实验一：鸡血细胞融合
鸡血细胞融合的安全预案
一、背景鸡血细胞融合实验是一种重要的生物技术手段，在动物遗传育种、疾病治疗等方面具有广泛的应用前景。
然而，由于实验过程中涉及到多种生物安全风险，因此制定一套完善的安全预案至关重要。
二、目的为保障鸡血细胞融合实验的顺利进行，确保实验人员、动物及环境的安全，特制定本安全预案。
三、适用范围本预案适用于所有从事鸡血细胞融合实验的研究机构、企业及个人。
四、安全组织与职责1. 实验室主任负责全面负责实验室的生物安全管理工作，确保实验安全。
2. 生物安全负责人负责具体实施实验室的生物安全管理工作，对实验人员进行安全培训。
3. 实验人员应严格遵守本预案，做好个人防护，确保实验安全。
4. 实验室管理人员负责实验设备的维护和保养，确保设备安全运行。
五、安全措施1. 实验室生物安全等级根据鸡血细胞融合实验的生物安全风险，实验室应达到二级生物安全实验室标准。
2. 实验室设施与设备（1）实验室内应配备生物安全柜、高压灭菌器、离心机、超净工作台等设备。
（2）实验室内应配备个人防护用品，如防护服、手套、口罩、护目镜等。
3. 实验操作规范（1）实验人员进入实验室前应穿戴个人防护用品，确保自身安全。
（2）实验操作应在生物安全柜内进行，避免直接接触实验材料。
（3）实验操作过程中，应严格遵守无菌操作规程，防止交叉污染。
4. 实验废弃物处理（1）实验废弃物应分类收集，严格按照相关规定进行处理。
（2）锐器类废弃物应放入锐器盒，不得与其他废弃物混放。
（3）实验废弃物应在实验室内进行初步消毒，然后交由专业机构进行处理。
5. 实验动物管理（1）实验动物应定期进行健康检查，确保实验动物的健康。
（2）实验动物饲养环境应符合国家相关规定，确保动物福利。
（3）实验动物使用完毕后，应进行无害化处理。
六、应急处理1. 实验过程中，如发生生物安全事故，实验人员应立即停止操作，并向实验室主任报告。
2. 实验室主任应立即启动应急预案，组织人员进行现场处理。
3. 对受伤人员，应立即进行现场急救，并送往医院进行治疗。
鸡血细胞的体外融合
鸡血细胞的体外融合【实验目的】1．掌握聚乙二醇（PEG ）诱导体外细胞融合的基本原理。
2．通过PEG 体外诱导鸡血细胞之间的融合实验，初步掌握细胞融合的基本方法。
【实验原理】细胞融合(cell fusion ）又称体细胞杂交，是指用人工方法使两个或两个以上的体细胞融合成异核体细胞，随后，异核体同步进入有丝分裂，核膜崩溃，来自两个亲本细胞的基因组合在一起形成只含有一个细胞核的杂种细胞(hybrid cell ）。
细胞融合技术是研究细胞遗传、基因定位、细胞免疫、病毒和肿瘤的重要手段。
显微镜下的细胞融合过程融合过程中两个细胞膜的变化过程依据融合过程采用的助融剂的不同，细胞融合可分为：（1）病毒诱导的细胞融合，如：仙台病毒（hemagglutinating virus of Japan，HVJ）；（2）化学因子诱导的细胞融合，如：聚乙二醇（polyethyleneglycol，PEG）；（3）电场诱导的细胞融合；（4）激光诱导的细胞融合。
PEG是乙二醇的多聚化合物，存在一系列不同分子质量的多聚体。
PEG可改变各类细胞的膜结构，使两细胞接触点处脂类分子发生疏散和重组，引起细胞融合。
该方法应用分子质量为400—6000的PEG溶液引起细胞的聚集和粘连，产生高频率的细胞融合。
融合的频率和活力与所用PEG的分子质量、浓度、作用时间、细胞的生理状态与密度等有关。
【方法与步骤】1. 鸡血细胞的获得：从家鸡的翼根静脉用注射器采血，注入试管后，迅速加入肝素（100U 肝素/ 5ml全血）混合，制成抗凝全血。
2. 鸡血细胞储备液的制备：在抗凝全血的试管中，加入4倍体积的0.85 %NaCl溶液，制成红细胞储备液，置于4℃冰箱内可供一周内使用。
3. 鸡血细胞悬液的制备：取鸡血细胞储备液1ml，加入4ml 0.85 %NaCl溶液，混匀后，1200rpm离心5min，弃去上清液，再加入5ml 0.85 %NaCl溶液按上述条件离心一次。
鸡血细胞的融合实验
本实验材料为鸡红细胞，其核结构紧密，易于观察。
[实验用品]
10 ml刻度离心管、试管架、吸管、注射器、载玻片 等。
1. 器具：普通光学显微镜、普通离心机、恒温水浴箱、
2. 材料：新鲜鸡血或与Alsever液混合的备用鸡血。 3. 试剂：50％PEG（现用现配），Alsever液，0.85
％生理盐水，GKN液，Janus green染液或Giemsa 染液。
3.细胞融合操作
(1)离心洗涤：
取(1:4)鸡血悬液0.5ml加0.85％生理盐水至4m1，混匀。 3000rpm,1min，弃上清。 加GKN溶液至4ml,混匀。 3000rpm,1min，弃上清。
(2)水浴 加GKN溶液至0.5m1,混匀。
39℃ 水EG至悬液,边加边混匀。
[注意事项]
1.滴加50％PEG时，应缓慢、逐滴加入，而且每 加一滴应轻摇离心管以混匀，滴加完毕后可用 滴管温和混匀。 2.高Ca2+浓度能提高细胞的融合率。 3.因PEG对细胞有毒性，应严格控制作用时间于 1～2 min，但本实验中融合后的细胞不继续培 养，可将处理时间延长至15 min以达到最高融 合率。
[实验结果及分析]
1.在显微镜下观察细胞融合情况，可看到不同融合 状态的细胞：两细胞的细胞膜间相互接触、粘连；接 触部位的细胞膜崩解，两细胞间的细胞质相通，形成 细胞质通道；通道扩大，两个细胞连成一体；细胞合 并完成，形成一个含有两个或多个核的圆形细胞。 2. 计算融合率： 融合率＝视野内发生融合的细胞核总数/视野内所 有细胞核总数×100％
PEG是乙二醇的多聚化合物，存在一系列不同分子 量的多聚体。PEG可与水分子借氢键结合，在高浓度 (50％)的PEG溶液中自由水消失，导致细胞脱水而发 生质膜结构的变化，引起细胞融合。为了发挥PEG促 进细胞融合的效力，必须采用较高浓度的PEG溶液， 但在高浓度PEG溶液下，细胞可能因脱水而受到显著 的破坏。因此，选择合适的分子量、浓度及作用时间 是PEG融合技术的关键。
鸡血细胞融合实验报告
鸡血细胞融合实验报告鸡血细胞融合实验报告引言细胞融合是一种重要的实验技术，通过将两种或多种细胞融合在一起，可以研究细胞间的相互作用、基因表达调控以及细胞发育等方面的问题。
在本次实验中，我们选择了鸡血细胞作为研究对象，通过融合不同类型的鸡血细胞，探究其对细胞功能和特性的影响。
实验材料与方法1. 实验材料：- 鸡血细胞样本：从鸡体内提取鲜血样本，分离出鸡血细胞。
- 细胞培养基：含有适宜的营养物质和生长因子，维持细胞生长和分裂。
- 细胞培养器具：培养皿、离心管、移液器等。
2. 实验方法：- 细胞培养与扩增：将鸡血细胞接种于含有细胞培养基的培养皿中，放置于恒温培养箱中，控制适宜的温度和湿度，使细胞能够正常生长和分裂。
- 细胞融合：选取两种不同类型的鸡血细胞，分别标记为A和B。
将细胞A和细胞B分别收集，离心沉淀后，用细胞培养基将其悬浮于一起。
利用电融合或化学融合等方法，使细胞A和细胞B融合为一个细胞群体。
- 细胞观察与分析：观察融合后细胞的形态变化、生长速率、基因表达等特性，并与原始细胞进行对比分析。
实验结果与讨论通过实验观察和数据分析，我们得到了以下结果和结论：1. 细胞融合后形态变化融合前的细胞A和细胞B在形态上存在明显的差异。
然而，经过细胞融合后，新形成的细胞群体呈现出一种中间状态，既保留了细胞A和细胞B的一些特征，又具有自身的特点。
这表明细胞融合可以导致细胞形态的重塑和变异。
2. 细胞融合后生长速率我们观察到，在细胞融合后的细胞群体中，生长速率明显高于单独培养的细胞A和细胞B。
这可能是由于融合后细胞的互补性增强，使得细胞能够更有效地利用培养基中的营养物质和生长因子。
3. 细胞融合后基因表达通过实时荧光定量PCR等技术，我们检测了融合后细胞中一些关键基因的表达水平。
结果显示，融合后细胞的基因表达模式发生了明显的变化，一些基因的表达水平显著上调或下调。
这表明细胞融合可以影响基因的转录水平，从而影响细胞的功能和特性。
PEG实验操作
PEG介导的鸡血细胞融合实验
1．鸡翼下静脉采血，血液用D-Hank’s液，稀释10-20倍。
2. 实验时取约0.5 ml鸡血保存液于EP管中。
1500rpm离心10min 弃去上清，可见血细胞沉淀。
3.用手轻弹管底，使沉淀松散，加入D-Hank’s 约0.25ml制成悬液。
然后放入38℃水浴中预热10min。
4.吸取预热在38℃水浴锅中的50%PEG 0.25 ml在38℃水浴锅中于1min内沿离心管壁逐滴加入离心管中至离心管0.5 ml 刻度处（融合过程应在水浴锅内进行），边加边摇动离心管，使之与细胞混匀，38℃水浴中保温。
5.保温15~20min 后轻轻混匀，取细胞液制备涂片。
6.自然干燥后，甲醇固定10 分钟，晾干。
7. Giemsa扣染10分钟，小水流冲片后干燥，显微观察。
在上第5点细胞融合过程中，可在不同融合时间取细胞液制备涂片后，并加入少量Giemsa 染色，用牙签混匀，3min后，显微镜下观察细胞融合情况。
（注意：1.细胞液不能多2.显微镜观察只用40×观察。
PEG诱导鸡血细胞融合实验方法比较
PEG诱导鸡血细胞融合实验方法比较PEG（聚乙二醇）介导的鸡血细胞融合实验是一种常用的细胞学实验方法，用于研究细胞融合、基因转移、病毒感染等现象。
在这个实验中，PEG起到促进融合的作用。
本文将对常用的PEG诱导鸡血细胞融合实验方法进行比较。
1.直接混合法：直接混合法是最简单直接的方法，将两种不同细胞类型的细胞直接混合，加入PEG处理后，通过细胞的融合产生融合细胞。
实验步骤：a.将两种不同类型的鸡血细胞分别培养至对数生长期。
b.将细胞收集、洗涤后，按照一定比例混合在一起。
c.在混合细胞悬液中加入PEG，进行处理。
d.处理后的细胞悬液进行培养。
优点：简单快捷，操作方便。
缺点：融合效率低，融合细胞的纯度较低，难以鉴定融合细胞。
2.等渗处理法：等渗处理法使用PEG使两个细胞类型的渗透压基本相等，减小由于渗透压差带来的融合细胞死亡的可能性。
实验步骤类似于直接混合法，不同之处在于在混合前要将细胞分别处理加入等量的PEG。
优点：可以减少融合细胞死亡的可能性。
缺点：融合效率仍然较低，难以确保融合细胞的纯度。
3.高瓶底法：高瓶底法是一种间接融合法，将两种细胞性的细胞分别培养到八倍增生指数时接种于两个高菌瓶内，将角质层去除，用高菌瓶口与高速离心的纺棉花轻摩转盘瓶底，离心至指定g数。
因离心后双方菌瓶接触，菌体外膜断裂，细胞在瓶壁内微小空间聚集，有利于融合。
实验步骤：a.将两种不同类型的鸡血细胞分别培养至八倍增生指数。
b.将细胞收集后接种于两个高菌瓶内。
c.去除角质层，将高菌瓶口与高速离心的纺毛轻摩转盘瓶底。
d.将菌瓶离心至指定g数。
优点：融合效率较高，融合细胞纯度较高。
缺点：操作复杂，需要使用专用设备。
4.电熔法：电熔法是利用电场将两种细胞融合的方法。
通过电熔法可以达到融合效率较高的效果。
实验步骤：a.将两种不同类型的鸡血细胞分别培养至对数生长期。
b.将细胞收集后接种于电熔腔中。
c.设置一定的电场参数，通过电场产生的作用使细胞融合。
鸡血细胞融合实验报告
鸡血细胞融合实验报告鸡血细胞融合实验报告引言：细胞融合是生物学领域中的一个重要研究课题，通过将两种或多种细胞融合在一起，可以产生新的细胞，从而探索细胞的特性和功能。
本实验旨在通过将鸡血细胞进行融合，观察融合细胞的形态特征和生理功能，以期对细胞融合的机制和应用进行深入研究。
材料与方法：1. 实验动物：选取健康成年鸡作为实验对象。
2. 细胞培养：从鸡体内提取血液样本，分离出鸡血细胞，并进行细胞培养。
3. 细胞融合：选择适当的融合剂，将两种不同来源的鸡血细胞进行融合。
4. 观察与记录：通过显微镜观察融合细胞的形态特征，记录细胞的大小、形状、颜色等信息。
结果与讨论：通过实验观察，我们发现融合细胞在形态上与原始细胞有所不同。
融合细胞的大小较原始细胞更大，形状也更加不规则，颜色也呈现出混合的特征。
这表明细胞融合可能导致细胞的形态改变，从而影响其生理功能。
为了进一步验证融合细胞是否具有新的生理功能，我们进行了一系列实验。
首先，我们检测了融合细胞的代谢活性。
结果显示，融合细胞的代谢活性明显增强，相比于原始细胞，其能够更快地吸收营养物质并释放代谢产物。
这表明细胞融合可能导致代谢途径的改变，从而增强细胞的生理功能。
接下来，我们对融合细胞进行了增殖实验。
结果显示，融合细胞的增殖速度明显加快，相比于原始细胞，其能够更快地分裂并形成新的细胞。
这表明细胞融合可能导致细胞增殖机制的改变，从而增强细胞的生长能力。
此外，我们还对融合细胞进行了细胞凋亡实验。
结果显示，融合细胞的凋亡率明显降低，相比于原始细胞，其更容易存活并继续进行细胞分裂。
这表明细胞融合可能导致细胞凋亡途径的改变，从而增强细胞的生存能力。
综上所述，通过鸡血细胞融合实验，我们发现融合细胞在形态特征和生理功能上与原始细胞有所不同。
细胞融合可能导致细胞形态的改变、代谢活性的增强、增殖速度的加快以及凋亡率的降低。
这些发现为细胞融合的机制和应用提供了新的线索，有望在组织工程、再生医学等领域发挥重要作用。
观察鸡血切片实训报告范文
一、实验目的1. 学习并掌握动物组织切片的基本原理和操作技术。
2. 观察鸡血细胞的结构特点，了解细胞核、细胞质等基本结构。
3. 培养观察和描述实验现象的能力。
二、实验原理动物组织切片是生物学研究中的重要技术之一，通过将组织切成薄片，可以观察到细胞和细胞器的微观结构。
本实验采用石蜡切片法，将鸡血组织切成薄片，经过染色处理后，在显微镜下观察其结构。
三、实验材料与仪器1. 实验材料：新鲜鸡血、石蜡、二甲苯、酒精、盐酸、苏木精、伊红等。
2. 实验仪器：切片机、显微镜、解剖剪、镊子、刀片、离心管、离心机、烧杯、试管等。
四、实验步骤1. 取材：取新鲜鸡血，用生理盐水制成10%的悬液。
2. 固定：将鸡血悬液加入固定液（10%甲醛溶液）中，室温固定24小时。
3. 脱水：将固定后的鸡血悬液依次浸泡在70%、80%、90%、95%、100%酒精中，各30分钟。
4. 透明：将鸡血悬液浸泡在二甲苯中，透明30分钟。
5. 包埋：将透明后的鸡血悬液滴加石蜡，制成石蜡块。
6. 切片：将石蜡块切成5-10微米的薄片，贴附在载玻片上。
7. 染色：将切片放入染色液中，依次进行苏木精染色、盐酸酒精分化、伊红染色、水洗。
8. 封片：将染色后的切片放入封片液中，封片。
五、实验结果与分析1. 显微镜观察：在显微镜下观察鸡血切片，可见细胞核、细胞质、细胞膜等结构。
2. 细胞核：鸡血细胞核呈圆形或椭圆形，核膜明显，核仁清晰可见。
3. 细胞质：细胞质呈淡蓝色，细胞质内有红细胞和白细胞。
4. 红细胞：红细胞呈双凹圆盘状，无细胞核，内含血红蛋白。
5. 白细胞：白细胞呈圆形或椭圆形，细胞核呈蓝色，细胞质呈红色。
六、讨论1. 鸡血细胞融合实验是一种常用的细胞学技术，可以用于研究细胞核、细胞质等结构的变化。
2. 鸡血细胞核的融合可以观察到细胞核的形态、大小和染色质分布等方面的变化。
3. 鸡血容易获取，且量多，是进行细胞学实验的良好材料。
4. 在鸡血细胞融合实验中，PEG作为一种细胞融合剂，可以促进细胞核的融合。
动物细胞融合实验实验报告
动物细胞融合实验实验报告
实验目的：1、了解动物细胞融合的常用方法
2、学习化学融合的基本操作过过程
3、观察动物细胞融合过程中的细胞行为和变化
实验材料：鸡血红细胞、50%PEG溶液、0.85%氯化钠溶液、显微镜、离心机、载玻片、盖玻片等
实验原理：聚乙二醇（PEG）能够改变细胞膜脂质分子的排列，在去除这些物质之后，细胞膜趋向于恢复原有的有序结构。
在恢复过程中相接触的细胞由于接口处脂质双分
子层的互相亲和与表面张力，细胞膜融合，胞质流通，发生融合。
实验步骤：1、取鸡血，离心后去除上清液，以0.85%氯化钠溶液制成5%~10%的悬液
2、加入GKN液4ml，混匀
3、加入14滴PEG液，静置3~5min后混匀，放于显微镜下观察
实验结果：显微镜下可观察到有些细胞发生质膜融合
分析与讨论：细胞融合的应用有微生物原生质体融合构成新菌株、利用原生质体融合和培养技术培育新植物、细胞杂交瘤技术与单克隆抗体、用于基因定位和绘制人类基因
图谱、用于生产树突状细胞抗肿瘤疫苗、用于动物育种、用于细胞疗法等。
细胞融合
（3）将悬液移入离心管，以500r/min离心7~8min， 倾去上清液，加入8~10mlHanks液，再次悬浮细 胞，离心洗涤一次，倾去上清液后将离心管倒置 于滤纸上，尽量流尽剩余液体。 （4） 用手指轻弹离心管底部，使沉淀物松散。然 后吸取制备好的50%PEG0.4ml，在37℃水浴中 于90秒内逐滴加入离心管中，并使之与细胞混匀， 然后加入8~10mlHanks液，轻打混匀，在37℃水 浴中静置5min以稀释PEG，离心弃去上清液后， 加入2~3mlRPNI1640培养液，在37℃孵育30min。融 Nhomakorabea过程观察
分别于温育5min 10min 20min 30min取 细胞液一滴制成临时装片，以0.2%次甲基 蓝染液染色，在显微镜下观察细胞融合的 不同阶段。
注意事项
• 保持PEG的温度，否者易凝固 • PEG处理时间不宜过长，否者会造成细胞破
坏或多个细胞彼此融合形成巨大的合胞体。 • 经PEG处理后加液混匀时应轻轻吹打，以免 刚刚融合的细胞分开。
动物细胞融合
实验目的：
了解细胞融合的基本方法 并掌握PEG诱导动物细胞融合的方法
实验原理
PEG可以减少细胞间的游离水，使细胞相 互靠近并破坏细胞膜的磷脂双分子层，改 变膜的结构，使细胞相互接触处容易融合 在一起。以鸡血细胞为实验原料，经PEG 诱导融合为两个或多个细胞核的细胞，可 视为融合细胞。
实验材料及用品
• 实验材料：鸡血细胞 • 实验器材：普通离心机 水浴箱 酒精灯 离心管 载玻片 盖玻片 显微镜 • 实验试剂：肝素钠细胞溶液 Hanks液 50%的PEG溶液 0.2%次甲基蓝染液 RPNI1640培养液
实验步骤
（1）50%PEG的制备 称取一定量的PEG （MV=4000)放入刻度离心管内，在酒精灯 上加热融化，待冷至50℃时，加入等体积 并预热的无血清1640液混匀，置37℃水浴 箱中保温待用。 （2）配2%鸡红细胞悬液 用肝素钠生理盐 水抗凝鸡血500rpm离心5min，制成悬液。
细胞生物学实验-鸡血细胞的体外融合
鸡血细胞的体外融合
应用领域（微生物）： 对微生物而言，细胞融合技术主要用于改良微生物菌种特性、提高目的
鸡血细胞的体外融合
细胞融合的方法： 聚乙二醇诱导融合：聚乙二醇具有强烈的吸水性以及凝聚和沉淀蛋白质
的作用，能够有效地促进植物原生质体和动物细胞的融合。在不同种类的动 物细胞混合液中加入聚乙二醇，就会发生细胞凝集作用，在稀释和除去聚乙 二醇的过程中，就会发生细胞融合。聚乙二醇诱导细胞融合的分子机理还不 太清楚。作为化学试剂，聚乙二醇使用起来很方便，诱导细胞融合的频率比 较高，但是它有一定毒性，对有些细胞（如卵细胞等）不适用。
鸡血细胞的体外融合
成纤维细胞
Байду номын сангаас
鼠肿瘤细胞
植物细胞A
植物细胞B
仙台病毒 融合培养基
融合
去掉细胞壁
原生质体A
原生质体B
形成杂种细胞
在选择性培养 基中杂种细胞 增殖形成克隆
异核体 杂种细胞
原生质体融合 再生细胞壁
杂种细胞 细胞分裂
愈伤组织
杂种细胞克隆
杂种植株
鸡血细胞的体外融合
实验器材：
普通光学显微镜、剪刀、镊子、载玻片、盖玻片、注射器、滤纸、胶头吸管、 离心机、血细胞计数板、水浴锅、烧杯、容量瓶、酒精灯。
鸡血细胞的体外融合
应用领域（动物细胞）：
1. 用于基因定位和绘制人类基因图谱：根据杂种细胞中某一染色体或其片段的存 在与否和细胞的某一性状表达与否相联系，从而可以实现把基因定位于某一染 色体或某一区段上。
鸡血细胞体外融合的影响因素研究
１ ． ２ ． ５ 鸡 血细胞 悬液 的 配制【 ‘ ３ Ｉ
红， ＧＫＮ 液． 血 细胞 计 数 板 ， 刻度离心管 ， 离心机 ， 水 浴锅 ， 盖 玻片 ， 容量 瓶 ， 载玻片， 移 液管 等．
１ ． ２ 实 验 方 法
１ ． ２ ． １ ０ ． ８ ５ Ｎａ Ｃ１ 溶 液 的 配 制
１ ． ２ ． ３ Ｈａ ｎ ｋ ｓ液 的 配 制 。 。 。
原 液 Ａ： 称取 Ｎ ａ Ｃ １ １ ６ ． ０ ｇ 、 Ｋ Ｃ １ ８ ． ０ ｇ 、 Ｍｇ Ｓ Ｏ ４・ ７ Ｈ２ ０ ２ ． ０ ｇ 、 Ｍｇ Ｃ １ ２・６ Ｈ２ Ｏ ２ ． ０ ｇ 、 Ｃ ａ Ｃ １ ２ （ 无水 ）
称取 Ｎ ａ Ｃ １ ８ ． ０ ｇ 、 葡 萄糖 ２ ． ０ ｇ 、 Ｎａ ２ ＨＰ Ｏ ・
收 稿 日期 ： ２ ０ １ ４～０ ５—１ ７ ； 修 回 日期 ： ２ ０ １ ４—０ ６—２ ０
（ ２ ） 向 抗 凝 全 血 的 试 管 中加 入 ４倍 体 积 的
４ ． ０℃ ：
原液 Ｂ ： 葡 萄糖 ２ ０ ． ０ ｇ 、 Ｎａ ＨＰ Ｏ ・１ ２ Ｈ２ Ｏ
０ ． ０ ６ ｇ 、 ＫＨ ２ Ｐ Ｏ １ ． ２ ｇ 、 双 蒸水 ８ ０ ０ ｍＬ， 用 滤 纸 过
学 内容ｌ 】 ］ ． 在实 际 操作 中 ， 该 方 法 易 受 许 多 因 素 的
１ 材 料 与 方 法
１ ． １ 实 验 材 料 及 仪 器
公鸡 全 血， Ｐ Ｅ Ｇ， Ｎａ Ｃ １ ， Ｈａ ｎ ｋ ｓ液 ， ０ ． ５ 酚
（ ３ ）向 ４个小 烧杯 中分 别加 入 预热 至 ５ Ｏ℃ 的
Ｇ ＫＮ 液 混 匀 ， 配制成 １ ０ ， ３ Ｏ ， ５ ０ ， ７ ０ 的
细胞生物学实验手册：细胞融合实验原理及步骤
实验十一细胞融合【实验目的】掌握细胞融合原理、应用PEG融合细胞的方法以及细胞融合率的计算。
【实验用品】一、材料鸡红细胞二、器材和仪器：显微镜、离心机、水浴箱、刻度离心管、试管、载玻璃片、盖玻片三、试剂 50％PEG(MW4,000)、Hanks液(pH7.4)【实验内容】一、原理细胞融合(Cell fusion)，即在自然条件下或用人工方法(生物的、物理的、化学的)使两个或两个以上的细胞合并形成一个细胞的过程。
人工诱导的细胞融合，在六十年代作为一门新兴技术而发展起来。
由于它不仅能产生同种细胞融合，也能产生种间细胞的融合，因此细胞融合技术目前被广泛应用于细胞生物学和医学研究的各个领域。
细胞融合的诱导物种类很多．常用的主要有灭活的仙台病毒(Sendai virus)，聚乙二醇(Polyethyleneglycol，PEG)和电脉冲。
目前应用最广泛的是聚乙二醇，因为它易得、简便，且融合效果稳定。
PEG的促融机制尚不完全清楚，它可能引起细胞膜中磷脂的酰键及极性基团发生结构重排。
二、方法(1)取新鲜鸡血以0.85％生理盐水制成10％的悬液。
(2)称取0.5克PEG(MW=4,000)放入试管内，在酒精灯上融化之，迅速加入0.5ml预热的Hanks液混匀制成50％的PEG溶液。
放入37℃水浴中待用。
(3)取上述10％的鸡红细胞悬液1ml放入离心管中，再加入5ml Hanks液混匀，然后以1,000rpm离心5分钟，小心弃去上清，用指弹法将细胞团块弹散。
(4)取上述50％PEG溶液0.5ml，在1分钟内滴加到鸡红细胞悬液，边加边轻轻摇动混匀。
待PEG全部加入后静置1分钟左右。
此全部过程都要求在37℃水浴内进行。
细胞生物学实验报告——动物细胞融合
山东大学细胞生物学实验报告聚乙二醇（PEG ）法诱导的动物细胞融合实验2012/9/11实验目的：了解细胞融合技术的发展过程和主要方法的基本原理，用聚乙二醇(PEG)化学诱导法进行鸡血红细胞的融合实验，掌握实验的基本操作，观察鸡血红细胞融合的不同时期。
实验原理：1. 细胞融合的概念两个或两个以上的细胞或原生质体在自然或人为诱导的情况下细胞质膜相互融合，细胞质相互混合成为一个整体杂合细胞的现象被称为细胞融合。
细胞融合可以发生在同种细胞之间也可以在不同物种间实现。
2. 细胞人工融合的主要方法及基本原理细胞体外融合的主要方法分为病毒诱导，化学诱导和物理诱导。
1953年，M. Kuroya 在临床中第一次分离到仙台病毒（HVJ ）[1]。
1958年，日本学者Okada 发现仙台病毒（HVJ ）能诱导动物细胞融合[2]，其基本原理是仙台病毒的衣壳上有细胞表面受体的结合位点，可以诱导不同细胞凝集，最终使不同细胞的细胞膜相互融合。
1974年，加拿大学者高国楠发明了细胞的聚乙二醇（Polyethyleneglycol ，PEG ）化学融合法，由于该方法对实验条件要求极低，试剂易得，操作简单，成为应用最广泛的细胞融合方法。
化学诱导细胞融合的基本原理是PEG 等化学物质能够诱导细胞膜磷脂分子的极性基团发生结构重排，相互接触的细胞在细胞膜恢复过程中借助磷脂分子的亲和作用和表面张力实现融合。
比之于仙台病毒诱导法，PEG 诱导法的效率提高了几百倍。
80年代，科学家发明了细胞电融合法[4, 5]，电融合法将细胞融合的产率提高到了50%-80%。
电融合法的建立是基于细胞膜表面带电荷的性质。
当在细胞悬液周围加入特定方向的电场时，细胞表面会发生极化现象，相邻的细胞将吸附在一起。
这时突然提高电场强度，细胞间彼此接触的细胞膜会被击穿，细胞膜修复时受到磷脂分子间的亲和作用和细胞膜表面张力的作用将会发生融合。
图2. 以电融合方法得到的3T3-C2融合细胞 （引自J. Teissie 等，1982 )。
细胞融合实验报告
细胞融合实验报告【实验题目】动物细胞融合【实验目的】1.了解动物细胞融合的常用方法。
2.学习化学融合的基本操作过程。
3.观察动物细胞融合过程中细胞的行为与变化。
【实验材料与用品】1、材料鸡血红细胞2、试剂50%PEG、GKN溶液、Alsever’s细胞保存液、0.85%氯化钠溶液。
3、器材倒置显微镜、离心机、载玻片、盖玻片、离心管、废液缸、滴管等。
【实验原理】细胞融合是指在自发或者诱导条件下，两个或两个以上细胞合并为双核或者多核细胞的过程。
目前人们已经发现有很多方法可以诱导细胞融合，包括：病毒诱导融合、化学诱导融和和电激诱导融合。
1、病毒诱导融合仙台病毒、牛痘病毒、新城鸡瘟病毒和疱疹病毒等可以介导细胞的融时也可介导细胞与细胞的融合。
用紫外线灭活后，这些病毒即可诱导细胞发生融合。
2、化学诱导融合很多化学试剂能够诱导细胞融合，如聚乙二醇(PEG)、二甲基亚砜、山梨醇、甘油、溶血性卵磷脂、磷脂酰丝氨酸等。
这些物质能够改变细胞膜脂质分子的排列，在去除这些物质之后，细胞膜趋向于恢复原有的有序结构。
在恢复过程中想接触的细胞由于接口处脂质双分子层的相互亲和与表面张力，细胞膜融合，胞质流通，发生融合。
化学诱导方法，操作方便，诱导融合的概率比较高，效果稳定，适用于动、植物细胞，但对细胞具有一定的毒性。
PEG是广泛使用的化学融合剂。
3、电激诱导融合包括电诱导、激光诱导等。
其中，电诱导是先使细胞在电场中极化成为偶极子，沿电力线排布成串，再利用高强度、短时程的电脉冲击破细胞膜，细胞膜的脂质分子发生重排，由于表面张力的作用，两细胞发生融合。
电诱导方法具有融合过程易控制、融合概率高、无毒性、作用机制明确、可重复性高等优点。
【实验步骤】在本次实验中采用的是化学诱导融合的方法，利用PEG使鸡血红细胞发生融合。
具体实验步骤如下：1、取鸡血2ml+2mlAlsever液，再加入6mlAlsever液，混匀后制悬液（4℃保存）【老师已做好，可直接使用】2、取（1）中悬液1ml+4ml的0.85%的NaCl溶液，进行以下三次离心处理： 1200r/min下离心5min，去掉上清液，再加入0.85%的NaCl溶液至5ml； 1000-1200r/min下离心5min，去掉上清液，再加入0.85%的NaCl溶液至5ml；1000-1200r/min下离心7min【因时间关系此次实验只离心一次】3、将离心后的沉降血球（去上清后约0.1-0.2ml）加入GKN至1-2ml，使之成为10%的细胞悬液；4、取上述10%的血球悬液1ml,加入3mlGKN液，使每毫升含血球xxxx个；5、分别取（4）1ml+0.5ml50%PEG，（4）0.5ml+0.5ml50%PEG，（4）0.5ml+1.0ml50%PEG，2-3min后，显微镜下观察。
细胞融合实验原理教学文案
实验操作
5. 取以上细胞悬液0.2ml放入1ml的EP管中，然后放入 37℃水浴中预热，同时将50％PEG液一并预热20min；
6. 20min后将0.2ml的50％PEG溶液逐滴沿离心管壁加 入到0.2ml细胞悬液中，边加边摇匀，然后放入37℃ 水浴中保温20min；
Alsever溶液：葡萄糖2.05g，柠檬酸钠0.80g， NaCl 0.42g，溶于100ml双蒸水中。
GKN溶液：NaCl 8g，KCl 0.4g，Na2HPO4·2H2O 1.77g，NaH2PO4·H2O 0.69g，葡萄糖2g，酚红 0.01g，溶于1000ml水中。
50％PEG溶液：称取一定量的PEG（WM＝4000） 放入烧杯中，沸水浴加热，使之熔化，待冷却至 50℃时，加入等体积预热至50℃的GKN溶液，混 匀，置37备用。
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ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
7. 20min后，加入GKN溶液1ml，静止于水浴中20min 左右；
8. 1500r/min离心5min，弃去上清，加GKN溶液再离心 1次；
9. 弃去上清，加入GKN液少许，混匀，取少量悬浮于 载玻片上，加入詹纳斯绿染液，用牙签混匀，3min 盖上盖玻片，观察细胞融合情况。
融合过程
相关实验溶液的配制
细胞融合实验原理
实验操作
1. 在公鸡翼下静脉抽取2ml鸡血，加入盛有8ml的 Alsever液中，使血液与Alsever液的的比例达1∶4， 混匀后可在冰箱中存放一周；
2. 取此储存鸡血0.2ml加入0.8ml的0.85％生理盐水， 充分混匀，1500r/min离心5min，弃去上清，加入 1ml的0.85％生理盐水，重复上述条件离心两次。 最后弃去上清，加GKN液0.8ml，离心；
细胞生物学实验报告-鸡红细胞的融合教学幻灯片
八、绘图
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（3）取上稀释悬液1ml，加5ml0.85%生理盐水混 匀
2020/4/21
（4）1000rpm离心上述溶液5min，去上清液，重 复操作3次
（5）第三次离心去上清液后，加GKN 0.5ml 制成10%悬液，放在37℃水浴箱预热2~3min
（6）逐滴0.25ml的50%的PEG溶液，边加边 摇匀，37℃恒温静置15min
2、数据处理：由上表原始数据得视野内发生融合的 细胞核数为12个，视野内所有细胞核总数为105 个，由公式：
融合率=视野内发生融合的细胞核数/视野内所有细
胞核数× 100% =12/105 ×100% =11.4%
3、实验结果：鸡红细胞的融合率为11.4%
2020/4/21Fra bibliotek七、结果分析及讨论
2020/4/21
（7）取上述液一滴，盖上盖玻片，镜检
2020/4/21
五、数据记录及处理
观察四个视野中的细胞，记录鸡血细胞融合情况如下表所 示
视野细胞核 视野内融合
总数
细胞核数
2核细胞
3核细胞 所有细胞核 所有融合细
总数
胞核总数
1 30
4
2
0
2 26
3
0
1
105 12
3 28
2
1
0
4 31
3
0
1
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鸡红细胞的融合
实验报告
主要内容
1
实验目的
2
实验用品
3
实验原理
4
需要实注验意步的问骤题
5 数据记录及处理 6 结果分析及讨论
7
绘图
细胞融合实验报告
细胞融合Cell Fusionxx 201100140120 同组者：xx 2013年3月14号【实验目的】1、了解动物细胞融合的常用方法Learn common methods of cell fusion2、学习用PEG进行细胞融合的基本操作过程Use PEG to induce cell fusion3、注意动物细胞融合的过程中细胞的行为和变化Pay attention to the action and change of cells during the process of cell fusion【实验原理】细胞融合是指把相同或不同类型的两个或多个细胞融合成一个具有共同细胞质和单一、连续细胞膜的细胞。
Cell fusion is that two or more cells ，of same or different types，be fused by certain technique to produce one cell with a common cytoplasm and a single continuous cell membrane.目前用于细胞融合的有以下三种常用的方法：1、Virus 病毒2、PEG 聚乙二醇3、Electric shock 电击通过结合化学和电击的方法，可以使细胞融合率高达70%Up to 70% cell fusion efficiencies by combining both chemical and electrical fusion protocols.细胞融合率=已融合的细胞核总数/所有细胞的细胞核总数*100%Cell fusion efficiency is the ratio of the total number of fused nucleus over that of all the cells in the vision，usually shown as percentage.除了诱导剂外，其他因素，如细胞类型和性质、温度、PH值、离子强度等也会影响细胞融合率。
鸡细胞融合实验报告
一、实验目的1. 了解PEG诱导细胞融合的基本原理。
2. 通过细胞融合实验，初步掌握细胞融合技术。
3. 观察鸡细胞融合过程中的细胞行为与变化。
二、实验材料与用品1. 实验材料：鸡红细胞、Hanks液、PEG（聚乙二醇）。
2. 实验用品：生物显微镜、离心机、恒温水浴箱、试管、离心管、滴管、酒精灯、载玻片、盖玻片、生理盐水、剪刀、镊子等。
三、实验方法1. 准备鸡红细胞悬液：取新鲜鸡血，用生理盐水稀释至10%的悬液。
2. 制备PEG溶液：称取0.5克PEG（分子量4000）放入试管内，在酒精灯上融化，迅速加入0.5ml预热的Hanks液混匀，制成50%的PEG溶液。
放入37℃水浴中待用。
3. 处理鸡红细胞：取10%的鸡红细胞悬液1ml放入离心管中，加入5ml Hanks液混匀，以1000rpm离心5分钟，小心弃去上清，用指弹法将细胞团块弹散。
4. 诱导细胞融合：取上述50%的PEG溶液0.5ml，在1分钟内滴加到鸡红细胞悬液中，边加边轻轻摇动混匀。
待PEG全部加入后静置1分钟左右。
此过程均在37℃水浴中进行。
5. 终止PEG作用：缓慢滴加9ml Hanks液以终止PEG的作用，在37℃水浴中静置5分钟。
6. 离心弃上清：离心弃去上清，取一滴融合后的细胞悬液滴片，加盖片镜检。
四、实验结果与分析1. 镜检观察：在显微镜下观察，可见鸡红细胞融合后的细胞呈现球形，细胞膜较厚，细胞质较为均匀。
2. 实验结果分析：本实验成功诱导鸡红细胞融合，说明PEG诱导细胞融合技术在鸡细胞融合实验中具有可行性。
鸡红细胞融合后的细胞形态较为规则，细胞膜完整，细胞质均匀，说明细胞融合过程较为顺利。
五、讨论1. 鸡红细胞融合实验的成功，为细胞融合技术的研究提供了实验依据。
本实验采用PEG诱导细胞融合技术，具有操作简便、效果显著等优点。
2. 鸡红细胞融合实验过程中，PEG的浓度、处理时间等因素对细胞融合效果有较大影响。
实验中，PEG浓度为50%，处理时间为1分钟，能够获得较好的融合效果。
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实验一：鸡血细胞融合
一、实验目的
1、熟悉细胞融合的理论；
2、掌握PEG诱导的细胞融合方法。
二、实验原理
1、细胞融合原理
两个以上的细胞合并成为一个双核或多核细胞称为融合细胞。
在通常情况下，两个细胞接触并不发生融合现象，因为各自存在完整的细胞膜，在特殊融合诱导物的作用下，两个细胞膜发生一定的变化，就可促进两个或多个细胞聚集，相接触的细胞膜之间融合，继之细胞质融合，形成一个大的融合细胞。
利用PEG介导的动物细胞融合，其实验原理到目前为止还没有完全定论。
学者们一般认为，PEG改变各类细胞的膜结构，使两细胞相互接触部位的膜脂双层中磷脂分子发生疏散、进而使其结构发生重排，再加上膜脂双层的相互亲合以及彼此间表面张力的作用，引起相临的重排质膜在修复时相互合并在一起,使两细胞的胞质沟通,从而造成相互接触的细胞之间发生融合。
细胞与组织不同，不排斥异类、异种细胞。
不仅能产生同种细胞融合、种间细胞融合，而且也能诱导动植物细胞间产生融合。
细胞融合(Cell fusion)，即在自然条件下或用人工方法(生物的、物理的、化学的)使两个或两个以上的细胞合并形成一个细胞的过程。
人工诱导的细胞融合不仅能产生同种细胞融合，也能产生种间细胞的融合。
2、细胞融合方法
诱导细胞融合的主要方法有：病毒诱导融合，化学融合剂诱导融合和电融合。
1. 病毒诱导融合：有许多种类的病毒能介导细胞融合，最常用的是灭活的仙台病毒（HVJ），为RNA病毒。
病毒诱导细胞融合的过程有：首先是细胞表面吸附许多病毒粒子，接着细胞发生凝集，几分钟至几十分钟后，病毒粒子从细胞表面消失，而就在这个部位邻接的细胞的细胞膜融合，胞浆相互交流，最后形成融合细胞。
2. 化学融合剂诱导融合：化学融合剂主要有高级脂肪酸衍生物、脂质体、钙离子、水溶性高分子化合物、水溶性蛋白质和多肽，其中最常用的是聚已二醇（PEG）。
PEG用于细胞融合至少有两方面的作用：①可促使细胞凝结；②破坏互相接触处的细胞膜的磷脂双分子层，从而使相互接触的细胞膜之间发生融合，进而细胞质沟通，形成一个打的双核或多核融合细胞。
3. 电融合：是指细胞在电场中极化成偶极子，并沿着电力线排列成串，然后用高强度、短时程的电脉冲击穿细胞膜而导致细胞融合。
所有的细胞融合方法都有其各自的优缺点，我们在本次实验中采用PEG诱导细胞融合的方法。
三、实验材料和用品
1．材料：鸡血红细胞；
2．器材和仪器：显微镜、离心机、刻度离心管、试管、载玻片、盖玻片；
3．试剂： Alsever 液(pH7.4)、0.85％生理盐水、GKN 液、50％PEG
四、实验步骤
1、取鸡血2ml+2mlAlsever液，再加入6mlAlsever液，混匀后制悬液（4℃下保存）；
2、取上步中所得悬液1ml+4ml 0.85％的NaCl溶液，进以下三次离心处理：
①1200r/min离心5min（去上清液再加入至5ml的0.85%NaCl溶液）；
②1000-1200r/min离心5min（去上清液再加入至5ml的0.85%NaCl溶液）；
③1000～1200r/min离心7min；
3、将上步最后一次的沉降血球（去上清液后，约0.1-0.2ml），加入GKN 液至1-2ml，使之成10%的细胞悬液。
4、取上述10%的血球悬液1ml，加入3ml GKN液，使每毫升含血球15000万个，即15×107个/ml。
5、取步骤4中所得悬液1ml+0.5ml 50%的PEG液，混匀滴片，再常温下2-3min 后即可镜下观察。
五、实验结果
图一：鸡血细胞融合现象光镜观察（10×40）融合中有两核的细胞
图二：鸡血细胞融合现象光镜观察（10×40）细胞刚开始融合
六、讨论与结论
聚乙二醇分子能改变各类细胞的生物膜结构，使两细胞接触点处质膜的脂类分子发生疏散和重组，使细胞发生融合，形成融合细胞。
本次实验用聚乙二醇处理鸡红血细胞并制片利用显微镜观察。
由实验图片可得，照片中鸡血红细胞两个或者更多出现不同程度的相互融合，但总体来说融合率并不高的。
经分析主要是以下原因：
由于PEG与鸡血红细胞悬浊液接触时间适宜，PEG与鸡血红细胞接触不充分，从而融合率比较低。
因为在吹气泡的时候，PEG与鸡血细胞悬浊液混合并不均匀，以至于达到了细胞融合率并不高。