最新乙肝病毒DNA的实验室检测-精选PPT文档
合集下载
最新浅谈乙肝病毒检测ppt课件
地区的特点和情况，采取特殊政策和灵
④民族团结是实现民族平等的政治基础
A．①③
B．②④
C．①④
D．②③
37
【分析】题干主要反映了民族区域自治制度的优越 性及民族团结的重要性，②③正确且符合题意，故 选D项。①与题意不符，不选；民族平等是实现民 族团结的政治基础，④说法错误，不选。
答案 D
38
•
认为“民族区域自治就是少数民族
自己管理自己”
7.洗涤
洗涤液充分洗涤5次，洗涤完扣干（每次应保持30-60秒的浸 泡时间）
8.显色
每孔加入A、B底物50 μL，混匀，37℃暗置15分钟
9.终止
每孔加50 μL终止液50 μL，混匀
10.测定
酶标仪单波长450nm或双波长450/630nm测定各空OD值，记 录结果,30分钟内测定完成）
4.结果判定
民族区域自治制度已载入《中华人民共
和国宪法》，成为我国的一项基本政治
制度。坚持民族区域自治制度也是党和
政府坚持依法行事的体现。
31
•
我国民族区域自治制度的优越
性
•
（1）有利于维护国家统一和安全：
民族区域自治是以领土完整、国家统一为
前提和基础的，是国家的集中统一领导与
民族区域自治的有机结合。它增强了中华
自治法所规定的，涉及政治、经济、文化和
社会生活各个方面，但不同于特别行政区的
高度自治权。民族区域自治是以领土完整、
国家统一为前提和基础的。
30
•
④明确实行民族区域自治制度的
原因。首先，实行民族区域自治是适合
我国国情的必然选择，是由我国的历史
特点和现实情况决定的。其次，民族区
实验室检查——乙肝五项-PPT
- 既往感染恢复期
+ 既往感染或“窗口期”
- 既往感染或接种过疫苗
4
5
受试者入选标准
结果分析
HBsAg
无症状携带者
+
急性乙型肝炎
+
+
+
慢性乙型肝炎
-
HBV DNA定量检测
-
来区别稳定期或活动 -
期（检测标准） -
Hale Waihona Puke 抗-HBs+ + +
HBeAg
+ + -
抗-HBe
+ + + -
抗-HBc
+ + + + -
6
大三阳与小三阳区别
大三阳
小三阳
化验单检查 结果
DNA
HBsAg（+）HBeAg （+）
抗-HBc（+）
阳性
HBsAg（+）抗-HBe （+）
抗-HBc（+）
阴性
传染性
强
弱
乙肝病毒复 制
活跃
不活跃
演变
慢性肝炎 肝硬化、肝癌
7
预防及免疫
1.控制传染源、切断传播途径 2.人工主动免疫：
疫苗（血源性、基因工程-HBsAg) 3.人工被动免疫：
2
4.HBeAb-乙肝病毒e抗体：为病毒复制停止标志。传染性较弱，但并非 完全没有传染性。乙肝病毒感染后的恢复期或慢性感染者可以阳性。
5.HBcAb-乙肝病毒核心抗体：HBcAg是乙型肝炎病毒的核心抗原, 一般 存在于肝细胞内，不易检测, 因此乙肝两对半五项指标中不包括此项。 但只要体内有HBcAg就会产生抗-HBc。因此HBcAb提示体内存在 HBcAg，为曾经感染过或正在感染者都会出现的标志。核心抗体IgG是 新近感染或病毒复制和传染性的标志，急性乙肝、慢性乙肝、肝硬化等 均可以表现为阳性。核心抗体IgG是感染后就会产生的。
乙肝实验室检查课件
7.乙肝病毒的基因组最引人注目的一个特征就是它非常小， 而且乙肝病毒DNA的两链长短不一，长链完整，长度恒定， 为负链，短链是正链，长度可变，大概是长链的50％～80%。 表面抗原和核心抗原都是由Dane颗粒的DNA编码而来。
病理：（1）HBV抗原和抗体系统
1.HBsAg和抗-HBs
PreS1 PreS2
4.慢性化：特别是幼儿期感染，多为慢性化过程，长期携带 HBV，体内呈“免疫耐受”状态，不能将病毒清除，这个过 程可长达10-30年或更久，是重要的传染源
5.致癌性：HBV是肝癌的重要病因，约80％-90％的肝癌有乙 肝背景。癌变的原因是HBV的基因整合到肝细胞基因上，发 生突变，导致肝癌。
6.HBV的基因变异性：HBV是极度易变异的病毒之一，它的四 个基因组（S、C、P、X）均可变异，变异是病毒的特性
（2）HBeAg 和抗-HBe
e抗原(HBeAg)： 是可溶性蛋白质 只存在于血液中 是病毒复制和传染性的标志 e抗体(抗-HBe)： 对HBV感染有一定的保护作用 其出现标志着病毒复制减少、 传染性降低
5
1,Hepatitis B（vi3ri）on(HDBaVne的par三tic种le)形态
3.生化指标：血清ALT（丙氨酸转氨酶）活力升高，有黄疸者 血 清胆红素升高。
4.病原学检查 甲型：抗HAV－IgM阳性，即可确诊。 乙型：HBsAg阳性、HBeAg阳性、抗HBc－IgM阳性）或
HBVDNA阳性。 丙型：抗HCV-IgG、HCV-IgM阳性，HCV－RNA阳性。 丁型：抗HDV－IgM阳性或HDV－RNA阳性。 戊型：抗HEV－IgM阳性。 庚型：抗HGV－IgM阳性
2,secreted filament 3,secreted sphere
病理：（1）HBV抗原和抗体系统
1.HBsAg和抗-HBs
PreS1 PreS2
4.慢性化：特别是幼儿期感染，多为慢性化过程，长期携带 HBV，体内呈“免疫耐受”状态，不能将病毒清除，这个过 程可长达10-30年或更久，是重要的传染源
5.致癌性：HBV是肝癌的重要病因，约80％-90％的肝癌有乙 肝背景。癌变的原因是HBV的基因整合到肝细胞基因上，发 生突变，导致肝癌。
6.HBV的基因变异性：HBV是极度易变异的病毒之一，它的四 个基因组（S、C、P、X）均可变异，变异是病毒的特性
（2）HBeAg 和抗-HBe
e抗原(HBeAg)： 是可溶性蛋白质 只存在于血液中 是病毒复制和传染性的标志 e抗体(抗-HBe)： 对HBV感染有一定的保护作用 其出现标志着病毒复制减少、 传染性降低
5
1,Hepatitis B（vi3ri）on(HDBaVne的par三tic种le)形态
3.生化指标：血清ALT（丙氨酸转氨酶）活力升高，有黄疸者 血 清胆红素升高。
4.病原学检查 甲型：抗HAV－IgM阳性，即可确诊。 乙型：HBsAg阳性、HBeAg阳性、抗HBc－IgM阳性）或
HBVDNA阳性。 丙型：抗HCV-IgG、HCV-IgM阳性，HCV－RNA阳性。 丁型：抗HDV－IgM阳性或HDV－RNA阳性。 戊型：抗HEV－IgM阳性。 庚型：抗HGV－IgM阳性
2,secreted filament 3,secreted sphere
乙肝丙肝实验室检测及临床意义PPT课件
丙型肝炎抗体测定（ Anti-HCV）
血浆/血清/全血 250403014 20元 酶免
每天上午10：00前样本当天可出报告，10:00后样本第二天下午 出报告
HBV 血清学检测
HBV DNA检测
HBeAg
HCV RNA检测
HBV DNA 分子检测 HBV DNA 定量检测
HBV 耐药突变株检测
③ PCR检测结果与其它检测 项目不同，一般量值变化 在一个数量级内均视为没 有变化
乙型肝炎病毒(HBV)DNA检测意义
缩短“窗口期”，有利于感染的早期诊断
HBV感染后至血液中出现可检出的HBsAg或HBV特异抗体需要一定时间。
HBV DNA先于 HBsAg出现于外周
血循环中 实时荧光定量PCR检
HBeAg
HCV RNA检测
表面抗原 (HBsAg) e 抗原(HBeAg) 表面抗体(抗-HBs) e抗体(抗-HBe)
HBV血清学检测——乙肝两对半
+ 定性（qualitative） 判断阴阳性
+ 定量（quantitative） 单位：ng/ml、IU/ml、IU/L、PEIU/ml
定性-乙肝“两对半”
HBV DNA高精度检 全血、血清、血浆 促凝管 4℃ 测
每周一、周四10:30 前样本，15:00出报 告
每周四11:00前样本 ，当日16:30出报告
HCV RNA检测 全血、血清、血浆 促凝管 4h内送 每周三10:00前样本
至实验室
，15:00出报告
HBV耐药基因检测 全血、血清、血浆 促凝管 4℃
－
－
接种疫苗获得免疫力
相关检验项目详情
检验科（84005）
检测
乙肝病毒基因检测和基因型ppt课件
完整版ppt课件
21
•抗-HBe：
•意味着 HBV部分被清除或抑制，复制减少， 传染性降低, 但慢性肝炎, 肝硬化阳性率高
• e抗体和e抗原一般不同时存在，e抗原消失， e抗体产生。
• e抗体（+）说明患者曾出现过HBeAg
• 但对e抗体（+）者不可视为HBV复制平息。
完整版ppt课件
22
抗-HBc IgM ： 是诊断急性乙型肝炎和判断 病毒复制活跃的指标，并提示病人血液有 强传染性。抗-HBc IgM阳性也可见于慢性 活动性肝炎。
抗-HBc IgG ： 高滴度表明机体正感染HBV； 而低滴度抗-HBc IgG则是既往感染过HBV 的指标，具有流行病学的意义。 (非保护性抗体)
完整版ppt课件
23
乙型肝炎病毒血清标志物的综合评价
(1) (2) (3) (4) (5) ＋ － ＋ － ＋ 急性或慢性乙型肝炎，高传染性 ＋ － － － ＋ 急性、慢性乙型肝炎或慢性HBsAg携带者 ＋ － － ＋ ＋ 急性乙肝趋向恢复或慢性乙肝，弱传染性 － ＋ － － ＋ 急性HBV感染康复期或有既往感染史，有
完整版ppt课件
34
双标记探针: Taqman probes
5’
5’
3’
Excitation Excitation
RR
Q
3’
完整版ppt课件
3’
3’ 5’ Q
5’
35
完整版ppt课件
36
1. HBV DNA 检测结果与血清标志物的综合评价
⑴ 与HBsAg检测结果的关系 :
一般来说HBsAg阳性，HBV DNA测定常常阳性。在实践 中可能遇到的问题是HBsAg测定结果阴性，而HBV DNA测定 阳性, 其原因可能是因为:
乙型病毒性肝炎的实验室检查PPT课件
乙型病毒性肝炎的实验室检查
·
报告人：付红伟
天津医大总医院
1
检验中心
2011.1.21
·
我国HBV感染概况
一般人群HBsAg携带率高达7.18%；现有慢性HBV感染者 约9 300万人，占全世界的1/4；
其中慢性乙型病毒性肝炎患者超过 2 000万例，占全 世界慢性乙肝患者的1/3；
15岁以下儿童HBsAg携带率下降显著，1-4岁组仅为 0.96%；1~ 4岁组HBsAb阳性率由1992年15.75%升至 72.25%; 抗HBcAb阳性率由1992年30.08%降至3.76%；
HBV DNA 定量检测
病毒复制水平最可靠，最直接的证据，与传染性和疾病 进展密切相关；
主要用于HBV感染的判断，治疗适应症的选择及抗病毒疗 效的判断。
HBV基因分型
基因分型的必要性； 基因分型的主要方法；
HBV耐药突变的检测
23
慢性HBV感染治疗适应症的选择
·
HBeAg 阳性，HBV DNA 载量> 105 copies/ml, ALT > 2 ×ULN;
嗜肝DNA病毒的共同特点： 内含3~3.3kb松散环状、部分双链DNA基因组
3 及DNA聚合酶；病毒的复制需逆转录过程。
HBV抗原和抗体系统
·
1.HBsAg和抗-HBs
PreS1 PreS2
S
表面抗原(HBsAg)：
大分子蛋白
中分子蛋白 S蛋白
★HBV外膜糖蛋白=S+L+M蛋白
S蛋白：狭义的HBsAg指S蛋白。
16
Back
大三阳
vs
小三 阳
·
17
·
HBV血清学标志检测结果分析
·
报告人：付红伟
天津医大总医院
1
检验中心
2011.1.21
·
我国HBV感染概况
一般人群HBsAg携带率高达7.18%；现有慢性HBV感染者 约9 300万人，占全世界的1/4；
其中慢性乙型病毒性肝炎患者超过 2 000万例，占全 世界慢性乙肝患者的1/3；
15岁以下儿童HBsAg携带率下降显著，1-4岁组仅为 0.96%；1~ 4岁组HBsAb阳性率由1992年15.75%升至 72.25%; 抗HBcAb阳性率由1992年30.08%降至3.76%；
HBV DNA 定量检测
病毒复制水平最可靠，最直接的证据，与传染性和疾病 进展密切相关；
主要用于HBV感染的判断，治疗适应症的选择及抗病毒疗 效的判断。
HBV基因分型
基因分型的必要性； 基因分型的主要方法；
HBV耐药突变的检测
23
慢性HBV感染治疗适应症的选择
·
HBeAg 阳性，HBV DNA 载量> 105 copies/ml, ALT > 2 ×ULN;
嗜肝DNA病毒的共同特点： 内含3~3.3kb松散环状、部分双链DNA基因组
3 及DNA聚合酶；病毒的复制需逆转录过程。
HBV抗原和抗体系统
·
1.HBsAg和抗-HBs
PreS1 PreS2
S
表面抗原(HBsAg)：
大分子蛋白
中分子蛋白 S蛋白
★HBV外膜糖蛋白=S+L+M蛋白
S蛋白：狭义的HBsAg指S蛋白。
16
Back
大三阳
vs
小三 阳
·
17
·
HBV血清学标志检测结果分析
临床检验乙肝课件ppt
控制脂肪摄入
避免高脂肪食物，如油炸食品、肥肉 等，以降低脂肪肝的风险。
多摄入新鲜蔬菜和水果
提供丰富的维生素和矿物质，有助于 改善免疫功能。
运动指导
适量运动
乙肝患者应进行适量运动，如散 步、慢跑、瑜伽等，以增强体质
和免疫力。
避免剧烈运动
避免过度劳累和剧烈运动，以免加 重肝脏负担。
定期复查
在运动过程中，乙肝患者应定期进 行肝功能等指标的复查，以确保身 体状况良好。
VS
详细描述
乙肝两对半检测包括乙肝病毒表面抗原（ HBsAg）、表面抗体（HBsAb）、e抗原 （HBeAg）、e抗体（HBeAb）和核心 抗体（HBcAb）的检测。HBsAg阳性表 示感染了乙肝病毒，HBsAb阳性表示体 内产生了保护性抗体。HBeAg阳性表示 病毒复制活跃，传染性强，HBeAb阳性 则表示病毒复制减弱，传染性降低。 HBcAb阳性表示感染过乙肝病毒。
免疫调节剂
通过调节机体免疫功能，增强机体对乙肝病毒的清除能力。
新型抗病毒组合疗法
将直接抗病毒药物与免疫调节剂联合使用，提高治疗效果。
乙肝疫苗研究
新型疫苗研发
01
针对不同基因型和亚型的乙肝病毒，研发更广泛覆盖的疫苗。
加强疫苗接种
02
针对已接种过疫苗的人群，研究加强接种方案，提高免疫效果
。
疫苗接种策略优化
性传播的预防
正确使用安全套，避免多个性 伴侣和无保护性行为。
加强个人卫生
注意个人卫生，勤洗手、勤洗 澡、勤换衣，保持生活环境清
洁卫生。
4
乙肝患者生活指导
饮食指导
饮食原则
乙肝患者应遵循高蛋白、低脂肪、高 维生素、易消化的原则，确保摄入足 够的营养素。
基于乙肝病毒DNA检测技术的诊断课件
3
测序技术
测序技术可以帮助识别乙肝病毒DNA序列中的突变，从而更好地评估病毒的耐药性和致病性。
Hale Waihona Puke 检测结果解读阴性结果
阴性结果表示未检测到乙肝 病毒DNA，说明检测样本中 没有乙肝感染。
阳性结果
阳性结果表示检测到乙肝病 毒DNA，说明样本中存在乙 肝感染。
病毒载量
病毒载量是指血液中乙肝病 毒的数量，高载量可能说明 感染程度较重。
基于乙肝病毒DNA检测技 术的诊断课件
本课件旨在介绍基于乙肝病毒DNA检测技术的诊断方法，为大家详细解释乙 肝病毒检测的重要性以及相关方法和意义。
乙肝病毒检测的重要性
乙肝病毒检测是预防和控制乙肝传播的关键措施，早期检测可帮助避免病情 恶化和传染他人。
乙肝病毒的传播途径
乙肝病毒主要通过血液接触、性传播和母婴传播等途径传播，了解传播途径 可帮助预防和控制疾病的传播。
乙肝病毒DNA检测技术
乙肝病毒DNA检测技术是一种确诊乙肝感染的常用方法，通过检测乙肝病毒的DNA分子来确定感染情况。
乙肝病毒DNA检测方法
1
PC R （聚合酶链式反应）
PCR是一种快速高效的基因检测方法，可用于检测乙肝病毒DNA，并确定感染程度。
2
原位杂交
原位杂交是一种检测乙肝病毒DNA的特异性方法，通过与标记的探针结合来确定感染的位置。
乙肝病毒DNA检测的意义
1 早期诊断
乙肝病毒DNA检测可帮助早 期发现感染，提供及时治疗 和干预的机会。
2 疫情监测
乙肝病毒DNA检测可帮助监 测疫情和流行趋势，指导公 共卫生部门的干预措施。
3 治疗评估
乙肝病毒DNA检测可以评估患者对治疗的反应，指导治疗方案的调整。
实验十二乙型肝炎病毒标志物的检测.ppt
（二）实验材料
1、HBV标志物检测的试剂盒:可用于测定 抗原，也可用于测定抗体。在这种测定方 法中有3种必要的试剂：
①固相的抗原或抗体， ②酶标记的抗原或抗体， ③酶作用的底物。 2、待检血清 3、微量加样枪、塑料滴头、37℃水浴箱
（三）实验方法
1、双抗体夹心法
双抗体夹心法是检测抗原最常用的方法，操作步骤 如下：
（4）加底物：夹心式复合物中的酶催化底 物成为有色产物。根据颜色反应的程度进 行该抗原的定性或定量。
2、间接法测抗体
间接法是检测抗体最常用的方法，其原理 为利用酶标记的抗抗体以检测已与固相结 合的受检抗体，故称为间接法。操作步骤 如下：
（1）将特异性抗原与固相载体连接，形成 固相抗原：洗涤除去未结合的抗原及杂质。
（4）加底物显色：颜色深度代表标本中受检 抗体的量。
本法只要更换不同的固相抗原，可以用 一种酶标抗抗体检测各种与抗原相应的抗体。
间接法——测抗体
（四）应用
——乙肝病毒标志物的检测
1、乙肝病毒的形态结构
大球形颗粒
（ Dane颗粒，有感染性的完整颗粒）
HBV DNA DNAP
HBcAg （内衣壳蛋白）
（1）将特异性抗体与固相载体连接，形成固相抗 体：洗涤除去未结合的抗体及杂质。
（2）加受检标本：使之与固相抗体接触反应一段 时间，让标本中的抗原与固相载体上的抗体结合， 形成固相抗原复合物。洗涤除去其他未结合的物质。
（3）加酶标抗体：使固相免疫复合物上的 抗原与酶标抗体结合。彻底洗涤未结合的 酶标抗体。此时固相载体上带有的酶量与 标本中受检物质的量正相关。
+
-
+
-
-
-
-
+
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
HBeAg阳性慢性乙型肝炎 乙型肝炎肝硬化
正常 无炎症或仅有轻 度炎症 非活动性HBsAg 携带者
增高或者波动 中度或严重炎 症、肝纤维化
Hቤተ መጻሕፍቲ ባይዱeAg阴性 慢性乙型肝炎 乙型肝炎肝硬化
临床诊断
乙肝病毒的感染
慢性HBV感染分期及相关实验室检测指标
鲁凤民，庄辉，乙型肝炎实验室诊断研究进展 2009
HBV-DNA与临床
1、荧光定量PCR技术 2、乙肝病毒的感染 3、HBV-DNA与临床
荧光定量PCR技术
荧光定量PCR技术
• Polymerase chain reaction(PCR)，聚合酶链式反应，是 一种DNA的快速扩增技术。PCR技术通过两个短的称为引物 的DNA小片段和一种耐热酶（TaqDNA聚合酶）的作用，经
一般不存在于血循环中
HBcAb: 非保护性抗体，HBcAb-IgM
提示HBV处于复制状态
HBeAg：HBV复制及强感染性的指标 HBeAb：有一定的保护作用，预后良好
乙肝病毒的感染
（二） HBV-DNA与“两对半”
1. “两对半” ：机体的免疫反应状态；
FQ-PCR：检测的是HBV本身的遗传物质—DNA，是 病毒存在和复制的最可靠、最直接的指标。
处于复制状态，最准确的方法还是通过检测HBV
DNA来决定。
HBV DNA检测的临床意义
HBsAg和HBeAg均阳性而HBV DNA阴性？
●干扰素或拉米夫定等治疗后病毒复制受抑制。
●PCR所用引物相应的DNA序列发生突变，此引物与突变DNA不能配对结
合。 ●病毒DNA整合于宿主肝细胞染色体而血中游离HBV DNA很少或缺乏。
2. “携带者”、“大三阳”、“小三阳”等免疫学 指标不能 反应体内病毒复制水平与感染程度。 3. 血清学指标(－)不能排除HBV感染。
HBsAg(－) HBV-DNA(＋) HBeAg (－) HBV-DNA(＋)
乙肝病毒的感染
4. 也可能出现HBsAg(＋)，HBV-DNA(－)。
5.HBeAg阳性标本HBV DNA检出率90％左右
3’ 5’ 3’ 5’ 3’ 5’ 3’ 5’ 3’ 5’ 3’ 5’ 3’
5’
循环3
8个拷贝
3’ 3’
3’
3’
3’
荧光定量PCR原理
插入染料法 SYBR Green I
杂交探针法(最常用) TaqMan
TaqMan探针
3’ 5’ 5’ 3’
Primers
d.NTPs Taq酶
R
反应体系
Q
Probe
HBV DNA检测的临床意义
HBV DNA是HBV存在最直接的依据
HBV DNA是HBV复制的标志
HBV DNA是患者具有传染性的标志 HBV DNA对乙肝两对半起补充作用 HBV DNA是目前判断乙肝抗病毒药物疗效最敏感的指标 HBV DNA可检测出隐匿性慢性乙型肝炎
HBV DNA检测的临床意义
乙肝的治疗 目前尚无一种能迅速、直接杀死清除乙肝病毒的
药物，最好的抗病毒药物疗效也仅能达到50％左右。
目前国际医学界公认的治疗慢性乙肝有确切疗效的抗 病毒药物主要有两大类： 干扰素：重组人α -1b干扰素、α - 2a、 α -2b干扰素等。
核苷类似物：拉米夫定、阿德福韦。
乙肝的治疗
主要包括
、免疫调节、抗炎保肝、抗纤维化等
对于HBV
DNA≥105的患者应进行抗病毒治疗
过高温变性、低温退火、适温延伸三个步骤在3个小时内
反复循环25-30次，把特定的DNA片段扩增1000万倍。 • 每个PCR体系含4种主要成分：含有待扩增序列的DNA模板 、引物、TaqDNA聚合酶、脱氧核糖核酸三磷酸（dNTP）
荧光定量PCR技术
实时荧光定量PCR技术，是指在反应体系中加入 ，利用荧光信号积累实时检测整个PCR过程，通过 对PCR终产物的分析，最终实现对未知的起始
提供直接证据缩短“窗口期”
PCR检测
HBV HCV HIV
“窗口期”
56 70 22
核酸检测缩短的“窗口期”的天数
6-15 41-60 10-15
有利于献血员窗口期病毒核酸的筛查和早期诊断
HBV DNA检测的临床意义
调查表明并不是所有“大三阳”的病人都处于 HBV复制期，具有传染性；也不是所有“小三阳” 的病人HBV都无复制。因此，要准确知道HBV是否
模版进行定量分析的一种技术，是迄今对已知基因序列的
核酸测定中最灵敏的方法。
PCR 反应过程
3’ 5’ 5’ 3’
Primers
d.NTPs
Taq 酶
反应组分
变
性
3’
5’
5’
3’
退
火
3’
Taq Taq
3’
5’
延 重
伸 复
3’
3’ 3’ 5’ 3’ 5’ 3’ 3’
5’
循环2 4个拷贝
3’
3’
3’ 3’ 3’ 3’
Taq
l
R
Q
变
性
Q
5’
R
3’
退 火
R Q
5’
Taq
3’
1. 链取代 2. 水
R Q
5’
Taq
R
5’ 3’
解
Taq
5’
5’ 3’
3. 聚
合
l Taq
5’
R
5’ 3’
4. 检测荧光
乙肝病毒的感染
乙肝病毒的感染
（一）
乙型肝炎病毒结构及特点
HBsAg：是HBV感染的主要标志 HBsAb：保护性抗体 HBcAg：仅存于感染的肝细胞核内，
HBeAg与HBV DNA有着良好的相关性
乙肝病毒的感染 免疫耐受期 免疫清除期 非活动或低（ 非）复制期 再活动期
HBV DNA ALT 肝组织学
HBV DNA贯穿感染者的终生，是评价病毒复制的金标准
正常 无明显异常, 或 轻度炎症纤维化 慢性HBV携带者 增高或者波动 中度或严重炎症、纤 维化快速进展
正常 无炎症或仅有轻 度炎症 非活动性HBsAg 携带者
增高或者波动 中度或严重炎 症、肝纤维化
Hቤተ መጻሕፍቲ ባይዱeAg阴性 慢性乙型肝炎 乙型肝炎肝硬化
临床诊断
乙肝病毒的感染
慢性HBV感染分期及相关实验室检测指标
鲁凤民，庄辉，乙型肝炎实验室诊断研究进展 2009
HBV-DNA与临床
1、荧光定量PCR技术 2、乙肝病毒的感染 3、HBV-DNA与临床
荧光定量PCR技术
荧光定量PCR技术
• Polymerase chain reaction(PCR)，聚合酶链式反应，是 一种DNA的快速扩增技术。PCR技术通过两个短的称为引物 的DNA小片段和一种耐热酶（TaqDNA聚合酶）的作用，经
一般不存在于血循环中
HBcAb: 非保护性抗体，HBcAb-IgM
提示HBV处于复制状态
HBeAg：HBV复制及强感染性的指标 HBeAb：有一定的保护作用，预后良好
乙肝病毒的感染
（二） HBV-DNA与“两对半”
1. “两对半” ：机体的免疫反应状态；
FQ-PCR：检测的是HBV本身的遗传物质—DNA，是 病毒存在和复制的最可靠、最直接的指标。
处于复制状态，最准确的方法还是通过检测HBV
DNA来决定。
HBV DNA检测的临床意义
HBsAg和HBeAg均阳性而HBV DNA阴性？
●干扰素或拉米夫定等治疗后病毒复制受抑制。
●PCR所用引物相应的DNA序列发生突变，此引物与突变DNA不能配对结
合。 ●病毒DNA整合于宿主肝细胞染色体而血中游离HBV DNA很少或缺乏。
2. “携带者”、“大三阳”、“小三阳”等免疫学 指标不能 反应体内病毒复制水平与感染程度。 3. 血清学指标(－)不能排除HBV感染。
HBsAg(－) HBV-DNA(＋) HBeAg (－) HBV-DNA(＋)
乙肝病毒的感染
4. 也可能出现HBsAg(＋)，HBV-DNA(－)。
5.HBeAg阳性标本HBV DNA检出率90％左右
3’ 5’ 3’ 5’ 3’ 5’ 3’ 5’ 3’ 5’ 3’ 5’ 3’
5’
循环3
8个拷贝
3’ 3’
3’
3’
3’
荧光定量PCR原理
插入染料法 SYBR Green I
杂交探针法(最常用) TaqMan
TaqMan探针
3’ 5’ 5’ 3’
Primers
d.NTPs Taq酶
R
反应体系
Q
Probe
HBV DNA检测的临床意义
HBV DNA是HBV存在最直接的依据
HBV DNA是HBV复制的标志
HBV DNA是患者具有传染性的标志 HBV DNA对乙肝两对半起补充作用 HBV DNA是目前判断乙肝抗病毒药物疗效最敏感的指标 HBV DNA可检测出隐匿性慢性乙型肝炎
HBV DNA检测的临床意义
乙肝的治疗 目前尚无一种能迅速、直接杀死清除乙肝病毒的
药物，最好的抗病毒药物疗效也仅能达到50％左右。
目前国际医学界公认的治疗慢性乙肝有确切疗效的抗 病毒药物主要有两大类： 干扰素：重组人α -1b干扰素、α - 2a、 α -2b干扰素等。
核苷类似物：拉米夫定、阿德福韦。
乙肝的治疗
主要包括
、免疫调节、抗炎保肝、抗纤维化等
对于HBV
DNA≥105的患者应进行抗病毒治疗
过高温变性、低温退火、适温延伸三个步骤在3个小时内
反复循环25-30次，把特定的DNA片段扩增1000万倍。 • 每个PCR体系含4种主要成分：含有待扩增序列的DNA模板 、引物、TaqDNA聚合酶、脱氧核糖核酸三磷酸（dNTP）
荧光定量PCR技术
实时荧光定量PCR技术，是指在反应体系中加入 ，利用荧光信号积累实时检测整个PCR过程，通过 对PCR终产物的分析，最终实现对未知的起始
提供直接证据缩短“窗口期”
PCR检测
HBV HCV HIV
“窗口期”
56 70 22
核酸检测缩短的“窗口期”的天数
6-15 41-60 10-15
有利于献血员窗口期病毒核酸的筛查和早期诊断
HBV DNA检测的临床意义
调查表明并不是所有“大三阳”的病人都处于 HBV复制期，具有传染性；也不是所有“小三阳” 的病人HBV都无复制。因此，要准确知道HBV是否
模版进行定量分析的一种技术，是迄今对已知基因序列的
核酸测定中最灵敏的方法。
PCR 反应过程
3’ 5’ 5’ 3’
Primers
d.NTPs
Taq 酶
反应组分
变
性
3’
5’
5’
3’
退
火
3’
Taq Taq
3’
5’
延 重
伸 复
3’
3’ 3’ 5’ 3’ 5’ 3’ 3’
5’
循环2 4个拷贝
3’
3’
3’ 3’ 3’ 3’
Taq
l
R
Q
变
性
Q
5’
R
3’
退 火
R Q
5’
Taq
3’
1. 链取代 2. 水
R Q
5’
Taq
R
5’ 3’
解
Taq
5’
5’ 3’
3. 聚
合
l Taq
5’
R
5’ 3’
4. 检测荧光
乙肝病毒的感染
乙肝病毒的感染
（一）
乙型肝炎病毒结构及特点
HBsAg：是HBV感染的主要标志 HBsAb：保护性抗体 HBcAg：仅存于感染的肝细胞核内，
HBeAg与HBV DNA有着良好的相关性
乙肝病毒的感染 免疫耐受期 免疫清除期 非活动或低（ 非）复制期 再活动期
HBV DNA ALT 肝组织学
HBV DNA贯穿感染者的终生，是评价病毒复制的金标准
正常 无明显异常, 或 轻度炎症纤维化 慢性HBV携带者 增高或者波动 中度或严重炎症、纤 维化快速进展