高脂血症模型的建立和降血脂作用的研究

高脂血症模型的建立和降血脂作用的研究

1.1、材料

SD大白鼠（120-200g）、降血脂药物。

1.2、仪器与试剂

离心沉淀器（4000r/min）、高速离心机（6000~12000r/min）、752紫外可见光分光光度计、盘称、注射器（5mL），大鼠灌胃器。

NaOH试液、10%AlCl3、5%NaHNO2、FeC13贮存液、显色剂、胆固醇标准贮存液，胆固醇标准应用液。

1.3、试剂的配制

1.3.1、5%亚硝酸钠溶液

取2.5 g亚硝酸钠，加水使溶解成50mL，即得。

1.3.2、氢氧化钠试液

称取氢氧化钠4.3 g，加水使溶解成100mL，即得。

1.3.3、FeC13贮存液

取FeC13 2.5 g，研碎后溶于87%浓磷酸，加至100mL，盛棕色瓶中，放室温下暗处保存。

1.3.4、胆固醇标准贮存液

精确称取胆固醇（重结晶）200.8mg，溶于无水乙醇稀释至100mL，贮冰箱内备用。

1.3.5、胆固醇标准应用液

准确吸取上述贮存液2mL，用无水乙醇稀释至100mL，贮存冰箱内，用时预温至室温。

1.3.6、显色剂

取胆固醇标准用液8mL，加浓硫酸至100mL混合，放暗处保存，有沉淀，需重配。

1.4、方法

1.4.1、胆固醇的测定方法

乙醇提取，高铁-硫酸显色法。

1.4.2、血清的制备方法

取轻微麻醉过的大白鼠，从眼眶后静脉丛用毛细管采血0.5mL，放入用肝素处理过的离心管中，用6000r/min高速离心机离心3min，灰黄色的上清液为血清。

1.4.3、基本原理

用无水乙醇沉淀血清蛋白质，再加显色剂使胆固醇与浓硫酸及高铁离子反应生成稳定的紫红色物质，该物质在550nm处有最大的吸收，与同样处理的标准液对照比色，计算胆固醇含量。

1.4.4、测定液配制

取带塞离心管一只，准确加入血清0.1 mL，再对血清吹入无水乙醇4.9 mL，使蛋白质分散成微细的颗粒沉淀，加塞，用力振摇0.5min，放置10min后再振摇混合，以2000 r/min离心10 min，取上清液备用。

1.4.5、试管准备

取试管12只，按表编号和操作。表1。

表1 实验前各组胆固醇的测定

组别

试剂

B S T1T2T3T4T5T6T7T8T9T10

取上清液 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 胆固醇标准应用液 2

无水乙醇 2

显色剂 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2

Ⅰ组胆固醇含量0 100

Ⅱ组胆固醇含量

Ⅲ组胆固醇含量

注：B：空白，S：标准，T1~T10：测定

1.4.6、比色分析

冷至室温后（勿超过2 h），用550nm比色，以空白校正吸收度到0，测取各管吸收度。加显色剂须沿管壁缓缓加入，与乙醇分成两层，立即振摇20次，使其混合。

1.4.7、计算

血清总胆固醇mg%=(DT/DS)×200

2、结果与分析

2.1、建立高血脂模型

取SD大鼠30只，随机分为Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ三组，称重，Ⅰ组饲喂普通饲料作为对照组，Ⅱ组和Ⅲ组饲喂高脂饲料，喂养10d后。按方法1.4.4～1.4.7测定血脂，Ⅱ组和Ⅲ组血脂明显增高。

高脂饲料配方：85%的基础饲料，10%蛋黄粉，5%猪油，0.1%的丙基硫氧啼啶，0.5%的胆酸。实验表明，Ⅱ组和Ⅲ组的高血脂模型是成功的。表2。

表2 对照组与饲喂高脂饲料组10d后血脂的上升情况

鼠号

血脂（mg%）

1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 Ⅰ组（对照组）

Ⅱ组

Ⅲ组

2.2、降血脂药物对大鼠血脂的影响

Ⅱ组和Ⅲ组的高血脂模型建成后，Ⅱ组在喂养高血脂饲料的同时，每天每隔12h灌胃10%降血脂药水一次，灌胃剂量2mL/100g，Ⅲ组仍以高脂饲料饲养，

分别于第5d，第10d取血测定血清总胆固醇。血清总胆固醇的下降值与10%降血脂药水灌胃前相比，降血脂作用十分的显著，与丙组相比，降血脂作用十分显著，在第5d，第10d测其实验组血脂含量分别是灌胃前的1.424和0.966倍，而对照组血脂没有显著性变化。表3。

表3 大鼠给药后血脂情况

鼠号

血脂（mg%）

1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 Ⅱ组（灌胃前）

Ⅱ组（灌胃后5d）

Ⅱ组（灌胃后10d）

Ⅲ组（对照组）

注：给药第5d P<0.001，给药第10d P<0.001，给药第5d和第10d P<0.001。

3、结论

（1）实验动物采用大自鼠建立高脂模型，成本适中，采血量可一次满足做多项指标检测的需求。同时大鼠模型建立的方法最多。更重要的是大鼠的食性与人类相似，所形成的病变与人类早期病理改变相似，且适应性较强。研究表明大鼠在脂代谢方面比小鼠更接近于人，比小鼠更适合做人类高血脂模型。

（2）采用以上的高脂饲料饲养法制备高血脂模型，成功率达100%且模型有良好的稳定性。大鼠是自然采食条件下饲养的，应激性的刺激少，测定结果更真实。

（3）血清中总胆固醇的测定方法有化学显色法、酶法、洋地黄皂苷沉淀法和简易酸碱柱层析法等。实验采用的是采用化学显色法，即用乙醇提取，高铁-硫酸显色法，作为测定胆固醇的方法，经济、费用低、快速简便。