控制菌检查用培养基适用性检查操作规程Word版

1目的

建立一个控制菌检查用培养基检查操作程序。

控制菌检查中用的培养基。检查项目包括培养基的促生长、指示和抑制特性能力。3发放范围

质量部

4职责

5.1菌种和菌液制备

5.1.1控制菌检查用培养适用性检查试验用菌株。

大肠埃希菌（Escherichia coli) [CMCC(B0 44102]

金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus) [CMCC(B0 26003

乙型副伤寒沙门菌

铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa) [CMCC(B) 10104

生孢梭菌(Clostridium sporgenes) [CMCC(B) 64941]

白色念珠菌Candida albicans) [CMCC(B) 98001]

5.1.2将金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、大肠埃希菌、沙门菌分别接种于胰酪大豆胨液体培养基中或在胰酪大豆胨琼脂培养基上，30-35℃培养18-24小时，将白色念珠菌接种于沙氏葡萄糖琼脂培养基上或沙氏葡萄糖液体培养基中，20-25℃培养2-3天，将生孢梭菌接捉于梭菌增菌培养基中置厌氧条件下30-35℃培养24-48小时或接种于硫乙

醇酸盐液体培养基中30-35

℃培养18-24小时。

5.2各种培养基需要测试的能力及判断指标

5.2.1液体培养基促生长能力检查，取不大于100cfu的试验菌分别接种于被检查培养基和对照培养基中，在相应控制菌检查规定的培养温度及不大于规定的最短培养时间下培养。增菌培养基多澄清液体培养基，与对照培养基比较，被检查培养基中试验菌应生长良好，表现为液体培养基浑浊。

固体培养基促生长能力检查：取试验菌液（含菌数不大于100cfu）分别涂布于被检查培养基和对照培养基上，在相应控制菌检查规定的培养温度及不大于规定的最短时间下培养，与对照培养基比较，被检查培养基与对照培养基上生长的菌落大小、形态特征应一致。若被检查培养基上的菌落平均数与对照培养基上的菌落数的比值应在50-200%，且菌落形态、大小与对照培养基上的菌落一致，则判断该培养基的适用性检查促生长能力符合规定。

5.2.2培养基抑制能力检查：取不少于100cfu的试验菌分别接种于被检查培养基和对照培养基，在相应控制菌检查规定的培养温度及不不小于规定的最长培养基时间下培养，试验菌应不得生长。

5.2.3液体培养基指示能力检查：取不大于100cfu的试验菌分别接种于被检培养基和对照培养基中，在相应控制菌检查规定的培养温度及不大于规定的最短培养时间下培养。与对照培养基比较，被检查培养基中试验菌应生长情况/指示剂反应等应与对照培养基一致。

固体培养基指示能力检查：取试验菌液（含菌数不大于100cfu）分别涂布于被检查培养基和对照培养基上，在相应控制菌检查规定的培养温度及不大于规定的时间下培养，与对照培养基比较，被检查培养基与对照培养基上生长的菌落大小、形态特征、菌落颜色及指示剂反应等应一致。

5.3控制菌检查用培养基能力测试列表

控制菌检查涉及的14种培养基特点各异味，表中概述培养基检查的具体项目，具体操作在其后说明。

表1 控制菌检查用培养基的促生长能力、抑制能力和指示特征

5.4.6木糖赖氨酸脱氧胆酸盐琼脂培养基：新鲜配制对照木糖赖氨酸脱氧胆酸盐琼脂培养基，121℃灭菌15分钟，备用。取含沙门菌的RV沙门增菌液体培养物划线接种于木糖赖氨酸脱氧胆酸盐琼脂培养基平板上30-35℃培养18-48小时，被检培养基同法操作。

培养18小时，被检培养基菌落大小、形态特征及颜色应与对照培养基上的菌落一致，培养48小时，空白平板和接种金黄色葡萄球菌的平板应不得生长。

5.4.7三糖铁琼脂培养基新鲜配制对照三糖铁琼脂培养基，121℃灭菌15分钟，制成高底层（2-3cm）短斜面，备用，用接种针挑取在木糖赖氨酸脱氧胆酸盐琼脂培养基平板上生长的疑似菌落于三糖铁琼脂培养基高层斜面上进行斜面和高层穿刺接种，培养18-24小时，被检培养基同法操作。培养18小时，被检培养基菌落大小、形态特征及颜色与对照培养基上的菌落一致;培养24小时，空白平板应无菌落生长。

5.4.8溴化十六烷基三甲铵琼脂培养基新鲜配制对照溴化十六烷基三甲铵琼脂培养基，121℃灭菌15分钟，备用。冷却至60℃倾注平皿，35℃培养箱预培养8小时后备用。取7个无菌琼脂平板，分别涂布接种铜绿假单胞菌和大肠埃希菌各3 皿，接种菌液0.1ml（含菌50-100cfu），另一平板不接种菌作为空白对照，涂布均匀后于规定温度30-35℃倒置培养18-72小时，被检培养基同法操作。培养18小时，被检培养基菌落大小、形态特征及颜色应与对照培养基上的菌落一致，培养72小时，空白平板和接种大肠埃希菌的平板应无菌落生长。

5.4.9甘露醇氯化钠琼脂培养基新鲜配制对照甘露醇氯化钠琼脂培基，121℃灭菌15分钟，冷却至60℃冷却至60℃倾注平皿，35℃培养箱预培养8小时后备用。取5个无菌琼脂平板，分别涂布接种金黄色葡萄球菌和大肠埃希菌各2 皿，接种菌液0.1ml（含菌50-100cfu），另一平板不接种菌作为空白对照，涂布均匀后于规定温度30-35℃倒置培养18-72小时，被检培养基同法操作。培养18小时，被检培养基菌落大小、形态特征及颜色应与对照培养基上的菌落一致，培养72小时，空白平板和接种大肠埃希菌的平板应无菌落生长。

5.4.10梭菌增菌培养基新鲜配制对照梭菌增菌培养基2瓶，121℃灭菌15分钟，备用，接种生孢梭菌1瓶，接种菌液1ml(不大于100cfu),另一瓶不接种菌株作为空白对照，置规定温度30-35℃厌氧条件下培养48小时，检培养基同法操作。培养48小时，空白培养瓶应不得浑浊，与对照培养基比较，，被检培养基中试验菌应生长良好，表现为液体培养基变浑浊。

5.4.11哥伦比亚琼脂培养基新鲜配制对照哥伦比亚琼脂培养基，121℃灭菌15分钟，冷却至60℃倾注平皿，35℃培养箱预培养8小时后备用。取3个哥伦比亚琼脂平板，涂布接种生孢梭菌各2 皿，接种菌液0.1ml（含菌50-100cfu），另一平板不接种菌作为空白对照，涂布均匀后于规定温度30-35℃的厌氧条件倒置培养48-72小时，被检培养基同法操作。培养48小时，被检培养基菌落大小、形态特征及颜色应与对照培养基上的菌落一致，培养72小时，空白平板和接种大肠埃希菌的平板应无菌落生长。