腐植酸的分析方法

腐植酸分析方法
（一）容量法
GBT 11957-2001 煤中腐植酸产率测定方法。

DB51T_842-2008肥料中腐植酸含量的测定方法。

Ⅰ、原理。

用焦磷酸钠碱液或氢氧化钠溶液从没杨忠提取腐植酸；再在强碱性溶液中，用重铬酸钾将腐植酸中得碳氧化成二氧化碳，根据重铬酸钾消耗量和腐植酸的含碳比，计算腐植酸的产率。

缺点：适用于固体中腐植酸的测定，不适用于溶液。

NYT 1971-2010 水溶肥料腐植酸含量的测定。

Ⅰ、原理。

试样溶液中的腐植酸在酸性条件下定量沉淀，其他非腐植酸类碳、氯离子及低价金属离子等干扰测试的物质留存于溶液中。

弃去溶液后用定量的重铬酸钾-硫酸溶液氧化沉淀中的有机碳，剩余的重铬酸钾用硫酸亚铁标准滴定溶液滴定。

以空白为基准，根据试样氧化前后氧化剂消耗量，计算出有机碳量。

经过碳系数的换算得到试样腐植酸含量。

缺点：既溶于碱，又溶于酸的富里酸被忽略了。

（二）改进的Lowry法
腐殖酸的测定采用改进的Lowry法测定（方法同蛋白质）
试剂：
NaOH-Na2CO3试剂，准确配制氢氧化钠（143.0 mmol/L）和碳酸钠（270.0 mmol/L）的混合溶液；
CuSO4溶液，57.0 mmol/L；
酒石酸钾钠溶液，124.0 mmol/L；
Folin酚试剂：在2L磨口回流装置内加二水合钨酸钠100g，二水合钼酸钠25g，蒸馏水700mL，14．68mol/L(85％)，磷酸50mL，浓盐酸100mL充分混合后用小火回流10h。

冷却后，再加硫酸锂150g，蒸馏水5mL，液溴数滴，然后开口沸腾15min，以驱除过量溴。

注意：溴气有毒，要在通风橱中进行。

冷却后用蒸馏水定容至1000mL，过滤，滤液为淡黄色，置于棕色瓶中，可在冰箱内长期保存。

若滤液变绿，可加液溴几滴，煮沸数分钟至溶液恢复淡黄色即可。

试剂使用前，用标准氢氧化钠溶液滴定，酚酞为指示剂，标定试剂酸度，使用时适当稀释(约1倍)，使最终酸浓度为1mol/L。

置于冰箱中长期保存。

方法：
样品溶液2.50 mL，加入3.50 mL NaOH-Na2CO3溶液、CuSO4溶液、酒石酸钠溶液
的混合液（体积比, 100:1:1）、0.50 mL Fulin酚试剂，混匀，室温下静置45 min，用紫外分光光度计在750 nm处测定其吸光度A CuSO4。

样品溶液2.50 mL，加入3.50 mL NaOH-Na2CO3溶液、去离子水、酒石酸钠溶液的混合液（体积比, 100:1:1）、0.50 mL Fulin酚试剂，混匀，室温下静置45 min，用紫外分光光度计在750nm处测定其吸光度A H20。

A（蛋白）=1.25 A CuSO4-1.25 A H20
A（腐殖酸）=1.25 A H20-0.25 A CuSO4
蛋白和腐殖酸要分别做标线。

蛋白以卵清蛋白为标样，腐殖酸标样可能需要提纯后再使用。

缺点：水样中的背景颜色物质对显色反应的物质在750nm处的分光光度法的吸光度有一定的影响，但影响应该很小。