实验1显微镜的使用细菌的简单染色
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n：玻片与物镜间介质的折射率。
空气 (n=1.0)、水 (n=1.33)、香柏油 (n=1.52)，介质折射率 提高 数值孔径值提高 分辨率提高。
2 提高照明度
空气(n=1.00) 玻璃(n=1.52)
光线在穿过折射率不同的介质 时发生折射。
对于低倍镜和高倍镜：介 质是空气
空气 (n=1.00) 玻璃 (n=1.52) 香柏油(n=1.52)
5 显微镜用毕后处理
下降载物台，取下载玻片；分三步用擦镜纸清理镜头。
将显微镜还原。包括将光源灯亮度调至最低后关闭；将 最低放大倍数物镜转到工作位置；载物台及聚光器降至最低 位置。
五 注意事项
1 严格、标准的进行无菌操作。 2 涂片时取菌量要适宜而且要涂抹均匀。 3 注意油镜头的清理。 4 注意显微镜用后还原。
六 实验报告
1 请绘制观察到的金黄色葡萄球菌和枯草芽孢杆菌形态图。 2 什么是物镜的同焦现象？在显微观察时有什么意义？
Many Thanks
调节目镜间距和屈光度。
瞳距调节
屈光度调节：可以适应双眼视力有差异的观察者。
2 低倍镜观察
养成良好的调焦习惯，先从侧面注视，小心调节物镜靠近 标本，然后用目镜观察，以防操作失误而损坏镜头。
3 高倍镜观察
一般情况下，当物像在一种物镜中清晰聚焦后，转动转换 器将其它物镜转到工作位置，物像保持基本准焦状态，称为物 镜的同焦(parfocal)。
对于油镜：工作介质是香 柏油。
很多原来由于在透镜及载片表面的反射和折射而损失的 光线可以进入物镜，使照明亮度提高，改善观察效果。
源自文库
㈢ 细菌的简单染色
利用单一染料对菌体进行染色的方法称为简单染色。
细菌个体微小，无色透明，不经过染色，常常不容易观 察。经过染色后，菌体与背景颜色形成鲜明的颜色对比，便 于在显微镜下观察细菌的形态、大小和排列方式。
0.5 l 最小可分辨距离= ————
n sin q λ为所用光源波长；n=载玻片与物镜间介质的折射率。
镜口角是光线投射到物镜上的最大角度，q为物镜镜口角 半数，取决于物镜的直径和工作距离。
0.5 l 最小可分辨距离= ————
n sin q 显微镜数值孔径(numerical aperture, NA)：指镜口角一半 的正弦与载玻片物镜间介质折射率的乘积，是决定物镜性能的 最重要指标。
㈠ 普通光学显微镜
微生物个体微小，必须借助显微镜才能观察到，显微镜 是微生物学者不可缺少的基本工具。
普通光学显微镜利用目镜、物镜两组透镜系统来放大成 像，常称为复式显微镜，由机械装置和光学系统两大部分组 成。
1 机械装置 镜座和镜臂：镜座支持整个显微镜，镜臂支持镜筒部分。
镜筒：上接目镜，下接转换器，分为单筒和双筒两种。
二 实验器材
1 菌种 金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)、枯草芽孢杆菌 (Bacillus subtilis)。
2 溶液和试剂 香柏油、二甲苯、吕氏碱性美兰染液、水等。
3 仪器和其它用品 普通光学显微镜、载玻片、酒精灯、火柴、擦镜纸、接 种环、废液缸、滤纸、纱布等。
三 基本原理
用于生物染色的碱性染料不是碱而是一种盐，碱性染料 电离时染料离子带正电荷，而细菌蛋白质的等电点较低，当 它生长于中性、碱性或弱酸性的溶液时常带负电荷，这样带 负电荷的细菌很容易与带正电荷的染料离子结合而使细菌着 色。
常用的碱性染料有美兰、结晶紫、碱性复红、番红等。
四 操作步骤
㈠ 细菌的简单染色
涂片 1小滴生理盐水 干燥 室温或烘干 固定 2-3次 染色 美兰，2-3min 水洗 滤纸吸干 镜检
利用同焦现象，在使用高倍镜或油镜等放大倍数高、工作 距离短的物镜时，仅用微动螺旋即可对物像清晰聚焦，从而避 免由于使用粗动螺旋时可能的错误操作而损坏镜头。
4 油镜观察 注意不要因为在下降物镜镜头时用力过猛或者调焦时误
将粗动螺旋向反方向转动而损坏镜头及载玻片。 不可以将高倍镜转动经过加油镜油的区域。
一台显微镜由机械装置和光学系统组成，其中物镜是显 微镜最重要的部件。
物镜通常有三种，低倍镜、高倍镜、油镜。低倍镜的放 大倍数一般为4-10×、高倍镜的放大倍数一般为40-45×、油 镜为95-100×，是放大倍数最大的物镜。
㈡ 油镜的工作原理 1 提高分辨率
分辨率是决定显微镜观察效果的重要指标， 显微镜分辨 率越高，能达到的最小可分辨距离越小。
目镜：安装在镜筒上端，由两块透镜组成，将物镜成的像 再次放大，但是不增加分辨力，目镜放大倍数过大，反而影响 观察效果。
聚光器：由聚光镜和虹彩光圈组成， 调节聚光镜的高度和虹彩光圈的大小，使 适当强度的光线照射到标本上。
光源：安装在镜座内，通过开关控制。
滤光片：可见光由不同波长的光线组 成，使用滤光片可以得到所需的一种波长 的光线，提高分辨率、增加反差。
转换器：是一个金属圆盘，上面装有3-4个物镜，可以使 物镜通过镜筒和目镜组成一个放大系统。
载物台：放置镜检标本，中间有 通光孔。载物台上装有标本夹和标本 推进器，在推动器上具有刻度，能够 确定标本位置，便于找到观察视野。
调焦装置： 调节物镜与标本间距 离的结构。
粗动螺旋
微动螺旋
2 光学系统
物镜：安装在转换器上，将物体第一次放大，决定显微镜 的成像质量和分辨能力。
㈡ 显微镜使用及细菌基本形态观察
1 观察前准备 显微镜安置：置显微镜于平稳的实验台上，镜座距实验
台边沿约为10cm左右，镜检者姿势要端正。
光源调节：适当调节聚光器的高度可以改变视野亮度， 但是一般情况下聚光器在使用中都是调到最高位置。
聚光器数值孔径的调节：调节方法见教材，但是做普通 观察时可以不用调节。
微生物学实验
生命科学学院
实验一 显微镜的使用 细菌的简单染色
(3学时)
实验内容涉及教材：实验2、7、12等。
一 目的要求
1 复习普通光学显微镜的结构、功能和操作技术；学 习油镜的工作原理和使用方法；
2 掌握细菌的制片和简单染色技术，观察球菌和杆菌 等在光学显微镜下的基本形态特征；
3 建立“无菌概念”，体会无菌操作的重要性。
空气 (n=1.0)、水 (n=1.33)、香柏油 (n=1.52)，介质折射率 提高 数值孔径值提高 分辨率提高。
2 提高照明度
空气(n=1.00) 玻璃(n=1.52)
光线在穿过折射率不同的介质 时发生折射。
对于低倍镜和高倍镜：介 质是空气
空气 (n=1.00) 玻璃 (n=1.52) 香柏油(n=1.52)
5 显微镜用毕后处理
下降载物台，取下载玻片；分三步用擦镜纸清理镜头。
将显微镜还原。包括将光源灯亮度调至最低后关闭；将 最低放大倍数物镜转到工作位置；载物台及聚光器降至最低 位置。
五 注意事项
1 严格、标准的进行无菌操作。 2 涂片时取菌量要适宜而且要涂抹均匀。 3 注意油镜头的清理。 4 注意显微镜用后还原。
六 实验报告
1 请绘制观察到的金黄色葡萄球菌和枯草芽孢杆菌形态图。 2 什么是物镜的同焦现象？在显微观察时有什么意义？
Many Thanks
调节目镜间距和屈光度。
瞳距调节
屈光度调节：可以适应双眼视力有差异的观察者。
2 低倍镜观察
养成良好的调焦习惯，先从侧面注视，小心调节物镜靠近 标本，然后用目镜观察，以防操作失误而损坏镜头。
3 高倍镜观察
一般情况下，当物像在一种物镜中清晰聚焦后，转动转换 器将其它物镜转到工作位置，物像保持基本准焦状态，称为物 镜的同焦(parfocal)。
对于油镜：工作介质是香 柏油。
很多原来由于在透镜及载片表面的反射和折射而损失的 光线可以进入物镜，使照明亮度提高，改善观察效果。
源自文库
㈢ 细菌的简单染色
利用单一染料对菌体进行染色的方法称为简单染色。
细菌个体微小，无色透明，不经过染色，常常不容易观 察。经过染色后，菌体与背景颜色形成鲜明的颜色对比，便 于在显微镜下观察细菌的形态、大小和排列方式。
0.5 l 最小可分辨距离= ————
n sin q λ为所用光源波长；n=载玻片与物镜间介质的折射率。
镜口角是光线投射到物镜上的最大角度，q为物镜镜口角 半数，取决于物镜的直径和工作距离。
0.5 l 最小可分辨距离= ————
n sin q 显微镜数值孔径(numerical aperture, NA)：指镜口角一半 的正弦与载玻片物镜间介质折射率的乘积，是决定物镜性能的 最重要指标。
㈠ 普通光学显微镜
微生物个体微小，必须借助显微镜才能观察到，显微镜 是微生物学者不可缺少的基本工具。
普通光学显微镜利用目镜、物镜两组透镜系统来放大成 像，常称为复式显微镜，由机械装置和光学系统两大部分组 成。
1 机械装置 镜座和镜臂：镜座支持整个显微镜，镜臂支持镜筒部分。
镜筒：上接目镜，下接转换器，分为单筒和双筒两种。
二 实验器材
1 菌种 金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)、枯草芽孢杆菌 (Bacillus subtilis)。
2 溶液和试剂 香柏油、二甲苯、吕氏碱性美兰染液、水等。
3 仪器和其它用品 普通光学显微镜、载玻片、酒精灯、火柴、擦镜纸、接 种环、废液缸、滤纸、纱布等。
三 基本原理
用于生物染色的碱性染料不是碱而是一种盐，碱性染料 电离时染料离子带正电荷，而细菌蛋白质的等电点较低，当 它生长于中性、碱性或弱酸性的溶液时常带负电荷，这样带 负电荷的细菌很容易与带正电荷的染料离子结合而使细菌着 色。
常用的碱性染料有美兰、结晶紫、碱性复红、番红等。
四 操作步骤
㈠ 细菌的简单染色
涂片 1小滴生理盐水 干燥 室温或烘干 固定 2-3次 染色 美兰，2-3min 水洗 滤纸吸干 镜检
利用同焦现象，在使用高倍镜或油镜等放大倍数高、工作 距离短的物镜时，仅用微动螺旋即可对物像清晰聚焦，从而避 免由于使用粗动螺旋时可能的错误操作而损坏镜头。
4 油镜观察 注意不要因为在下降物镜镜头时用力过猛或者调焦时误
将粗动螺旋向反方向转动而损坏镜头及载玻片。 不可以将高倍镜转动经过加油镜油的区域。
一台显微镜由机械装置和光学系统组成，其中物镜是显 微镜最重要的部件。
物镜通常有三种，低倍镜、高倍镜、油镜。低倍镜的放 大倍数一般为4-10×、高倍镜的放大倍数一般为40-45×、油 镜为95-100×，是放大倍数最大的物镜。
㈡ 油镜的工作原理 1 提高分辨率
分辨率是决定显微镜观察效果的重要指标， 显微镜分辨 率越高，能达到的最小可分辨距离越小。
目镜：安装在镜筒上端，由两块透镜组成，将物镜成的像 再次放大，但是不增加分辨力，目镜放大倍数过大，反而影响 观察效果。
聚光器：由聚光镜和虹彩光圈组成， 调节聚光镜的高度和虹彩光圈的大小，使 适当强度的光线照射到标本上。
光源：安装在镜座内，通过开关控制。
滤光片：可见光由不同波长的光线组 成，使用滤光片可以得到所需的一种波长 的光线，提高分辨率、增加反差。
转换器：是一个金属圆盘，上面装有3-4个物镜，可以使 物镜通过镜筒和目镜组成一个放大系统。
载物台：放置镜检标本，中间有 通光孔。载物台上装有标本夹和标本 推进器，在推动器上具有刻度，能够 确定标本位置，便于找到观察视野。
调焦装置： 调节物镜与标本间距 离的结构。
粗动螺旋
微动螺旋
2 光学系统
物镜：安装在转换器上，将物体第一次放大，决定显微镜 的成像质量和分辨能力。
㈡ 显微镜使用及细菌基本形态观察
1 观察前准备 显微镜安置：置显微镜于平稳的实验台上，镜座距实验
台边沿约为10cm左右，镜检者姿势要端正。
光源调节：适当调节聚光器的高度可以改变视野亮度， 但是一般情况下聚光器在使用中都是调到最高位置。
聚光器数值孔径的调节：调节方法见教材，但是做普通 观察时可以不用调节。
微生物学实验
生命科学学院
实验一 显微镜的使用 细菌的简单染色
(3学时)
实验内容涉及教材：实验2、7、12等。
一 目的要求
1 复习普通光学显微镜的结构、功能和操作技术；学 习油镜的工作原理和使用方法；
2 掌握细菌的制片和简单染色技术，观察球菌和杆菌 等在光学显微镜下的基本形态特征；
3 建立“无菌概念”，体会无菌操作的重要性。