虎杖中游离羟基蒽醌类成分的提取分离和鉴别

虎杖中游离羟基蒽醌类成分的提取分离和鉴别

虎杖为蓼科植物虎杖（Polygonumcus pidatum siedet Zucc）的根及根茎，别名阴阳莲，花斑竹。味苦、性微寒。能清热解毒、祛风利湿、利尿通淋、祛痰、止咳、通经等。主要用于湿热黄疸、风湿痹痛、淋浊带下、经闭、烫伤。

虎杖中含有较多的羟基蒽醌类成分及二苯乙烯类成分。其中主要有大黄素、大黄酸、大黄素-6-甲醚、大黄素-8-D-葡萄糖苷及白藜芦醇苷、β-谷甾醇和鞣质等。虎杖的主要药理作用为抗菌、抗病毒及镇咳平喘，常用来治疗急性炎症、烧烫伤、肝炎、气管炎等。

一、实验目的

1．掌握从虎杖中提取蒽醌类成分的一般方法；

2．掌握pH梯度法分离混合蒽醌成分的原理和操作技术；

3．了解蒽醌类成分的性质和检识方法。

二、仪器与试药

（一）仪器

RE-52旋转蒸发仪 SHB-循环水式多用真空泵分液漏斗（125mL）

HHS型电热恒温水浴锅玻璃仪器气流烘干器圆底烧瓶（500mL）

ZF-2型三用紫外仪电热恒温干燥箱移液管（10mL、5mL）

（二）试药

虎杖粗粉乙醇氯仿乙醚碳酸氢钠盐酸碳酸钠丙酮

氢氧化钠盐酸醋酸镁硅胶 CMC-Na 苯乙酸乙酯

石油醚（30-60℃）甲酸乙酯甲酸大黄素对照品浓氨水

三、主要成分的结构与性质

R 1 R 2

OH H 大黄素 H H 大黄酚

OCH 3 H 大黄素-6-甲醚

OCH 3 glu 大黄素-6-甲醚-8-D-葡萄糖苷

OH glu 大黄素-8-D-葡萄糖苷

R=H 白藜芦醇 R=glu 白藜芦醇葡萄糖苷

另外。虎杖叶、茎中含β-谷甾醇、鞣质、少量羟基蒽醌类化合物、有机酸、槲皮苷、异槲皮

O

O

OR 2OH

CH 3

R1

O

H OH

OR

苷、虎杖黄酮苷、扁蓄苷、金丝桃苷及芸苷等。

四、实验原理：

1．羟基醌类化合物及二苯乙烯类成分，均可溶于乙醇中，故可用乙醇将它们取出来。羟基蒽醌类易溶于乙醚和含水氯仿等弱极性溶剂，白藜芦醇苷在乙醚和含水氯仿中溶解度很小，利用它们对含水氯仿的溶解性差异使羟基蒽醌类与白藜芦醇苷分离；

2．利用各羟基蒽醌类结构的不同所表现的酸性不同，用pH梯度萃取法分离它们。

五、实验方法：

（一）提取

乙醇总提取物的制备：取虎杖粗粉50g，于500mL圆底烧瓶中回流，第一次加200mL乙醇回流30分钟，过滤，滤渣再加150mL乙醇，回流20分钟，过滤，合并两次乙醇提取液，减压回收乙醇至小体积，得浸膏。

（二）分离

1．亲脂性成分与亲水性成分的分离：

浸膏

30，30，20）

残渣

（含白藜芦醇苷等）50mL

洗液氯仿液

回收氯仿至5-10mL

趁热倒入蒸发皿中，放冷析晶

总游离蒽醌

2．总游离蒽醌分离（pH梯度萃取法）：

（1）强酸性成分：大黄酸的分离：

总游离蒽醌

加100mL乙醚溶解

乙醚液

30mL

滴加6moL盐酸调pH至2，析出沉淀，过滤

沉淀

沉淀

水洗沉淀至中性，抽干，干燥

大黄酸粗品

（2）中等酸性成分：大黄素的分离：

3次，每次30mL

乙醚液（B） 5%碳酸钠萃取液

滴加浓盐酸调pH2，析出沉淀，过滤

沉淀

水洗沉淀至中性，抽干，干燥

大黄素粗品

用丙酮、甲醇重结晶

大黄素纯品

（3）弱酸性成分:大黄酚、大黄素-6-甲醚的分离：

乙醚液（B）

3次，每次20mL

（中性成分）滴加浓盐酸调pH3，析出沉淀，过滤

沉淀

水洗沉淀至中性，抽干，干燥

大黄酚、大黄素-6-甲醚混合物粗品

（三）游离蒽醌的鉴别

1．化学检识：分别取大黄素、大黄酚等少许，用乙醚溶解，做如下反应：（1）碱液试验：取试液1mL，加20%NaOH数滴，观察颜色。

（2）醋酸镁反应：取试样1mL，加醋酸镁试剂数滴，观察颜色变化。

2．薄层鉴别：

吸附剂：青岛硅胶以0.4%CMC-Na溶液制板，105℃活化40分钟。

展开剂：（1）C6H6-EtOAc(8：2或97：3)；

（2）石油醚（30-60℃）-甲酸乙酯-甲酸（15：5：1）上层溶液。

对照品：大黄素对照品

显色剂：（1）氨蒸气熏；

（2）5%NaOH喷雾显色。

六、实验结果

1．记录大黄总蒽醌的提取方法。

2．记录总蒽醌的分离程序（包括溶剂用量），及各分离物粗品的薄层色谱鉴定检查结果（附色谱图）。

3．总结实验过程中遇到的问题和解决方法。

七、思考题

1．pH梯度法萃取的原理是什么？可用于哪些化学成分的分离？

2．写出各成分显色反应机理。