细胞化学染色法 PPT课件
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细胞化学染色
3．单核细胞系统：除早期原始阶段外皆呈弱 阳性反应。其颗粒细小，弥散分布，可覆 盖核上，有的也可呈阴性反应。
4．正常网状细胞(分化型)及吞噬细胞：可呈 不同程度阳性反应。
5．淋巴细胞、浆细胞、红细胞、巨核细胞系 统等：均为阴性。
6．Auer小体：呈阳性。
【临床意义】
POX染色是鉴别急性粒细胞白血病(简 称急粒)、急性单核细胞白血病(简称急单)、 急性淋巴细胞白血病(简称急淋)类型的重 要细胞化学方法。
二、铁 染 色(Iron Stain)
【目的和原理】 骨髓小粒中的含铁血黄素称细胞外铁，
其中的三价铁与分子中的蛋白质结合不牢， 经稀盐酸处理后而游离，并能在酸性亚铁 氰化钾溶液中产生普鲁士蓝反应。细胞内 铁也可用此法显示。
【材料】
1.酸性亚铁氰化钾溶液
取200g／L亚铁氰化钾溶液置于试管中，缓 缓滴加浓盐酸，边滴边摇匀，至出现白色沉淀， 再滴加200g／L亚铁氰化钾溶液，亦边滴边摇匀， 至白色沉淀消失为止，备用。
(++)：有较多的铁颗粒和小珠。
(+++)：有很多的铁颗粒、小珠和少数小 块状。
(++++)：有极多铁颗粒、小珠，有很多 的小块，密集成堆。
(3)细胞内铁：用油镜计数100个中、晚幼红 细胞，记录胞浆中含有蓝色铁粒的细胞(铁 粒幼红细胞)的百分率。并根据细胞内铁颗
粒的数目、大小、染色深浅和颗粒分布情
1．急性粒细胞白血病：细胞分化较好时，原 始粒细胞呈阳性反应，阳性率可>30%， 在分化较差的白血病，如AML-M0和未分 化型（AML-M1）的部分病例，原粒细胞 的POX染色也可呈阴性。
2．急性早幼粒细胞白血病时白血病细胞呈强 阳性反应。
《组织化学染色》课件
科学研究
通过染色技术，研究人员可 以观察和研究细胞的结构和 功能。
药物开发
染色技术也可以用于药物开 发过程中的药效评估和分析。
组织化学染色的原理
组织化学染色的原理是利用化学反应将染料分子与组织或细胞结构中的特定 成分结合，从而产生颜色反应。
组织化学染色的步骤
1
标本制备
将组织标本收集、固定和包埋，以便进行 Nhomakorabea一步的染色过程。
2
染料选择
根据需要染色的组织或细胞成分特点选择合适的染料。
3
固定和染色
将标本与染料处理，使染料与目标结合，并增强染色效果。
优点和限制
优点
组织化学染色可以提供直观的视觉信息，用 于研究和诊断。
限制
染色结果可能受到多种因素影响，例如标本 质量和染色剂的稳定性。
常见问题和解决方法
1 染色结果不明显
可能因为染料浓度不足，可以尝试增加染料浓度。
常用的染色方法
1 酸性染料
酸性染料常用于染色细胞核和某些细胞器，例如血液涂片中的噬菌体。
2 碱性染料
碱性染料主要用于染色胞浆和细胞骨架，如组织切片中的嗜酸性细胞。
3 特殊染料
特殊染料用于特定类型的细胞或组织元素，例如肿瘤标志物的染色。
染色技术的应用
医学诊断
组织化学染色在病理学中广 泛应用于疾病的诊断和鉴定。
《组织化学染色》PPT课 件
欢迎来到《组织化学染色》的课程！在本课程中，我们将深入探讨组织化学 染色的基本原理、常用方法以及应用领域。准备好扩展您的知识，并让我们 一起开始这个令人兴奋的旅程吧！
染色的定义和作用
染色是一种在组织学和生物学研究中常用的技术，通过使用染料将细胞和组织的特定结构染色，以显示 其形态、组织类型和功能特点。
第三章 细胞化学染色
第三章 第二节 细胞化学染色
急性单核细胞白血病的POX染色 1.中性成熟粒细胞，呈强阳性；2.原始单核细胞，呈阳性；
3.原始单核细胞，呈弱阳性；其他原幼单核细胞呈阴性
一、过氧化物酶（POX）染色
【临床意义】
1.帮助鉴别急性白血病的类型 2.成熟中性粒细胞过氧化物酶活性的变化 活性增高：见于再生障碍性贫血、感染、急性淋巴细
其他为阳性。
第三章 第二节 细胞化学染色
第三章 第二节 细胞化学染色
四、过碘酸-雪夫（PAS）反应
【正常血细胞的染色反应 】
1.粒细胞系统 分化差的原始粒细胞呈阴性，分化 好的原始粒细胞至中性分叶核粒细 胞均呈阳性，并随着细胞的成熟而 逐渐增强；嗜酸性粒细胞中颗粒之 间的胞质呈红色；嗜碱性粒细胞中 的嗜碱性颗粒呈阳性。
2.红细胞系统 有核红细胞及红细胞均呈阴性。 3.单核细胞系统 分化差的原始单核细胞呈阴性，
第三章 第二节 细胞化学染色
（二）α-醋酸萘酚酯酶(α-NAE)染色
【临床意义 】
1.急性单核细胞白血病 单核系细胞多呈阳性，阳性 反应能被氟化钠抑制。
2.急性粒细胞白血病 原始粒细胞呈阴性或弱阳性， 阳性反应不能被氟化钠抑制。
3.急性早幼粒细胞白血病 早幼粒细胞呈强阳性，阳 性反应不能被氟化钠抑制。
第三章 第二节 细胞化学染色
1.中性成熟粒细胞，呈强阳性；2.晚幼红细胞，呈阴性； 3.单核细胞，呈弱阳性；4.浆细胞，呈阴性
一、过氧化物酶（POX）染色
帮助鉴 别急性 白血病 的类型
临床意义
是辅助判断急性白 血病细胞类型的首选、 最重要的细胞化学染色
成熟中性 粒细胞过 氧化物酶 活性的变 化
第三章 第二节 细胞化学染色
急性单核细胞白血病的POX染色 1.中性成熟粒细胞，呈强阳性；2.原始单核细胞，呈阳性；
3.原始单核细胞，呈弱阳性；其他原幼单核细胞呈阴性
一、过氧化物酶（POX）染色
【临床意义】
1.帮助鉴别急性白血病的类型 2.成熟中性粒细胞过氧化物酶活性的变化 活性增高：见于再生障碍性贫血、感染、急性淋巴细
其他为阳性。
第三章 第二节 细胞化学染色
第三章 第二节 细胞化学染色
四、过碘酸-雪夫（PAS）反应
【正常血细胞的染色反应 】
1.粒细胞系统 分化差的原始粒细胞呈阴性，分化 好的原始粒细胞至中性分叶核粒细 胞均呈阳性，并随着细胞的成熟而 逐渐增强；嗜酸性粒细胞中颗粒之 间的胞质呈红色；嗜碱性粒细胞中 的嗜碱性颗粒呈阳性。
2.红细胞系统 有核红细胞及红细胞均呈阴性。 3.单核细胞系统 分化差的原始单核细胞呈阴性，
第三章 第二节 细胞化学染色
（二）α-醋酸萘酚酯酶(α-NAE)染色
【临床意义 】
1.急性单核细胞白血病 单核系细胞多呈阳性，阳性 反应能被氟化钠抑制。
2.急性粒细胞白血病 原始粒细胞呈阴性或弱阳性， 阳性反应不能被氟化钠抑制。
3.急性早幼粒细胞白血病 早幼粒细胞呈强阳性，阳 性反应不能被氟化钠抑制。
第三章 第二节 细胞化学染色
1.中性成熟粒细胞，呈强阳性；2.晚幼红细胞，呈阴性； 3.单核细胞，呈弱阳性；4.浆细胞，呈阴性
一、过氧化物酶（POX）染色
帮助鉴 别急性 白血病 的类型
临床意义
是辅助判断急性白 血病细胞类型的首选、 最重要的细胞化学染色
成熟中性 粒细胞过 氧化物酶 活性的变 化
第三章 第二节 细胞化学染色
细胞化学染色
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6、临床意义 （1）正常分布 粒系:早期原粒阴性，晚期原粒及以下各阶段呈 不同程度阳性。 单核系:早期原单阴性，其它阶段皆呈弱阳性。 淋巴、红系、浆细胞、巨核均呈阴性。
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（2）急性白血病的鉴别诊断 幼稚细胞POX阳性率≥3% ：急非淋（AML) 幼稚细胞POX阳性率＜3% ：急淋（ALL)
至9.2，4℃保存！
（3）作用(基质液): 磷酸萘酚钠
5mg
N-N二甲基酰胺 1ml
Tris-Hcl液
4ml
坚固蓝RR盐
5mg
（4）复染液：1%中性红
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3.操作步骤 1、新鲜、干燥的外周血或骨髓涂片（标本片及 对照片）加固定剂作用30秒（染缸），水洗待干； 2、滴加作用液，室温染色15min，水洗待干； 3、1%中性红复染1min
过氧化物酶染色 中性粒细胞碱性磷酸酶染色 糖原染色 非特异性酯酶染色 特异性酯酶染色 骨髓铁染色
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（一)过氧化物酶(POX)染色
1、原理：
pox
H2O2
O
联苯胺
联苯胺蓝 +
亚硝基铁氰化钠
蓝黑色颗粒
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2.试剂 (1)联苯胺酒精溶液： 取0.3g联苯胺加亚硝基铁氰化钠饱合液（36%）1ml, 再加95%乙醇至100ml，存在于棕色瓶中，可存一年。 (2) 稀过氧化氢（新鲜配制）：取50ml蒸馏水加 30%H2O21滴。 （3）瑞吉氏复染液
细胞化学染色检验
申家辉
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一、概述 二、细胞化学染色的基本方法 三、临床应用
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一、概 述
1、概念： 细胞化学染色是细胞学和化学相结合而成的一门
血液学血细胞化学染色 ppt课件
分子生物学分型：提高到分子水平
2020/11/13
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四、基本步骤
1. 固定 （1）物理法：干燥、火焰 （2）化学法：
A、蒸气固定：甲醛 B、液体固定：甲醛、乙醇、甲醇、丙 酮。
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2. 显示：有色沉淀反应
（1）偶氮偶联法：酯酶染色 （2）联苯胺法：POX （3）普鲁士蓝反应：Fe （4）希夫反应：PAS （5）金属沉淀法：NAP （6）物理显色法：SBB
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【结果判断】
幼红细胞核染色为鲜红色,铁粒呈蓝 绿色。
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细胞内铁(油镜观察幼红细胞)
Ⅰ型：1～2个小铁颗粒； Ⅱ型： 3～5个小铁颗粒； Ⅲ型： 6～10个小铁颗粒或1～4个大颗粒； Ⅳ型： 10个以上小铁颗粒或5个以上大颗粒
2020/11/13
诊断 3. 观察疾病的疗效和预后 4. 疾病发病机制的探讨
2020/11/13
8
白血病的诊断：MICM分型
M：morphology I：immunology C：cytogenitics M：molecular biology 形态学分型：进行初步的诊断
免疫学分型：明确细胞种类
细胞遗传学分型：与疾病预后有关
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第二节 常用细胞化学染色技术
➢ 铁染色 ➢ 过氧化物酶染色 ➢ 苏丹黑B染色 ➢ 酯酶染色 ➢ 过碘酸-希夫反应 ➢ 中性粒细胞碱性磷酸酶染色 ➢ 酸性磷酸酶染色
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一、 铁 染 色 （ferric stain）
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原理
酸性环境
铁 ＋亚铁氰化钾
亚铁氰化铁
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四、基本步骤
1. 固定 （1）物理法：干燥、火焰 （2）化学法：
A、蒸气固定：甲醛 B、液体固定：甲醛、乙醇、甲醇、丙 酮。
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2. 显示：有色沉淀反应
（1）偶氮偶联法：酯酶染色 （2）联苯胺法：POX （3）普鲁士蓝反应：Fe （4）希夫反应：PAS （5）金属沉淀法：NAP （6）物理显色法：SBB
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【结果判断】
幼红细胞核染色为鲜红色,铁粒呈蓝 绿色。
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细胞内铁(油镜观察幼红细胞)
Ⅰ型：1～2个小铁颗粒； Ⅱ型： 3～5个小铁颗粒； Ⅲ型： 6～10个小铁颗粒或1～4个大颗粒； Ⅳ型： 10个以上小铁颗粒或5个以上大颗粒
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诊断 3. 观察疾病的疗效和预后 4. 疾病发病机制的探讨
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白血病的诊断：MICM分型
M：morphology I：immunology C：cytogenitics M：molecular biology 形态学分型：进行初步的诊断
免疫学分型：明确细胞种类
细胞遗传学分型：与疾病预后有关
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第二节 常用细胞化学染色技术
➢ 铁染色 ➢ 过氧化物酶染色 ➢ 苏丹黑B染色 ➢ 酯酶染色 ➢ 过碘酸-希夫反应 ➢ 中性粒细胞碱性磷酸酶染色 ➢ 酸性磷酸酶染色
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一、 铁 染 色 （ferric stain）
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原理
酸性环境
铁 ＋亚铁氰化钾
亚铁氰化铁
细胞生物学荧光染色实验 ppt课件
ppt课件
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四、实验方法
(一)利用荧光增白剂观察植物细胞壁 植物细胞壁有强烈的吸附染料的能力，因此很 多荧光染料都能着染细胞壁，但近年来最常用的还 是荧光增白剂，以此来鉴别细胞壁的状况，并常用 于检查原生质体细胞壁是否分解完全，以及原生质 体再生细胞壁的鉴别。
ppt课件 6
1．取洋葱表皮细胞(1cm2)置于载玻片，以 荧光增白剂染色5分钟，加盖玻片，荧光显微 镜下观察其细胞壁。 2．取以酶液游离出来的原生质体悬液l滴于 载玻片上，加荧光增白剂一滴，染色 5分钟，加
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（四) 线粒体观察 取洋葱内表皮细胞 (1cm2)置于载玻片，以 0.0l％罗丹明染色5分钟生理盐水冲洗一次，加盖 玻片，荧光显微镜下绿光激发观察。
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五、作业
分别描述DNA，蛋白质及线粒体在细胞内的 分布与颜色。
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实验六 细胞活力的测定
ppt课件
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一、实验目的
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三、实验用品
(一) 材料：新鲜紫鸭趾草花粉或蚕豆原生质体悬液，人口腔上皮细 胞。 (二) 用品：荧光显微镜，载玻片，盖玻片，镊子，烧杯，牙签等。 (三) 试剂： 1．二丙酸酯荧光素溶液：取l0mg二丙酸荧光素于5ml丙酮中，将 此溶液逐滴加入 5ml PH5-6生理盐水或0.65M的甘露醇溶液中，直到 出现永久性乳白沉淀为止。 2．0.01％吖啶橙的生理盐水溶液。
学习荧光显微镜的使用，了解荧光 显微技术原理和方法，以及荧光技术在 细胞化学方面的应用。
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二、实验原理
荧光显微技术是利用短波光照射被射物质，以激发其发射荧光而 在荧光显微镜下可以检视的方法。 荧光又可分为：自发荧光和次生荧光。自发荧光是指有些生物体 受到短波光照射后，直接发出的荧光。如经紫外光照射后，叶绿体 发出的红色荧光；木质素发出的黄色荧光等。次生荧光是指有பைடு நூலகம்生 物材料受到短波光照射后并不发光，但当它吸附荧光染料后，也同 样产生荧光，这种荧光也称间接荧光。
细胞化学染色法
醋酸AS-D萘酚酯酶染色 染色结果 、临床意义基本同α-NAE
染色。
α -丁酸萘酚酯酶染色 临床意义同α-NAE染色，特异性低
于α-NAE染色
酸性磷酸酶染色
原理： 偶氮偶联法： Gomori硫化铅法 抗酒石酸酸性磷酸酶染色
临床评价： 诊断多毛细胞白血病
毛细胞呈阳性，阳性反应不被L-酒石 酸抑制。
ＮＡＰ积分下降：
慢性粒细胞白血病（慢性期）、阵发性 睡眠性血红蛋白尿、骨髓增生异常综合 症、恶性组织细胞病等。
疾病的鉴别
1. 类白血病反应 血病
慢性粒细胞性白
2. 细菌性感染 病毒性感染
5. 恶性组织细胞病 反应性组织细胞增 多症
6. 真性红细胞增多症 继发性红细胞增 多症
单核细胞系统 原单（可为阴性）,其他为阳性。
淋巴：大多阴性，少数阳性。 巨核及血小板：阳性
临床评价
红血病、红白血病、骨髓增生异常综合 征中幼红细胞可阳性（均匀红色或块状）
白细胞系统疾病： 急淋：（原幼淋细胞阳性率升高，呈粗 颗粒或块状） 急粒：少数原粒呈阳性 急单：可呈阳性
M5 PAS(+)
红、沙黄等 染浆：伊红、刚果红、光绿等
四、种类
过氧化物酶染色、苏丹黑染色、 中性粒细胞碱性磷酸酶染色 过碘酸-雪夫反应 α-醋酸奈酚酯酶染色 酸性磷酸酶染色 铁染色
过氧化物酶染色(POX)
过氧化物酶： 是中性粒细胞含量最多的一种酶 主要存在于线粒体和溶酶体中 主要功能是破坏生物氧化过程中有剧毒 的过氧化物，使其放出氧，参加细胞内 氧化还原过程。
参考范围：
细胞外铁： （+）～（++）
细胞内铁：铁粒幼红细胞12% ～ 44%，以Ⅰ型为主，少数为Ⅱ型。
免疫荧光组织(细胞)化学染色方法
免疫荧光组织（细胞）化学染色方法免疫荧光组织（细胞）化学染色方法：直接法基本原理将荧光素标记在相应的抗体上，直接与相应抗原反应。
其优点是方法简便、特异性高，非特异性荧光染色少。
缺点是敏感性偏低；而且每检查一种抗原就需要制备一种荧光抗体。
此法常用于细菌、病毒等微生物的快速检查和肾炎活检、皮肤活检的免疫病理检查。
试剂与仪器磷酸盐缓冲盐水（PBS）：0.01mol/L，pH7.4荧光标记的抗体溶液：以0.01mol/L，pH7.4的PBS进行稀释缓冲甘油：分析纯无荧光的甘油9份+ pH9.2 0.2M碳酸盐缓冲液1份配制搪瓷桶三只（内有0.01mol/L，pH7.4的PBS 1500ml）有盖搪瓷盒一只（内铺一层浸湿的纱布垫）荧光显微镜玻片架滤纸H37℃温箱等。
试验步骤1、滴加0.01mol/L，pH7.4的PBS于待检标本片上，10min后弃去，使标本保持肯定湿度。
2、滴加适当稀释的荧光标记的抗体溶液，使其完全掩盖标本，置于有盖搪瓷盒内，保温肯定时间（参考：30min）。
3、取出玻片，置玻片架上，先用0.01mol/L，pH7.4的PBS冲洗后，再按挨次过0.01mol/L，pH7.4的PBS三缸浸泡，每缸3-5 min，不时振荡。
4、取出玻片，用滤纸吸去多余水分，但不使标本干燥，加一滴缓冲甘油，以盖玻片掩盖。
5、马上用荧光显微镜观看。
观看标本的特异性荧光强度，一般可用"+'表示：（-）无荧光；（）极弱的可疑荧光；（+）荧光较弱，但清晰可见；（++）荧光光明；（+++ --++++）荧光闪亮。
待检标本特异性荧光染色强度达"++'以上，而各种对比显示为（）或（-），即可判定为阳性。
留意事项1、对荧光标记的抗体的稀释，要保证抗体的蛋白有肯定的浓度，一般稀释度不应超过1：20，抗体浓度过低，会导致产生的荧光过弱，影响结果的观看。
2、染色的温度和时间需要依据各种不同的标本及抗原而变化，染色时间可以从10 min到数小时，一般30 min已足够。
细胞化学染色
•【染色方法】
• 1.取新鲜骨髓涂片置浓福尔马林中蒸3分钟。（2 滴） • 2.放入作用液37℃温箱30分钟。 • 作用液配制：取固兰40mg，1%α -萘酚（以50%丙 酮做溶剂）0.8ml，0.05mol/L磷酸盐缓冲液 （PH7.4）40ml混合，过滤后使用。 • 3.用自来水冲洗，晾干。 • 4.用1%沙黄复染45秒。 • 5.水洗，晾干后镜检。
【正常血细胞的染色结果】
• 细胞中如有蓝黑色即为阳性细胞。根据阳性 颗粒的有无及多少，将染色结果分为（-）、 （+）、（++）、（+++）、（++++）。
阳性反应细胞 阳性强度 阳性特征 阴性反应细胞 部分原粒细胞 嗜碱性粒细胞 大部分单系细胞 淋巴细胞 浆细胞 红系细胞
部分原粒细胞 +~++ 颗粒细小，分布稀疏 早幼粒细胞 ++~++++ 颗粒状或弥散状 中性成熟粒细胞 ++~+++ 同上 嗜酸性粒细胞 ++~++++ 粗颗粒状，密集 少数单系细胞 +~++ 细小，弥散，较少
• 【标本要求】
• 一般用新鲜的骨髓涂片做POX染色； 如果外周血中白血病细胞多而骨髓涂 片不够的情况下，可选择新鲜的血涂 片来做。为了保证酶的活性，片子一 般应在固定后一周内完成染色。
•【染色方法】
• 一、试剂：甲液：联苯胺（0.3g）；95%乙醇 （99ml）；亚硝基氰化钠饱和溶液（1ml） 乙液：3%过氧化氢（0.3ml）；蒸馏水（2ml） 注：乙液必须现配现用（5mlH2O+1滴H2O2） 二、染色：1.滴加甲液在干的涂片上。 2.待30秒后滴加乙液。（比例为2:1） 3.过3-4分钟后用自来水冲洗3-4分钟。 4.复染15分钟。
实验细胞化学染色POX(共72张PPT)
▪ 苏丹黑B染色较过氧化物酶染色更敏感，但特异 性不如过氧化物酶染色（极少数急性淋巴细胞 白血病可为阳性）。
M1-SBB(+)
M2-SBB(+)
三、过碘酸一雪夫（PAS)染色
▪ 【原理】
胞浆内存在糖原或多糖类物质（如粘多糖、 粘蛋白、糖蛋白、糖脂等）中的乙二醇基（ CHOH-CHOH）经过碘酸（periodic acid） 氧化，转变为二醛基（CHO-CHO），与雪夫 (Schiff )试剂中的无色品红结合，形成紫红色 染料而沉积于胞浆中。该反应称为过碘酸一雪 夫(PAS)阳性反应。
▪ 【结果】 ▪ （1）粒细胞系：
▪ 原粒细胞多呈阴性反应，也可弱阳性。
▪ 自早幼粒细胞以后随着细胞的成熟程度，阳 性反应逐渐增强。
▪ 嗜酸粒细胞颗粒本身不着色，但颗粒间的胞质
呈弥漫性阳性反应；
▪ 嗜碱粒细胞为阳性反应，颗粒紫红色，大小不 一。
中性粒细胞糖原含量参考标准 （-） 胞质无颗粒 （+） 胞质呈淡红色，无颗粒 （++） 胞质呈红色，有少量颗粒 （+++） 胞质呈暗红色 ，颗粒较密 （++++）胞质呈紫红色，颗粒极密
淀物，具有一定的稳定性。
▪ 血细胞化学染色可显示糖原、脂类、酶 、蛋白质等。
血细胞化学染色流程
▪ （一）固定 Ⅳ型：>10个铁颗粒。
苏丹黑B染色较过氧化物酶染色更敏感，但特异性不如过氧化物酶染色（极少数急性淋巴细胞白血病可为阳性）。 L1 PAS(+) POX主要分布在粒细胞和单核细胞内，随着粒细胞成熟的程度而逐渐增强，中性分叶核粒细胞为强阳性。
M7 PAS(+)
（3）巨核细胞和Sternberg细胞鉴别
M1-SBB(+)
M2-SBB(+)
三、过碘酸一雪夫（PAS)染色
▪ 【原理】
胞浆内存在糖原或多糖类物质（如粘多糖、 粘蛋白、糖蛋白、糖脂等）中的乙二醇基（ CHOH-CHOH）经过碘酸（periodic acid） 氧化，转变为二醛基（CHO-CHO），与雪夫 (Schiff )试剂中的无色品红结合，形成紫红色 染料而沉积于胞浆中。该反应称为过碘酸一雪 夫(PAS)阳性反应。
▪ 【结果】 ▪ （1）粒细胞系：
▪ 原粒细胞多呈阴性反应，也可弱阳性。
▪ 自早幼粒细胞以后随着细胞的成熟程度，阳 性反应逐渐增强。
▪ 嗜酸粒细胞颗粒本身不着色，但颗粒间的胞质
呈弥漫性阳性反应；
▪ 嗜碱粒细胞为阳性反应，颗粒紫红色，大小不 一。
中性粒细胞糖原含量参考标准 （-） 胞质无颗粒 （+） 胞质呈淡红色，无颗粒 （++） 胞质呈红色，有少量颗粒 （+++） 胞质呈暗红色 ，颗粒较密 （++++）胞质呈紫红色，颗粒极密
淀物，具有一定的稳定性。
▪ 血细胞化学染色可显示糖原、脂类、酶 、蛋白质等。
血细胞化学染色流程
▪ （一）固定 Ⅳ型：>10个铁颗粒。
苏丹黑B染色较过氧化物酶染色更敏感，但特异性不如过氧化物酶染色（极少数急性淋巴细胞白血病可为阳性）。 L1 PAS(+) POX主要分布在粒细胞和单核细胞内，随着粒细胞成熟的程度而逐渐增强，中性分叶核粒细胞为强阳性。
M7 PAS(+)
（3）巨核细胞和Sternberg细胞鉴别
考马斯亮蓝法显示细胞中的微丝课件
通过对染色结果的观察和分析， 发现微丝在细胞中的分布和形态 具有组织特异性，与细胞的生理
功能密切相关。
对未来研究的建议
进一步探讨考马斯亮蓝法染色显示细 胞中微丝的机制，以及染色效果的影 响因素，为该方法的优化和应用提供 理论依据。
深入研究微丝在细胞中的功能和作用 机制，以期为相关疾病的治疗和药物 研发提供新的思路和靶点。
微丝排列
分析微丝在细胞内的排列 情况，是否呈现有规律的 排列方式。
微丝交联
观察微丝之间是否存在交 联，交联的密度和形式如何。
数据分析与解 释
数据收集
收集不同实验条件下的染色结果 数据，包括染色效果、微丝形态、
排列和交联情况等。
数据分析
对收集到的数据进行分析，比较 不同实验条件下的染色效果和微
丝结构差异。
考马斯亮蓝法显示 细胞中的微丝课件
• 引言 • 实验原理 • 实验步骤 • 结果分析 • 结论 • 注意事项与局限性 • 参考文献
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引言
微丝简介
微丝是一种由肌动蛋白聚合形成的纤维 状蛋白质结构，是细胞骨架的重要组成 部分。它们在细胞形态维持、细胞运动、 物质运输等许多细胞活动中发挥关键作
用。
样品制备
将培养的细胞进行固定，常用的 固定剂包括甲醇和冰醋酸，固定 后使用适宜的缓冲液洗涤细胞。
考马斯亮蓝染色
染色液配制
洗涤
将考马斯亮蓝加入适量的甲醇溶液中， 搅拌均匀后过滤，得到染色液。
染色完成后，使用缓冲液洗涤细胞样 品，去除多余的染色液。
染色过程
将固定和洗涤后的细胞样品加入染色 液中，染色时间根据实验需求而定， 一般为10-30分钟。
THANK YOU
感谢观看
细胞化学染色(lishai)
正常血细胞的染色反应
淋巴细胞系统 大多数阴性，少数阳性。 巨核细胞系统 巨核细胞和血小板阳性，阳性反应 的程度随细胞的发育成熟而增强。
临床意义
◆红细胞系统疾病
红血病、红白血病、骨髓增生异常综合征中 幼红细胞可阳性（均匀红色或块状）；某些 红系良性疾病如缺铁贫、巨幼贫等阴性。
◆白细胞系统疾病
ALL：（原幼淋细胞阳性率升高，呈粗颗粒或 块状） 急粒：少数原粒呈阳性，阳性细颗粒状 急单：可呈阳性，阳性细颗粒状
过氧化物酶染色
Peroxidase stain, POX
染色原理（四甲基联苯胺法）
H2O2
溶酶体颗粒中的ＰＯＸ
H2O＋O2
四甲基联苯胺
O2
联苯胺蓝
O2
联苯胺蓝＋亚硝基铁氰化钠
蓝色物质
（沉淀）
正常血细胞的染色反应
粒细胞系统 原粒（可为阴性） 分叶（阳性程 度逐渐增强） 嗜酸阳性最强 嗜碱阴性 单核细胞系统 阴性或弱阳性（颗粒少而 细） 其他血细胞 阴性
细胞化学染色的基本步骤 固定
显示
保持细胞结构及化学成分不变，并使血 膜在染色、冲洗过程中不易脱落损坏
形成稳定的有色沉淀，显示出被检 测的化学物质
复染
既能显示细胞结构又能清楚地看出细 胞化学染色结果
细胞化学染色的种类
过氧化物酶染色（POX)、苏丹黑染色
（SBB) 过碘酸-雪夫反应（PAS）又称糖原染色 酯酶染色 酸性磷酸酶染色（ACP) 铁染色 中性粒细胞碱性磷酸酶染色（NAP）
PAS临床意义
MA 幼红细胞呈阴性反 应
AML-M6 幼红细胞呈阳性反 应
ALL
AML-M6
AML-M6 PAS(+)
细胞化学染色
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CE
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非特异性酯酶染色（α-NAE）
1. 原理：
α-NAE
α-醋酸萘酚
α-萘酚
7.4~7.6
重氮盐
形成不溶性有色沉淀 定位于胞浆内酶所在 位置
(坚固盐B)
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2.试剂
（1）固定液：甲醛
（2）作用液:
α-醋酸萘酚 丙酮 磷酸盐缓冲液 固蓝B盐
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5、结果判定：中性粒细胞杆状及分叶核呈强阳 性是染色成功的标志(设对照片）。 在细胞的胞浆中出现蓝绿色或蓝棕色颗粒为阳 性反应。
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1.中性成熟粒细胞，呈强阳性；2.晚幼红细胞，呈 阴性；3.单核细胞，呈弱阳性；4.浆细胞，呈阴性
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4.注意事项 （1）所用染色缸及器具应十分清洁、干燥。 （2）雪夫氏染液应避光密封保存，变红则失效。 （3）放入雪夫氏溶液之前，用蒸馏水洗涂片， 而且一定要完全干燥，若有水，试剂变色失效。
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（4）染色时间和温度应相对恒定，一般37℃效果最 好。 （5）染好的标本不能久放，8天后渐退色，因此应及 时观察。
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急性粒细胞白血病（M2a) 的POX染色 原始粒细胞均呈阳性
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急性淋巴细胞白血病的POX染色
1.中性成熟粒细胞，呈强阳性；其他原始淋巴细胞均呈阴性
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急性早幼粒细胞白血病的POX染色
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