Trizol法提取RNA实验步骤及原理(新手详细注释版)

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Trizol 法使用步骤一、分离纯化的基本原理研究基因的表达和调控时常常要从组织和细胞中分离和纯化RNA。

RNA 质量的高低常常影响 cDNA 库， RT-PCR和 Northern Blot等分子生物学实验的成败。

Trizol 是一种新型总RNA 抽提试剂，内含异硫氰酸胍等物质，能迅速破碎细胞，抑制细胞释放出的核酸酶。

二、用户需自备的试剂和材料无水乙醇、氯仿、Glycogen（可能需要）、 1.5ml Eppendorf 管（ RNase-free）、 Tips（ RNase-free）三、准备工作RNase酶非常稳定，是导致 RNA 降解最主要的物质。

它在一些极端的条件可以暂时失活，但限制因素去除后有迅速复性。

用常规的高温高压蒸气灭菌方法和蛋白抑制剂都不能是RNase 完全失活。

它广泛存在于人的皮肤上，因此，在与RNA 制备有关的分子生物学实验时，必须戴手套。

RNase 的又一污染源是取液器，根据取液器制造商的要求对取液器进行处理。

用用 DEPC配制的 70%乙醇擦洗取液器的内部和外部，基本达到要求。

取时必须戴手套。

一般情况下采RNase-free 的物品1、料制品的处理尽可能使用无菌，一次性塑料制品，已标明 RNase-Free 的塑料制品，如没有开封使用过通常没有必要再次处理。

对于国产塑料制品，原则上都必须处理方可使用。

处理步骤如下：1）在玻璃烧杯中注入去离子水，加入 DEPC使 DEPC的终浓度为 0.1%。

注意： DEPC为剧毒物，活性很强，小心在通风柜中使用。

2）处理的塑料制品放入一个可以高温灭菌的容器中，注入DEPC 水溶液，使塑料制品的所有部分都浸泡到溶液中。

3）在通风柜中室温处理过夜。

4）将 DEPC水溶液小心倒到废液瓶中，用铝箔封住含已 DEPC水处理过的塑料制品的烧杯，高温高压蒸气灭菌至少 30 分钟。

5）烘箱用合适的温度烘拷至干燥。

置于干净处备用。

2、璃玻和金属物品250°C 烘烤 3 小时以上。

Trizol法提取RNA实验步骤及原理(新手详细注释版)

Trizoｌ法使用步骤一、分离纯化得基本原理研究基因得表达与调控时常常要从组织与细胞中分离与纯化ＲＮA。

ＲNA质量得高低常常影响cＤNA库,ＲT-PCＲ与Ｎorthern Ｂloｔ等分子生物学实验得成败。

Ｔrizol就是一种新型总ＲNＡ抽提试剂,内含异硫氰酸胍等物质,能迅速破碎细胞，抑制细胞释放出得核酸酶。

二、用户需自备得试剂与材料无水乙醇、氯仿、Ｇlycｏgen(可能需要)、 1、５ｍｌ Eppeｎｄｏrf管(ＲNase-frｅe)、 Tips(ＲNase－free)三、准备工作RNａse酶非常稳定,就是导致ＲNＡ降解最主要得物质。

它在一些极端得条件可以暂时失活,但限制因素去除后有迅速复性。

用常规得高温高压蒸气灭菌方法与蛋白抑制剂都不能就是ＲＮase完全失活。

它广泛存在于人得皮肤上,因此,在与RＮA制备有关得分子生物学实验时,必须戴手套。

RNase得又一污染源就是取液器,根据取液器制造商得要求对取液器进行处理。

一般情况下采用用ＤEPC（焦炭酸二磷脂,一种ＲＮａse抑制剂)配制得7０％乙醇擦洗取液器得内部与外部,基本达到要求。

取ＲＮａｓｅ－free得物品时必须戴手套。

1、料制品得处理尽可能使用无菌,一次性塑料制品，已标明RNasｅ-Fｒee 得塑料制品，如没有开封使用过通常没有必要再次处理。

对于国产塑料制品,原则上都必须处理方可使用。

处理步骤如下:1)在玻璃烧杯中注入去离子水，加入DEＰＣ使DEＰC得终浓度为０、1%。

注意:DEP Ｃ为剧毒物,活性很强，小心在通风柜中使用。

2)处理得塑料制品放入一个可以高温灭菌得容器中,注入ＤEPC水溶液,使塑料制品得所有部分都浸泡到溶液中。

3)在通风柜中室温处理过夜。

4)将DEPC水溶液小心倒到废液瓶中,用铝箔封住含已ＤEＰＣ水处理过得塑料制品得烧杯,高温高压蒸气灭菌至少30分钟。

5）烘箱用合适得温度烘拷至干燥。

置于干净处备用。

2、璃玻与金属物品250°C烘烤3小时以上。

RNA提取原理及步骤

细菌总RNA提取一、TRIzol溶液提取细胞总RNA实验原理1. TRIzol溶液的成分及作用:苯酚、异硫氰酸胍、8－羟基喹啉等。

其中苯酚可有效地变性蛋白质，但不能完全抑制RNA酶活性，8－羟基喹啉（可以抑制RNase，与氯仿联合使用可增强抑制作用）、异硫氰酸胍（是一类强力的蛋白质变性剂，可溶解蛋白质并使蛋白质二级结构消失，导致细胞结构降解，核蛋白迅速与核酸分离）、β-巯基乙醇（主要作用是破坏RNase 蛋白质中的二硫键）。

因此内源和外源RNase（RNA酶）受抑制，在样品裂解或匀浆过程中，TRIZOL能保持RNA完整性。

2. 提取原理：细胞用TRIzol溶液裂解后，加入氯仿后溶液分为水相和有机相，RNA在水相中（上层）、中层为DNA、下层为粉色的蛋白质层。

之后将水相取出，用异丙醇或者无水乙醇沉淀回收RNA。

RNA沉淀用70%的乙醇进行漂洗，最后加ddH2O溶解。

二、实验步骤1.取一只2mL离心管，加入大肠杆菌培养液0.7ml，10,000 rpm离心2 min，倒掉上清液。

2.加入2mL TRIzol溶液, 至菌体彻底悬浮并彻底裂解。

之后，在室温下放置5min,使核酸蛋白质彻底分离。

3.往管中加入0.4ml氯仿，盖好管盖，剧烈震荡15sec,之后在室温放置3min。

4.4℃,13000rmp,离心15min。

取出后，可见样品分成三层，RNA在水相中（上层）、中层为DNA、下层为粉色的蛋白质。

5.将上层水相小心取出（约0.5ml）,加入1.5ml离心管中，往管中加入等体积的异丙醇。

室温下在室温放置5min。

6. 4℃,13000rmp,离心10min。

离心后，可见管底见胶装沉淀。

7.加入2ml 70%乙醇洗涤沉淀，之后倒出液体，注意不要将沉淀倒出，若沉淀松动，可稍离心。

8.用黄色枪头将剩余液体全部吸出后，往管中加入25μl ddH2O,彻底溶解RNA。

9.电泳检测RNA以及昨天实验的DNA。

各取8μl样品与2μl loading buffer 混匀，点样。

Trizol法提取RNA实验步骤及原理(新手详细注释版)

Trizol法提取RNA实验步骤及原理(新手详细注释版)Trizol法提取RNA实验步骤及原理(新手详细注释版)一、实验步骤1. 涂布区域准备- 确保实验室台面干净整洁，并消毒工作区域。

- 准备所需的试剂和材料，包括Trizol试剂、异丙醇、70%乙醇、无菌乙酸纯水等。

2. 细胞样本处理- 从培养皿中收集所需的细胞样本，注意避免污染。

- 使用无菌PBS缓冲液洗涤细胞，以去除培养基和细胞碎片。

- 加入适量的Trizol试剂至细胞样本中，充分悬浮细胞。

- 注意：为了保护RNA的完整性，在细胞样本处理过程中尽量迅速操作，避免长时间接触Trizol试剂。

3. 提取RNA- 将含有细胞样本和Trizol试剂的混合物转移到无菌离心管中。

- 加入适量的氯仿，摇匀混合，并静置15分钟，使混合物体相分离。

- 低速离心10分钟，将上层的无色透明液体转移到新的无菌离心管中。

4. 分离RNA- 加入等体积的异丙醇，轻轻倾斜离心管，使RNA沉淀形成。

- 低速离心10分钟以沉淀RNA，上清液中通常含有DNA。

- 倒掉上清液，并加入70%乙醇洗涤RNA沉淀，轻轻颠倒离心管以洗涤RNA。

- 低速离心5分钟，倒掉乙醇。

5. 干燥RNA- 用洗涤过的无菌乙酸纯水溶解RNA沉淀，轻轻颠倒离心管以溶解RNA。

- 将溶解的RNA转移至无菌离心管中。

- 在室温或37摄氏度下迅速干燥RNA，避免长时间曝露。

6. 储存RNA- 使用RNase-free水溶解RNA沉淀，测定RNA的浓度和纯度。

- 分配等量的RNA至多个RNase-free离心管中，储存在-80摄氏度的冰箱中。

二、实验原理Trizol法是一种常用于提取RNA的方法，其原理如下：1. 细胞破裂- Trizol试剂能够迅速破坏细胞膜，使细胞释放出RNA。

- Trizol试剂中含有酚和氯仿，酚用于破坏脂质，氯仿用于改变混合物的密度，从而使RNA与其他细胞成分分离。

2. 分离RNA- 经过破裂后，细胞内的DNA、RNA和蛋白质等成分被混合在一起，形成上清液。

Trizol法提取RNA实验步骤讲解学习

Tr i zol法提取RNA实验步骤Trizol法使用步骤一、分离纯化的基本原理研究基因的表达和调控时常常要从组织和细胞中分离和纯化RNARN颇量的高低常常影响cDN癖，RT-PCR日Northern Blot等分子生物学实验的成败。

Trizol是一种新型总RN袖提试剂，内含异硫氧酸服等物质，能迅速破碎细胞，抑制细胞释放出的核酸酶。

二、用户需白备的试剂和材料无水乙醇、氯仿、Glycogen （可能需要）、1.5ml Eppendorf管（RNase-free ）、Tips （RNase-free ）三、准备工作RNas购非常稳定，是导致RN廨解最主要的物质。

它在一些极端的条件可以暂时失活，但限制因素去除后有迅速复性。

用常规的周温局压蒸气灭菌方法和蛋白抑制剂都不能是RNases全失活。

它广泛存在于人的皮肤上，因此，在与RN制备有关的分子生物学实验时，必须戴手套。

RNase勺又一污染源是取液器，根据取液器制造商的要求对取液器进行处理。

一般情况下采用用DEP配制的70气醇擦洗取液器的内部和外部，基本达到要求。

取RNase-free的物品时必须戴手套。

1、料制品的处理尽可能使用无菌，一次性塑料制品，已标明RNase-Free的塑料制品，如没有开封使用过通常没有必要再次处理。

对于国产塑料制品，原则上都必须处理方可使用。

处理步骤如下：1）在玻璃烧杯中注入去离子水，加入DEPC!DEP曲终浓度为0.1%。

注意：DEPd剧毒物，活性很强，小心在通风柜中使用。

2）处理的塑料制品放入一个可以高温灭菌的容器中，注入DEPCC溶液，使塑料制品的所有部分都浸泡到溶液中。

3）在通风柜中室温处理过夜。

4）将DEP弧溶液小心倒到废液瓶中，用铝箔封住含已DEPCC处理过的塑料制品的烧杯，高温高压蒸气灭菌至少30分钟。

5）烘箱用合适的温度烘拷至干燥。

置于干净处备用。

2、璃玻和金属物品250 C烘烤3小时以上。

四、从组织中提取总RNA1）液氮研磨：组织块直接放入研钵中，加入少量液氮，迅速研磨，待组织变软，再加少量液氮，再研磨，如此三次，按50-100m珂织/mlTrizol加入Trizol，转入离心管进行第2步操作。

trizol法提取rna的原理

trizol法提取rna的原理
Trizol法是一种常用的RNA提取方法，其原理基于三种物质的作用：酚、异硫氰酸盐和氯仿。

这三种物质能够分别破坏细胞膜、蛋白质和DNA，从而将RNA释放出来。

具体步骤如下：
1. 细胞样品裂解
将细胞样品加入Trizol试剂中，通过离心等方式使细胞裂解，并释放出RNA。

2. 蛋白质沉淀
加入氯仿并离心，使细胞蛋白质沉淀到底部形成一个有机相。

3. RNA沉淀
将上层的水相转移至新管中，并加入异硫氰酸盐。

异硫氰酸盐能够溶解RNA，使其在水相中存在。

4. RNA纯化
通过离心等方式将RNA从水相中分离出来，并使用乙酸等试剂对其进行纯化和去除杂质。

最终得到的RNA可以用于后续实验，如逆转录PCR、Northern blotting等。

需要注意的是，在Trizol法提取RNA时要严格控制操作条件，避免污染和失去RNA。

同时也需要对不同类型的样品进行优化，以获得最佳的RNA提取效果。

Trizol法提取RNA实验步骤及原理(新手详细注释版)

Trizol法提取RNA实验步骤及原理(新手详细注释
版)
哎呀，今天咱们来聊聊RNA提取的实验步骤和原理吧！这个实验可是大有学问哦，千万别小瞧了它。

咱们得准备好一些材料，比如说Trizol试剂盒、细胞样本、离心机
等等。

咱们就可以开始实验啦！
1.1 第一步：准备样本
咱们得准备好细胞样本。

这个样本可以是任何类型的细胞，比如说口腔上皮细胞、肝细胞等等。

当然啦，不同的细胞类型可能会影响到实验结果，所以在实验前最好先了解一下自己所使用的细胞类型的特点。

1.2 第二步：提取RNA
就是最重要的一步啦——提取RNA!这一步的关键在于使用Trizol试剂盒。

把样本放入试剂盒中，加入适量的Trizol试剂，然后轻轻摇晃一下。

这时候，试剂会和样本
中的核酸发生反应，使得RNA被释放出来。

2.1 第三步：分离RNA
提取完RNA之后，咱们还得把它们分离开来。

这个过程叫做反转录酶链式反应(RT-PCR)。

具体来说，就是用反转录酶把RNA转化为cDNA(complementary DNA),然后再用PCR仪扩增出大量的cDNA片段。

这样一来，咱们就可以从中筛选出我们需要的目标基因了。

2.2 第四步：检测RNA
最后一步就是检测RNA的质量和数量了。

这个过程可以用紫外分光光度计或者琼脂糖凝胶电泳来完成。

通过这些方法，咱们可以了解到RNA的纯度、大小以及是否存在突变等问题。

RNA提取实验虽然看起来有点复杂，但只要掌握了正确的方法和步骤，就一定能够取得理想的结果哦！。

Trizol法提取RNA实验步骤及原理(新手详细注释版)

Trizol法提取RNA实验步骤及原理(新手详细注释版)RNA提取是一种常用的实验技术，它可以用于研究基因表达、蛋白质合成等方面。

而Trizol法是一种常用的RNA提取方法，下面我将详细介绍该方法的实验步骤及原理。

一、实验材料和设备1. 细胞样本：如洋葱、酵母等植物或动物细胞；2. Trizol试剂盒：包括Trizol reagent、DMEM/F12培养基、异丙醇、氯仿等试剂。

3. 离心机：用于分离细胞和RNA;4. 紫外分光光度计：用于测定RNA的浓度和纯度。

二、实验步骤1. 取适量的细胞样本，加入适量的DMEM/F12培养基中，用离心机离心去除细胞碎片和杂质。

2. 将上清液转移到新的管子中，加入2 mL异丙醇，轻轻摇匀，使其与细胞充分混合。

3. 加入1 mL Trizol reagent,混匀后室温下静置10 min;4. 离心管中液体分为4层，从上往下分别是黄色(含有RNA)、白色(含有蛋白质)、透明(上清液)和红色(含有DNA)。

取出黄色层进行下一步处理。

5. 用吸头将黄色层的RNA吸取到一个新的试管中，加入适量的氯仿，轻轻摇匀。

6. 离心试管，将RNA和氯仿分离。

7. 用吸头将上层的白色RNA溶液吸出一部分，加入等量的异丙醇，混匀后离心。

8. 将上清液倒掉，留下含RNA的沉淀物。

9. 用紫外分光光度计测定RNA的浓度和纯度。

三、实验原理Trizol法提取RNA的原理是利用Trizol reagent中的Trizol和氯仿对细胞进行裂解，使RNA释放出来。

具体来说，Trizol reagent中的Trizol是一种有机溶剂，它能够破坏细胞膜并将细胞内的RNA溶解在水中。

而氯仿则是一种脂溶性溶剂，它能够与RNA结合形成复合物，使得RNA更容易被提取出来。

在实验过程中，首先加入异丙醇的作用是破坏细胞膜，使RNA更容易释放出来。

然后加入Trizol reagent,使其与细胞充分混合并裂解细胞。

(完整版)Trizol法提取RNA实验步骤

Trizol法使用步骤一、分离纯化的基本原理研究基因的表达和调控时常常要从组织和细胞中分离和纯化RNA。

RNA质量的高低常常影响cDNA库，RT-PCR和Northern Blot等分子生物学实验的成败。

Trizol是一种新型总RNA 抽提试剂，内含异硫氰酸胍等物质，能迅速破碎细胞，抑制细胞释放出的核酸酶。

二、用户需自备的试剂和材料无水乙醇、氯仿、Glycogen（可能需要）、1.5ml Eppendorf管（RNase-free）、Tips（RNase-free）三、准备工作RNase酶非常稳定，是导致RNA降解最主要的物质。

它在一些极端的条件可以暂时失活，但限制因素去除后有迅速复性。

用常规的高温高压蒸气灭菌方法和蛋白抑制剂都不能是RNase完全失活。

它广泛存在于人的皮肤上，因此，在与RNA制备有关的分子生物学实验时，必须戴手套。

RNase的又一污染源是取液器，根据取液器制造商的要求对取液器进行处理。

一般情况下采用用DEPC配制的70%乙醇擦洗取液器的内部和外部，基本达到要求。

取RNase-free的物品时必须戴手套。

1、料制品的处理尽可能使用无菌，一次性塑料制品，已标明RNase-Free 的塑料制品，如没有开封使用过通常没有必要再次处理。

对于国产塑料制品，原则上都必须处理方可使用。

处理步骤如下：1）在玻璃烧杯中注入去离子水，加入DEPC使DEPC的终浓度为0.1%。

注意：DEPC为剧毒物，活性很强，小心在通风柜中使用。

2）处理的塑料制品放入一个可以高温灭菌的容器中，注入DEPC水溶液，使塑料制品的所有部分都浸泡到溶液中。

3）在通风柜中室温处理过夜。

4）将DEPC水溶液小心倒到废液瓶中，用铝箔封住含已DEPC水处理过的塑料制品的烧杯，高温高压蒸气灭菌至少30分钟。

5）烘箱用合适的温度烘拷至干燥。

置于干净处备用。

2、璃玻和金属物品250°C烘烤3小时以上。

四、从组织中提取总RNA1)液氮研磨：组织块直接放入研钵中，加入少量液氮，迅速研磨，待组织变软，再加少量液氮，再研磨，如此三次，按50-100mg组织/ml Trizol加入Trizol，转入离心管进行第2步操作。

(完整word版)Trizol法提取RNA实验步骤

Trizol 法提取RNA实验步骤需要的试剂：氯仿异丙醇75%乙醇（in DEPC-treated water)RNase free水或者0.5% SDS溶液[准备不含RNase的水，将其装入不含RNase的玻璃瓶中，加入diethylpyrocarbonate (DEPC) to 0.01% (v/v)。

静置过夜，然后高压灭菌。

0.5% SDS溶液必须用DEPC预处理、高压灭菌的水]1、组织匀浆(1) 取出高温高压消毒后研钵，切取50-100mg冰冻组织置于研钵内，倒入液氮，研碎。

(2) 每50-100mg均浆组织标本中加入1ml的TRIZOL，标本的量不能超过TRIZOL体积的10%，否则会出现DNA污染。

(3) 将以上匀浆标本转移到1.5ml的EP管中，在15- 30°C放置5分钟，以彻底分离核蛋白复合体。

2、相分离加入0.2 ml的氯仿，加盖好后用手剧烈摇晃15秒，在15- 30°C放置2-3分钟，然后离心12,000× g，15 minutes ，2 - 8°C。

离心后分成三层，下面的红色为酚-氯仿相，一个中间层，一面是无色的水相。

RNA 只存在于水相中。

水相占总TRIZOL的60%。

3、RNA沉淀将上层水相转移到另一干净的EP管中，加入0.5ml异丙醇，静置10 minutes ，15 -30°C，然后离心12,000 × g ，10 minutes，2 - 8°C。

离心前可以在管的侧壁和底部看到絮状胶样沉淀，这就是RNA沉淀。

4、RNA洗涤去上清，加入1ml 75%乙醇洗涤RNA沉淀，振荡器混匀，离心7,500 × g ，5 minutes，2 -8°C。

5、RNA再溶解去上清，置真空或空气中5-10分钟，干燥RNA沉淀，（不能在真空中离心干燥）。

注意不能将RNA沉淀完全干燥，这样会极大地降低它的溶解度。

TRIZOL法提取总RNA

Trizol法提取总RNA
目录
• 实验原理 • 实验步骤 • 结果分析 • 注意事项 • 实验优化和常见问题处理
01
实验原理
Trizol的组成和作用
Trizol是一种常用的细胞裂解液，主要由苯酚、异硫氰酸胍和苯酚等成分组成。
苯酚的作用是使蛋白质变性并释放核酸，异硫氰酸胍的作用是抑制DNA 酶活性，防止DNA降解，同时能ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ效地变性蛋白质，使RNA充分释放。
RNA的完整性检测
琼脂糖凝胶电泳
将RNA样品进行琼脂糖凝胶电泳，观察28S和18S rRNA条带的亮度及完整性，判断RNA的质量。
生物信息学分析
将RNA测序数据与基因组数据进行比对，分析转录本的拼接情况，评估RNA的完整性。
反转录和PCR验证
反转录
将RNA反转录成cDNA，以便进行后续的PCR验证。
效果。
去除DNA和蛋白质
在提取RNA的过程中，需要去除DNA 和蛋白质等杂质，以避免对后续实验的干扰。
在去除杂质的过程中，需要注意控制好离心时间和转速，以保证去除效果。
Trizol法中，DNA和蛋白质可以通过离心和洗涤的方法去除。在离心后，上清液中的DNA和蛋白质可以被去除，而RNA则留在沉淀中。
在使用Trizol法时，通常采用玻璃匀浆器或匀浆机进行匀浆破碎。
抽提RNA
抽提RNA的目的是将RNA从细胞碎片和其他杂质中分离出来。
Trizol法是一种常用的RNA抽提试剂，它能够有效地分离出
RNA，同时抑制DNA和蛋白质的降解。
在抽提过程中，需要按照试剂说明书进行操作，注意控制好细胞碎片的浓度和体积，以保证抽提
将提取的RNA存储在无菌环境中，避免污染。

RNA提取方法（TRIzol法）

RNA提取方法（TRIzol法）RNA 提取方法（TRIzol法）一、试剂准备1、TROzlo试剂、氯仿、75%乙醇（0.1% DEPC配制）。

2、塑料器皿需用0.1% DEPC 水浸泡。

3、0.1%DEPC水：100ml dd水中加入DEPC0.1ml，充分振荡，37℃孵育12h以上，121℃高压灭菌20min，于4℃保存。

二、操作步骤1、样品处理（1）组织：50-100mg组织中加入1ml TROzlo试剂。

（2）单层细胞：加入TROzlo 试剂1ml/cm2平板。

（3）悬浮细胞：处理前洗涤细胞，以防止RNA降解。

每5-10×105动物、植物或酵母细胞，或1×107细菌加入1 ml TROzlo试剂。

2、将上述样品于15-30℃静置5min，使核蛋白充分解离。

3、加入0.2ml（1 ml TROzlo试剂）氯仿，盖紧盖子，充分剧烈振荡15s并于15-30℃静置2-3min。

4、于2-8℃12000g离心15min。

离心后样品分层，上层水相中含RNA，下层有机相中含蛋白和DNA。

5、取上清，加入0.5ml异丙醇，轻轻混匀，于15-30℃静置10min后，在管底会出现胶状沉淀，即为RNA。

6、于2-8℃12000g离心10min后弃去上清。

7、向沉淀中加入1ml 75%乙醇，轻轻混匀。

8、于2-8℃7500g离心5min后弃上清9、将RNA样品凉干（不要彻底干燥），加入适量DEPC水溶解（可于55-60℃促溶10min）。

三、注意问题1、在加入氯仿之前（第1步），样品能于-60- -70℃保存至少一个月。

2、RNA沉淀（第6步）在75%乙醇中于2-8℃能保存至少一周，于-5- -20℃能保存至少一年。

四、RNA定量RNA（mg/mL）=40×OD260×稀释倍数（n）/1000 RNA纯品OD260/OD280=2.0 五、RNA电泳（1）用1×TAE电泳缓冲液制作琼脂糖凝胶，加1×TAE电泳缓冲液至液面覆盖凝胶。

Trizol法提取RNA实验步骤及原理

Trizol法使用步骤一、分离纯化的基本原理研究基因的表达和调控时常常要从组织和细胞中分离和纯化RNA。

RNA质量的高低常常影响cDNA库，RT-PCR和Northern Blot等分子生物学实验的成败。

Trizol是一种新型总RNA抽提试剂，内含异硫氰酸胍等物质，能迅速破碎细胞，抑制细胞释放出的核酸酶。

二、用户需自备的试剂和材料无水乙醇、氯仿、Glycogen（可能需要）、 Eppendorf管（RNase-free）、 Tips （RNase-free）三、准备工作RNase酶非常稳定，是导致RNA降解最主要的物质。

它在一些极端的条件可以暂时失活，但限制因素去除后有迅速复性。

用常规的高温高压蒸气灭菌方法和蛋白抑制剂都不能是RNase完全失活。

它广泛存在于人的皮肤上，因此，在与RNA制备有关的分子生物学实验时，必须戴手套。

RNase的又一污染源是取液器，根据取液器制造商的要求对取液器进行处理。

一般情况下采用用DEPC(焦炭酸二磷脂，一种RNase抑制剂)配制的70%乙醇擦洗取液器的内部和外部，基本达到要求。

取RNase-free的物品时必须戴手套。

1、料制品的处理尽可能使用无菌，一次性塑料制品，已标明RNase-Free 的塑料制品，如没有开封使用过通常没有必要再次处理。

对于国产塑料制品，原则上都必须处理方可使用。

处理步骤如下：1）在玻璃烧杯中注入去离子水，加入DEPC使DEPC的终浓度为%。

注意：DEPC为剧毒物，活性很强，小心在通风柜中使用。

2）处理的塑料制品放入一个可以高温灭菌的容器中，注入DEPC水溶液，使塑料制品的所有部分都浸泡到溶液中。

3）在通风柜中室温处理过夜。

4）将DEPC水溶液小心倒到废液瓶中，用铝箔封住含已DEPC水处理过的塑料制品的烧杯，高温高压蒸气灭菌至少30分钟。

5）烘箱用合适的温度烘拷至干燥。

置于干净处备用。

2、璃玻和金属物品250°C烘烤3小时以上。

Trizol法提取RNA实验步骤及原理

Trizol法提取RNA实验步骤及原理实验原理：Trizol法是一种常用的RNA提取方法，其原理是利用三种有机物（TRIzol、氯仿和异丙醇）的混合物，使细胞或组织中的RNA在低温下与TRIzol发生相互作用，形成RNA-TRIzol复合物。

加入氯仿后，RNA-TRIzol复合物会转移到有机相中，而DNA和蛋白质则留在水相中。

通过离心分离有机相和水相，可将RNA从有机相中分离出来。

最后，加入丙醇沉淀RNA，即可得到纯度较高的RNA。

实验步骤：1. 细胞或组织样品的收集：将细胞或组织样品收集到离心管中。

2. 加入Trizol试剂：向离心管中加入适量的Trizol试剂，按比例加入的量为1mL Trizol/100mg组织或1×10^7个细胞。

3. 细胞或组织样品的破碎：使用超声波或均质器等方法将细胞或组织样品破碎。

4. 加入氯仿：向离心管中加入适量的氯仿，按比例加入的量为0.2mL氯仿/1mL Trizol。

5. 混合离心：将离心管中的混合物混合均匀后，离心分离有机相和水相。

6. 收集RNA：将有机相转移到新的离心管中，加入适量的异丙醇，沉淀RNA。

7. 洗涤RNA：用75%乙酸酒精洗涤RNA。

8. 溶解RNA：用RNase-free水或DEPC水溶解RNA。

9. 检测RNA：使用比色法或琼脂糖凝胶电泳等方法检测RNA的纯度和浓度。

注意事项：1. Trizol试剂应保存在4℃下，避免阳光直射和冰冻。

2. 操作过程中要注意RNA的保护，避免RNA的降解。

3. 操作过程中要使用无菌技术，避免污染。

4. 操作过程中要注意个人防护，避免接触到有害物质。

5. 实验前要准备好所有所需试剂和设备，确保实验顺利进行。

6. 实验后要及时清洗和消毒实验器材，避免交叉污染。

Trizol法提取RNA实验步骤及原理

Trizol法提取RNA实验步骤及原理RNA（核糖核酸）在基因表达调控、蛋白质合成等生物过程中起着至关重要的作用。

Trizol 法是一种广泛应用于从细胞和组织中提取高质量 RNA 的经典方法。

下面将详细介绍 Trizol 法提取 RNA 的实验步骤及原理。

一、实验原理Trizol 试剂主要由苯酚和异硫氰酸胍组成。

苯酚的作用是使蛋白质变性并将其分离，而异硫氰酸胍则能抑制 RNA 酶的活性，保护 RNA 不被降解。

在细胞破碎后，Trizol 试剂能够迅速渗透到细胞中，裂解细胞并释放出 RNA、DNA 和蛋白质等成分。

由于 RNA 在酸性条件下会溶于水相，而 DNA 和蛋白质则分别存在于有机相和中间相。

通过离心操作，可以将 RNA 与其他成分分离开来，从而获得纯净的 RNA 样品。

二、实验步骤1、材料准备新鲜的细胞或组织样本Trizol 试剂氯仿异丙醇75%乙醇（用无 RNase 的水配制）无 RNase 的水或 DEPC 处理水离心机移液器及枪头（RNasefree）冰盒2、样品处理对于细胞样本：将培养的细胞收集到离心管中，离心弃去培养液。

用 PBS 缓冲液洗涤细胞 1 2 次，离心弃上清。

对于组织样本：将新鲜组织切成小块，放入液氮中速冻，然后用研钵或匀浆器将其充分研磨成粉末状。

3、加入 Trizol 试剂按每 50 100 mg 组织或 10^6 10^7 个细胞加入 1 ml Trizol 试剂的比例，将 Trizol 试剂加入到样品中。

用移液器反复吹打或剧烈振荡，使细胞或组织充分裂解，室温放置5 分钟，使核蛋白复合物完全解离。

4、分离相每 1 ml Trizol 试剂加入 02 ml 氯仿，盖紧离心管盖，剧烈振荡 15 秒，室温放置 2 3 分钟。

在4℃下，以12,000 g 离心15 分钟。

离心后，混合物会分成三层：下层为红色的有机相（主要包含蛋白质和 DNA），中间层为白色的变性蛋白层，上层为无色的水相（包含 RNA）。

(完整版)Trizol法提取RNA实验步骤(可编辑修改word版)

Trizol 法使用步骤一、分离纯化的基本原理研究基因的表达和调控时常常要从组织和细胞中分离和纯化RNA。

RNA 质量的高低常常影响cDNA 库，RT-PCR 和Northern Blot 等分子生物学实验的成败。

Trizol 是一种新型总RNA 抽提试剂，内含异硫氰酸胍等物质，能迅速破碎细胞，抑制细胞释放出的核酸酶。

二、用户需自备的试剂和材料无水乙醇、氯仿、Glycogen（可能需要）、 1.5ml Eppendorf 管（RNase-free）、Tips（RNase-free）三、准备工作RNase 酶非常稳定，是导致RNA 降解最主要的物质。

它在一些极端的条件可以暂时失活，但限制因素去除后有迅速复性。

用常规的高温高压蒸气灭菌方法和蛋白抑制剂都不能是RNase 完全失活。

它广泛存在于人的皮肤上，因此，在与RNA 制备有关的分子生物学实验时，必须戴手套。

RNase 的又一污染源是取液器，根据取液器制造商的要求对取液器进行处理。

一般情况下采用用DEPC 配制的70%乙醇擦洗取液器的内部和外部，基本达到要求。

取RNase-free 的物品时必须戴手套。

1、料制品的处理尽可能使用无菌，一次性塑料制品，已标明RNase-Free 的塑料制品，如没有开封使用过通常没有必要再次处理。

对于国产塑料制品，原则上都必须处理方可使用。

处理步骤如下：1）在玻璃烧杯中注入去离子水，加入DEPC 使DEPC 的终浓度为0.1%。

注意：DEPC 为剧毒物，活性很强，小心在通风柜中使用。

2）处理的塑料制品放入一个可以高温灭菌的容器中，注入DEPC 水溶液，使塑料制品的所有部分都浸泡到溶液中。

3）在通风柜中室温处理过夜。

4）将DEPC 水溶液小心倒到废液瓶中，用铝箔封住含已DEPC 水处理过的塑料制品的烧杯，高温高压蒸气灭菌至少30 分钟。

5）烘箱用合适的温度烘拷至干燥。

置于干净处备用。

2、璃玻和金属物品250°C 烘烤3 小时以上。

详解Trizol提取RNA原理、步骤和注意事项

详解Trizol提取RNA原理、步骤和注意事项Trizol是一种新型总RNA抽提试剂，采用变性剂即内含异硫氰酸胍酚和β-巯基乙醇等变性物质，能迅速破碎细胞，抑制细胞释放出的核酸酶。

异硫氰酸胍属于解偶剂，是一类强力的蛋白质变性剂，可溶解蛋白质，并使蛋白质二级结构消失，细胞结构降解，核蛋白迅速与核酸分离。

β-巯基乙醇主要破坏RNase蛋白质中的二硫键。

（一）试剂准备1．Trizol试剂。

2．氯仿3．异丙醇4．75%乙醇（DEPC水配制）5．DEPC水细胞裂解后，细胞释放出蛋白质、DNA、RNA等物质，再根据它们在不同的PH值和不同极性溶剂的溶解度不同而使得分开。

（二）操作步骤1．样品处理：（1）细胞：1）悬浮细胞：移入1.5ml离心管中，1200转，离心5min，弃上清，PBS洗，重复两次，最后弃ＰＢＳ，加入1ml Trizol，混匀，室温静置5min。

２）贴壁细胞：PBS洗两次，最后弃ＰＢＳ，加入1ml Trizol，混匀，室温静置5min。

（2）组织：取50-100mg组织（新鲜或-70℃及液氮中保存的组织均可）置1.5ml 离心管中，加入1ml Trizol充分匀浆，室温静置５min。

2．加入0.2ml氯仿，振荡15s，静置15min。

3．4℃离心，12000g×15min，取上清。

4．加入0.5ml异丙醇，将管中液体轻轻混匀，室温静置10min。

5．4℃离心，12000g×10min，弃上清。

6．加入1ml 75%乙醇，轻轻洗涤沉淀。

4℃，8000g×5min，弃上清。

7. 晾干，加入适量的DEP水溶解（65℃促溶10-15min）。

（三）注意事项1．样品量和Trizol的加入量一定要按步骤（1）的比例，不能随意增加样品量或减少Trizol量，否则会使内源性RNase的抑制不完全，导致RNA降解。

2．实验过程必须严格防止RNsae的污染。

（四）总RNA定量RNA定量方法与DNA定量相似，RNA在260nm波长处有最大的吸收峰。