lb培养基的配置实验方案
LB配料
实验室常用培养基的配制方法Ampicillin (100 mg/ml)IPTG(24 mg/ml)X-Gal (20 mg/ml)LB 培养基■ 组份浓度100 mg/ml Ampicillin■ 配制量50 ml■ 配制方法 1. 称量5 g Ampicillin 置于50 ml 离心管中。
2. 加入40 ml 灭菌水，充分混合溶解后，定容至50 ml。
3. 用0.22 μm 滤器过滤除菌。
4. 小份分装（1 ml/份）后，-20℃保存。
■ 组份浓度24 mg/ml IPTG■ 配制量50 ml■ 配制方法 1. 称量1.2 g IPTG 置于50 ml 离心管中。
2. 加入40 ml 灭菌水，充分混合溶解后，定容至50 ml。
3. 用0.22 μm 滤器过滤除菌。
4. 小份分装（1 ml/份）后，-20℃保存。
■ 组份浓度20 mg/ml X-Gal■ 配制量50 ml■ 配制方法 1. 称量1 g X-Gal 置于50 ml 离心管中。
2. 加入40 ml DMF（二甲基甲酰胺），充分混合溶解后，定容至50 ml。
3. 小份分装（1 ml/份）后，-20℃避光保存。
■ 组份浓度1%（W/V）Tryptone，0.5%（W/V）Yeast Extract，1%（W/V）NaCl■ 配制量 1 L■ 配制方法 1. 称量下列试剂，置于1 L 烧杯中。
Tryptone 10 gYeast Extract 5 gNaCl 10 g2. 加入约800 ml 的去离子水，充分搅拌溶解。
3. 滴加5 N NaOH（约0.2 ml），调节pH 值至7.0。
4. 加去离子水将培养基定容至1 L。
5. 高温高压灭菌后，4℃保存。
TB 培养基0.5%（W/V）Yeast Extract1%（W/V）NaCl0.1 mg/ml Ampicillin■ 配制量 1 L■ 配制方法 1. 称取下列试剂，置于1 L 烧杯中。
LB培养基怎样配制
LB培养基怎样配制之袁州冬雪创作LB一般被诠释为Luria-Bertani，然而根据其发明人贝尔塔尼(Giuseppe Bertani)的说法，这个名字来历于英语lysogeny broth，即溶菌肉汤.LB培养基是近些年来用于培养基因工程受体菌(大肠杆菌)的常常使用培养基之一.LB培养基是一种应用最广泛和最普通的细菌基础培养基，有时又称普通培养基，含有酵母提取物、胰化蛋白胨和NaCl.酵母提取物：酵母经破壁后将其中蛋白质、核酸、维生素等抽提，再经生物酶解的富含小分子的氨基酸、肽、核苷酸、维生素等天然活性成分的淡黄色粉末，其中氨基酸含量30%以上，总蛋白50%以上，核苷酸10%以上，广泛用作生物培养基和食品调味品制造原料.胰化蛋白胨：一种优质蛋白胨，是以新鲜牛肉和牛骨经胰酶消化，稀释干燥而成的白色粉末，含有丰富的氮源、氨基酸等.酵母提取物为微生物提供碳源、动力、磷酸盐、生长因子、维生素等;蛋白胨主要提供氮源;NaCl主要提供微生物生长环境(如渗透压)，其次是提供无机盐.在配制固体培养基时还要加入一定量琼脂作凝结剂.琼脂在常常使用浓度下96℃时溶化，一般实际应用时在沸水浴中或垫以石棉网直接煮沸溶化.琼脂在40℃时凝结，通常不被微生物分解操纵.固体培养基中琼脂的含量根据琼脂的质量和气温的分歧而有所分歧.由于这种培养基多用于培养细菌，因此，要用稀酸或稀碱将其pH调至中性或微碱性，以利于细菌的生长繁殖.LB培养基配方(每升)酵母提取物 5g胰化蛋白胨 10g氯化钠 10gNaOH调pH至7.0，121℃、20min高压灭菌.LB固体培养基LB培养基 1L琼脂粉 15gNaOH调pH至7.0，121℃、20min高压灭菌.有时需在培养基中添加抗生素，琼脂凝结点为40℃，所以添加抗生素最好在50～55℃.LB培养基用途：用于一般细菌培养，特别用于分子生物学试验中大肠杆菌的保管和培养.LB培养基使用原理：蛋白胨、酵母膏粉提供氮源、维生素和生长因子;氯化钠维持平衡的渗透压;葡萄糖提供碳源;琼脂是培养基的凝结剂.LB培养基配制方法配制每升培养基，应该在950 ml去液态lb培养基离子水中加入：胰化蛋白胨10g 酵母提取物5g NaCl 10g 摇动容器直至溶质溶解.用5mol/LNaOH调pH至7.0.用去离子水定容至1L.在15psi高压下蒸汽灭菌20min.2.抗生素的加入：高压灭菌后，将融化的LB固体培养基置与55℃的水浴中，待培养基温度降到55℃时(手可触摸)加入抗生素，以免温度过高导致抗生素失效，并充分摇匀.3.倒板：一般10ml倒1个板子.培养基倒入培养皿后，打开盖子，在紫外下照10-15分钟.4.保管：用封口胶封边，并倒置放于4℃保管，一个月内使用. 配400ml的话成分按比例减少就好了，pH还是要按规定的.。
LB培养基怎样配制
LB培养基怎样配制LB一般被解释为Luria-Bertani，然而根据其发明人贝尔塔尼(Giuseppe Bertani)的说法，这个名字来源于英语lysogeny broth，即溶菌肉汤。
LB培养基是近年来用于培养基因工程受体菌(大肠杆菌)的常用培养基之一。
LB培养基是一种应用最广泛和最普通的细菌基础培养基，有时又称普通培养基，含有酵母提取物、胰化蛋白胨和NaCl。
酵母提取物：酵母经破壁后将其中蛋白质、核酸、维生素等抽提，再经生物酶解的富含小分子的氨基酸、肽、核苷酸、维生素等天然活性成分的淡黄色粉末，其中氨基酸含量30%以上，总蛋白50%以上，核苷酸10%以上，广泛用作生物培养基和食品调味品制造原料。
胰化蛋白胨：一种优质蛋白胨，是以新鲜牛肉和牛骨经胰酶消化，浓缩干燥而成的白色粉末，含有丰富的氮源、氨基酸等。
酵母提取物为微生物提供碳源、能源、磷酸盐、生长因子、维生素等;蛋白胨主要提供氮源;NaCl主要提供微生物生长环境(如渗透压)，其次是提供无机盐。
在配制固体培养基时还要加入一定量琼脂作凝固剂。
琼脂在常用浓度下96℃时溶化，一般实际应用时在沸水浴中或垫以石棉网直接煮沸溶化。
琼脂在40℃时凝固，通常不被微生物分解利用。
固体培养基中琼脂的含量根据琼脂的质量和气温的不同而有所不同。
由于这种培养基多用于培养细菌，因此，要用稀酸或稀碱将其pH调至中性或微碱性，以利于细菌的生长繁殖。
LB培养基配方(每升)酵母提取物 5g胰化蛋白胨 10g氯化钠 10gNaOH调pH至7.0，121℃、20min高压灭菌。
LB固体培养基LB培养基 1L琼脂粉 15gNaOH调pH至7.0，121℃、20min高压灭菌。
有时需在培养基中添加抗生素，琼脂凝固点为40℃，所以添加抗生素最好在50～55℃。
LB培养基用途：用于一般细菌培养，特别用于分子生物学试验中大肠杆菌的保存和培养。
LB培养基使用原理：蛋白胨、酵母膏粉提供氮源、维生素和生长因子;氯化钠维持均衡的渗透压;葡萄糖提供碳源;琼脂是培养基的凝固剂。
lb培养基配方
lb培养基配方LB培养基是由Bertani于1951年开发的一种常用的培养基。
它是一种富含营养物质的培养基，适用于多种细菌的生长和培养。
LB培养基常被用于细菌的培养和研究中，提供了细菌生长所需的营养物质和能量来源。
下面是LB培养基的配方和制备方法。
配方如下：1. 十氯酸钾（KClO₃）：0.05 g/L2. 酵母浸粉（Yeast extract）：5 g/L3. 蛋白胨（Peptone）：10 g/L4. 氯化钠（NaCl）：10 g/L5. 水：适量制备方法：1. 将酵母浸粉、蛋白胨和氯化钠加入适量的水中，搅拌溶解。
2. 加入十氯酸钾，继续搅拌混合。
3. 将溶液加热至沸腾，然后冷却至室温。
4. 调整溶液的pH值为7.0（如果需要）。
5. 用适当的容器（如试管或烧杯）装载培养基，然后用自动灭菌器（如高压灭菌器）进行灭菌。
注意事项：1. 在制备培养基时，要注意实验室卫生和操作规范，避免污染和交叉感染。
2. 使用无菌的工具和容器，避免微生物的污染。
3. 制备后的培养基应保持在适当的温度和环境条件下，以确保细菌的生长。
4. 若长时间存储，建议将培养基分装于适当的容器中，并密封保存在低温（如4℃）的冰箱中。
总结：LB培养基是一种简单易制备、适用范围广的细菌培养基，提供了细菌所需的营养物质和环境。
其配方简单，制备方法方便，常被广泛应用于生物学研究和实验室中的细菌培养。
请注意，以上为LB培养基的一般配方和制备方法，具体使用时还需根据实验需要进行调整和优化。
同时，个人在实验室操作时应遵循相关的实验安全规范和操作规程，确保实验的顺利进行。
lb培养基的配置流程
lb培养基的配置流程下载温馨提示:该文档是我店铺精心编制而成，希望大家下载以后，能够帮助大家解决实际的问题。
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以下是 LB 培养基的配置流程：一、实验材料1. 胰蛋白胨（Tryptone）2. 酵母提取物（Yeast Extract）3. NaCl4. 琼脂粉（Agar）5. 蒸馏水6. 1mol/L NaOH7. 1mol/L HCl8. 培养皿9. 三角瓶10. 移液器11. 电子天平12. 高压灭菌锅二、实验步骤1. 称量根据配方，称取所需量的胰蛋白胨、酵母提取物和NaCl，放入三角瓶中。
lb培养液的配制
如对您有帮助，请购买打赏，谢谢您！1．称量：准确称取各成分。
蛋白胨0.5g，酵母提取物0.25g，氯化钠0.5g，加水50ml。
配置LB固体培养基时还需加1g琼脂。
2．溶化：加热熔化，用蒸馏水定容到50mL。
配置LB固体培养基时还需加琼脂，整个过程不断用玻棒搅拌，目的是防止琼脂糊底而导致烧杯破裂。
3．调pH：用1mol/L NaOH溶液调节pH至偏碱性。
4．灭菌：在两个250ml的三角瓶中分别装入50ml LB液体培养基和50ml LB固体培养基，加上棉塞。
将培养皿用牛皮纸包好，放入灭菌锅内，1kg压力灭菌15min。
5．倒平板：灭菌后，待固体培养基冷却至60℃左右时在酒精灯火焰附近操作进行。
其过程是：①将灭过菌的培养皿放在火焰旁，右手拿装有培养基的三角瓶，左手拔出棉塞；②右手拿三角瓶，使三角瓶的瓶口迅速通过火焰；③用左手将培养皿打开一条稍大于三角瓶口的缝隙，右手将培养基倒入培养皿，立刻盖上皿盖；④待平板冷却凝固后，将平板倒过来放置。
倒过来放置的目的是防止培养基冷却过程中形成的水滴落到培养基表面。
向培养皿中转移已灭菌的培养基时，也不要把培养基沾在皿壁上。
否则，空气中杂菌会在这些粘附培养基上繁殖，并污染皿内培养基。
三、灭菌和消毒1．无菌技术：①对实验操作空间、操作者的衣着和手进行清洁和消毒；②将培养器皿、接种用具和培养基等器具进行灭菌；③为避免周围微生物污染，实验操作应在酒精灯火焰旁进行；④避免已灭菌处理的材料用具与周围的物品相接触。
2．消毒方法：①日常生活经常用到的是煮沸消毒法；②对一些不耐高温的液体，则使用巴氏消毒法；③对接种室、接种箱或超净工作台首先喷洒石炭酸或煤酚皂等溶液以增强消毒效果，然后使用紫外线进行物理消毒；④实验操作者的双手使用酒精进行消毒。
3．灭菌方法：①接种环、接种针、试管口等使用灼烧灭菌法；②培养基、无菌水等使用高压蒸汽灭菌法，所用器械是高压蒸汽灭菌锅；③表面灭菌和空气灭菌等使用紫外线灭菌法，所用器械是紫外灯。
LB培养基怎样配制
LB培养基怎样配制之五兆芳芳创作LB一般被解释为Luria-Bertani，然而按照其创造人贝尔塔尼(Giuseppe Bertani)的说法，这个名字来源于英语lysogeny broth，即溶菌肉汤.LB培养基是近年来用于培养基因工程受体菌(大肠杆菌)的经常使用培养基之一.LB培养基是一种应用最普遍和最普通的细菌根本培养基，有时又称普通培养基，含有酵母提取物、胰化蛋白胨和NaCl.酵母提取物：酵母经破壁后将其中蛋白质、核酸、维生素等抽提，再经生物酶解的富含小份子的氨基酸、肽、核苷酸、维生素等天然活性成分的淡黄色粉末，其中氨基酸含量30%以上，总蛋白50%以上，核苷酸10%以上，普遍用作生物培养基和食品调味品制造原料.胰化蛋白胨：一种优质蛋白胨，是以新鲜牛肉和牛骨经胰酶消化，浓缩枯燥而成的白色粉末，含有丰厚的氮源、氨基酸等.酵母提取物为微生物提供碳源、能源、磷酸盐、生长因子、维生素等;蛋白胨主要提供氮源;NaCl主要提供微生物生长情况(如渗透压)，其次是提供无机盐.在配制固体培养基时还要参加一定量琼脂作凝固剂.琼脂在经常使用浓度下96℃时溶化，一般实际应用时在滚水浴中或垫以石棉网直接煮沸溶化.琼脂在40℃时凝固，通常不被微生物分化利用.固体培养基中琼脂的含量按照琼脂的质量和蔼温的不合而有所不合.由于这种培养基多用于培养细菌，因此，要用稀酸或稀碱将其pH调至中性或微碱性，以利于细菌的生长繁衍.LB培养基配方(每升)酵母提取物 5g胰化蛋白胨 10g氯化钠 10gNaOH调pH至7.0，121℃、20min高压灭菌.LB固体培养基LB培养基 1L琼脂粉 15gNaOH调pH至7.0，121℃、20min高压灭菌.有时需在培养基中添加抗生素，琼脂凝固点为40℃，所以添加抗生素最好在50～55℃.LB培养基用途：用于一般细菌培养，特别用于份子生物学试验中大肠杆菌的保管和培养.LB培养基使用原理：蛋白胨、酵母膏粉提供氮源、维生素和生长因子;氯化钠维持均衡的渗透压;葡萄糖提供碳源;琼脂是培养基的凝固剂.LB培养基配制办法配制每升培养基，应该在950 ml去液态lb培养基离子水中参加：胰化蛋白胨10g 酵母提取物5g NaCl 10g 摇动容器直至溶质溶解.用5mol/LNaOH调pH至7.0.用去离子水定容至1L.在15psi高压下蒸汽灭菌20min.2.抗生素的参加：高压灭菌后，将融化的LB固体培养基置与55℃的水浴中，待培养基温度降到55℃时(手可触摸)参加抗生素，以免温度太高导致抗生素失效，并充分摇匀.3.倒板：一般10ml倒1个板子.培养基倒入培养皿后，打开盖子，在紫外下照10-15分钟.4.保管：用封口胶封边，并倒置放于4℃保管，一个月内使用. 配400ml的话成分按比例削减就行了，pH仍是要按规则的.。
LB培养基怎样配制
LB培养基怎样配制之马矢奏春创作LB一般被解释为Luria-Bertani, 然而根据其发明人贝尔塔尼(Giuseppe Bertani)的说法, 这个名字来源于英语lysogeny broth, 即溶菌肉汤.LB培养基是近年来用于培养基因工程受体菌(年夜肠杆菌)的经常使用培养基之一.LB培养基是一种应用最广泛和最普通的细菌基础培养基, 有时又称普通培养基, 含有酵母提取物、胰化卵白胨和NaCl.酵母提取物：酵母经破壁后将其中卵白质、核酸、维生素等抽提, 再经生物酶解的富含小分子的氨基酸、肽、核苷酸、维生素等天然活性成份的淡黄色粉末, 其中氨基酸含量30%以上, 总卵白50%以上, 核苷酸10%以上, 广泛用作生物培养基和食品调味品制造原料.胰化卵白胨：一种优质卵白胨, 是以新鲜牛肉和牛骨经胰酶消化, 浓缩干燥而成的白色粉末, 含有丰富的氮源、氨基酸等.酵母提取物为微生物提供碳源、能源、磷酸盐、生长因子、维生素等;卵白胨主要提供氮源;NaCl主要提供微生物生长环境(如渗透压), 其次是提供无机盐.在配制固体培养基时还要加入一定量琼脂作凝固剂.琼脂在经常使用浓度下96℃时溶化, 一般实际应用时在沸水浴中或垫以石棉网直接煮沸溶化.琼脂在40℃时凝固, 通常不被微生物分解利用.固体培养基中琼脂的含量根据琼脂的质量和气温的分歧而有所分歧.由于这种培养基多用于培养细菌, 因此, 要用稀酸或稀碱将其pH调至中性或微碱性, 以利于细菌的生长繁殖.LB培养基配方(每升)酵母提取物 5g胰化卵白胨 10g氯化钠 10gNaOH调pH至7.0, 121℃、20min高压灭菌.LB固体培养基LB培养基 1L琼脂粉 15gNaOH调pH至7.0, 121℃、20min高压灭菌.有时需在培养基中添加抗生素, 琼脂凝固点为40℃, 所以添加抗生素最好在50～55℃.LB培养基用途：用于一般细菌培养, 特别用于分子生物学试验中年夜肠杆菌的保管和培养.LB培养基使用原理：卵白胨、酵母膏粉提供氮源、维生素和生长因子;氯化钠维持均衡的渗透压;葡萄糖提供碳源;琼脂是培养基的凝固剂.LB培养基配制方法配制每升培养基, 应该在950 ml去液态lb培养基离子水中加入：胰化卵白胨10g 酵母提取物5g NaCl 10g 摇动容器直至溶质溶解.用5mol/LNaOH调pH至7.0.用去离子水定容至1L.在15psi高压下蒸汽灭菌20min.2.抗生素的加入：高压灭菌后, 将融化的LB固体培养基置与55℃的水浴中, 待培养基温度降到55℃时(手可触摸)加入抗生素, 以免温渡过高招致抗生素失效, 并充沛摇匀.3.倒板：一般10ml倒1个板子.培养基倒入培养皿后, 翻开盖子, 在紫外下照10-15分钟.4.保管：用封口胶封边, 并颠倒放于4℃保管, 一个月内使用. 配400ml的话成份按比例减少就行了, pH还是要按规定的.。
LB培养基怎样配制
LB培养基怎样配制LB一般被解释为Luria-Bertani，然而根据其发明人贝尔塔尼(Giuseppe Bertani)的说法，这个名字来源于英语lysogeny broth，即溶菌肉汤。
LB培养基是近年来用于培养基因工程受体菌(大肠杆菌)的常用培养基之一。
LB培养基是一种应用最广泛和最普通的细菌基础培养基，有时又称普通培养基，含有酵母提取物、胰化蛋白胨和NaCl。
酵母提取物：酵母经破壁后将其中蛋白质、核酸、维生素等抽提，再经生物酶解的富含小分子的氨基酸、肽、核苷酸、维生素等天然活性成分的淡黄色粉末，其中氨基酸含量30%以上，总蛋白50%以上，核苷酸10%以上，广泛用作生物培养基和食品调味品制造原料。
胰化蛋白胨：一种优质蛋白胨，是以新鲜牛肉和牛骨经胰酶消化，浓缩干燥而成的白色粉末，含有丰富的氮源、氨基酸等。
酵母提取物为微生物提供碳源、能源、磷酸盐、生长因子、维生素等;蛋白胨主要提供氮源;NaCl主要提供微生物生长环境(如渗透压)，其次是提供无机盐。
在配制固体培养基时还要加入一定量琼脂作凝固剂。
琼脂在常用浓度下96℃时溶化，一般实际应用时在沸水浴中或垫以石棉网直接煮沸溶化。
琼脂在40℃时凝固，通常不被微生物分解利用。
固体培养基中琼脂的含量根据琼脂的质量和气温的不同而有所不同。
由于这种培养基多用于培养细菌，因此，要用稀酸或稀碱将其pH调至中性或微碱性，以利于细菌的生长繁殖。
LB培养基配方(每升)酵母提取物 5g胰化蛋白胨 10g氯化钠 10gNaOH调pH至7.0，121℃、20min高压灭菌。
LB固体培养基LB培养基 1L琼脂粉 15gNaOH调pH至7.0，121℃、20min高压灭菌。
有时需在培养基中添加抗生素，琼脂凝固点为40℃，所以添加抗生素最好在50～55℃。
LB培养基用途：用于一般细菌培养，特别用于分子生物学试验中大肠杆菌的保存和培养。
LB培养基使用原理：蛋白胨、酵母膏粉提供氮源、维生素和生长因子;氯化钠维持均衡的渗透压;葡萄糖提供碳源;琼脂是培养基的凝固剂。
转染实验方法(全)
转染实验方法（全）转染实验方案1.lb培养基的配制：500ml（5皿+2锥形瓶）准备工作：500ml玻璃瓶1个，250ml玻璃瓶2个，500ml容量瓶一个，平皿5个称取：酵母金属粉末液5.0g蛋白胨10.0g氯化钠10.0g实验操作方式：混合后加去离子水（或注射用水）水400ml，待充分溶解后加水定容至500ml，取100ml做固体培养基用装入a瓶，余下装入500mlb瓶中（400ml/瓶）称取1.5g琼脂粉加入a瓶中另挑一瓶（c瓶）接100ml水（吸收氨苄西林用）将以上3瓶高压杀菌：121°c,30min挑氨苄西林一支：规格：1g/支加水于安瓶中溶解后，移入c瓶中，浓度：10mg/ml按照50μg/ml氨苄西林的浓度加到abc三瓶中a瓶：0.5ml（即为lb液态培养基）――僵硬型100μg/ml,世俗性型50μg/mlb瓶：2ml（即为lb液体培养基）将a瓶按20ml/平皿，分别移到5个平皿中，待冷却后即为固体培养基。
用膜封口放入4℃保存。
2.感受态转变与培育（top10）准备：37℃摇床，37℃烘箱，10cm培养皿（lb琼脂凝胶+氨苄=50mllb+0.75g琼脂+50μl氨苄），冰盒，42℃水浴,无菌牙签，氨苄溶液40~60μg/ml实验前：水浴调到42℃，soc培养液放入室温，lb提氨苄培养皿于37度烘箱中冷却半小时实验操作：1)将质粒较长时间Vergt后快速放进冰浴中2)冰上鞭叶top103)吸取1到10μl质粒加入top10中，轻轻敲打混匀（切记不可用移液枪混匀）。
剩余的质粒可储存于-20℃中4)冰上孵育top10离心管30min。
5)42℃水浴30s（精确），不要晃动离心管6)快速转至冰浴2-3min，重新加入250μl预演的soc溶液，确保过程无菌7)37℃来靠水平225rpm挥1h8)吸取200μl用三角耙铺板（最好同时做不同加入量的2个皿，la培养皿预热），余下溶液储存于4℃9)正置20min，倒置37℃培养过夜10)第二天抽出平皿，观测菌落，挑选很大菌落，用牙签挑取菌落放进对应的试管中，加入15μl氨苄西林（c瓶母液），最后加3mllb液体培养基，试管放架子上37℃摇4-6h（预培养）11)按照培养基：菌液=200ml：2ml展开转菌，余下菌液放进ep管中-20℃留存（衰退加时100μl菌液预培养）。
固体lb培养基的配方
固体lb培养基的配方固体LB（Luria-Bertani）培养基是一种常用的细菌培养基，用于培养大肠杆菌（Escherichia coli）以及其他革兰氏阴性菌。
LB培养基含有许多必需营养物质，如碳源、氮源、矿物质等，可以满足细菌的生长需求。
以下是一种常用的固体LB培养基的配方：1.碳源：- 葡萄糖（Glucose）：1%2.氮源：- 蛋白胨（Peptone）：1%蛋白胨是LB培养基的主要氮源，提供细菌生长所需的氨基酸和肽类物质。
3.矿物质：- 酵母浸膏（Yeast extract）：0.5%酵母浸膏富含多种维生素和矿物质，对细菌生长有促进作用。
4.pH调节剂：-氢氧化钠（NaOH）：将溶液调至pH7.0±0.2氢氧化钠用于调节LB培养基的酸碱度，使其适合细菌的生长。
5.凝固剂：- 琼脂（Agar）：1.5%琼脂用于增稠培养基，使其成为固体培养基，方便细菌营养体的生长。
制备过程：1.首先，将适量的葡萄糖、蛋白胨和酵母浸膏加入适量的去离子水中，充分溶解。
2.加入适量的琼脂，搅拌均匀。
3.将溶液倒入试管或培养皿中。
4.用自动调节pH的仪器或适量的氢氧化钠调节溶液的pH值为7.0±0.25.灭菌：将试管或培养皿用高压蒸汽灭菌锅或培养皿灭菌器进行高温高压灭菌，时间一般为15-20分钟。
6.灭菌后，可将LB固体培养基储存在冰箱中，温度一般设置在4℃，有效期为2周。
在使用固体LB培养基进行培养时，首先需要取少量的固体LB培养基，加入适量的去离子水中，使其变成液体LB培养基。
然后，在无菌条件下，将液体LB培养基倒入培养皿或试管中。
等到液体LB培养基凝固成固体后，将需要培养的细菌接种于LB固体培养基表面，培养条件一般为37℃，时间根据细菌的生长速度而定。
使用固体LB培养基的主要优点之一是可以用于检测细菌的菌落形态，因为固体培养基上细菌形成的菌落会有可见的外在特征。
此外，固体LB培养基还可以用于制备菌种库或保存细菌菌株。
生物学实验 LB培养基的配置
实验6 LB培养基的配置一、实验目的明确培养基配置原理通过对LB培养基的配置，掌握配置培养的一般方法二、实验原理LB培养基是一种应用最广泛和最普通的细菌基础培养基。
它含有酵母提取物、蛋白胨和NaCl。
其中酵母提取物为微生物提供碳源和能源，磷酸盐、蛋白胨主要提供氮源，而NaCl 提供无机盐。
在配制固体培养基时还要加入一定量琼脂作凝固剂。
琼脂在常用浓度下96℃时溶化，一般实际应用时在沸水浴中或下面垫以石棉网煮沸溶化，以免琼脂烧焦。
琼脂在40℃时凝固，通常不被微生物分解利用。
固体培养基中琼脂的含量根据琼脂的质量和气温的不同而有所不同。
由于这种培养基多用于培养细菌，因此，要用稀酸或稀碱将其pH调至中性或微碱性，以利于细菌的生长繁殖。
LB培养基的配方如下：酵母提取物5g 蛋白胨10gNaCl 5g 琼脂15～20g水1000mL pH 7.4～7.6三、实验设备试管，三角烧瓶，烧杯，量筒，玻棒，培养基分装器，天平，牛角匙，高压蒸汽灭菌锅，pH 试纸（pH 5.5～9.0），棉花，牛皮纸，记号笔，麻绳，纱布等。
四、实验试剂酵母提取物，蛋白胨，NaCl，琼脂；1mol/L NaOH，1mol/L HCl；五、操作步骤1．称量按培养基配方比例依次准确地称取酵母提取物、蛋白胨、NaCl放入烧杯中。
蛋白胨很易吸潮，在称取时动作要迅速。
另外，称药品时严防药品混杂，一把牛角匙用于一种药品，或称取一种药品后，洗净、擦干，再称取另一药品，瓶盖也不要盖错。
2．溶化在上述烧杯中可先加入少于所需要的水量，用玻棒搅匀，然后，在石棉网上加热使其溶解。
待药品完全溶解后，补充水分到所需的总体积。
如果配制固体培养基，将称好的琼脂放入已溶化的药品中，再加热溶化，在琼脂溶化的过程中，需不断搅拌，以防琼脂糊底使烧杯破裂。
最后补足所失的水分。
3．调pH在未调pH前，先用精密pH试纸测量培养基的原始pH值，如果pH偏酸，用滴管向培养基中逐滴加入1mol/L NaOH，边加边搅拌，并随时用pH试纸测其pH值，直至pH达7.6。
培养基的配制及消毒与灭菌及LB培养基的制备
液体分装分装高度以试管高度的1/4左右为宜。 固体分装分装试管，其装量不超过管高的1/5，灭菌后制成斜面，分装三角烧瓶的量以不超过三角烧瓶容积的一半为宜。 半固体分装试管一般以试管高度的1/3为宜，灭菌后垂直待凝。
分装
调pH
在未调pH前，先用精密pH试纸测量培养基的原始pH值，如果pH偏酸，用滴管向培养基中逐滴加入1mol/L NaOH，边加边搅拌，并随时用pH试纸测其pH值，直至pH达7.6。反之，则用1mol/L HCl进行调节。注意pH值不要调过头，以避免回调，否则，将会影响培养基内各离子的浓度。对于有些要求pH值较精确的微生物，其pH的调节可用酸度计进行（使用方法，可参考有关说明书）。
四、实验步骤
按培养基配方比例依次准确地称取酵母提取物、蛋白胨、NaCl放入烧杯中。蛋白胨很易吸潮，在称取时动作要迅速。另外，称药品时严防药品混杂，一把牛角匙用于一种药品，或称取一种药品后，洗净、擦干，再称取另一药品，瓶盖也不要盖错。
称量
在上述烧杯中可先加入少于所需要的水量，用玻棒搅匀，然后，在石棉网上加热使其溶解。待药品完全溶解后，补充水分到所需的总体积。如果配制固体培养基，将称好的琼脂放入已溶化的药品中，再加热溶化，在琼脂溶化的过程中，需不断搅拌，以防琼脂糊底使烧杯破裂。最后补足所失的水分。
按培养基的物理状态分类
固体培养基:在液体培养基中加入凝固剂即为固体培养基。实验用的凝固剂有琼脂、明胶和硅胶，后者用于配制自养微生物的固体培养基。对其他多数微生物来讲，以琼脂最为合适，一般加入1．5—2．5%即可凝固成固体。此培养基可供分离、鉴定、活菌计数、菌种保藏等用。 半固体培养基:在液体培养基中加入少量凝固剂即为半固体培养基，例如琼脂只需加入0．2—0．7%。常用作细菌动力检查和菌种保存、噬菌体制剂的制备等。 液体培养基:没有加琼脂，配好后成液体状态的培养基。常用于生理代谢的研究和工业发酵等。
通过对LB培养基的配制
释放出来的DNA在强碱性（NaOH）条件下发生变性。再用酸性乙
酸钾来中和，使溶液处于中性，质粒DNA将迅速复性，而基因组DNA 因分子较大，难以复性。 离心后，质粒DNA将在上清中，而基因组DNA则与细胞碎片一起沉 淀至离心管底部。通过这种方法即可将质粒DNA从细菌中提取出来。
配制：每升液体培养基，应在950ml蒸馏水中加入
胰蛋白胨 10g， 酵母提取物 容1L。 LB固体培养基：在液体培养基基础上调PH值、定容、分装后， 每升培养基加入15克琼脂。 灭菌：0.11MPa，121.5℃，20min灭菌。 5g，NaCl 10g。
摇动容器直至完全溶解，加入 5mol/L NaOH调节pH至7.4，定
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4. 高压蒸气灭菌锅的使用及注意事项
①首先将内层锅取出，再向外层锅内加入适量的水，使水 面与三角搁架相平为宜。切物忘记加水，同时加水量不 可过少，以防灭菌锅烧干而损坏加热棒或引起炸裂事故。 ②放入内层锅，并装入待灭菌物品。注意不要装得太挤， 以免妨碍蒸气流通而影响灭菌效果。三角瓶与试管口端 均不要与桶壁接触，以免冷凝水淋湿包口的纸而透入棉 塞。
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【操作步骤】
1．称量
按培养基配方比例依次准确地称取酵母提取物、蛋白胨、NaCl放 入烧杯中。蛋白胨很易吸潮，在称取时动作要迅速。另外，称药品时 严防药品混杂，一把牛角匙用于一种药品，或称取一种药品后，洗净、 擦干，再称取另一药品，瓶盖也不要盖错。
2．溶化
在上述烧杯中可先加入少于所需要的水量，用玻棒搅匀，然后， 在石棉网上加热使其溶解。待药品全溶解后，补充水分到所需的总体 积。如果配制固体培养基，将称好的琼脂放入已溶化的药品中，再加 热溶化，在琼脂溶化的过程中，需不断搅拌，以防琼脂糊底使烧杯破 裂。最后补足所失的水分。
分子操作基本技术实验报告LB培养基的配制和大肠杆菌的培养
实验一LB培养基的配制和大肠杆菌的培养第一部分理论知识一．生物工程所需的微生物学原理基因工程主要采用革兰氏阴性细菌作为宿主细胞表达系统。
下面着重讲述大肠杆菌。
1.大肠杆菌的一般特性大肠杆菌（Escherichia coli，简写为E.coli）属于革兰氏阴性细菌，大肠杆菌不仅能液体培养，也能在固体培养基上很好地生长。
在细菌培养过程中，有两方面的因素影响它的纯度：1.其它细菌造成的细菌污染。
因此，用于培养的所有药品、器皿必须消毒，全部过程应在无菌条件下操作；2.遗传的异质性。
遗传上的异质性发生在培养过程中原有细菌株系遗传成分的变异，导致原有标记性状的改变。
其原因可能是天然突变的结果；或是在由质粒携带标记性状的情况下，异质性可能来自细胞分裂过程中质粒的丢失或质粒的分离。
据目前所知，许多质粒以相当高的频率在寄主细胞分裂时发生分离，从而引起所带性状的变化。
2. 抗生素抗性抗生素阻止细菌生长往往有抑菌和杀菌两种方式。
抑菌就是指药物仅仅使细菌生长受阻而未直接引起细胞死亡；而杀菌是指药物引起细胞裂解或死亡。
一种抗生素抑菌或杀菌效果取决于细菌接触药物的条件。
例如，大肠杆菌接触低水平的四环素将会通过四环素与核糖体结合，影响细菌蛋白质的合成而最终抑制细胞生长。
然而，结合着四环素的核糖体是可恢复的，因为受抑制的细胞被稀释到无药物的培养基上，将会重新恢复正常细胞的生长。
这种抑制的可恢复性表明四环素正以抑菌的方式发挥功能。
当四环素浓度加大，阻止细菌声中的另一种方式变得明显而不可逆，亦即在高浓度下，四环素以杀菌方式发挥功能。
细菌有三种抗生素抗性的机制：（1）抗生素在细菌中作用的目标位置发生了变化。
例如蛋白质合成抑制剂链霉素的抗性通常是由于细菌合成了一种变化了的核糖体蛋白质，这种蛋白质不再与链霉素相连，因此阻止了链霉素的抑制行为；（2）组织药物进入细胞。
如对四环素的抗性是由于细菌合成了阻止四环素进入细胞的膜蛋白，因而四环素的穿透性大为减低所致；（3）改变或钝化药物。
LB培养基的制备
郑州鼎国生物用脂质体转染需要的试剂DMEM培养基链霉素/青霉素（双抗）FCS（小牛血清）PBS（磷酸盐缓冲溶液）胰酶/EDTA消化液转染试剂（TransFast）LB培养基是一种近年来用于培养基因工程受体菌（大肠杆菌）的常用培养基。
LB一般被解释为Luria-Bertani培养基，然而根据其发明人贝尔塔尼(Giuseppe Bertani)的说法，这个名字来源於英语的lysogeny broth，即溶菌肉汤。
蛋白胨10g，酵母粉5g，Nacl 10g,这个不管我在国内国外都是一样的。
LB培养基是一种应用最广泛和最普通的细菌基础培养基，有时又称为普通培养基。
它含有酵母提取物、蛋白胨和NaCl。
其中酵母提取物为微生物提供碳源和能源，磷酸盐、蛋白胨主要提供氮源，而NaCl提供无机盐。
在配制固体培养基时还要加入一定量琼脂作凝固剂。
琼脂在常用浓度下96℃时溶化，一般实际应用时在沸水浴中或下面垫以石棉网煮沸溶化，以免琼脂烧焦。
琼脂在40℃时凝固，通常不被微生物分解利用。
固体培养基中琼脂的含量根据琼脂的质量和气温的不同而有所不同。
由于这种培养基多用于培养细菌，因此，要用稀酸或稀碱将其pH调至中性或微碱性，以利于细菌的生长繁殖。
LB培养基的配方如下：酵母提取物 5g蛋白胨 10gNaCl 5g琼脂 15～20g水 1000mLpH 7.4～7.6三、器材酵母提取物，蛋白胨， NaCl，琼脂；1mol/L NaOH， 1mol/L HCl；试管，三角烧瓶，烧杯，量筒，玻棒，培养基分装器，天平，牛角匙，高压蒸汽灭菌锅，pH试纸（pH 5.5～9.0），棉花，牛皮纸，记号笔，麻绳，纱布等。
四、操作步骤1．称量按培养基配方比例依次准确地称取酵母提取物、蛋白胨、NaCl放入烧杯中。
蛋白胨很易吸潮，在称取时动作要迅速。
另外，称药品时严防药品混杂，一把牛角匙用于一种药品，或称取一种药品后，洗净、擦干，再称取另一药品，瓶盖也不要盖错。
LB配料
实验室常用培养基的配制方法Ampicillin (100mg/ml)IPTG (24mg/ml)X-Gal (20mg/ml)LB培养基■组份浓度100mg/ml Ampicillin■配制量50ml■配制方法 1.称量5g Ampicillin置于50ml离心管中。
2.加入40ml灭菌水，充分混合溶解后，定容至50ml。
3.用0.22μm滤器过滤除菌。
4.小份分装（1ml/份）后，-20℃保存。
■组份浓度24mg/ml IPTG■配制量50ml■配制方法 1.称量1.2g IPTG置于50ml离心管中。
2.加入40ml灭菌水，充分混合溶解后，定容至50ml。
3.用0.22μm滤器过滤除菌。
4.小份分装（1ml/份）后，-20℃保存。
■组份浓度20mg/ml X-Gal■配制量50ml■配制方法 1.称量1g X-Gal置于50ml离心管中。
2.加入40ml DMF（二甲基甲酰胺），充分混合溶解后，定容至50ml。
3.小份分装（1ml/份）后，-20℃避光保存。
■组份浓度1%（W/V）Tryptone，0.5%（W/V）Yeast Extract，1%（W/V）NaCl■配制量1L■配制方法 1.称量下列试剂，置于1L烧杯中。
Tryptone10gYeast Extract5gNaCl10g2.加入约800ml的去离子水，充分搅拌溶解。
3.滴加5N NaOH（约0.2ml），调节pH值至7.0。
4.加去离子水将培养基定容至1L。
5.高温高压灭菌后，4℃保存。
TB培养基0.5%（W/V）Yeast Extract1%（W/V）NaCl0.1mg/ml Ampicillin■配制量1L■配制方法 1.称取下列试剂，置于1L烧杯中。
Tryptone10gYeast Extract5gNaCl10g2.加入约800ml的去离子水，充分搅拌溶解。
3.滴加5N NaOH（约0.2ml），调节pH值至7.0。
实验2、 LB培养基制备及大肠杆菌的接种
四、实验方法
平板划线分离法 细菌的接种方法有很多种，如划线法、涂布法、倾注法、 斜面接种法、液体培养基接种法、螺旋接种法等。 平板划线分离法主要用于菌种分纯，获得单菌落。
五、实验步骤 培养基灭菌 制作平板 扩大培养 划线分离
LB液体培养基、LB固体培养基、培养皿高压灭 菌。 超净工作台中，将灭菌后冷却到60℃左右的LB 固体培养基倒入灭菌培养皿中，敞盖冷却，备 用。 将大肠杆菌接种到LB液体培养基中，于37℃摇 床中震荡培养12h。 以接种环取震荡培养后的菌液，在固体培养基 上划线，封口。培养皿倒置与37℃的恒温培养 箱中培养12~24h，观察划线末端的菌落生长情 况；用接种环挑取单菌落，用划线法接种于斜 面上，在37℃的恒温培养箱中培养24h。
1、大肠杆（Escherichia coli ）
特点：DH5α是一种经 诱变的菌株；缺乏DNA 修饰，即其自身DNA不会 被修饰；缺乏“免疫”机 制，不会对导入的外源 DNA进行切割；对青霉素 敏感。 用途：基因工程受体菌。
2、LB培养基
是微生物学实验中最常用的培养基，用于培养大肠杆菌 等细菌，其分为液态或是加入琼脂制成的固态培养基。加入 抗生素的 LB 培养基可用于筛选以大肠杆菌为宿主的克隆。 LB培养基的配方如下： 酵母提取物：5 g 蛋白胨： 10 g NaCl： 10 g 琼脂： 15～20 g 水： 1000 mL pH 7.0
原理：通过的菌种逐步稀释分散到培养基的表面。在数次划 线后，可以分离到由一个细胞繁殖而来的肉眼可见的子 细胞群体。
三.、实验器材
菌种：大肠杆菌 DH5ɑ 培养基：LB固体培养基 仪器材料：超净工作台，接种针，酒精灯，封口 条， 记号笔，恒温培养箱。
6. 注意保持无菌操作；
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实验LB培养基的配置
一、实验目的
明确培养基配置原理
通过对LB培养基的配置，掌握配置培养的一般方法
二、实验原理
LB培养基是一种应用最广泛和最普通的细菌基础培养基。
它含有酵母提取物、蛋白胨和NaCl。
其中酵母提取物为微生物提供碳源和能源，磷酸盐、蛋白胨主要提供氮源，而NaCl提供无机盐。
在配制固体培养基时还要加入一定量琼脂作凝固剂。
琼脂在常用浓度下96℃时溶化，一般实际应用时在沸水浴中或下面垫以石棉网煮沸溶化，以免琼脂烧焦。
琼脂在40℃时凝固，通常不被微生物分解利用。
固体培养基中琼脂的含量根据琼脂的质量和气温的不同而有所不同。
由于这种培养基多用于培养细菌，因此，要用稀酸或稀碱将其pH调至中性或微碱性，以利于细菌的生长繁殖。
LB培养基的配方如下：
酵母提取物5g 蛋白胨10g
NaCl 5g 琼脂15～20g
水1000mL pH 7.4～7.6
三、实验设备
试管，三角烧瓶，烧杯，量筒，玻棒，培养基分装器，天平，牛角匙，高压蒸汽灭菌锅，pH试纸（pH 5.5～9.0），棉花，牛皮纸，记号笔，
麻绳，纱布等。
四、实验试剂
酵母提取物，蛋白胨，NaCl，琼脂；
1mol/L NaOH，1mol/L HCl；
五、操作步骤
1．称量
按培养基配方比例依次准确地称取酵母提取物、蛋白胨、NaCl放入烧杯中。
蛋白胨很易吸潮，在称取时动作要迅速。
另外，称药品时严防药品混杂，一把牛角匙用于一种药品，或称取一种药品后，洗净、擦干，再称取另一药品，瓶盖也不要盖错。
2．溶化
在上述烧杯中可先加入少于所需要的水量，用玻棒搅匀，然后，在石棉网上加热使其溶解。
待药品完全溶解后，补充水分到所需的总体积。
如果配制固体培养基，将称好的琼脂放入已溶化的药品中，再加热溶化，在琼脂溶化的过程中，需不断搅拌，以防琼脂糊底使烧杯破裂。
最后补足所失的水分。
3．调pH
在未调pH前，先用精密pH试纸测量培养基的原始pH值，如果pH 偏酸，用滴管向培养基中逐滴加入1mol/L NaOH，边加边搅拌，并随时用pH试纸测其pH值，直至pH达7.6。
反之，则用1mol/L HCl 进行调节。
注意pH值不要调过头，以避免回调，否则，将会影响培养基内各离子的浓度。
对于有些要求pH值较精确的微生物，其pH的调节可用酸度计进行（使用方法，可参考有关说明书）。
4．分装
按实验要求，可将配制的培养基分装入试管内或三角烧瓶内。
分装过程中注意不要使培养基沾在管口或瓶口上，以免沾污棉塞而引起污染。
(1)液体分装分装高度以试管高度的1/4左右为宜。
(2)固体分装分装试管，其装量不超过管高的1/5，灭菌后制成斜面，分装三角烧瓶的量以不超过三角烧瓶容积的一半为宜。
(3)半固体分装试管一般以试管高度的1/3为宜，灭菌后垂直待凝。
5．加塞
培养基分装完毕后，在试管口或三角烧瓶口上塞上棉塞，以阻止外界微生物进入培养基内而造成污染，并保证有良好的通气性能。
6．包扎
加塞后，将全部试管用麻绳捆扎好，再在棉塞外包一层牛皮纸，以防止灭菌时冷凝水润湿棉塞，其外再用一道麻绳扎好。
用记号笔注明培养基名称、组别、日期。
三角烧瓶加塞后，外包牛皮纸，用麻绳以活结形式扎好，使用时容易解开，同样用记号笔注明培养基名称、组别、日期。
7．灭菌
将上述培养基以1.05kg/cm2（15磅/英寸2），121.3℃，20分钟高压蒸汽灭菌。
如因特殊情况不能及时灭菌，则应放入冰箱内暂存。
8．搁置斜面
将灭菌的试管培养基冷至50℃左右，将试管棉塞端搁在玻棒上，搁置的斜面长度以不超过试管总长的一半为宜。
9．无菌检查
将灭菌的培养基放入37℃的温室中培养24～48小时，以检查灭菌是否彻底。