几种微血管形态学观测方法间的比较分析
放大内镜对大肠病变微血管形态观察
SANO 等将NBI结合放大镜下观察到的黏膜微血 管（Capillary Pattern CP）分为三型： I型：微血管排列规则，血管呈浅褐色，无树枝 状血管网,见于正常结肠黏膜和增生性息肉
II型：微血管密度较为稀松，血管结构类似 正常黏膜，但血管较长较粗，见于结肠腺 瘤性病灶
III型：微血管明显增长增粗，密度增加，伴 有分支、弯曲和不规则改变，有深褐色的树枝 状血管网及许多深绿色血管，部分血管网破坏 多见结肠癌
Togashi K et al.Gastrointest Endosc. 2009 ;69(3 Suppl):734-41
Horimatsu T通过NBI结合放大内镜研究轻度不典型 增生与重度不典型增生大肠病变的MC (meshedcapillary )微血管形态相关性.结果发现,NBI结合放大 内镜发现98% (44 of 45) 的轻度不典型增生病变存在 MC，而92% (23 of 25)的重度不典型增生缺乏MC,因 此认为有无MC为判别是否有肿瘤血管新生标志.
不同深浅部位的血管走形，从而判断病情。
Ｒ550
Ｇ500
Ｂ4０0
原图象
FICE图象
Ｒ540
Ｇ415
Ｂ415
Ｒ550
Ｇ500
Ｂ4０0
Figure 3. A: pit pattern of type II, some light brown blood capillary are shown (R: 540 nm, G: 440 nm, B: 415 nm).
Nakiyashi等采用NBI合并放大内镜观察了 早期胃癌病灶的微血管变化，并且比较了 分化良好型与未分化型腺癌微血管变化的 不同，发现分化良好的早期胃腺癌其微血 管形态仍然较为规则，而未分化癌的微血 管紊乱、呈螺旋形。
血管形成测定
血管形成测定血管形成是从已经存有的血管床中通过内皮细胞增殖和迁移,以芽生或非芽生的方式生成新生血管系统的过程，与正常的生理过程(如伤口愈合、胚胎发育等)和很多病理过程(如肿瘤的生长和转移、类风湿性关节炎、脑和心血管等疾病)密切相关1,2。
血管形成中的主要细胞是内皮细胞，它存有于所有的血管上，通过内皮细胞的迁移、增殖、分化和结构重建构成了新的毛细血管网。
除内皮细胞在血管发生过程起重要作用外，支持细胞(如肿瘤细胞、外周细胞、平滑肌细胞、成纤维细胞)、细胞外基质、血液细胞和体液成分也都与血管的发生相关。
所以，血管发生的测定非常复杂。
当今尚未有任何一种体外的实验方法能精确地模拟这个复杂的过程，但结合体外、体内血管形成的测定方法，能够有效地了解血管发生的作用机理。
本文介绍了当前体内外用来研究血管形成的一些基本方法和最新方法，并对这些方法的优缺点实行了深入探讨。
体外测定血管形成的方法主要侧重于外源性抑制剂或刺激因子对内皮细胞的迁移、增殖和成管的作用。
对内皮细胞的测定，关键问题在于内皮细胞具有物种和器官的差异性。
内皮细胞表型的差异已在大血管衍生的内皮细胞(如人脐静脉内皮细胞)和微血管器官的内皮细胞(如人类皮肤毛细血管内皮细胞)中被证实3,4。
在培养中，内皮细胞的活化状态、染色体表型、细胞表面抗原的表达和它们的生长特性都会发生改变，将失去体内生长的一些特性3。
另外，在体外，内皮细胞在静止环境、动态环境、结合不同的基质的情况下，它们的特征也不同，所以它并不能完全代表体内复杂的生理过程。
即使用内皮细胞作为模型来研究体内血管发生具有很大的局限性，但体外测定方法具有快速、易定量、可重复性高等特点。
1.1内皮细胞增殖测定法血管内皮细胞的增殖是血管发生的重要步骤。
当前，已有多种成熟的细胞增殖测定方法，如四氮唑盐还原法等。
3H?残叵汆奏げ羧敕ê拖赴?周期动力学检测法是两种主要的细胞增殖测定方法。
四氮唑盐〔3??(4,5??dimethylthiazol??2??yl)??2,5??diphenyl??tetrazoliu mbromide,MTT〕还原法，又称MTT比色法，是一种最常用的检测细胞存活和生长的方法。
研究物体微小形变的方法
研究物体微小形变的方法
研究物体微小形变的方法有很多种，以下是其中几种常见的方法：
1. 光杠杆法：利用光杠杆原理，可以将微小的形变转化为可测量的光程差。
具体方法是将待测物体放在光杠杆上，通过测量光杠杆的转角来计算物体的微小形变。
2. 应变片法：应变片是一种能够测量物体应变的传感器。
将应变片粘贴在待测物体上，当物体发生形变时，应变片的电阻值会发生变化，通过测量应变片的电阻变化可以计算出物体的微小形变。
3. 激光干涉法：利用激光干涉原理，可以测量物体的微小形变。
具体方法是将激光束分成两束，一束照射在待测物体上，另一束作为参考光。
当物体发生形变时，两束光的干涉条纹会发生变化，通过测量干涉条纹的变化可以计算出物体的微小形变。
4. 磁共振成像法：磁共振成像技术可以用于测量物体的微小形变。
通过测量磁共振信号的相位或频率变化，可以计算出物体的微小形变。
5. 数字图像相关法：数字图像相关法是一种基于数字图像处理的非接触式测量方法。
通过对物体表面的数字图像进行分析，可以计算出物体的微小形变。
以上是几种常见的研究物体微小形变的方法，不同的方法适用于不同的情况，可以根据具体需求选择合适的方法。
窄带成像技术下鼻咽癌黏膜微血管形态学变化分析
窄带成像技术下鼻咽癌黏膜微血管形态学变化分析陈斌;郑亿庆;邹华;张志钢;黄晓明【摘要】目的探讨窄带成像技术(narrow band imaging,NBI)下鼻咽癌黏膜微血管形态的特征性表现.方法选取我科2009年12月～2010年9月在门诊行电子鼻咽喉内镜检查,NBI模式下鼻咽局部疑为癌变并行活检的患者94例,根据局部是否隆起将上述患者分为平坦组与隆起组,计算NBI技术对上述两组患者鼻咽癌诊断的阳性预测值,并作统计学比较,评估NBI模式下鼻咽癌与非癌变黏膜微血管的形态学特点.结果NBI模式下鼻咽黏膜血管分为黏膜下血管(submucosal vessels,SV)、树枝状血管(branching vessels,BV)以及上皮内乳头状毛细血管袢(intraepithelial papillary capillary loop,IPCL)3类.黏膜下层血管有2种形式,即正常型和扩张型;树枝状血管有3种形式,即正常型、僵直扩张型及弯曲扩张型;上皮内乳头状毛细血管袢有3种形式,即密集点状扩张型、疏松点状扩张型及迂曲扩张型.各组黏膜微血管形态均有所不同.在本组资料中NBI模式对鼻咽癌诊断的阳性预测值为80.9％,其中平坦组为37.5％,隆起组为95.7％,两者差异有统计学意义(P＜0.05).结论窄带成像技术下鼻咽癌黏膜微血管形态学变化具有特异性,提高对上述血管形态变化的认识可为鼻咽癌的早期诊断提供可靠的依据.【期刊名称】《中国耳鼻咽喉颅底外科杂志》【年(卷),期】2012(018)001【总页数】6页(P15-19,23)【关键词】窄带成像技术;鼻咽癌;微血管;形态学;分析【作者】陈斌;郑亿庆;邹华;张志钢;黄晓明【作者单位】中山大学附属孙逸仙纪念医院耳鼻咽喉头颈外科,广东广州510120;中山大学附属孙逸仙纪念医院耳鼻咽喉头颈外科,广东广州510120;中山大学附属孙逸仙纪念医院耳鼻咽喉头颈外科,广东广州510120;中山大学附属孙逸仙纪念医院耳鼻咽喉头颈外科,广东广州510120;中山大学附属孙逸仙纪念医院耳鼻咽喉头颈外科,广东广州510120【正文语种】中文【中图分类】R739.63中国南方地区是鼻咽癌的高发区，其年发病率可高达 20～50/100000[1]。
显微镜三种观察方法对比
显微镜三种观察方法对比显微镜是一种用于观察微小对象的工具，具有高分辨率和放大倍数高的优点。
在显微镜观察中，有三种常见的观察方法，分别是亮场显微镜、暗场显微镜和荧光显微镜。
下面将对这三种观察方法进行详细的对比。
首先是亮场显微镜。
亮场显微镜是最常见的显微镜观察方法，其工作原理是通过透射光源通过样本，然后经过物镜和目镜的放大来进行观察。
亮场显微镜适用于各种生物组织和细胞观察，可以显示样品的透明性和结构。
亮场显微镜的分辨率高，但对于透明性较差的样品，观察效果可能不明显。
此外，亮场显微镜可以使用常规光学染色方法，如吉姆萨染色、伊红染色等，以增加样品的对比度。
接下来是暗场显微镜。
暗场显微镜是亮场显微镜的一种改进，通过使用特殊的暗场物镜，使样本处于一种特殊的照明方式下，即样本与周围背景之间的一种对比现象。
暗场显微镜适用于观察透明性差的样品，如活细胞、微小生物等，能够增强样本的对比度，并能够观察到样品的细胞运动和变化。
然而，暗场显微镜的分辨率相对较低，不适用于需要高分辨率观察的研究。
最后是荧光显微镜。
荧光显微镜是一种利用样品自身的荧光来观察的显微镜。
荧光显微镜通过激光或者白炽光源照射样本，样品中的荧光物质吸收光能，并发出荧光信号。
荧光显微镜可以观察标记有特定荧光物质的样品，如荧光染料、荧光蛋白等。
荧光显微镜具有极高的分辨率和特异性，可以用来观察细胞内特定分子的动态过程，如蛋白质分布、细胞器的位置等。
此外，荧光显微镜还可以进行多通道观察，即同时观察多种不同颜色的荧光信号，以获得更多的信息。
综上所述，亮场显微镜是最常见的显微镜观察方法，适用于各种样品，分辨率高，观察效果明显。
暗场显微镜适用于透明性差的样品，能够增强样本的对比度，并可观察细胞运动和变化。
荧光显微镜通过检测样品自身的荧光信号，具有高分辨率和特异性，适用于观察具有特定荧光标记的样品。
不同的观察方法具有各自的优缺点，根据需要选择适合的方法进行观察，能够更好地满足研究的需求。
甲襞微循环的观测指标
⽑细⾎管形态，⽑细⾎管流态，⽑细⾎管周围状态。
1、细⾎管形态： 1）、管袢清晰度：管袢清晰度是镜下观察甲襞⽑细⾎管不可缺少的指标。
甲襞是⼿指远端的⽪肤，由于职业或⼯作的原因（如搬运⼯⼈、清洗⼯⼈等），经常接受不同刺激，引起表⽪增⽣，⾓化层增厚，⽪肤粗糙，致使表⽪透光性减退，造成管袢模糊不清，约4.1-10%正常⼈的管袢模糊。
正常⼈甲襞⽑细⾎管排列整齐，分布均匀，管袢清晰可见。
异常状态：排列紊乱，管袢模糊。
2）、管袢数：微循环检测中，管袢数的改变具有重要的临床意义。
以远⼼端第⼀排⾎管袢中部1/2以上为管袢计数区，低于此线者不计，模糊不清者不计，计数时不应改变焦距，以免将不同深度的另⼀排管袢计⼊。
计数每毫⽶内的管袢数，取三个视野的平均值；凡1mm内的所有管袢数均应计⼊。
正常值：8-10（7-9）根/视野（第⼀排） 异常：A、袢增多：缺氧、慢性肺⼼病。
B：袢减少：⾎压下降，循环⾎量不⾜。
末梢⾎管收缩（细动脉收缩）感染性休克等。
3）、管径：测量部位为⾎管袢的中部，要避开节段性扩张或收缩处。
正常⼈输⼊枝与输出枝之⽐为：1.5-2. 正常值：输⼊值—11±mm 输出值—14±3mm 袢顶—15±3mm 异常：A、管径增宽：⾼⾎压及冠⼼病（早期）袢细长，部分病例输出枝扩张。
⾼⾎压、冠⼼病伴有⾼脂⾎症，⾎流粘度增加，输出枝，特别是袢顶增宽。
B、管径变窄：急性肾炎，肾病综合症，由于动脉压升⾼，⽑细⾎管阻⼒增加，管袢特别是输⼊枝管径明显变窄。
⾎压低，房间隔缺⾎，严重贫⾎。
（因⾎液灌流量减少，管袢变细） 4）、管袢形态 正常的管袢形态为发夹型（∩）、交叉型和畸形，三者⽐例为6：3：1. 异常：交叉型及畸形增多，风湿性关节炎、类风湿、⾼⾎压、糖尿病、⼼绞痛、⼼肌梗塞（95%异性管袢） 5）管袢长度：测量受观察⾓度，⼿指的位置、照明等影响较⼤。
正常：2—5CM. 异常：A超长：⼩动脉硬化，家族⾼⾎压史，部分⾼⾎压病⼈（由于局部⾎液灌流量⼤，⾎流受阻所致） B、缩短、⼼脏病、⼼功能不全、⽔肿、休克。
血管拟态的研究方法
血管拟态的研究方法血管拟态是指在体内或体外模拟血管环境，培育具有血管相似结构的材料或细胞。
血管拟态研究旨在模拟人体血管环境，促进血管新生、血管再生及组织修复等方面的研究。
本文将重点介绍血管拟态的研究方法。
一、动物实验1. 神经管转染法神经管转染法是将具有小时后功能的神经管内充填有成纤维细胞，表达VEGF等刺激新生血管的蛋白质。
神经管置于背侧的皮下脂肪组织中，可使充填的成纤维细胞及VEGF最终生成结构类似于血管的通透的管状物，与背面的血管相连。
2. 内皮细胞迁移法内皮细胞迁移法是将含有内皮细胞的组织移植到体内，如在裸鼠体内移植血管内皮细胞以上的组织，可形成“祖孙血管”，这种血管新生模式不依赖于成纤维细胞的存在，但需要关闭原有血管。
3. 同种异体再造法同种异体再造法是将孕鼠或成年小鼠运用同样复杂的操作培育出一整副或更多子宫组织，通过手术按照准备好的孔洞将子宫组织注入到一个异常处，细胞生长和再生的过程中，向周围输送所需的养分和信号，这种方法通过子宫多能干细胞的母源进行生殖系统再生，在实验大鼠中建立了一种生殖器再生的效果，这种方法已经有一定的应用前景。
二、细胞培养法1. 三维细胞培养法三维细胞培养法是将细胞转移到生物材料或细胞支架上，培植出更具有三维结构的细胞模型，使细胞趋于生物结构与生理行为上更趋于真实的模拟。
2. 微绝缘区培植法微绝缘区培植法是将细胞种植物种子沉降到微绝缘区培养皿中，采用人工振荡处理技术，使实验动物细胞自然生长，增加细胞细微刺激，加速生长的效果，生成的细胞在三维构造中表现出真实成分及异质性。
三、生物材料修复法1. 人工血管2. 规则微米级纳米级沟槽手术刀刻蚀法这种方法要直接对生物材料进行修改，通过增加纳米级微米级沟槽的数目和大小，来使生物材料达到随机和有序梯度型拟态标准，并且具有生物相容性和生物相似性。
3. 生物相容性材料植入术生物相容性材料植入术是通过将生物材料经过特定物理处理后，植入体内，达到修复或替代受损或缺陷的血管或血管组织。
冈上肌腱微血管定量分析
方 差分 析结果 表 明 ， 年龄 组 之 间 、 位 之 间 的差 在 部 异 有统 计学 意义 （ Ｐ＜０ ０ ） 性 别 之 间无 差 异 ， 龄 和 ．１ ， 年 部 位 间有交 互作用 （ Ｐ＜Ｏ ０ ）说 明在 冈上 肌腱 盼毛 细 ．１， 血 管数 量 上 ， 年 组 少 于 成 年 组 ， 女 性 别 对 其 无 影 老 男
Ｋｅ ｏｄ ｓｏ ｌｅ ｉｔ ｃｆ ｔｎ ｏ ； ｕ ｒｓ ｉ ｔｓｍｕ ｃ ； ａ ｉａｙｑ ａ ｔａｉｅａ ａ ｓ ｙｗ ｒｓ ｈ ｕｄｒ ｏｎ ； ｕｆ ｅｄ ｎ ｓ ｐａｐｎ ｕ ｓｌ ｃｐｌ ｒ ｕ ｎｉ ｔ ｎ ｌ ｉ ｊ ａ ｅ ｌ ｔ ｖ ｙｓ
１３ ９１年 ，ｏ ｍａ ［首先 提 出 冈上 肌腱 在 靠 近其 止 Ｃ ｄ ｎ】 ］ 点处 有 一 血 供 不 良 的 部 位 （ １ ， 命 名 为 临 界 区 图 ）并
—
黑色灌 注 液 为 止 。灌 注 完 毕 用 自来 水 冲洗 局 部 降
９ 一 ０
温 ， 后 置 于 １ 甲 醛 溶 液 中 浸 泡 １ｄ 待 灌 注 液 完 然 ０ ， 全 凝 固 后 进 行 解 剖 。将 冈 上 肌 腱 按 部 位 分 成 止 点 处、 临界 区 、 肌 腹 处 ３部 分 ， 各 部 编 号 。然 后 用 接 将 １ 甲醛 溶 液 固定 ， 钙 ， 埋 切 片 ， Ｅ染 色 ， ０ 脱 包 Ｈ— 中性
（ｒ ｉ ｌ ｏ ｅ 。认为 在 该 处 最 易 发 生 冈上 肌 腱 撕 裂 。 ｃｉ ｃ ｎ ） ｔａｚ
冈上肌 腱撕 裂 是 常 见 的老 年 性 疾 病 ， 是 引 起 肩 痛 和 也
冻结肩的主要原因， Ｇ ａ ｔ 报道 ， 据 ｒｎ 等Ｅ］ 尸体解剖 中肌
腱袖 撕 裂 的检 出率 为 ８ ～２ ， 中最 常见 的是 冈上 ４ 其 肌腱 撕 裂 ， 今 病 因不 明 。研 究 冈 上 肌腱 的 血 供 及 其 至 与该 肌 疾患 的 关 系 ， 于查 明 冈 上 肌 腱 撕 裂 的病 因 和 对 发病 机 制 以及 治疗 方案 的确 定 ， 具有 一定 的参 考价 值 。 １９ 国内学 者Ｅ采 用 明胶 墨汁 血管 注 射 方法 研 ９０年 ］
微血管体积密度和表面积密度的测量方法
微血管体积密度和表面积密度的测量方法
微血管体积密度和表面积密度是衡量血液循环系统机能的重要指标。
它们是测量血液循环分布在脏器、肌肉和皮肤中的重要参数，是研究
细胞代谢作用和恢复加速的重要指标。
本文将对测量血液微血管体积
密度和表面积密度的方法进行总结。
一、测量血液微血管体积密度的方法
1. MRI技术测量：核磁共振成像技术可以通过使用磁场来检测单个微
血管单元的尺寸、形状和数量，从而测量血液微血管体积密度。
2. 光学显微镜和发光素子显微镜技术测量：通过全血管光学显微镜和
发光素子显微镜，可以使用细胞标记和激光来检测血液微血管的体积，从而计算出血液微血管总体积和体积密度。
3. 半身体扫描仪测量：半身体扫描仪可以检测血液微血管网络，测量
血液微血管总体积和体积密度。
二、测量血液微血管表面积密度的方法
1. 組織現象：組織试验可以检测微血管网络的数量，通过计算微血管
的表面积和体积，可以测量微血管表面积密度。
2. 光学显微镜和发光素子显微镜技术测量：通过使用细胞标记和激光
技术，可以测量血液微血管的形状和表面积，从而测量出血液微血管表面积密度。
3. 三维显微镜技术测量：三维显微镜技术可以精确测量血液微血管网络的表面积和体积，从而可以计算出血液微血管表面积密度。
总之，根据以上测量血液微血管体积密度和表面积密度的方法，可以评价血液循环的各个组成部分，从而获得血液循环的正常值，为进一步研究血液循环提供参考和依据。
胃癌组织中微血管密度的测定及其临床意义
胃癌组织中微血管密度的测定及其临床意义胃癌是一种恶性肿瘤，是全球死亡人数最高的癌症之一。
早期的胃癌常常没有明显症状，因此容易被忽视，直到癌症发展到晚期才会发现。
胃癌的诊断和治疗一直是临床研究的热点，其中微血管密度已经成为胃癌研究的重要指标之一。
本文将介绍如何测定胃癌组织中的微血管密度以及它在临床应用中的意义。
什么是微血管密度微血管密度（Microvascular density，MVD）又称微血管计数，是指在单位面积内血管数量的统计。
在肿瘤等组织中，血管的生成和分化异常，血管的密度也会相应改变。
因此，通过测定肿瘤组织中的微血管密度，可以反映血管的新生和可塑性，进而评估肿瘤的侵袭和生长。
如何测定胃癌组织中的微血管密度目前，常用的测定胃癌组织中微血管密度的方法主要有免疫组织化学染色法和电镜法。
免疫组织化学染色法这种方法是通过免疫组织化学技术对肿瘤组织中的微血管进行染色和计数。
具体操作步骤如下：1.取得含癌细胞的组织标本，并将其嵌入蜡块中；2.制备组织切片，并用适当抗体进行染色；3.扫描数字图像，对图像中的血管进行计数。
电镜法这种方法是通过电镜对组织中的微血管进行观察和计数。
具体操作步骤如下：1.取得含癌细胞的组织标本，并将其固定和分割；2.制备样品薄片，并用电子显微镜观察组织中的微血管；3.计算单位面积内微血管的数量。
胃癌组织中微血管密度的临床意义胃癌脱离原位后，需要通过新生血管的生成来获取养分和氧气。
因此，微血管密度已成为了肿瘤生长过程中一个非常重要的指标。
下面我们来讨论一下胃癌组织中微血管密度的临床意义：预后判断胃癌组织中微血管密度与胃癌的分期和转移相关。
常规治疗后血管密度的变化情况可以作为预后判断的指标。
治疗选型低微血管密度的患者可能对放疗、内分泌和化疗等非手术治疗更为敏感。
因此，微血管密度也可以作为评估治疗选项的指标。
治疗效果评价在联合放化疗后，微血管密度的变化也可以用来统计肿瘤治疗的有效性。
血管功能评价的研究方法
血管功能评价的研究方法血管功能的评价是了解血管疾病发展的重要步骤，也是评估个体健康状况的重要指标之一。
常用的血管功能评价方法包括动脉硬化指数、血管内皮功能检测、血管舒张功能检测等。
本文将介绍目前常用的血管功能评价方法、其原理以及优缺点。
动脉硬化指数（ASI）动脉硬化指数是通过脉搏波波形分析得出的一种指数，反映了血管的硬度和弹性。
具体是利用脉搏波传播速度和幅度的变化来计算ASI。
ASI值越高，说明动脉硬度越大，血管弹性越低。
通常，ASI值在30以上被认为是中度到严重的动脉硬化。
ASI作为一种简单、无创、快速的评价指标，被广泛应用于动脉硬化、心血管疾病、糖尿病等疾病的评估和监测中。
但是，ASI也有局限性，不能直接反映血管内部的变化。
同时，个体间对ASI的反应存在差异，需要综合其他指标来进行评价。
血管内皮功能检测血管内皮是维持血管正常生理功能的重要组成部分，其损伤是许多心血管疾病的共同基础。
血管内皮功能的检测主要是通过血流物理学实验和生物分子学实验两种方法进行。
血流物理学实验包括流量介导性舒张反应（FMD）和二氧化碳反应（CVR）两种方法。
FMD是指刺激血管内皮细胞后引起的血管舒张反应，在检测中主要观察血管内径的变化。
CVR则是指在通气过程中血流量和血管内径的变化，通过血流动力学的变化来评价内皮功能。
生物分子学实验则是探索内皮细胞与血细胞、炎症因子、氧化应激、血小板等细胞之间的相互作用，以及试图从分子角度来探究血管内皮生理与病理。
血管舒张功能检测血管舒张功能检测方法同样适用于心血管疾病、糖尿病等患者群体的评价。
其常用的方法包括NO代谢产物、脉搏波速度、冷剌激试验等。
NO代谢产物检测是指测量血液中的亚硝酸、硝酸等活性氮化物质，并通过它们与NO生物活性相关联来评价血管舒张功能。
该方法具有检测简单、操作方便的特点，同时能够反映血管舒张能力的变化。
脉搏波速度检测是通过血流的传导速度来评价血管舒缩能力。
该方法需要测量血管内脉冲波的传播时间和距离，计算出脉搏波速度，越高的速度代表血管硬度越大，表明血管壁的弹性下降。
免疫磁珠分选法原代培养小鼠肺微血管内皮细胞
免疫磁珠分选法原代培养小鼠肺微血管内皮细胞周玲萍;冯成;汤雪斌;徐红蕾【摘要】目的：探讨一种高效、稳定的小鼠肺微血管内皮细胞（PMVECs）原代培养方法。
方法：选取45只1周龄Balb/c小鼠,随机分成3组,分别用酶消化法、组织贴块法、免疫磁珠分选法3种方法分离培养小鼠PMVECs,观察细胞形态学以及VIII因子相关抗原免疫荧光染色鉴定内皮细胞,计算各组原代培养成功率及从原代培养开始到首次传代所需时间,测定细胞纯度,MTT法绘制生长曲线。
结果：3组原代培养的细胞在倒置显微镜下均能见到短梭形、多边形的微血管内皮细胞,血管内皮细胞特异性标志物VIII因子相关抗原表达阳性。
免疫磁珠分选法组原代培养成功率及细胞活性显著高于其他2组,差异有统计学意义（P〈0.01）,从原代培养至首次传代所需的时间短于组织贴块法组,差异有统计学意义（P〈0.05）,细胞纯度显著高于酶消化法组,差异有统计学意义（P〈0.01）。
结论：相比于酶消化法与组织贴块法,免疫磁珠分选法原代培养小鼠PMVECs具有重复性好,分离速度快,细胞纯度高及活性好的优点。
【期刊名称】《温州医科大学学报》【年(卷),期】2016(046)008【总页数】4页(P590-593)【关键词】细胞培养;原代培养;免疫磁珠;肺微血管内皮细胞【作者】周玲萍;冯成;汤雪斌;徐红蕾【作者单位】温州医科大学附属第一医院呼吸与危重症医学科,浙江温州325015【正文语种】中文【中图分类】R331建立高效的肺微血管内皮细胞（pulmonary microvascular endothelial cells，PMVECs）体外培养方法对急性肺损伤等疾病发病机制及药物治疗等方面的研究起着重要作用。
目前文献报道体外培养PMVECs的方法主要有酶消化法、组织块培养法、免疫磁珠分选法，但由于PMVECs较脆弱难成活、生长缓慢、易污染、不易纯化等原因，目前其培养仍是一个难题。
本研究对上述3种PMVECs体外培养方法进行比较，明确不同培养方法的优缺点，探讨出一种稳定的PMVECs培养方法。
微循环判断方法
微循环判断方法Microcirculation refers to the flow of blood through the smallest blood vessels in the body, such as capillaries, arterioles, and venules. It plays a crucial role in delivering oxygen and nutrients to tissues while removing waste products. Assessing microcirculation is important in diagnosing and monitoring various medical conditions, as it can provide insights into tissue perfusion and oxygenation.微循环是指血液通过身体中最小的血管，如毛细血管、小动脉和小静脉的流动。
它在向组织输送氧气和营养的同时清除废物产生了至关重要的作用。
评估微循环在诊断和监测各种医疗状况时非常重要，因为它可以为组织灌注和氧合提供见解。
There are various methods to assess microcirculation, each with its own advantages and limitations. One common method is the use of a handheld microscope, which allows for direct visualization of microvascular flow and density. This technique is non-invasive and can provide real-time assessment of microcirculation in different tissues. However, it requires training and experience to accurately interpret the images obtained.有多种方法来评估微循环，每种方法都有自己的优势和局限性。
血管拟态的研究方法
血管拟态的研究方法
血管拟态是指在生物体内形成的新血管，通常是由某些生物分子或组织因子的诱导作用而产生。
这些新生的血管可能会在许多疾病的发病机制中发挥重要作用，如肿瘤的生长与转移、糖尿病性视网膜病变、心肌梗死后的再灌注损伤等。
要研究血管拟态，需要一些特定的实验方法。
常见的方法包括： 1. 培养内皮细胞：通过收集动物或人体内皮细胞并在培养皿中培养，可以观察到内皮细胞在分化和增殖时形成新的血管结构。
2. 动物模型：使用小鼠、大鼠等动物建立血管拟态模型，通过注射特定生物分子或组织因子来诱导血管生成，然后观察血管形态、密度等变化。
3. 细胞迁移实验：在体外使用细胞迁移实验，通过观察细胞在特定生物分子或组织因子的作用下的迁移能力，来研究血管拟态的分子机制。
4. 组织切片染色：通过对组织切片进行特定的染色方法，如Immunohistochemistry，可以在切片上检测到特定分子的表达情况，以验证其参与了血管拟态的过程。
以上方法都是研究血管拟态的重要手段，可以为疾病治疗和预防提供新的思路和方法。
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人皮肤微循环血管形态显示方法论文
人皮肤微循环血管形态显示方法的探讨摘要：目的：探讨人皮肤微循环血管形态显示方法，通过对显示人皮肤微血管各种方法的优缺点的比较，为微循环形态学研究提供资料。
方法：墨汁灌注方法、铅丹乳胶灌注方法、a．b．s血管铸型方法和甲基丙烯酸甲酯血管灌注方法。
结果：用于显示血管密度，墨汁灌注石蜡切片仍不失为一种较好的方法，而用a．b．s和甲基丙烯酸甲酯这两种充填剂进行血管铸型则各有优缺点。
结论：研制既能保持微血管原型又不污染环境的新型铸型剂是一项重要而现实的工作。
关键词：皮肤微循环；血管形态；显示方法；探讨【中图分类号】r541.7【文献标识码】a【文章编号】1672-3783(2012)04-0147-02皮肤是与外界接触最多的组织系统，在维持身体平衡机稳定性能上有重要作用。
探索人皮肤微循环血管形态显示方法，能为人体皮肤移植以及治疗皮肤损伤等多有很大的临床价值和意义。
现将方法探讨的具体情况报告如下：1 资料和方法1.1 一般资料：在人体皮肤微循环血管形态显示方法的实验素材上，选取新鲜成人及儿童尸体的上、下肢各5侧。
其中各两侧上肢及下肢用含10％福尔马林的印度墨汁灌注血管。
剩余的各3侧上肢及下肢用a．b．s丁酮溶液做皮肤血管铸型、铅丹乳胶灌注方法和甲基丙烯酸甲酯血管灌注方法。
1.2 方法:灌注液采用70%印度墨汁右旋糖酐混合液,即70ml印度墨汁+30ml低分子右旋糖酐,利用这种墨汁流动性好,容易注入的特点。
印度墨汁颗粒细小,能够进入网状毛细血管，国产北京牌墨汁亦可选用,但使用前宜先经定性滤纸过滤,以去除其中较大的颗粒及杂质[1]8%硫化钠脱毛后,作腹正中切口,牵开脏器,分离出腹主动、静脉；将两血管近心端结扎,作离心向插管。
分别由肽动脉和胭动脉灌注印度墨汁，压力120～200mmhg，固定48小时后取材，切取手、足、前臂、小腿、上臂、大腿等各部皮肤及浅、深筋膜，组织切片厚150～250um，常规伊红染色，光镜观察。
微波快速过氧化物酶染色法与灌注法用于微循环形态学研究之比较
微波快速过氧化物酶染色法与灌注法用于微循环形态学研究之
比较
熊正文;朱森树;阮士荣;李春光;左尚真
【期刊名称】《微循环学杂志》
【年(卷),期】1994(004)003
【摘要】微血管直径和密度是微循环研究的二个重要参数，管径和密度的大小分
别在不同程度上反映了循环液同组织、细胞间的交换面积，进而反映出微循环物质交换的功能状态。
微血管定量分析是研究微循环动力学变化规律和调节机理的基础。
从微循环形态学研究方法来看．灌注法是目前最常用的微血管显示方法之一。
【总页数】4页(P29-31,T002)
【作者】熊正文;朱森树;阮士荣;李春光;左尚真
【作者单位】中国人民解放军第251医院，张家口075000
【正文语种】中文
【中图分类】R392.12
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1.快速斑点免疫金染色法与二种免疫金银染色法检测抗囊尾蚴抗体的比较研究 [J], 郑葵阳;杜文平;郑霞;付琳琳;刘宜升
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封国光;刘新月
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5.微波快速过氧化物酶染色法与灌注法用于微循环形态学研究之比较 [J], 熊正文;米森树;阮士荣;
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《疾病知识：微循环观察主要观察什么？》
《疾病知识：微循环观察主要观察什么？》本篇分享：《微循环观察主要观察什么？》正常微循环的综合判断，简单的说看一个人的微循环好不好怎么样来判断呢？临床上微循环的观察主要是观察血液循环。
怎么样来观察血液循环的？可以在显微镜下直接显示，主要观察体液循环。
在显微镜下就可以看，目前能够开展的微循环观察部位有十几个。
在临床上能够观察到血液循环的位置有十几个，最常用并且能代表全身微循环状态的主要是甲币和眼球结膜两个部位。
其中甲币，是观察人体微循环的最好窗口，具有操作简单安全方便，对人体无损伤无刺激快捷准确等优点，而且甲币表皮比较薄透光性好，微血管儿比较浅观察方便。
甲币的观察方法一般是检查左手的无名指，如果常用左手，建议检查右手无名指。
叫常用左手老百姓大白话讲叫左撇子，正常人都是右手比较灵活，经常用右手，但是好多人左撇子左手经常用。
因为手动的多微循环它就不准确，想要准确，就观察少动的那只手，这样讲能理解了吧。
检查微循环就是观测甲币，一般都是观测左手的无名指甲币，来看微循环的好坏，或者是观察血液循环的状态是否正常有没有问题。
可能有人以前做过检测，但是有一部分人没有做过。
其实检测特别简单，在显微镜下就能看到，医院有微循环的检测仪，其实它就是一个显微镜作用。
要检查左手的无名指的甲币，是最常用和最具代表性的，能代表全身微循环状态的，甲币是观察人体微循环的最好窗口，就是说不光能代表而且观察特别好，说白了就是如果你在显微镜下，看你左手无名指的微循环的好坏，就能代表你全身微循环的状态。
微循环观测技术它有赖于工业技术和生产水平以及其它科学，例如：细胞学、组织学、生理学、生化学、免疫学、流体学等技术方面的进展，所以微循环不是简单看看微血管？也不是那么随意的。
很严谨的通过这些学科儿来总结微循环观测技术的发展史，既可以认识微循环学科儿在技术方面的发展历程，又可以开创微循环今后发展的思路。
世界微循环学的发展可分为好五个时代。
它发展的不像中医学，它起步比较晚，在1974年的时候世界微循环研究进行了一个总结。
血管直径测量方法
血管直径测量方法【实用版4篇】《血管直径测量方法》篇1血管直径的测量方法通常使用以下几种：1. 超声波测量法：使用超声波探测器在血管表面进行扫描，并根据回声波的时间和振幅来计算血管直径。
这种方法无创、快捷、重复性好，适用于颈部、股动脉等部位的血管直径测量。
2. 磁共振成像法：使用磁共振成像技术，通过流体动力学模型计算血管直径。
该方法无创、准确，适用于脑部血管直径的测量。
3. 计算机断层扫描法：通过CT 或MRI 等成像技术，对血管进行三维重建，并测量血管直径。
该方法适用于腹部、胸部等部位的血管直径测量。
4. 直接测量法：使用游标卡尺或螺旋测微仪等工具，直接测量血管直径。
该方法适用于一些小血管的测量，但需要有一定的操作技巧和经验。
需要注意的是，不同的测量方法适用于不同的血管部位和直径范围，应根据具体情况选择合适的测量方法。
《血管直径测量方法》篇2血管直径的测量方法通常使用以下几种：1. 超声波测量法：使用超声波探头对血管进行扫描，可以测量血管的内径和外径，从而计算出血管直径。
这种方法无创、快捷、重复性好，适用于不同类型的血管，如动脉、静脉和微血管等。
2. 计算机断层扫描（CT）或磁共振成像（MRI）：通过CT 或MRI 扫描，可以获取高分辨率的三维图像，用于测量血管直径。
这种方法适用于需要高分辨率图像的情况，如评估血管狭窄或动脉瘤等。
3. 血管造影法：通过注射造影剂，使血管在X 射线下显影，然后通过测量显影的血管直径来确定血管直径。
这种方法可以直接显示血管形态和狭窄情况，但需要侵入性操作，有一定的风险性。
4. 内窥镜测量法：通过内窥镜对血管进行观察和测量，可以确定血管直径。
这种方法适用于评估内部血管情况，如评估血管狭窄或血管瘤等。
不同的测量方法各有优缺点，应根据具体情况选择合适的方法。
《血管直径测量方法》篇3血管直径的测量方法通常使用以下几种：1. 血管造影法：通过注射造影剂使血管显影，然后通过X 射线或CT 等成像技术测量血管直径。
幼儿小脑齿状核及周围髓质微血管的形态学观察
幼儿小脑齿状核及周围髓质微血管的形态学观察
郭民;和荣丽;洛树东
【期刊名称】《山西医科大学学报》
【年(卷),期】2005(36)6
【摘要】目的观察幼儿小脑齿状核及周围髓质微血管的形态学特点.方法采用改良碱性磷酸酶染色法显示小脑齿状核及其周围髓质内微血管形态及其吻合.结果本实验成功地显示出微静脉,且观察到微动脉和微静脉间的吻合.小脑齿状核的微血管多为树根状,分支多以大锐角和弧形发出,且彼此吻合成网,其密度明显高于髓质区.髓质中的微血管走行多与纤维走行方向一致.结论小脑齿状核内微血管近似直角和弧形的弯曲可能是该区易发生出血的形态学基础.其密度较周围髓质高很多,与该部神经细胞需氧量较大,代谢较活跃有关.
【总页数】3页(P660-662)
【作者】郭民;和荣丽;洛树东
【作者单位】山西医科大学解剖学教研室,太原,030001;山西医科大学解剖学教研室,太原,030001;山西医科大学解剖学教研室,太原,030001
【正文语种】中文
【中图分类】R322.81
【相关文献】
1.幼儿小脑内部微血管构筑的形态学观察 [J], 和荣丽;郭民;洛树东
2.幼儿小脑齿状核的微血管构筑 [J], 和荣丽;郭民;洛树东
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5.幼儿小脑内部微血管构筑的形态学观察 [J], 和荣丽; 郭民; 洛树东
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・技术方法・几种微血管形态学观测方法间的比较分析张卫光1, 冯凤芝2, 夏家骝1, 田 珑1, 严宗毅1(1.北京大学医学部解剖学与组织胚胎学系,北京100083; 2.中国医学科学院北京协和医科大学北京协和医院,北京100730) 【摘要】目的:通过对6种微血管形态学观测方法的比较,使研究者能够选择出最适宜的实验方法。
方法:针对每一种方法,进行实验方法的简介和分析。
结果:6种方法间各有所长。
结论:研究者应根据实验的要求和条件,选择出一种方法或几种方法相结合,以达到研究的目的。
【关键词】微血管; 形态学; 方法学【中图分类号】R322 【文献标识码】A 【文章编号】1001-165X(2003)04-0408-03The comparison and analysis among a few methods on microvascular observation and measureZHA N G Wei2guang3,FEN G Feng2z hi,XIA Jia2liu,et al.3Depart ment of A natomy and histoembrology,Peking U niversity Health Science Center,Beijing100083,China【Abstract】Objective:To select a optimal method on microvascular observation and measure via comparisonand analysis among6kinds of morphological methods.Methods:Each of methods was briefly introduced and an2alyzed.R esults:Each of methods has its own advantages and disadvantages.Conclusion:According to differentexperimental need and condition,researchers should select a suitable method or integrate several methods.【K ey w ords】microvessel; morphology; methodology 微血管通常是指管径小于300μm的血管,主要包括微动脉、微静脉和毛细血管等,是研究组织和器官微循环的基础。
而人肉眼的最小分辨率为200μm,因此对微血管的观察和测量需借助显微镜利用一些特殊的方法进行。
近年来,随着内皮型一氧化氮合酶(en2 dothelial nitric oxide synthase,eNOS)等血管活性物质影响微血管舒缩功能研究的深入,对观察和测量微血管管径的实验方法和技术的要求也不断地提高。
本文针对目前实验室中经常采用的几种方法,作一比较分析其利弊,旨在为实验研究者提供更好的帮助。
1 组织切片苏木精-伊红(hematoxylin-eosine,H-E)染色法方法:取材后,组织经常规石蜡或冰冻切片,切片厚2～10μm,入水后先后经苏木精和伊红染色,酒精脱水,二甲苯透明,中性树胶封片。
分析:H-E染色法是实验室最常用的方法。
其优点是方法简单快捷,如果是冰冻切片,30min或更短的时间内即可知道结果,而且该技术容易掌握,花费低。
光镜下,血管及内皮细胞的形态保持良好,细胞核染成兰色,细胞浆染成红色。
其缺点是:组织(如石蜡【收稿日期】2002-07-21【基金项目】国家自然科学基金(30170244)和“985”跨学科项目资助【作者简介】张卫光(1970-),男,山东聊城市人,硕士,讲师,主要从事微血管结构和功能研究,Tel:(010)62092466,E2mail:zhangook@ 。
切片)经酒精脱水后收缩较严重(约10%～15%);因为切片很薄,所显示的微血管均为断面,血管的连续性差,其中绝大多数的断面并不是与微血管长轴相垂直的横断面,会出现多种情况影响测量的结果(图1)。
图1 不同的情况下所形成的4种微血管断面示意图Fig.1 These sketch showed four kinds of microvessel sec2tions under different conditions2 墨汁灌注组织学切片法方法:例如心脏,左、右冠状动脉或主动脉(动物)插管,墨汁灌注后24h取材,组织以火棉胶或混合蜡[1](凡士林∶蜂蜡∶石蜡=1∶2∶3配制)包埋,推拉式火棉胶切片机切片,切片厚度可在20～200μm之间选择。
二甲苯脱蜡,中性树胶封固。
分析:墨汁灌注后,光镜下观察到的黑色线条,显示的为微血管内径。
该方法不仅可显示微动脉、微静脉,还能很好地显示毛细血管;并因为切片较厚,各种血管的延续性也很清楚;借助目镜测微尺或图像分析,还可较准确测量毛细血管内径及密度,是研究微血管状态的较理想方法(见图2)。
此外,如果切片经H-E 染色后,还可观察组织和微血管的结构。
该方法的主・84・CHIN ESE JOURNAL OF CL INICAL ANATOM Y VOL.21 NO.3 2003要缺点为实验时间长,如采用火棉胶包埋约1～2个月,混合蜡包埋15d 左右。
临床上广泛应用的血管造影以及实验室中采用的血管内乳胶或铅丹等的灌注,均因显示时间太短或灌注物的颗粒较大,而无法显示组织和器官的微血管。
墨汁则因其颗粒小、无渗透性、反差好、经济等优点,在实验研究中得以较广泛地应用。
图2 墨汁灌注后显示的大鼠心肌微血管(黑色线条)×33Fig.2 Rat myocardial microvessel (black lines )per 2fused with Chinese ink.×333 树酯灌注扫描电镜观察方法:动脉插管,一般灌注以甲基丙烯酸甲酯、丙烯酸甲酯、过氧化苯甲酰和二甲基苯胺的混合液或其他的如ABS (丙烯腈、丁二烯、苯乙烯)灌注液,在灌注液凝固成型后,将标本置于盐酸中1～2周。
冲洗腐蚀的组织,待干燥后固定于样本托上,喷镀后在扫描电子显微镜下观察测量微血管的管径。
图3 ABS 灌注扫描电镜下的心肌微静脉(V )Fig.3 Myocardial venules (V ),perfused with ABS under scanning electron microscopy.分析:树脂灌注扫描电镜观察是测量和观察微血管的较理想的方法,从管径较大的微动脉和微静脉到管径很小的毛细血管,均能很清楚地显示出血管的内径。
该方法最突出的优点是能够观察到各级微血管的分支、分布、交通及其空间的立体构筑情况,通过观察血管铸型上内皮细胞和平滑肌细胞的细胞核的压迹,还能区分开微动脉和微静脉,并能够准确加以测量见(图3)。
但由于在电镜观察前已把微血管周围的组织腐蚀掉了,因此对于观察微血管与周围组织的关系上极为不利。
4 超薄切片透射电镜观察方法:低温取材、固定,丙酮脱水,环氧树脂618(Epon 618)包埋,聚合后行超薄切片,醋酸双氧铀和铅染液电子染色。
透射电子显微镜下观察和测量组织微血管的管径。
分析:透射电镜下,能够准确观察和测量出管径<50μm 的微血管,尤其是毛细血管的管腔及其血管内皮细胞的状况见(图4)。
如为免疫电镜方法,还可显示出血管内皮细胞的分泌功能情况。
但经放大1000倍以上,尤其是在放大5000倍以上时,组织中管径>100μm 的微血管全貌大多显示不完整。
因其切片更薄,测量微血管的管径时,如同H -E 方法,误差可能会比较大。
此外,该方法所需的费用大,应用较为受限。
图4 透射电镜照片显示心肌毛细血管(EN.内皮细胞核,L.管腔)×10000Fig.4 Myocardial capillary under transmission elec 2tron microscopy (EN.endothelial nuclear ,L.lumen ).×100005 免疫组织化学染色法方法:4%多聚甲醛固定,取材,铺片或行冰冻切片或石蜡切片。
标本入缓冲液后,经羊血清去电荷和H 2O 2去过氧化物酶,再滴加Ⅰ抗(如Ⅷ因子、CD 34或血管内皮生长因子等)、Ⅱ抗或HRP 标记的链酶卵白素(亲合素-生物素-过氧化物酶复合物法(avidin -bi 2otin peroxidase complex mothod ,ABC 法)),二氨基联苯胺(diaminobenzidine ,DAB )显色。
切片脱水、透明、封固。
分析:在研究微血管时,免疫组织化学染色法是目前国内外最常用的方法之一,其原理主要是针对血管内皮细胞或血管平滑肌细胞所分泌的大分子物质(如・904・中国临床解剖学杂志2003年第21卷第3期eNOS 、CD 34[2]等)或膜受体(如血管内皮生长因子的受体)的抗原抗体反应,在经DAB 等显色剂显色后,能直接反映血管内皮细胞等的分泌功能及其某种血管活性物质的分布情况。
如果该方法再结合以苏木精等的复染,还可观察到微血管的舒张/收缩变化趋势见(图5),但应该注意的是,苏木精使细胞核着的兰色,可部分掩盖免疫组化的显色。
而利用免疫组织化学染色法测量微血管的管径时,其缺点类似于H -E 染色。
此外,由于微血管的血管平滑肌细胞较少甚至缺如,内皮细胞在无细胞核的部位所形成的血管管壁非常薄,由此对该方法的技术要求也比较高。
图5 大鼠心肌微血管血管内皮生长因子免疫组织化学染色(苏木精复染),显示一管径约40μm 的微血管(箭头)的分支情况×50Fig.5 Fig.5 A 40μm wide rat myocardiol mi 2crovessel and its branches stained by V EGF immuno 2histochemistry ×50此外,在显示微血管时,与免疫组织化学染色法相似的方法还有冰冻切片酶组织化学方法和原位杂交法。
酶组织化学的原理主要是针对红细胞或血管内皮细胞中的某种酶或其它物质[3],如内源性过氧化物酶[4]等进行酶组织化学反应,来反映微血管的情况,但其特异性较差,显示较细的微血管和毛细血管时不理想。
原位杂交的原理是以用标记的DNA 或RNA 为探针,在原位检测组织微血管中,多为血管内皮细胞中的特定核酸序列,它虽然特异性很高,但所需费用偏高。
6 微导管法方法:微血管置于树胶玻璃微管腔内,循环以37℃的加氧缓冲液如Krebs 缓冲液(118.3mol NaCl ,4.7mol KCl ,2.5mol CaCl 2,1.2mol MgSO 4,1.2mol NaH 2PO 4,25mol NaHCO 3和11.1mol 葡萄糖)。