细胞生物学技术-细胞微量元素含量测定
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细胞中微量元素含量测定
原子吸收光谱法测定细胞
中微量元素
原子吸收光谱分析
基本原理
基于从光源辐射出待测元素的特征谱线的光,通过试样蒸气时,被蒸气中待测元素的基态原子所吸收,根据特征谱线的光减弱的程度来测定试样中待测元素含量的方法。
共振线:在原子吸收光谱中能被基态原子吸收的谱线。2017/11/16
2017/11/16单光束原子吸收光谱仪示意图
高压电源
读数器
放大器光电倍增管单色器光源
原子化器
分光系统燃料气载气检测系统
试样
光源(空心阴极灯)工作原理示意图
A = log I0
I
= k N l
光的吸收定律
I0 —光源所发射的待测元素“共振线”的强度;
A —吸光度;
I —被火焰中待测元素吸收后的透光强度;
k —原子吸收系数;
N —蒸汽中基态原子的浓度;
l —“共振线”所通过的火焰长度;
A = k C
(原子吸收光谱进行定量分析的基本公式)
2017/11/16
原子吸收光谱仪
2017/11/16
原子吸收分光光度计
2017/11/16
2017/11/16
自动进样器
方法特点及应用
(1)干扰少准确度高
(2)仪器简单操作方便
(3)灵敏度高
(4)测定元素范围广
应用:痕量分析
冶金、地质、采矿、石油、化工、环境保护、医药卫生等
2017/11/16
实例
火焰原子吸收光谱法测定淋巴细胞中微量的铜和锌
1. 淋巴细胞的分离
抽取外用静脉血3.0 ml,以等渗氯化理溶液4׃1稀释后,以Ficoll分离液分离淋巴细胞,以转速2000 rpm,分离30 min。将分离的淋巴细胞层吸出,加4倍等渗氯化锂后以转速1500 rpm,离心分离10 min,弃去上清液,加1.0 ml 超纯水轻轻振摇1 min,即加高渗氯化锂1.0 ml,振摇1 min,再加等渗氯化锂,清洗3遍,每次离心10 min。用等渗氯化锂0.12 ml加入经离心沉淀的淋巴细胞中轻轻振摇,使其成为均匀的悬浮液,从中吸取0.02 ml计数,另吸出0.1 ml置于康氏管,加等量胃蛋白酶消化液置于37℃水浴,18 h后,加0.4%硝酸至2.0 ml标定,并按公式换算每个淋巴细胞的铜、锌浓度。
2. 标准加入法曲线制作
由于淋巴细胞内铜、锌的含量极低,且灵敏
度受到共存物的影响,使用标准加入法可以
对基体影响加以校正。即在等量同一样品中
加入标准溶液使铜浓度分别为0、0.1、0.2、0.5、1.0、2.0 mg/ml,绘制标准加入法曲线。线性方程Cu:Y=0.021X + 0.001,r=1.000;Zn:Y=0.100X + 0.004,r=0.9992。
3. 精密度
按上述方法步骤对同一份淋巴细胞样品进行8次平行试验,结果见表2。
4. 回收率
采用样品加标准测定其回收率,来验证方法的准确度。回收率见表3。
5.应用
采用上述方法对克山病区、非病区正常人及潜在、慢性克山病人淋巴细胞内铜、锌进行了调查,结果见下表6。
Pro-inflammatory effects and oxidative stress in lung macrophages and epithelial cells
induced by ambient particulate matter
Environmental Pollution. 2013
Fig. 1. Illustration of PM-induced intracellular and extracellular toxicological mechanisms in the lung.
Fig. 2. Experimental procedure for PM preparation and cell exposure.
ICP-MS
Fig. 3. Cell viability [%] of A549 and RAW264.7 cells during 0e96 h incubation with PM10 samples from urban traffic and rural sites. Each measuring point shows mean standard deviation of one experiment in triplicate. Statistically significant difference between exposed and unexposed cells (*) p < 0.01, (**) p < 0.001, (***) p < 0.0001.
Fig. 4. D total GSH content [nmol/106 cells] of A549 and RAW264.7 cells after 0e96 h incubation with urban traffic and rural PM10. The data described as D total GSH content (measured values without control values), below the x-axis the graphic shows the control values. Each bar shows mean
standard deviation of one experiment in triplicate. Statistically significant differences between exposed and unexposed cells (*) p < 0.01, (**) p < 0.001, (***) p < 0.0001.