普通肉汤琼脂培养基使用

中文名称：营养琼脂(普通肉汤琼脂培养基)

英译名称：Nutrient Agar

品种编号：022020

营养琼脂规格：250g干粉培养基

营养琼脂用途：用于细菌总数测定、保存菌种及纯培养，也可用于消毒效果测定。

营养琼脂使用原理：

蛋白胨和牛肉膏粉提供氮源、维生素、氨基酸和碳源;氯化钠能维持均衡的渗透压;琼脂是培养基的凝固剂。

微生物图册：

营养琼脂配方(每升)：

蛋白胨10g

牛肉膏粉3g

氯化钠 5g

琼脂15g

最终pH 7.3±0.2

营养琼脂使用方法：

1、称取本品33g，加入蒸馏水或去离子水1 L，搅拌加热煮沸至完全溶解，分装三角瓶，121℃高压灭菌15min，备用。

2、(食品)以无菌操作称取检样25克(或25mL)，放入含有225mL灭菌生理盐水或其他稀释液的玻璃三角瓶中(瓶内预置适当数量的玻璃珠)，充分振摇，即为1：10的均匀稀释液。依次做1：100，1：1000……稀释液。

3、根据对样品污染情况的估计，选择2—3个合适的稀释度，分别在做10倍稀释的同时，吸取1mL稀释液于灭菌平皿中，每个稀释度做2个平皿。

4、稀释液移入平皿后应及时将凉至46℃左右的培养基注入平皿约15mL，并转动平皿使混合均匀，同时将营养琼脂培养基倾入加有1mL稀释液的灭菌平皿内作空白对照。待琼脂凝固后，倒置于36±1℃温箱中培养48±2h。

5、观察结果。

6、菌落计数方法：

做平板菌落计数时，可用肉眼观察，必要时用放大镜检查，以防遗漏，在计下各平板的菌落数后，求出同稀释度的各平板平均菌落总数。

7、菌落计数的报告：

选取菌落数在30-300之间的平板作为菌落总数测定标准。一个稀释度使用两个平板，应采用两个平板平均数，其中一个平板有较大片状菌落生长时，则不宜采用，而应以无片状菌落生长的平板作为该稀释度的菌落数，若片状菌落不到平板的一半，而其余一半中菌落分布又很均匀，即可计算半个平板后乘以2以代表全皿菌落数。平皿内如有我链状菌落生长时(菌落之间无明显界线)，若仅有一条链，可视为一个菌落;如有不同来源的几条链，则应将每条链视为一个菌落计。

营养琼脂质量控制：

本营养琼脂接种下列菌株，置于36±1℃温箱中培养48±2h，结果如下：

菌名菌号生长状况菌落特征

大肠埃希氏菌ATCC25922 良好白色—灰白色，圆形，边缘整齐，表面光滑，湿润。

金黄色葡萄球菌ATCC6538 良好黄色，圆形，边缘整齐，表面光滑、湿润，不透明。

贮存：贮存于避光、阴凉干燥处，用后立即旋紧瓶盖。贮存期三年。