第二章 酶 答案
酶工程课后题答案.doc
第一章1.简述酶与一般催化剂的共性以及作为生物催化剂的特点共同点：只能催化热力学所允许的的化学反应，缩短达到化学平衡的时间，而不改变平衡点：反应前后酶本身没有质和量的改变：很少量就能发挥较大的催化作用：其作用机理都在于降低了反应的活化能。
酶作为生物催化剂的特点：1.极高的催化率；2.高度专一性；3.酶活的可调节性；酶的不稳定性。
5.酶失活的因素和机理。
酶失活的因素主要包括物理因素，化学因素和生物因素物理因素1热失活：热失活是由于热伸展作用使酶的反应基团和疏水区域暴露，促使蛋白质聚合。
2冷冻和脱水：很多变构酶在温度降低是会产生构象变化。
在冷冻过程中，溶质（酶和盐）随着水分子的结晶而被浓缩，引起酶微环境中的pH和离子强度的剧烈改变，很容易引起蛋白质的酸变性。
3.辐射作用：电离辐射和非电离辐射都会导致多肽链的断裂和酶活性丧失。
4.机械力作用：化学因素1.极端pH：极端pH远离蛋白质的等电点，酶蛋白相同电荷间的静电斥力会导致蛋白肽链伸展，埋藏在酶蛋白内部非电离残基发生电离，启动改变。
交联或破坏氨基酸的化学反应，结果引起不可逆失活。
极端pH也容易导致蛋白质水解。
2.氧化作用：酶分子中所含的带芳香族侧链的氨基酸以及Met, Cys等，与活性氧有极高的反应性，极易受到氧化攻击。
3.聚合作用：加热或高浓度电介质课破坏蛋白质胶体溶液的稳定性，促使蛋白质结构发生改变，分子间聚合并沉淀。
4.表面活性剂和变性剂：表面活性剂主要改变酶分子正常的折叠，暴露酶分子疏水内核的疏水基团，使之变性；变性剂与酶分子结合，改变其稳定性，使之发生变性。
生物因素微生物或蛋白水解酶的作用使酶分子被水解。
6.简述酶活力测定方法的原理直接测定法：有些酶促反应进行一段时间后，酶底物或产物的变量可直接检测。
间接测定法：有些酶促反应的底物或产物不易直接检测，一次必须与特定的化学试剂反应，形成稳定的可检测物。
酶偶联测定法：与间接测定法相类似，只是使用一指示酶，使第一酶的产物在指示酶的作用下转变成可测定的新产物。
第二章 酶1
三、酶活性的调节
影响酶促反应速度的因素包括： 底物浓度、酶浓度、pH、温度、抑制剂、激活剂等。
参与酶活性调控方式包括：
基因表达调控、激素、反馈抑制、蛋白酶激活、可逆共价修 饰、别构调节等。
（一）共价修饰
1.不可逆共价修饰：蛋白酶解激活
酶原与酶原的激活
有些酶在细胞内合成或初分泌时只是酶的无活性前体， 必须在一定条件下，这些酶的前体水解一个或几个特定的 肽键，致使构象发生改变，表现出酶的活性。这种无活性 酶的前体称为酶原（zymogen）。 酶原向酶的转化过程称为酶原的激活。酶原的激活实 际上是酶的活性中心形成或暴露的过程。
协同效应： 寡聚酶（几个亚基）中，每个亚基的一个结合部位， 一旦一个效应物结合以后，会引起（诱导）酶分子构 象变化，使得酶分子上的电子分布被改变， 结果是使 后面的配体对酶的亲和力发生相应的改变。 如果一个效应物结合以后，后面的配体更容易结合，则 为正协同效应。 如果一个效应物结合以后，面后的配体更难结合，则为 负协同效应。 但同促协同效应一般为正协同效应。
（一）不可逆抑制作用： 抑制剂与酶分子的必需基团共价结合引 起酶活性的抑制，且不能采用透析等简 单方法使酶活性恢复的抑制作用就是不 可逆抑制作用。 酶的 不可 逆抑制 作用包 括专一 性抑制 （如有机磷农药对胆碱酯酶的抑制）和 非专一性抑制（如路易士气对巯基酶的 抑制）两种。
（二）可逆抑制作用： 抑制剂以非共价键与酶分子可逆性 结合造成酶活性的抑制，且可采用 透析等简单方法去除抑制剂而使酶 活性完全恢复的抑制作用就是可逆 抑制作用。 可逆抑制作用包括竞争性、反竞争 性、和非竞争性抑制几种类型。
断裂或形成 酶活性中心外的必需基团：维持酶活性中心的空间构象
（三）酶促反应的特点与机制
酶工程习题(答案全)
第一章绪论一、名词解释1、酶: 是具有生物催化功能的生物大分子2、酶工程:酶的生产与应用的技术过程称为酶工程。
它是利用酶的催化作用进行物质转化的技术,是将酶学理论与化工技术、微生物技术结合而形成的新技术，是借助工程学手段利用酶或细胞、细胞器的特定功能提供产品的一门科学3、核酸类酶：为一类具有生物催化功能的核糖核酸分子。
它可以催化本身RNA 剪切或剪接作用，还可以催化其他RNA，DNA多糖，酯类等分子进行反应4、蛋白类酶：为一类具有生物催化功能的蛋白质分子，它只能催化其他分子进行反应。
5、酶的生产:是指通过人工操作获得所需酶的技术过程。
主要包括微生物发酵产酶，动植物培养产酶，酶提取和分离纯化等6、酶的改性是通过各种方法改进酶的催化特性的技术过程,主要包括酶分子的修饰，酶固定化,酶非水相催化等7、酶的应用：是通过酶的催化作用获得人们所需要的物质或者不良物质的技术过程,主要包括酶反应器的选择和设计以及酶在各领域的应用等。
8、酶的专一性:又称为特异性,是指酶在催化生化反应时对底物的选择性,即在一定条件下，一种酶只能催化一种或一类结构相似的底物进行某种类型反应的特性。
亦即酶只能催化某一类或某一种化学反应.9、酶的转换数：酶的转换数Kp。
又称为摩尔催化活性，是指每个酶分子每分钟催化底物转化的分子数二、填空题1、根据分子中起催化作用的主要组分的不同,酶可以分为_________和____________两大类。
2、核酸类酶分子中起催化作用的主要组分是__________,蛋白类酶分子中起催化作用的主要组分是________________.3、进行分子内催化作用的核酸类酶可以分为________________，_________________。
4、酶活力是_______________的量度指标，酶的比活力是_______________的量度指标，酶的转换数的主要组分是________________的度量指标。
基因工程(第二章答案)
第二章基因工程工具酶一、解释下列名词1.Restriction and modification（限制与修饰）宿主特异性地降解外源遗传物质（DNA）的现象称为限制。
外源遗传物质通过甲基化等作用避免宿主的限制作用称为修饰。
2. Matched ends(or cohesive end)（匹配末端或粘性末端）识别位点为回文对称结构的序列，经限制酶切割后，产生的相同的，互补的末端称为匹配粘端，亦即粘性末端3. Blunt ends平末端。
在回文对称轴上同时切割DNA 的两条链，产生的没有碱基突出的末端称为平末端。
4. Star activity星星活性。
在极端非标准条件下，限制酶能切割与识别序列相似的序列，这个改变的特殊性称星星活性。
5. Klenow fragment Klenow 片段。
Klenow DNA 聚合酶是E.coli DNA polymerase 经蛋白酶（枯草杆菌蛋白酶）裂解而从全酶中除去5'--3' 外切活性的多肽大片段，而聚合活性和3'--5' 外切活性不受影响。
6.Reverse transcriptase反转录酶。
即依赖于RNA 的DNA 聚合酶，它有5'--3' 合成DNA 活性，但是无3'--5' 外切活性。
7.Terminal transferase（末端转移酶）8.Ligase连接酶。
催化DNA 5' 磷酸基与3' 羟基之间形成磷酸二酯键，将两段核酸连接起来的酶。
9.T4 polynucleotide kinase（T4多聚核苷酸激酶）催化ATP 的γ-磷酸基转移至DNA 或RNA 的5' 末端。
10.Alkaline phosphatase（碱性磷酸酶）催化除去DNA 或RNA 5' 磷酸11.S1 nuclease Sl 核酸酶。
可降解单链DNA 或RNA ，产生带5' 磷酸的单核苷酸或寡核苷酸双链；对dsDNA ，dsRNA ，DNA:RNA 杂交体不敏感。
第2章反应作业答案
第2章均相反应动力学作业题答案2-1 一分批进行的均相酶反应，底物的初始浓度为3×10-5mol/L ，Km=1×10-3mol/L ，经过2min 后，底物转化了5%。
假定该反应符合M-M 方程,试问当该反应经过10min 、30min 和60min 时,该底物转化了多少？2-1 答案:。
，；，；，，时，，，），（，而，，，可视为一级反应，785.0X min 60t 537.0X min 30t 236.0X min 10t ,e 1X ,026.0295.0ln k %5X min 2t e 1X t k X 11lnX 1C C t k C C ln dt k C dC C k dtdC C k C K r r ,C K ,C K C r r S S S t 026.0S 1S t k S 1SS 0S S 1S0S t01C C S S S 1SS 1S m max S 0S m Sm Smax S 1S 0S======-==-===-==--===-=-==〉〉+=--⎰⎰2-2 某酶反应,其Km=0.01mol/L 。
为了求其最大反应速率r max 值，现通过实验测得该反应进行5min 时，底物已转化了10%，已知C S0=3.4×10-4mol/L ，并假定该反应可用M-M 方程表示。
试求： （1）最大反应速率r max 为多少？（2）反应15min 后，底物浓度为多少？2-2答案：。
）（，时，，，），（，而，，，可视为一级反应，L /mol 1048.2)271.01(104.3X 1C C ,271.0e 1e 1X minL /mol 101.201.0021.0K k r ,021.059.0ln k %10X min 5t e 1X t k X 11lnX 1C C t k C C ln dt k C dC C k dtdC C k C K r r ,C K ,C K C r r 44S 0S S 15021.0t 021.0S 4m 1max 1S t k S 1SS 0S S 1S0S t01CC S S S 1SS 1S m max S 0S m Sm Smax S 1S 0S --⨯----⨯=-⨯=-==-=-=⋅⨯=⨯===-===-==--===-=-==〉〉+=⎰⎰2-3试根据下列实验数据确定rmax 、Km和KI值，并说明该酶反应是属于竞争由图可得：(1/r max )×102=1，r max =100μmol/Lmin 。
酶工程习题集LLQ
第一章绪论【内容提要】1.重点介绍酶和酶工程的研究简史和发展概况；2.简要回顾酶催化特点、影响酶活性的因素、测定酶活力方法以及酶反应动力学。
【习题】一、名词解释酶工程；转换数；催化周期；比活力；酶活力；酶活国际单位；酶反应动力学异构酶变构酶核酶抗体酶竞争性抑制反竞争性抑制非竞争性抑制酶结合效率酶活力回收率固定化酶的相对酶活力二、填空1．酶是具有功能的生物大分子。
2．酶催化作用的专一性包括和。
3．影响酶催化作用的因素有、、、、、。
4．按照酶分子中起催化作用的主要组分不同可分为和。
5．分子内催化的R酶可分为和。
6．分子间催化的R酶可分为、、、、、。
7．固定化酶的活力测定方法主要有、和。
8．固定化酶的比活力一般用所具有的酶活力单位数来表示。
9．酶的生产方法主要有、和。
三、判断1．核酸类酶的作用底物均为核酸2．核酸类酶仅能作用于其他分子3．核酸类酶可以以DNA为底物4．酶的化学本质是蛋白质五、简答题1. 简述酶的研究简史。
2. 简述酶工程的发展概况。
3. 简要回答酶的催化特点。
4. 简要回答影响酶催化作用的因素。
5. 简要回答米氏方程的意义。
6. 简述酶工程的研究内容及主要任务。
答案：酶的生产与应用的技术过程称为酶工程，其主要内容包括酶的生产、分离纯化、酶的固定化、酶及固定化的反应器、酶和固定化酶的应用。
7. 举例说明酶活力的测定在酶的研究、生产和应用过程中的重要性。
酶活力是指在一定条件下，酶催化某一反应的反应速度（一般测初速度）。
酶促反应速度是指单位时间、单位体积中底物的减少量或产物的增加量。
单位：浓度/单位时间（2分）酶的活力单位（U）国际单位（IU单位）：在最适反应条件下，每分钟催化1umol底物转化为产物所需的酶量，称一个国际单位（IU），1 IU = 1umol /min国际单位（Katal, Kat单位）：在在最适反应条件下，每秒钟催化1mol底物转化为产物所需的酶量，称Kat单位。
1 Kat=60 X 106 IU酶活力的测定方法：分光光度法；荧光法；同位素法；电化学法。
(完整版)第二次酶学练习题-答案2007
第二章酶学练习题一、填空题1.酶促反应的特点为_____________ 、 _____________ _、________ ____、_______ ______。
条件温和高效率高专一性可调节2.酶活性的快速调节方式包括_________ 和_________ 。
酶原激活共价修饰调节3.全酶包括______________ 和______________ 。
酶蛋白辅助因子4.酶的结合部位决定酶_____________ ，而催化部位决定酶的______________ 。
专一性催化反应性质5.酶活性中心往往处于酶分子表面的______________ 中，形成区，从而使酶与底物之间的作用加强。
孔穴凹陷疏水6.在酶蛋白中既能作为质子供体又能作为质子受体的、最有效又最活泼的催化基团是。
组氨酸的咪唑基7.在胰凝乳蛋白酶的催化过程中，有质子从酶到底物的转移，此质子的供体是。
水8.胰凝乳蛋白酶活性中心的电荷转接系统是由、和三个氨基酸残基依赖氢键产生的。
Asp102、His57及Ser195 氢9.同一种酶有几种底物，就有个Km值，其中Km值最的底物，便为该酶的底物。
几小最适宜10．加入竞争性抑制剂，酶的最大反应速度会，Km值会。
不变减小11.一般别构酶分子结构中都包括部位和部位，其反应速度对底物浓度的曲线是曲线。
活性部位别构部位 S形12.测定酶活力时，底物浓度应，反应温度应选在，反应PH选在，反应时间应在反应的期进行。
过量适宜范围适宜的范围初13.表示酶量的多少常用表示。
酶活力单位14.在标准条件下，1mg酶在1min内转化了2umol底物，那么 mg酶代表1个酶活力单位。
0.515.酶原激活的本质是的形成和暴露的过程。
活性中心16.丙二酸是酶的抑制剂。
琥珀酸脱氢酶竞争性17.延胡索酸酶只对反丁烯二酸(延胡索酸)起催化作用，而对顺丁烯二酸则无作用，因而此酶具有专一性。
几何异构18.米氏方程为。
V= Vmax[S]/(Km+[S])19.酶能加速化学反应的主要原因是和结合形成了，使呈活化状态，从而了反应的活化能。
第二章 酶学基础考试
降低是由于酶分子数量的减少，每分子酶
的催化效力并无变化.
二．抑制程度的表示
一般用反应速度的变化来表示。若以不加抑 制剂时的反应速度为 Vo，加入抑制剂后的 反应速度为Vi，则酶的抑制程度有下列几 种表示方法：
二．抑制程度的表示
1． 相对活力分数（残余活力分数） a=Vi/Vo 2． 相对活力百分数（残余活力百分数） a%==Vi/Vo*100% 3． 抑制分数 指被抑制而失去活力的分数i=1-a=1-Vi/Vo 4． 抑制百分数 i%=(1-a)*100%==(1-Vi/Vo)*100% 通常所谓抑制率是指抑制分数或 抑制百分数。
与酶蛋白结合得比较松的小分子有机物。 与膜蛋白结合得紧密的小分子有机物。
金属激活剂 金属离子作为辅助因子。 酶的催化专一性主要决定于膜蛋白部分。辅因 子通常是作为电子、原子或某些化学基团的载 体。
单体酶、寡聚酶和多酶复合物
1.单体酶（monomeric enzyme)：仅有一条具有活性部位的 多肽链，全部参与水解反应。 2.寡聚酶 (oligomeric enzyme)：由几个或多个亚基组成， 亚基牢固地联在一起，单个亚基没有催化活性。亚基之间以 非共价键结合。 3.多酶复合物 (multienzyme system)：几个酶镶嵌而成的 复合物。这些酶催化将底物转化为产物的一系列顺序反应。
丙酮酸脱氢酶系（E.coli）：丙酮酸脱氢酶（EⅠ）、 硫辛酰转乙酰酶（EⅡ）和二氢硫辛酰脱氢酶（EⅢ）。 EⅠ EⅡ EⅢ
碱性
EⅠ
+ EⅡ EⅢ
脲
EⅡ
+ EⅢ
活性部位和必需基团
必需基团：这些基团若经化学修饰使其改变，则 酶的活性丧失。 活性部位：酶分子中直接与底物结合，并和酶 催化作用直接有关的部位。
第二章 分子克隆工具酶题目
第二章分子克隆工具酶一、选择题1.有关基因工程的叙述正确的是（）A.限制性内切酶只在获得目的基因时才用B.重组质粒的形成在细胞内完成C.质粒都可作运载体D.蛋白质的结构可为合成目的基因提供资料2.限制性内切酶EcoRⅠ在野生型的λ噬菌体DNA中有5个切点，Hind Ⅲ有7个切点。
调整这些酶切位点的数量，主要通过（）。
A.体内突变B.完全酶切后连接C.部分酶切D.先用甲基化酶修饰后再酶切二、填空题1.如果用限制性内切核酸酶切割双链DNA产生5‟突出的黏性末端，则可以用__________进行3‟末端标记。
如果用限制性内切核酸酶切割DNA产生的是3‟突出的黏性末端，可以用__________________ 进行3‟末端标记。
2.可用T4 DNA聚合酶进行平末端的DNA标记，因为这种酶具有____________和_______的活性。
三、判断题1. pBR327是在pBR322的基础上去掉了1089bp的片段，留下了ampR和tetR的完整片段。
pBR327比pBR322有更高的拷贝，每个细胞中含有30-45个拷贝。
同时pBR327具有接合能力，能直接转入其他细胞（）四、名词解释1. DNA聚合酶2. 限制性内切酶3. 甲基化酶4. T4-DNA连接酶5. 核酸酶6. Klenow酶7. T4 DNA聚合酶8. Taq DNA聚合酶9. 逆转录酶10. 同裂酶11. 核酶五、简答题1.限制性内切酶分为哪几大类，各有什么特点？2. DNA修饰酶主要有哪些，各有什么作用？3.简述Klenow聚合酶的用途。
4.比较E.coli DNA 连接酶和Taq DNA 连接酶的作用特点。
5.限制性内切酶I 的识别序列和切点是——GATCC G ↓，限制性内切酶II 的识别序列和切点是——GATC ↓。
在质粒上有酶I 的1个切点，在目的基因的两侧各有l 个酶II 的切点。
用上述两种酶分别切割质粒和含有目的基因的DNA 。
酶工程第二章复习题
第二章复习题1.酶促反应的初速度不受哪一个因素影响（D）A. 〔S〕B.〔E〕C. pHD. 时间E. 温度2. 关于米氏常数Km的说法，哪个是正确的？（D）A. 饱和底物浓度时的速度；B. 在一定酶浓度下，最大速度的一半；C. 饱和底物的浓度；D. 速度达最大速度半数时的底物浓度；E. 降低一半速度时的抑制剂浓度.3. 如果要求酶促反应v= Vmax*90%，则[S]应为Km的倍数是（B）A. 4.5；B. 9；C. 8；D. 5；E. 90.4. 酶的纯粹竞争性抑制剂具有下列哪种动力学效应（A）A. Vmax不变，Km增大；B. Vmax不变，Km减小；C. Vmax增大，Km不变；D. Vmax减小，Km不变；E. Vmax和Km都不变.5. 作为催化剂的酶分子，具有下列哪一种能量效应（B）A.增高反应活化能；B.降低反应活化能；C. 增高产物能量水平；D.降低产物能量水平；E.降低反应自由能.6. 下面关于酶的描述，哪一项不正确（A）A. 所有的蛋白质都是酶；B. 酶是生物催化剂；C. 酶是在细胞内合成的，但也可以在细胞外发挥催化功能；D. 酶具有专一性；E. 酶在强碱、强酸条件下会失活.7. 催化下列反应的酶属于哪一大类黄嘌呤+H2O+O2→尿酸+H2O2（C）A. 水解酶；B. 裂解酶；C. 氧化还原酶；D. 转移酶；E. 异构酶.8. 当[S]=4Km时，v= （D）A. Vmax；B. Vmax*4/3；C. Vmax*3/4；D. Vmax*4/5；E. Vmax*6/5.9. 下列哪一种抑制剂不是琥珀酸脱氢酶的竞争性抑制剂（E）A. 乙二酸；B. 丙二酸；C. 丁二酸；D. α-酮戊二酸；E. 碘乙酸.10. 下列哪一项不是Km值的功能（E）A. Km值是酶的特征性物理常数，可用于鉴定不同的酶；B. Km值可以表示酶与底物之间的亲和力，Km值越小，亲和力越大；C. Km值可以预见系列反应中哪一步是限速反应；D. 用Km值可以选择酶的最适底物；E. 比较Km值可以估计不同的酶促反应速度.11. 丙二酸对琥珀酸脱氢酶的影响是属于（D）A. 产物反馈抑制；B. 产物阻遏抑制；C. 非竞争性抑制D. 竞争性抑制；E. 不可逆抑制12. 酶的不可逆抑制的机制是由于抑制剂（B）A. 使酶蛋白变性；B. 与酶的催化中心以共价键结合；C. 与酶的必需基团结合；D. 与活性中心的次级键结合；E. 与酶表面的极性基团结合.13. 酶的高效率在于（D）A. 增加活化能；B. 降低反应物的能量水平；C. 增加反应物的能量水平；D. 降低活化能；E. 以上都不对.14. 酶促反应的初速度（A）A. 与[S]成正比；B. 与[S]无关；C. 与Km成正比；D. 与[I]成正比；E. 与温度成正比.15. 米氏常数在推导过程中引入了哪项假设（E）A. 酶浓度为底物浓度的一半；B. 由于ES的存在使底物初始浓度降低；C. 由于酶浓度很大，所以[E]基本不变；D. 忽略反应ES→E+S的存在；E. 由于P→0，所以不考虑反应E+P→ES的存在.16. 将米氏方程改为双倒数方程后（B）A. 1/v与1/[S]成反比；B. 以1/v对1/[S]作图，其横轴为1/[S]；C. v与[S]成正比；D. Km值在纵轴上；E. Vmax值在纵轴上.17. 竞争性抑制作用特点是指抑制剂（A）A. 与酶的底物竞争酶的活性中心；B. 与酶的产物竞争酶的活性中心；C. 与酶的底物竞争非必需基团；D. 与酶的底物竞争辅酶；E. 与其他抑制剂竞争酶的活性中心.18. 非竞争性抑制作用引起酶促反应动力学的变化是（C）A. Km基本不变，Vmax变大；B. Km减小，Vmax变小；C. Km不变，Vmax变小D. Km变大，Vmax不变；E. Km值和Vmax值都不变.19. 乳酸脱氢酶属于（A）A. 氧化还原酶类；B. 转移酶类；C. 水解酶类；D. 异构酶类；E. 裂合酶类.20. 关于酶的叙述哪项是正确的（C）A. 所有的蛋白质都是酶；B. 酶与一般催化剂相比催化效率高得多，但专一性不够；C. 酶活性的可调节控制性质具有重要意义；D. 所有具有催化作用的物质都是酶；E. 酶可以改变反应的平衡点.21. 一个简单的米氏酶促反应，当[S]远远小于Km时（C）A. 反应速度最大；B. 反应速度难以测定；C. 底物浓度与反应速度成正比；D. 增加酶浓度，反应速度显著变大；E. [S]增大，Km值也随之变大.22. 下列关于辅基的正确叙述是（C）A. 一种小肽，与酶蛋白结合紧密；B. 只决定酶的专一性，与化学基团传递无关；C. 一般不能用透析的方法与酶蛋白分开；D. 酶蛋白的某肽键C末端的几个氨基酸；E. 酶的活性中心内的氨基酸残基.23. 下列关于酶活性中心的正确叙述是（A）A. 所有的酶至少有一个活性中心；B. 所有酶的活性中心都是不带电荷的；C. 所有抑制剂都直接作用于活性中心；D. 酶的必需基团均存在于活性中心内；E. 提供酶活性中心上的必需基团的氨基酸在肽链上相距很近.24. 在下列pH对酶反应速度的影响作用的叙述中，正确的是（C）A. 所有酶的反应速度对pH的曲线都表现为钟罩形；B. 最适pH值是酶的特征常数；C. pH不仅影响酶蛋白的构象，还会影响底物的解离，从而影响ES复合物的形成与解离；D. 针对pH对酶反应速度的影响，测酶活力时只要严格调整pH为最适，而不需缓冲体系；E. 以上都对.25. 下列有关温度对酶反应速度的影响作用的叙述中，错误的是（C）A. 温度对酶促反应速度的影响不仅包括升高温度使速度加快，也同时会使酶逐步变性；B. 在一定的温度范围内，在最适温度时，酶反应速度最快；C. 最适温度是酶的特征常数；D. 最适温度不是一个固定值，而与酶作用时间长短有关；E. 一般植物酶的最适温度比动物酶的最适温度稍高.26. 关于酶的激活剂的叙述错误的是（B）A. 激活剂可能是无机离子、中等大小有机分子和具蛋白质性质的大分子物质；B. 激活剂对酶不具选择性；C. Mg2+是多种激酶及合成酶的激活剂；D. 作为辅助因子的金属离子不是酶的激活剂；E. 激活剂可使酶的活性提高.27. 关于酶的抑制剂的叙述正确的是（C）A. 酶的抑制剂中一部分是酶的变性剂；B. 酶的抑制剂只与活性中心上的基团结合；C. 酶的抑制剂均能使酶促反应速度下降；D. 酶的抑制剂一般是大分子物质；E. 酶的抑制剂都能竞争性地使酶的活性降低.28. 关于酶的抑制作用的叙述，正确的是（C）A. 可逆抑制作用是指加入大量底物后可解除抑制剂对酶活性的抑制；B. 不可逆抑制作用是指用化学手段无法消除的抑制作用；C. 非专一性不可逆抑制剂对酶活性的抑制作用可用于了解酶的必需基团的种类；D. 非竞争性抑制属于不可逆抑制作用；E. 可逆抑制作用与不可逆抑制作用的主要区别是提高底物浓度是否能够逆转抑制剂对酶活性的抑制.29. 米氏方程能很好地解释（C）A. 多酶体系反应过程的动力学过程;B. 多底物酶促反应过程的动力学过程;C. 单底物单产物酶促反应的动力学过程;D. 非酶促简单化学反应的动力学过程;E. 别构酶的酶促反应的动力学过程.30. 根据米氏方程，不符合[S]与Km关系的是（E）A. 当[S]>> Km时，反应速度与底物浓度无关，成零级反应；B. 当[S]远远小于Km时，反应速度与底物浓度成正比，反应呈一级反应；C. 当[S]= Km时，v=Vmax/2；D. 度量二者的单位是相同的；E. 当[S]=Km/3时，v=67%Vmax.。
第二章 酶促反应动力学习题
第三章 酶促反应动力学习题1．简述酶促反应的特征及其与化学反应、微生物反应的主要区别。
2．应用直线作图法（Lineweaver-Burk 法；Haneswoolf 法；Eadie-Hofstree 法和积分法），求米氏方程中的动力学参数和，并比较各种方法所得结果误差大小。
3．在pH 对酶促反应速率影响的研究中，试证明对任一底物浓度CS，产物生成速率 与pH 的相关性为一左右对称的钟形曲线。
4. 某酶促反应机理为若假定上述反应机理式中，，试推导其速率方程。
5．利用稳态法建立竞争性抑制动力学方程。
设酶促反应机制如下，式中I 为抑制剂，EI 为非活性复合物。
6. 许多酶催化水解反应的机制式为：整个反应分两个阶段进行，分别采用快速平衡法和稳态法建立反应动力学方程，均可写成如下形式：试比较采用上述两种方法所获得的反应方程中的和K m 与k1 、k2和k−1、有何关系，写出相关式子。
7.有人研究了不同温度对酶的稳定性与酶活力的影响，得到如图2-13 所示结果。
基于此，他得到结论是：该酶在50°C 以下是稳定的，并且最适反应温度为35°C。
这一结论正确与否，请说明。
（a）无底物存在时，保温10min 后残存活力。
（b）在0.5M 底物存在下,保温10min 后产物生成量8.一般对于同一种酶促反应，在进行连续反应时的实际操作温度比分批实验所求得的最适温度要低。
请从实际反应时间较长来说明，并说明原因。
9. 利用稳态法建立可逆酶促反应的动力学方程。
10.某种酶以游离酶形式进行酶促反应时所得动力学参数Km=0.06mol/L 和rm=10mol/(L..min)。
该酶在某种载体颗粒表面固定化后进行同一酶促反应，所得动力学参数Km’=0.10mol/L 和rm´=8mol/(L...min)。
求底物浓度为1mol/L时，该固定化酶的效率因子η 。
11．影响固定化酶促反应的主要因素有哪些？12.实验测得分配系数KP 分别为，试从概念上说明载体颗粒与反应液之间的固液界面处底物浓度的变化情况。
生物化学-第二章-酶
*有机磷农药：敌百虫、敌敌畏、乐果杀虫剂1059 等
（二）可逆抑制
抑制剂与酶蛋白通过非共价键可逆性结合，使 酶活性降低或消失。
可用透析或超滤方法将抑制剂除去。
竞争性抑制 非竞争性抑制 反竞争性抑制
① 竞争性抑制(Competitive inhibition)
➢抑制剂与底物结构相似，可与底物竞争酶的 活性中心，与酶形成可逆的EI复合物，减少 酶与底物结合的机会，从而抑制酶活性。
基团
其它
二、 酶原及其激活
酶原(zymogen)： ✓在细胞内合成和初分泌的无活性的酶的前体。
酶原激活： ✓在一定条件下，由无活性的酶原转变为有催 化活性的酶的过程，其实质是酶的活性中心 形成或暴露的过程。
生理意义：
✓可视为有机体对酶活性的一种特殊调节方式， 保证酶在需要时在适当的部位、适当的时间 发挥作用，避免在不需要时发挥活性而对组 织细胞造成损伤。酶原还可以视为酶的一种 贮存形式。
5、具有生物催化剂特征的核酶(ribozyme)其 化学本质是（ ）
A、蛋白质 B、RNA C、DNA D、糖蛋白
一、名词解释 1.酶 2.酶原 3.竞争性抑制剂 4.辅基/辅酶
二、填空题：
1.酶催化作用的特点是
、
、
、
。
2.影响酶促反应的因素有 、 、 、 、 。
三、问答题： 1.何谓酶原激活？试述酶原激活的机理及其生理意义。
➢抑制剂与变性剂的区别： ✓抑制剂对酶有一定的选择性，而变性剂 对酶没有选择性
➢抑制的类型：
不可逆抑制
竞争性抑制
可逆抑制 非竞争性抑制
反竞争性抑制
（一）不可逆抑制
➢抑制剂通常以共价键与酶蛋白活性中心上的 必需基团结合，使酶活性消失。
第二章 酶促反应动力学习题答案
第三章 酶促反应动力学习题答案1. 答：酶促反应特征：(1)反应条件温和（常温）；(2)高度的专一性；(3)反应效率高；(4) 反应过程易于控制。
三者主要区别：p262. 答：①Lineweaver-Burk 法：米氏方程可变形为以作图，将得一直线，直线截距为率为据此计算r max 和K m 。
此法由于采用两个独立变量物浓度很低时，反应速率也很低，取倒数，误差较大。
斜，底，②HanesWoolf 法：米氏方程可变形为作图，将得一直线，直线截距为，斜率为，据此计算r max 和K m 。
此法在底物浓度很低时误差较小。
③EadieHofstee 法：米氏方程可变形为将得一直线，直线截距为r max ，斜率为，据此计算r max 和K m 。
上述方法的共同点，是要从动力学实验中获取不同的C S 值和r 值。
而r 不能由试验直接取得，试验中能直接得到的是不同时间t 时的浓度C S 值（或C P 值）。
为此需要根据速率的定义式，在C S ～t 的关系曲线上求取相应各点切线的斜率，才能确定不同时间的反应速率r 。
这种求取动力学参数的方法又称之为微分法。
显然，用这种微分法作图求取反应速率会带来较大的误差。
④积分法米氏方程积分后可变形为作图，将得一直线，直线斜率为,截距为。
因此直接采用动力学实验中测得的时间t、底物浓度C S 数据作图，即可求取动力学参数值。
3.4.6．解：酶催化水解反应机制为采用稳态法推导反应动力学方程：7．答：（1）酶的稳定性受温度和时间的双重影响，其函数表达式为图2－11 清楚地表明了温度和时间对酶稳定性的双重影响。
在同一温度下，不同的保温时间残存酶活力有极大差异。
图（a）中不同温度下保温10min 后残余酶活力曲线只表明，在保温时间为10min时，酶在50°C 以下是稳定的，而并不能得出“酶在50°C 以下是稳定的”这一结论。
因为不同的保温时间必将对酶的稳定性产生影响。
酶工程智慧树知到答案章节测试2023年华南理工大学
第一章测试1.酶的国际命名采用四码编号法，如葡萄糖氧化酶的系统编号为［EC1.1.3.4］，下列说法正确的是（）。
A:第一个号码表示该酶属于６大类酶中的某一大类B:第三个号码表示属于亚类中的某一小类C:第四个号码表示这一具体的酶在该小类中的序号D:第二个号码表示该酶属于该大类中的某一亚类答案:ABCD2.催化反应通式A＋B＋ATP == AB＋ADP＋Pi（或AB＋AMP＋PPi）的酶属于（）。
A:异构酶B:氧化还原酶C:裂合酶D:合成酶答案:D3.核酸类酶是（）。
A:催化RNA进行剪接反应的一类酶B:由RNA组成的一类酶C:催化RNA进行水解反应的一类酶D:催化DNA进行水解反应的一类酶答案:B4.RNA剪切酶是（）。
A:催化其他RNA分子进行剪切反应的R酶B:催化本身RNA分子进行剪接反应的R酶C:催化其他RNA分子进行反应的酶D:催化本身RNA分子进行剪切反应的R酶答案:A5.酶的转换数是指（）。
A:每个酶分子每分钟催化底物转化为产物的分子数B:每个酶分子催化底物转化为产物的分子数C:每摩尔酶催化底物转化为产物的摩尔数D:酶催化底物转化成产物的数量答案:A6.催化两个化合物缩合成一个化合物的酶称为合成酶。
（）A:错B:对答案:A7.多糖剪接酶是催化多糖分子进行剪切和连接反应的核酸类酶。
（）A:对B:错答案:A8.酶活力的大小可以用一定条件下酶所催化的反应初速率表示。
（）A:错B:对答案:B9.酶的比活力是酶纯度的量度指标，是指在特定条件下，单位体积蛋白质或RNA所具有的酶活力单位数。
（）A:错B:对答案:A10.蛋白类酶只能催化其它分子进行反应，而核酸类酶却可以催化本身分子也可以催化其它分子进行反应。
（）A:对B:错答案:A第二章测试1.乳糖操纵子的主要调控方式（）A:CAP的正调控B:正、负调控机制不可能同时发挥作用C:以阻遏蛋白的负调控为主D:CAP拮抗阻遏蛋白的转录封闭作用答案:C2.原核细胞中识别基因转录起始点的是（）A:阻遏蛋白B:σ因子C:转录激活蛋白D:基础转录因子答案:B3.使乳糖操纵子实现高表达的条件是（）A:乳糖存在B:乳糖存在，葡萄糖缺乏C:乳糖缺乏，葡萄糖存在D:乳糖和葡萄糖均存答案:B4.下列哪项不属于真核生物基因的顺式作用元件（）A:启动子B:转录因子C:衰减子答案:B5.下面关于启动子的描述正确的是（）A:是DNA上的专一碱基顺序B:作为转录模板转录成RNAC:属于反式作用因子D:具有多聚U尾巴和回文结构答案:A6.基因调控可以发生在基因表达的连续步骤的任何一个步骤。
酶第二章酶作用基本原理第二节
3、酶制剂保存方法
（1）用饱和硫酸铵或NaCl溶液，4℃保存（如 酶活力下降，此法不行） （2）使用液氮冷冻后保存于低温冰箱。 （3）冻干法，先将酶制剂冻成冰块，然后在高 真空中将冰升华除去，剩下蛋白干粉。 （4）喷学研究可采用的实验方案
动力学实验方案 1、改变底物浓度的动力研究 2、改变底物结构的动力学研究 3、抑制剂动力学研究 4、改变pH条件动力学研究 5、前稳态动力学研究 预期解决的问题 含酶中间产物出现秩序 酶催化位点的特征 酶催化位点的特征 推测催化活性中心的组成 推测含酶中间产物
三个残基互相靠近，Ser伯醇基与His的咪 唑基以及Asp的β-COOH与His的咪唑基拉走， 结果使Ser195上的氧原子成为强烈的亲核基团， 易于供电子，这个系统叫电荷转接系统。
4、水解肽链的机理
• 胰凝乳蛋白酶水解多肽的过程分为两个阶段：
• （1）Ser195的氧原子对底物的羰基原子发起攻击， 形成一个不稳定的四面体过渡态，同时质子Ser195由 转移到His57。结果底物敏感键断裂，其中形成胺通过 氢键与His195的咪唑基连接，底物羰基部分酯化到 Ser195的羰基上。
根据“诱导契合”学说，酶在底物起反应前 后，酶活性中心原子或基团的构象发生变化，使之 与底和物互相契合，使底物分子在活性中心作“定 向”排布，使分子间反应近似分子内反应，同时为 分子轨道交叉提供了条件，使底物进入过渡态的熵 负值减少，反应活化能降低，从而大大提高了ES复合物进入过渡态的机率。
（二）、酶使底物产生形变和“电子张力”
• 活化态释放出一部分能量,调整分子中的一些组成,即 变为产物P,视为终态.
• 在没有催化剂的情况下,由初态到终态,要越过活化态 这个能障,常常需要很高的活化能,所以常需要加温、 加压或进行光照以增加能量，才能发生反应，在有催 化剂的情部下，因催化剂能降低反应的自由能，只要 较小的能量就可以使反应物进入活化态，成为活化分 子，所以和非催化反应相比，活化分子数大大增加， 从而加快了反应速度。
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模块二酶
一、选择题
1、酶与一般催化剂的主要区别是（ D ）
A．只促进热力学上允许进行的化学反应B．在化学反应前后，本身不发生变化C．能加速化学反应速度，不能改变平衡点D．特异性强，催化效率极高
2、关于酶的叙述哪项是正确的（ C ）
A．所有的酶都含有辅基或辅酶B．只能在体内起催化作用
C．大多数酶的化学本质是蛋白质D．能改变化学反应的平衡点
3、K m值可用来表示酶对底物的亲和力，两者之间的关系是（ A ）
A．K m值增大，亲和力减小 B．K m值增大，亲和力增大
C．K m值减小，亲和力减小 D．K m值增大或减小，亲和力均增大4、下列关于K m的叙述不正确的是（ D ）
A．最适底物K m最小B．K m与温度、pH有关
C．V=V max/2时的[S]= K m D．K m越大，酶与底物的亲和力越大5、下列符合图示含义的是（ B ）
A．随pH从5升高到7，酶的活性逐渐降低
B．随pH从5升高到7，酶的最适温度不变
C．温度从0～A变化过程中，酶的活性逐渐降低
D．该酶的最适pH为7
6、下列关于酶特性的叙述错误的是（ D ）
A．催化效率高 B．特异性强 C．作用条件温和D．都有辅因子参与7、下列有关酶的概念正确的是（D ）
A．所有的蛋白质都有酶活性B．其底物都是有机化合物
C．其催化活性都需要特异的辅助因子D．对底物都有专一性
8、酶能加速化学反应的进行是由于哪一种效应?（ C ）
A．向反应体系提供能量B．降低反应的自由能变化
C．降低反应的活化能D．改变反应平衡
9、全酶是指（ C ）
A．酶的辅助因子以外的部分
B．酶的无活性前体
C．一种需要辅助因子的酶，并已具备各种成分
D．一种酶-抑制剂复合物
10、下列关于酶的活性中心的叙述正确的是（ A ）
A．所有的酶都有活性中心 B．所有酶的活性中心都含有辅酶
C．酶的活性中心只具有催化功能 D．酶的活性中心只具有结合功能 11、K m值是指( A )
A．反应速度为最大速度一半时的底物浓度
B．反应速度为最大速度一半时的酶浓度
C．反应速度为最大速度一半时的温度
D．反应速度为最大速度一半时的抑制剂浓度
12、底物浓度达到饱和后，再增加底物浓度（ D ）
A．反应速度随底物浓度增加而加快 B．随着底物浓度的增加，酶逐渐失活C．形成酶一底物复合物增加D．反应速度不再增加
13、与酶的K m值大小有关的是（ B ）
A．酶浓度B．酶性质C．底物浓度D．酶作用时间14、某一酶促反应的速度为最大反应速度的80%时，K m等于（ C ）
A．8［S］B．1/2［S］C．1/4［S］D．4［S］
15、某一符合米氏方程的酶，当[S] = 2K m时，其反应速度V等于（ B ）
A．V max B．2/3V max C．3/2V max D．2V max
16、酶促反应速度与下列因素成正比（ C ）
A．温度B．pH值C．酶浓度D．底物浓度
二、填空题
1、K m值可以用来反映酶与底物亲和力的大小。
2、酶通过形成中间产物降低反应所需要的活化能，酶的特异性依赖于底物与酶之间的诱导契合效应。
3、定义酶活力单位时必须明确的三个因素是反应条件、反应时间和
反应量。
4、影响酶促反应速度的因素有酶浓度、底物浓度、反应pH 、
反应温度、激活剂和抑制剂等。
5、酶活性中心包括结合部位和催化部位。
6、无活性状态的酶的前身物称为酶原，在一定条件下转变成有活性酶的过程称激活，其实质是酶活性中心的形成和暴露过程。
7、酶的本质为蛋白质，其作用机理为降低活化能。
8、不同酶的K m不同，同一种酶有不同底物时，K m值不同。
9、酶所催化的反应称酶促反应，其中发生变化的物质称为底物，反应后得到的物质称为产物。
10、酶是由活细胞产生的对特异底物起高效催化作用的蛋白质。
11、酶活力反映酶的催化能力，比活力反映酶的纯度。
12、激活剂可以提高酶活力，抑制剂可以降低酶活力。
三、判断题
1、酶的催化活性会随pH的升高而增强。
×
2、酶的催化活性会随温度的升高呈现先增后减的变化。
√
3、比活力越大，酶的纯度越高。
√
4、酶只能改变化学反应的活化能而不能改变化学反应的平衡常数。
√
5、K m是酶的特征常数，只与酶的性质有关，与酶浓度无关。
√
6、K m是酶的特征常数，在任何条件下K m是定值。
×
7、K m是酶的特征常数，只与酶的性质有关，与酶的底物无关。
×
8、一种酶有几种底物就有几种K m值。
√
四、名词解释
酶：酶是由生物体活细胞产生的具有催化活性和高度特异性的特殊蛋白质。
酶活性中心：酶分子中能够直接与底物结合，并催化底物化学反应的部位称为酶活性中心。
酶原：不具有活性，必须经过激活才具有催化能力的酶的前体物质称为酶原。
酶原激活：从不具有活性的酶原转变为有活性的酶的过程称为酶原激活。
五、问答题、计算题
1、影响酶促反应速度的因素有哪些？如何影响？
影响酶促反应速度的因素包括酶浓度、底物浓度、反应体系温度、反应体系pH值、激活剂和抑制剂。
当酶浓度远远低于底物浓度时，随着酶浓度的增加，反应速度随之增加，两者呈线性正比关系；当底物浓度远远低于酶浓度时，随着底物浓度的增加，反应速度随之增加直至到达最大反应速度（定值），两者之间关系符合米氏方程；当反应体系温度增加，反应速度呈现先增后减的变化规律，其中在最适温度时反应速度最高；当反应体系pH为最适pH时反应速度最高，偏离最适pH反应速度下降；激活剂可提高反应速度，抑制剂可降低反应速度。
2、酶与无机催化剂比较有哪些特点?
与无机催化剂相比，酶具有极高的催化效率、对底物的高度选择性、反应条件温和、反应受调节和控制以及不稳定的特点。
3、新鲜采摘的玉米有甜味，这是由于玉米中含有大量糖。
贮存几天以后甜味减少，原因在于采摘后一天之内玉米中的游离糖约有一半转变为淀粉。
为了保持新鲜玉米的甜味，可把剥去皮的玉米浸在沸水中几分钟，再放入冷水中冷却，这种处理方法的生物化学基础是什么？
采摘后玉米组织中含有的游离糖在酶的作用下转变为淀粉，而淀粉是不具有甜味的，通过加热处理使酶失活，并迅速冷却使酶难以复性，因此无法催化淀粉合成，甜味得以保留。
4、当某一酶促反应的速度从最大速度的10%提高到90%时，底物浓度应增大多少倍？
当V=0.1Vmax时，根据米氏方程解得，[s] = Km/9
当V=0.9Vmax时，根据米氏方程解得，[s]' = 9Km
底物浓度增大的倍数为：[s]’/[s]= 9Km/(Km/9)=81
5、有1mg淀粉酶制剂，与20mL2%的淀粉溶液在最适条件下反应，10min后就与碘不起颜色反应，计算1mg酶制剂的酶活力。
（活力单位定义为最适条件下，1min分解1mg淀粉的酶量为1U）
1mg酶制剂10min分解的淀粉：20mL×2% = 0.4g
1mg酶制剂1min分解的淀粉：0.4g/10 = 0.04g = 40mg
1mg酶制剂的酶活力为40U
6、为了研究唾液淀粉酶的催化作用会受哪些因素的影响，某实验小组做了如下实验，分析后回答问题：
（1）试管1和2比较，说明___唾液淀粉酶可以催化淀粉水解__________。
（2）试管2和3比较，说明____唾液淀粉酶催化活性大小受温度的影响___________。
（3）试管__2_和__4___比较，说明唾液淀粉酶的催化作用要受pH值的影响。
（4）试管2滴加碘液后不变色的原因是____淀粉已经被水解___________。
7、1mg某酶制剂的活力为420U，酶活力单位定义为标准条件下，10min水解100μmol底物所需的酶量。
问：
（1）每mg酶制剂1h水解多少μmol底物？
1mg酶制剂10min可水解底物：420 × 100μmol = 42000μmol
1mg酶制剂1h可水解底物：42000 × 6 = 2.52×105μmol
（2）1mg酶制剂水解1mol底物需要多少分钟？
1mg酶制剂1min可水解底物：42000/10 = 4200μmol
1mg酶制剂水解1mol底物需要时间：1×106/4200 = 238min。