基因工程和单细胞测序，深入研究免疫系统的细节和复杂性。
免疫标记技术实验报告
免疫标记技术实验报告免疫标记技术实验报告免疫标记技术是一种广泛应用于生物医学研究领域的实验技术，它能够帮助科学家们准确地检测和定位特定的生物分子，从而深入研究细胞和生物体内的各种生物过程。
本实验旨在探究免疫标记技术的原理、方法和应用，并通过实验验证其可靠性和有效性。
1. 实验目的本实验的主要目的是通过免疫标记技术来检测和定位目标蛋白在细胞中的分布情况，并了解其在细胞过程中的功能。
2. 实验原理免疫标记技术基于抗原与抗体的高度特异性结合原理，通过将特定的抗体与目标分子结合，再利用荧光染料或酶标记等方法进行检测。
该技术具有高灵敏度、高特异性和高分辨率的特点。
3. 实验步骤（1）制备标本：收集并处理细胞样本，使其适合于免疫标记实验。
（2）固定细胞：使用适当的固定剂固定细胞，以保持其形态和结构完整。
（3）渗透化处理：利用适当的渗透剂使细胞膜通透，使抗体能够进入细胞内部。
（4）免疫反应：加入目标蛋白的特异性抗体，与其结合形成免疫复合物。
（5）洗涤：用缓冲液洗涤细胞，去除未结合的抗体和其他杂质。
（6）标记：加入荧光染料或酶标记的二抗，与免疫复合物结合形成标记复合物。
（7）显微镜观察：将标记的细胞样本放置在显微镜下观察，记录和分析结果。
4. 实验结果通过显微镜观察，我们成功地检测到目标蛋白在细胞中的分布情况。
荧光染料或酶标记的标记复合物显现出明亮的信号，从而帮助我们准确地定位目标蛋白在细胞的位置。
5. 实验讨论免疫标记技术在生物医学研究中具有广泛的应用前景。
通过该技术，我们可以深入研究细胞的结构和功能，探索生物体内各种生物过程的机制。
例如，通过标记细胞内的蛋白质，我们可以研究细胞分化、增殖和凋亡等重要过程，从而为疾病的诊断和治疗提供依据。
然而，免疫标记技术也存在一些局限性。
首先，免疫标记的抗体必须具有高度特异性，否则可能会导致误判和误导。
其次，某些细胞结构和分子可能对固定和渗透化处理敏感，从而影响免疫标记的结果。
蛋白质免疫印记技术实验报告
蛋白质免疫印迹技术曹学敏郭晓华谷中如古泽江河北大学生命科学学院2010生物技术河北保定071002摘要：目的：学习掌握动物抗血清的制备原理及技术，通过实际操作学会动物抗血清的制备，掌握Western－blotting的基本原理，熟悉Western－blotting的实验操作。
方法：，使用鸡卵类粘蛋白对小白鼠进行常规免疫，获得抗血清，然后利用Western－blotting 检测抗血清。
结果：纯化的鸡卵类粘蛋白能引起小鼠的免疫反应关键词：常规免疫抗血清免疫印记Abstract：objective：learn to master the theory and technology of preparing animals’ antiserum by operating the experiment in person ,learn to prepare the animals’antiserum , mastering the basic principles of Western－blotting, and being familiar with the experiment operation of Western－blotting. Methods : using chicken ovomucoid operating the routine immunization of laboratory rat, and obtain the antiserum, then detecting the antiserum through Western－blotting. Result: purified chicken ovomucoid can lead to the immunization of laboratory rat Keywords: routine immunization antiserum Western－blotting前言免疫印迹(Western blotting)是一种检测固定在固相基质上的蛋白质的免疫化学方法该法是在凝胶电泳和固相免疫测定技术基础上发展起来的一种常规技术，是根据抗原抗体的特异性结合检测复杂样品中的某种蛋白的方法。
免疫标记
• 实验目的 • 通过HBsAg的检测，了解酶联免疫吸附试验的原理和 类型，熟悉双抗体夹心法的原理及其临床意义。
【原理】
以特异性抗体(抗-HBs)包被载体表面，然后将待测标本 加入反应孔，混匀，37℃孵育，洗去未结合的抗原，加 入酶标特异抗体(酶标 抗-HBs)37℃孵育30min。酶标抗 体就连接到已结合于致敏载体表面的抗原上，孵育后， 洗去未结合的酶标抗-HBs。最后加入底物溶液，根据颜 色反应来判定抗原含量。
已包被抗-HBs的反应孔 + 被测标本→+ 酶标抗-HBs → 混匀 37℃30min →洗涤液手工冲洗5次，拍干→ 加显色剂A液，再加B液 各1滴混匀 → 37℃10min →观察判断结果。 先观察3个对照孔结果。
双抗体夹心法检测抗原原理示意图
取出水洗5次
酶标抗HBs-Ab 放37℃，30min
• 4. 结果判断须在10min内完成。
【临床意义】
• 血清中检测到HBsAg可确证有乙型肝炎
（HBV）感染。我国有1亿HBsAg多健康携带者
• 但不一定是乙型肝炎患者。 实验报告
1. 简述荧光免疫法检测ANA的实验原理
2. 试述酶联免疫法检测HBs-Ag的实验原理
3. 报告实验结果：标本号，阴性，阳性，对照结果
• 实验物品发放：被检血清，每人一份，报告标本号
【方法】 阴性对照、阳性对照、空白对照全班各作2分。共6分
于已包被抗-HBs的试验孔内加入待测血清标本，每孔50μl
空白孔不加血清 阴、阳、空白对照 各2孔，全班
加入酶标抗-HBs，每孔1滴 (50μl)充分混匀，37℃ 30min
手工洗板:弃去反应孔内液体、拍干、用洗涤液注满孔， 弃去拍干，同法反复洗涤五次后，拍干。每次泡20秒
免疫印迹实验报告
免疫印迹实验报告竭诚为您提供优质文档/双击可除免疫印迹实验报告篇一：免疫印迹实验报告——westerblotwesternblot实验报告摘要：目的：学习并掌握westernblot分离蛋白及观察方法方法：westernblot结果：见后文结论：westernblot能很好地分离蛋白关键词：westernblot、分离、小鼠组织、蛋白westernblottestreportAbstract:objective:Learnandmasterthewesternblotprot einisolatedandobservationmethodmethods:westernblot ：,sds-pageandelectrictransferResults:seebelowKeywords:westernblot、separate、mousetissues、protein前言:免疫印迹又称western印迹(westernblotting)，与DnA的southern印迹技术相对应，两种技术均把电泳分离的组分从凝胶转移至一种固相载体(通常为nc膜)，然后用探针检测特异性组分。
不同的是，westernblotting所检测的是抗原类蛋白质成分，所用的探针是抗体，它与附着于固相载体的靶蛋白所呈现的抗原表位发生特异性反应。
该技术结合了凝胶电泳分辨力高和固相免疫测定特异敏感等诸多优点，具有从复杂混合物中对特定抗原进行鉴别和定量检测，以及从多克隆抗体中检测出单克隆抗体的优越性。
该技术的灵敏度能达到标准的固相放射免疫分析的水平而无需对靶蛋白进行放射性标记。
目前，westernblotting广泛用于蛋白质研究、基础研究和临床医学的研究。
免疫印迹可分成两个步骤：蛋白质由凝胶转移至固相基质；特异性抗体检测。
蛋白质转移通常由电泳实现，现常用的方法有二：1半干法：将凝胶和固相基质似三明治样夹在缓冲液湿润的滤纸中间，通电10-30分钟可完成转移；2湿法：将凝胶和固相基质夹在滤纸中间，浸在转移装置的缓冲液中，通电45分钟或过夜课完成转移。
免疫胶体金实验报告
免疫胶体金实验报告免疫胶体金技术常见影响因素分析免疫胶体金技术常见影响因素分析自胶体金作为特殊标记物进行研究以来,建立的各种免疫胶体金技术以其特异性强、灵敏度高、操作简捷等特点,在医学、农牧业、环境及食品检测等领域被广泛应用。
免疫胶体金技术的反应过程是一个由金颗粒、抗原与抗体动态结合的反应过程,在这个过程中每个环节的好坏都直接影响试验的成败。
而试验过程中每个环节又受到很多因素的影响和制约,下面将影响免疫胶体金技术的因素作一分析,为成功制备胶体金检测产品提供参考。
1耗材的选择1.1不同型号膜的筛选。
硝酸纤维素膜的型号在试验中至关重要,作为反应载体影响到整个试验的成败。
不同的生产厂家生产硝酸纤维素膜时使用的聚合物和表面活性剂的来源、类型和数量均大不相同,对生产出的膜的性能产生较大影响——膜的孔径和分布结构不同。
膜孔径减小,膜的实际可用表面积递增,膜结合蛋白的量也递增;膜孔径越小,层析速度也越慢,金标复合物通过T线的时间就越长,反应也就越充分;因此膜孔径越小灵敏度越高,但是同时也减慢了跑板速度,增加了非特异性结合的机会,也就是假阳性越高。
用于金标免疫快速试验的膜多为硝酸纤维素膜或硝酸纤维素/醋酸纤维素混合膜,不同的包被蛋白对膜有特定要求,试验者应根据蛋白质的性质选择适合孔径大小和分布结构的膜,找到合适的平衡点,使胶体金的标记物在膜上的流动速率为最佳。
1.2结合垫的选择。
结合垫位于层析系统的中间,一般要求结合垫的网格均一且非特异性吸附低,能很好地负载胶体金标记物和待检测样品,而不被吸附;玻璃纤维素膜具备以上优点,同时具有一定的硬度,为试验中常用。
1.3样品垫及吸水纸的选择。
样品垫和吸水纸位于胶体金免疫层析系统的两端,对于胶体金层析系统功能的实现起着举足轻重的作用。
试验中应根据试纸条检测样品的性质选择合适的样品垫和吸水纸,保证样品在样品垫形成的通道中快速地流动而不被非特异性地吸附或者改变样品的性质。
如检测样品为血清,则可选择网格较疏松的玻璃纤维素膜即可;如果检测样品为毒素,则可选择质量好的吸水纸和样品垫。
免疫实验 免疫学及免疫检测技术试验
2、加于淋巴细胞分离液上层，离心：500g 20min
（小于1000rpm)
！沿管壁滴加
!淋巴细胞分离液取法
离心
单个核细胞 （斜面！）
3、吸出细胞，悬于营养缓冲液（1～2倍量含5IU/ml 肝素、2％灭活小牛血清的PBS液 ），离心：200g 10min，除去血小板。
4、洗涤：同样营养液洗涤2次，洗去淋巴细胞分离 液，离心： 500g 10min
免疫学实验
实验一、外周血单个核细胞的分离
单个核细胞： 一、基本原理 ?常用哪些方法分离细胞，免疫学可采用哪些方法 本实验是利用不同的细胞之间密度不同的性质，通过 速度沉降法来分离制备外周血中单个核细胞。 二、操作： 1、稀释血：1ml血+1ml缓冲液（含5～10IU/ml肝素的 PBS，无血清 ）（用滴管）
•荧光各孔：阴性对照：Ab-Ag-FITC-Ab，阳性对照用 200ng/ml，500ng/ml
37℃，1hr，洗涤液洗涤三次
3、加酶标抗体、荧光标记抗体：
•所有ELISA各孔均加100ul（已稀释好,稀释倍数：2000
•各荧光孔不加酶标抗体，加荧光标记抗体100ul,(已稀释 好，稀释倍数：50)
实验四、免疫荧光检测技术
一、基本原理：
荧光双抗夹心法定位与定量抗原
二、操作：
1、抗体包被：（同实验二） 2、加样本：同实验二，但在本实验中不做标准曲 线，样品加两个稀释浓度，如1：20，1：40，另外 加一个阳性对照（用人IgG标准），每孔做一个复 孔，加空白对照共计8孔。 3、加荧光抗体：从这里开始与实验二不同之处是 一定要记得避光操作。按照要求加入一定稀释度的 荧光标记抗人IgG抗体（一般为1：80倍左右），避 光37℃保温箱中保温30-45分钟。
17.2-金免疫标记技术
一 洗 净 双 手
四
立 即 加 1 2 滴 缓 冲 液
操作
二 用 采 血 针 采 指 尖 血
样三 孔将 1 滴 指 尖 血 滴 入 加
？？结果
步骤5：15分钟读 取结果
？？结果
讨论分析
胶体金标记技术 (Immunogold labeling technique)
是以胶体金作为示 踪标记物，应用于 抗原抗体反应的一 种新型免疫标记技 术。
讨论分析
制备高质量胶体金的注意事项
（1）玻璃器皿必须彻底清洗，最好是经过硅化处理的玻璃 器皿，或用第一次配制的胶体金稳定的玻璃器皿，再用双 馏水冲洗后使用。否则影响生物大分子与金颗粒结合和活 化后金颗粒的稳定性，不能获得预期大小的金颗粒。 （2）试剂配制必须保持严格的纯净，所有试剂都必须使用 双馏水或三馏水并去离子后配制，或者在临用前将配好的 试剂经超滤或微孔滤膜（0.45µ m）过滤，以除去其中 的聚合物和其它可能混入的杂质。
讨论分析
2．鞣酸—枸橼酸钠还原法 A液：1％HAuCl4水溶液1ml加入79ml双馏水中混匀。 B液：1％枸橼酸三钠4ml，1％鞣酸0.7ml，0.1Mol/L K2CO3液0.2ml，混合，加入双馏水至20ml。
将A液、B液分别加热至60℃，在电磁搅拌下迅速将 B液加入A液中，溶液变蓝，继续加热搅拌至溶液变 成亮红色。此法制得的金颗粒的直径为5nm。如需 要制备其它直径的金颗粒，则按表15-1所列的数字 调整鞣酸及K2CO3的用量
讨论分析
示踪剂：以胶体金为指示剂，本 身形成免疫分析过程后的颜色标记
符号显示结果
自带质控对照
快速：全部检测过程 仅需 3-20分钟。
简便、经济实用
可单份检测，稳定性好
ELISA实验报告(两篇)
引言概述:ELISA（酶联免疫吸附测定）是一种常用于测定抗体或抗原的定量和定性的快速、敏感和特异性的实验技术。
本文将继续讨论ELISA实验的一些重要内容，包括实验操作步骤、控制样品的使用、结果分析和解释。
通过深入了解这些实验细节，我们可以更好地理解ELISA的原理和应用。
正文内容:一. 实验操作步骤1. 准备样品和标准曲线- 收集所需的样品，可以是血清、尿液或细胞上清等。
- 确定需要测定的抗体或抗原，并准备相应的标准曲线。
2. 处理样品- 样品处理包括离心、稀释或加热等步骤，以去除可能干扰测定的物质。
3. 准备实验板- 将酶标板预先涂覆上抗体或抗原，然后用非特异性蛋白质阻断剂进行阻断。
4. 加入样品和标准曲线- 将处理后的样品和标准曲线加入预先涂覆抗体或抗原的孔中。
5. 孔洗涤和加入检测抗体- 通过洗涤孔来去除非特异性结合物质。
- 加入检测抗体，它可以是与标准曲线中的抗体相同的抗体或与待测物质结合的抗体。
6. 孔洗涤和加入底物- 通过洗涤孔来去除未结合的检测抗体。
- 加入底物，它会与酶结合并产生可测定的信号。
7. 信号检测和结果记录- 使用酶标仪测量底物的反应产物生成的光信号。
- 将光信号与标准曲线进行比较，得出待测样品中目标物质的含量。
二. 控制样品的使用1. 阳性对照样品- 阳性对照样品是已知含有目标抗体或抗原的样品，用于验证实验的准确性和可靠性。
2. 阴性对照样品- 阴性对照样品是未含目标抗体或抗原的样品，用于确定实验的特异性。
3. 反应性对照样品- 反应性对照样品是含有不同浓度目标抗体或抗原的样品，用于绘制标准曲线并进行定量测定。
4. 标准曲线的制备- 使用已知浓度的标准样品制备标准曲线，该曲线用于将光信号转换为目标物质的定量结果。
5. 控制实验条件- 控制实验条件，包括温度、时间和洗涤次数等，以确保实验的可重复性和可比性。
三. 结果分析1. 原始数据处理- 使用酶标仪测量的吸光度值为原始数据，在计算吸光度值之前，需要进行空白校正和标准曲线外推。
免疫标记技术
• 100 ul of fresh substance (DAB) are added into each well.
Incubated at 37℃ for 20min. • 50 ul (one drop) of the stop solution are added into each well. • Read OD of each well at 490nm with a ELISA reader.
• 以胶体金为标记物的抗原抗体反应。 • 分类：定性：免疫电镜技术和免疫组织化学技术
半定量：常与膜载体技术结合，包括斑点金免疫渗滤
试验和斑点金免疫层析试验等。
• 胶体金是由金盐被还原成原子金后形成的金颗粒悬液，呈红 色，并能与蛋白质等大分子物质结合。
斑点金免疫层析试验(dot gold immunochromatographic assay，DICA)
• 三种试剂： ① 固相抗原或抗体 即把抗原或抗体用合适的方法连接到固 相载体表面，同时保留它们的免疫活性；
② 酶标抗原或抗体，即把某些酶用合适的方法连接到抗原或 抗体表面，同时保留它们的免疫活性以及酶的催化活性。 常用的酶是辣根过氧化物酶(HRP)和碱性磷酸酶(AP)； ③ 酶作用的底物 ：一般是能发生颜色改变的化合物，也可 以是发光类化学物质。
Immunogold labeling technique
the "rapid tests" that you might use to detect pregnancy, or diagnose an infection quickly in a doctor's office
胶体金免疫技术
Method
• Rabbit anti-human antibody are attached to the surface of microplate. (have been done)
ELISA酶联免疫吸附试验报告
大学实验报告酶联免疫吸附试验学院：专业：姓名：学号：一．实验原理酶联免疫吸附试验（ELISA）是一种用酶标记抗原或抗体的方法，此法是将抗原、抗体免疫反应的特异性和酶的高效催化作用原理有机地结合起来的技术，可敏感地检测体液中微量的特异性抗原或抗体。
基本原理如下：①先使用抗原或抗体结合到某种固相载体表面，并保持其免疫活性；②使抗原或抗体与某种酶联结成酶标抗原或酶标抗体，这种酶标抗原或酶标抗体即保留了其免疫活性，又保留了酶活性；③试验时，把受检标本（抗体或抗原）和酶标抗原或酶标抗体按不同的步骤与固相载体表面的抗原或抗体起反应，用洗涤法去除固相载体上的游离物质，最后结合在固相载体上的酶量与标本中受检物质的多少有关。
当加入酶反应的底物后，底物被酶催化而产生有色物质。
颜色反应深浅与受检抗原或抗体的量成正比。
因此，可借助颜色反应的深浅来定性、定量抗体或抗原。
本技术的特点是敏感性高，特异性强，操作简易，结果容易观察。
图1 ELISA实验原理示意图二．实验材料BSA抗原、兔抗BSA抗体（一抗，分别用PBS稀释成1:2, 1:4, 1:16, 1:32, 1:64, 1:128, 1:256七个浓度）、酶标羊抗兔IgG（二抗）、0.05M PH9.6碳酸盐包被缓冲液、洗涤液（PBS）、底物溶液、2mol/L H2SO4。
三．实验方法1.包被板的处理：加BSA（包被缓冲液稀释为10μg/ml）至酶标板中，每孔100μl，置湿盒中4℃过夜。
第二天取出，用PBS洗涤3-4次。
2.取包被好的酶标板，在第一孔中加入100μl PBS作阴性对照，在第2-8孔加入上述稀释的一抗各100μl，置37℃保温1h。
3.倾去液体，用PBS洗涤3-4次后加入二抗各100μl，置37℃保温30min。
4.倾去液体，用PBS洗涤3-4次后加入底物溶液各100μl，在暗处37℃避光显色20min，最后加入50μl、2M H2SO4终止反应。
5.在波长490nm处，测定各孔的光密度吸收值。
免疫标记技术实验报告
免疫标记技术实验报告实验目的：本实验旨在通过免疫标记技术，对特定生物分子进行定位、定量和功能分析。
免疫标记技术是一种利用抗体与抗原特异性结合的原理，通过标记物的信号放大，实现对目标分子的检测和分析的方法。
实验原理：免疫标记技术主要包括直接法和间接法两种。
直接法是将荧光素或其他标记物直接连接到抗体上，而间接法则是先将未标记的抗体与抗原结合，然后再用标记的二抗进行检测。
本实验采用荧光标记的直接法，通过荧光显微镜观察目标分子的分布情况。
实验材料：1. 目标细胞或组织样本2. 特异性抗体（一抗）3. 荧光标记的二抗4. 荧光显微镜5. 固定液、洗涤液、封闭液等实验试剂实验步骤：1. 样本准备：将细胞或组织样本固定在载玻片上，进行适当的固定处理。
2. 封闭处理：使用封闭液处理样本，以减少非特异性结合。
3. 一抗孵育：将样本与特异性一抗孵育，使一抗与目标抗原结合。
4. 洗涤：去除未结合的一抗，使用洗涤液清洗样本。
5. 二抗孵育：将荧光标记的二抗与样本孵育，使二抗与一抗结合。
6. 洗涤：再次洗涤样本，去除未结合的二抗。
7. 荧光显微镜观察：使用荧光显微镜观察并记录目标分子的荧光信号。
实验结果：通过荧光显微镜观察，我们可以看到目标分子在细胞或组织中的分布情况。
荧光信号的强度和分布模式为我们提供了关于目标分子表达水平和位置的重要信息。
实验讨论：本实验中，免疫标记技术的成功应用依赖于抗体的特异性和亲和力，以及荧光标记的稳定性和亮度。
实验中可能存在的非特异性结合和背景噪声需要通过优化实验条件和使用适当的封闭液来控制。
此外，荧光显微镜的分辨率和灵敏度也是影响实验结果的关键因素。
实验结论：免疫标记技术是一种强大的生物分子分析工具，它能够提供目标分子在细胞或组织中的精确定位和定量信息。
通过本实验，我们成功地应用了免疫标记技术，并对目标分子的分布情况进行了有效的观察和分析。
注意事项：1. 实验过程中应严格控制温度和时间，以保证抗体与抗原的特异性结合。
免疫标记技术ELSIA实验
呈色反应
EIA
(酶免疫测定法)
固相 聚苯乙烯
Ag或Ab吸附到固相 上的过程,称为包被
基本特点：
①标记后保留酶和抗原(抗体)的活性； ②酶促反应专一性，保证特异性； ③底物反应放大作用，提高敏感性； ④酶标试剂保存稳定； ⑤操作简便，安全易行。
常用酶及其底物
1.辣根过氧化物酶(HRP)
常用底物： 邻苯二胺(OPD)：反应显橙黄色，应避光，致癌性。 四甲基联苯胺(TMB)：反应后呈蓝色，无需避光，无致癌性, 但水溶性差。
2. 在各孔内加入酶标抗体1滴, 37℃温育30分钟。
3. 各孔分别加入洗涤液(加满)---甩掉，反复3次， 然后在吸水纸上吸干(倒扣在吸水纸上)。
4. 各孔内加入底物液A、B各1滴，轻轻摇动混匀， 室温避光反应15分钟。 5. 各孔内加入终止液1滴，观察结果。
结果判定
1.若待检孔显色浅于阴性对照则判定为阴性；
HBV感染后的血清学指标:
HBsAg, HBsAb HBeAg, HBeAb
又称表面抗原,存在于 HBV感染的急性期及慢 性期的血清中,为感染 指标。
HBcAb(IgG,IgM)
实验材料
1.HBV诊断试剂盒； 2.HBsAg阳性对照品，阴性对照品，待检品。
实验步骤
1. 将已包被的孔编号，分别加入阳性对照血清、 阴性对照血清及待测血清各1滴。
同位素
特异性
灵敏性
免疫标记技术主要特点
高特异性 高灵敏性
免疫标记技术
酶标技术 免疫荧光技术
酶免疫组化技术 酶联免疫吸附技术
放射物标记技术
其他标记技术
酶免疫技术
基本原理
利用酶催化底物反应的生物放大作用,提高特 异性抗原-抗体免疫学反应的检测敏感性的一 种标记免疫技术。
荧光免疫标记技术
完成任务，培养了与人合作、与人沟通的能力
第二页，编辑于星期日：十四点 五十二分。
任务对象
1
荧光标 记物的 制备
2
荧光免 疫组织 化学技
术
3
其他荧 光免疫 技术
第三页，编辑于星期日：十四点 五十二分。
任务过程
复习提问
2′
教
案例导入
2′
学
讲解与示教
FALS Sensor
90LS Sensor
侧向角散射光（SSC）：反映细胞内的颗粒多少
第二十七页，编辑于星期日：十四点 五十二分。
讨论分析
荧光免疫显微技术
B细胞
双色直接染色细胞
T细胞
第二十八页，编辑于星期日：十四点 五十二分。
荧光免疫显微技术
直方图分析：对细胞的某一个单参数 进行统计分析 横坐标为荧光或散射光强度 纵坐标为细胞数
无荧光。 ❖ ⑶斑点型：细胞核呈现斑点状荧光。 ❖ ⑷核仁型：核仁部分呈现荧光。
第九页，编辑于星期日：十四点 五十二分。
实验操作
【注意事项】
❖ 1.滴加的血清或标记抗体应充分覆盖满抗原片。 样品之间防止交叉污染。反应时应置于湿盒内， 防止干燥。
❖ 2.每次冲片应彻底，防止非特异荧光的干扰。 ❖ 3.荧光受温度影响较大，不能及时观察时应注意
以荧光素作为标记物，与已知的抗体(或抗原)结合、但不影 响其免疫学特性。然后将荧光素标记的抗体作为标准试剂， 用于检测和鉴定未知的抗原。
在荧光显微镜下，可以直接观察呈现特异荧光的抗原抗体复合 物及其存在部位。
第十四页，编辑于星期日：十四点 五十二分。
讨论分析
荧光
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免疫标记技术实验报告
前言
在生命科学研究中，免疫标记技术是一项十分重要的实验技术。
它利用特异性抗体或结合蛋白，标记或定位待检测分子，实现对生物体内各种生物分子的检测和研究。
本实验报告以免疫荧光标记技术为例，详细介绍了该技术的实验原理、实验步骤及结果分析，旨在帮助读者深入了解免疫标记技术的实验方法和应用。
实验原理
免疫荧光标记技术是利用荧光标记的抗体特异性识别和结合目标分子，从而对目标分子进行检测和定位。
本实验中，我们通过荧光标记的抗体识别和结合细胞膜表面的受体，实现对目标细胞的检测和定位。
实验中所使用的抗体标记方式是间接标记法，即将特异性初级抗体与荧光标记的二级抗体结合，从而实现对目标细胞的检测。
实验步骤
1.细胞培养和处理
将细胞培养于无菌培养皿中，细胞密度约为80%时，加入刺激剂并继续培养。
处理时间和刺激剂的浓度需根据不同的实验目的和要求进行调整。
2.制备抗体溶液
将荧光标记的抗体或间接标记法所需要的初级抗体和二级抗体制备至适当浓度。
常用抗体浓度范围为1:100-1:500。
3.活细胞荧光标记
用1倍PBS将培养皿中的细胞洗涤3次，去除细胞培养基和死细胞。
随后，向细胞中加入刚才制备好的荧光标记的抗体，并在室温下旋转轻轻混合15分钟。
4.洗涤和染色
用1倍PBS将细胞混合物洗涤2次，并用1倍PBS悬浮细胞混合物。
接着，用50%甘油液将混合物微量涂于载玻片上，用甘油溶液瞬时固定细胞，形成细胞染色。
5.显微镜观察
用荧光显微镜观察载玻片中的细胞荧光信号，并拍摄显微镜图像。
可以通过比对不同实验条件下的细胞标记和没有标记的对照组，对实验结果进行分析和比较。
结果分析
免疫荧光标记技术的应用范围十分广泛，本实验以细胞膜表面受体为例，介绍了该技术的实验步骤和原理。
通过观察显微镜下的荧光图像，可以发现被荧光标记的细胞荧光信号比未被标记的细胞荧光信号强烈许多，从而实现了对目标细胞的检测和定位。
但是需要注意的是，免疫标记技术中所使用的荧光标记物在实验过程中会产生光漂白和光淬灭的现象，从而降低检测信号的强度和可靠性。
如何选择合适的抗体、荧光标记物以及实验条件和分析方法等因素也会对免疫标记技术的实验效果产生影响。
结论
免疫标记技术是生命科学研究中的一项重要实验技术，通过特异性抗体的荧光标记，能够对生物体内各种生物分子进行检测和研究。
本实验以免疫荧光标记技术为例，介绍了该技术的实验步骤和原理，通过对标记和未标记的对照组的比较，实现了对目标细胞的检测和定位。
但其应用范围和效果仍需在进一步的实验研究中加以完善和提高。