流式细胞仪基本原理及应用

流式细胞仪在临床检测和科研中的应用
免疫学检测和科研应用
血液病检测和科研应用
肿瘤学检测和科研应用
All rights reserved by Dr Baiqing LI
-2-
Bengbu Medical College Department of Immunology
一、流式细胞仪和流式细胞术的基本概念
光学检测信号
All rights reserved by Dr Baiqing LI
-16-
Bengbu Medical College Department of Immunology
流式细胞仪的光学系统 FACSCalibur
All rights reserved by Dr Baiqing LI
免疫学教研室
流式细胞仪在临床检测和 临床科研中的应用
李柏青 蚌埠医学院免疫学教研室
© by Dr Baiqing LI
Bengbu Medical College Department of Immunology
流式细胞仪的基本工作原理以及在基础 和临床科研中的应用
流式细胞仪和流式细胞术－概述
流式细胞仪的工作原理和测量参数
大型机——FACSVantage SE
科研型 八荧光参数 高速分选 多路分选
All rights reserved by Dr Baiqing LI
-8-
Bengbu Medical College Department of Immunology
流式细胞仪与荧光显微镜比较
流式细胞仪 流动的细胞
荧光显微镜 静止的细胞样本
液流系统：鞘液系统＋样品流动系统
All rights reserved by Dr Baiqing LI
流式细胞仪(Flow Cytometer， FCM): 是集合光电子物理，光电测量技术， 液流技术，计算机技术等现代高科技 技术为一体的细胞测量和分析仪器。
All rights reserved by Dr Baiqing LI
-3-
Bengbu Medical College Department of Immunology
一、流式细胞仪和流式细胞术的基本概念
流式细胞术(Flow Cytometry，FCM): 是应用流式细胞仪，对处于快速流动液 体中的细胞或生物颗粒进行多参数、 快速测量和定量分析，以及分选的技 术。
All rights reserved by Dr Baiqing LI
-4-
Bengbu Medical College Department of Immunology
-13-
Bengbu Medical College Department of Immunology
Injector Tip
Sheath fluid
Fluorescence signals
Focused laser beam
All rights reserved by Dr Baiqing LI
数量大
数量少
高速分选
样本难以再利用
细胞群体特征量分布 可揭示细胞内部结构信息
All rights reserved by Dr Baiqing LI
-9-
二、流式细胞仪的工作原理和测量参数 Bengbu Medical College Department of Immunology
（一） 流式细胞仪的结构
流式细胞仪－光路系统
激光 (Laser)是一种相干光源，它能提供 单一波长、单一方向、同步的稳定光照
激光波长: 488nm, 635nm
光收集系统是由若干组透镜, 滤波片, 小 孔组成，将产生的光信号引导至检测器
All rights reserved by Dr Baiqing LI
-11-
光路系统
-17-
Bengbu Medical College Department of Immunology
流式细胞仪－液流系统
All rights reserved by Dr Baiqing LI
-18-
Bengbu Medical College Department of Immunology
一、流式细胞仪和流式细胞术－特点
多参数测量和分析（散射光和荧光） ； 快速测量和分析
每秒可达1000-10000个细胞 分选纯度可达99%以上。
获取的数据分析结果更具有统计学意义；
通常测量的对象如各种细胞细胞必须处在单 个细胞悬液中。此外，也可测量微生物等生物 颗粒，或者工合成微球非生物颗粒，
All rights reserved by Dr Baiqing LI
பைடு நூலகம்
Bengbu Medical College Department of Immunology
All rights reserved by Dr Baiqing LI
-12-
Bengbu Medical College Department of Immunology
Injector Tip
All rights reserved by Dr Baiqing LI
光路系统：
激光光源，光路系统（透镜、滤光片）
电子系统：光电倍增管（PMT），补偿电路 液流系统： 鞘液系统，样品流动系统
数据系统：计算机，数据测量和分析软件。
细胞分选系统
All rights reserved by Dr Baiqing LI
-10-
Bengbu Medical College Department of Immunology
-5-
Bengbu Medical College Department of Immunology
台式机——FACSCalibur
双激光 488nm 635nm
四荧光参数
分选、浓缩系统
All rights reserved by Dr Baiqing LI
-6-
7
Bengbu Medical College Department of Immunology
-14-
Bengbu Medical College Department of Immunology
流式细胞仪－光学系统
激发光源与荧光标记物
All rights reserved by Dr Baiqing LI
-15-
Bengbu Medical College Department of Immunology