普通肉汤琼脂培养基使用
细菌的分离培养
细菌的分离培养实验目的：掌握在各种培养基上的接种方法并观察生长现象。
实验材料：菌种、普通琼脂平板、肉汤培养基、半固体培养基、斜面培养基、接种环、接种针、酒精灯。
实验内容：一、平板划线接种法（分离培养法）原理：通过在平板上划线，将混杂的细菌在琼脂平板表面充分的分散开，使单个细菌能固定在一点上生长繁殖，形成单个菌落，以达到分离纯种的目的。
若需从平板上获取纯种，则挑取一个单个菌落作纯培养。
用途：分离出纯种细菌，以利作纯培养。
操作方法（三区划线法）：1、右手拿接种环，烧灼冷却后，取菌液一环。
2、左手抓握琼脂平板（让皿盖留于桌上），在酒精灯火焰左前上方，使平板面向火焰，以免空中杂菌落入，右手将已沾菌的接种环在琼脂表面密集而不重叠的来回划线，面积约占整个平板的1/5-1/6，此为第一区。
划线时接种环与琼脂呈30-40度角轻轻接触，利用腕力滑动，切忌划破琼脂。
3、接种环上多余的细菌可烧灼（每划完一个区域是否需要烧灼灭菌视标本中含菌量多少而定），待冷后，在划线末端重复2-3根线后，再划下一区域（约占1/4面积），此为第二区。
4、第二区划完后可不烧灼接种环，用同样方法划第三区，划满整个平皿。
5、划线完毕，将平板扣入皿盖并作好标记，置37°C温箱孵育18-24小时观察琼脂表面菌落分布情况，注意是否分离出单个菌落，并记录菌落特征（如大小、形状、透明度、色素等）。
二、液体培养基接种法用途：凡肉汤、蛋白胨水，各种单糖发酵均用此法接种。
可以观察细菌不同的生长性状、生化特性以供鉴别之用。
操作方法：右手执笔式握住接种环，灭菌冷却后取单个菌落。
1、左手拇指、食指、中指托住液体培养基之下端，右手小指和无名指（或手掌）拔取试管塞，将管口移至火焰上旋转烧灼。
2、将沾菌的接种环移入培养基管中，在液体偏少侧接近液面的管壁上轻轻研磨，沾取少许液体与之调和，使菌液混合于培养基中（图5）。
3、管口通过火焰，塞好试管塞，将接种环灭菌后放下，经37C温箱孵育18-24小时，取出观察生长情况。
微生物培养基种类大全
摘要：1、营养琼脂（普通琼脂）成份：牛肉浸液（或其它浸液，消化液或肉膏汤）100毫升琼脂（视天气，琼脂质量而定）制法：将上物加热溶解，补足水，调ph至7．6，过滤分装121℃，高压灭菌15分钟。
用途：作普通琼脂平皿。
2、血琼脂平板（BA）制法：取营养琼脂（PH7．6），加热使其溶解待冷至45-50℃，以灭菌操作于每100毫升营养1、营养琼脂（普通琼脂)成份：牛肉浸液（或其它浸液，消化液或肉膏汤) 100毫升琼脂（视天气，琼脂质量而定)制法：将上物加热溶解，补足水，调ph至7．6，过滤分装121℃，高压灭菌15分钟。
用途：作普通琼脂平皿。
2、血琼脂平板（BA)制法：取营养琼脂（PH7．6)，加热使其溶解待冷至45-50℃，以灭菌操作于每100毫升营养琼脂加灭菌脱纤维羊血或兔血5-10毫升,轻轻摇匀，立即倾注于平板或分装试管，制成斜面备用。
用途：1．一般棉拭子均接种此培养基。
2．尿液，脓液3．分离细菌标本用。
3、基础培养基（肉膏汤BB)成份：蛋白胨10克牛肉膏5克氯化钠5克水1000毫升制法：将以上各物称好，加水煮沸溶解，用1NNOH校正PH至7．6，过滤分瓶，121℃高压灭菌，20分钟备用。
用途：1 作耐药试验，增菌用分装小管。
2 作普通琼脂斜面。
4、血液培养基（大管肉汤培养基)成份：1 新鲜牛肉浸液1000毫升2 PABA（对氨基苯甲酸〔相当于10mg/毫升〕) 1g% 1毫升3 MgSO4 [相当于0．493/100毫升] 49．3% 1毫升4 枸椽酸钠0．3g制法：1 将1号，4号混合液，2号，3号液分装高压灭菌。
2 取灭菌1，4号混合液用无菌法加入PABA，MgSO4，再分管，行无菌试验三天方可使用。
用途：作血，骨髓培养用。
5、肠道杆菌培养基（伊红美兰琼脂)成份：蛋白胨10克乳糖10克氯化钠5克琼脂25（22)克水1000毫升2%伊红溶液20毫升0．5%美兰溶液20毫升制法：将蛋白胨，氯化钠琼脂称好，加水1000毫升使溶解，校正PH7．4过滤，补足失水，加入2%伊红溶液20毫升，0．5%美兰溶液20毫升，（115℃高压20分钟)，冷却至50℃左右倾注平板，凝固后存冰箱备用。
基础培养基的制备
1.灭菌器内加入一定量的水，将包扎好的物品放入其中。 封盖。
2.接通电源，进行加热。 3. 排除高压锅内的冷空气，可将排气阀打开，待排出大 气后关闭排气阀。
4.当压力达15bl/in2（即1.05kg/cm2）时，此时灭菌器 内的温度为1210C，维持15～20min。
• 不加氮源的无氮培养基： 分离固氮菌
• 不加含碳有机物的无碳培养基： 分离自养型微生物
• 加入青霉素等抗生素的培养基： 分离导入的目的基因的受体细胞
• 加入氨基嘌呤、次黄嘌呤和胸腺嘧啶核苷的培养基： 分离杂交瘤细胞
五、培养基配制的一般程序
• 称量：按照配方正确称取各种原料放于烧杯中。
• 溶化：在烧杯中加入所需水量，玻棒搅匀，加热溶解。
应用微生物与免疫学
一、目的要求
• 了解配制培养基的基本程序，熟悉基础培养 基的配制原则和制备方法。
• 掌握肉汤培养基、普通琼脂培养基的制备及 用途。
二、实验原理
• 培养基为人工培养微生物而制备的、提供适合微生物生长、 繁殖或积累代谢产物的营养基质。
• 人工制造适宜的培养基并给予合适的温度、气体等培养条 件，即能使细菌等微生物在体外迅速生长繁殖。
按培养基 配方称量
加水加 热熔化
调节 pH值
过滤
分装 包装
灭菌
检查灭菌 彻底与否
六、实验内容
（一）材料： • 药品：牛肉膏、蛋白胨、琼脂、氯化钠等。
• 高压蒸汽灭菌器、恒温干热灭菌箱。 • 其它： 1N NaOH、天平、牛角匙、电炉、pH试纸、烧杯、
量筒、漏斗、漏斗架、玻棒、三角瓶、带棉塞的试管、培 养皿、吸管、各种包装纸、绳索、标签等。
5.灭菌时间一到，切断电源，待压力降至零时，才能打 开排气阀，然后打开灭菌器盖，取出物品。
肉汤培养基
肉汤培养基听到肉汤培养基很多人的反应是肉汤我知道是啥，培养基我也知道，但是连起来就不明白了。
其实肉汤培养基是一种测定细菌或者提供给真菌生存环境的，它是以肉汤作为基础成份，再加以一定的生物手段，形成适合真菌生存的环境。
与肉汤培养基类似的有琼脂培养基，外形和作用效果都有相似的地方，要注意区分。
第一肉汤培养基的制备。
去脂、去筋鲜牛肉末50g，加水100ml，搅匀，放冰箱过夜，取出煮沸30分钟，用纱布过滤，补足水量为100ml，即为牛肉浸液。
加入蛋白胨1g，氯化钠0.5g，加热溶解。
调整pH值为7.6，煮沸10分钟，过滤，分装，高压灭菌备用。
第二肉汤培养基和LB培养基的区别。
LB是用来培养菌种的，能让菌种在里边成倍扩增；MH是用于抗生素敏感试验，也就是培养基上已经有某种菌种，我们要检测某种抗生素对该菌种的杀灭性，就往MH培养基上加抗生素。
这样MH是可以分为数百种的，因为常见微生物就有太多种。
第三营养肉汤培养基。
MRS肉汤菌种乳酸菌英文名MRSBroth用途:用于乳酸菌增菌培养配方:(g/L)蛋白胨10.0肉膏10.0酵母浸粉5.0葡萄糖20.0磷酸氢二钾2.0柠檬酸氢二铵2.0乙酸钠5.0硫酸镁0.58硫酸锰0.25半胱氨酸0.5吐温801.0pH值6.2-6.4原理:蛋白胨、肉膏、酵母浸粉提供氮源、维生素、生长因子;葡萄糖为可发酵糖类;磷酸氢二钾为酸碱缓冲剂;柠檬酸氢二铵、硫酸镁、硫酸锰、吐温-80和乙酸钠为培养各种乳酸菌提供生长因子，其成分还能抑制某些杂菌。
第四甘油肉汤培养基。
20g甘油10ml氯化镁(无水)1.4g琼脂14g硫酸钾(无水)10g 水1000ml取胨、氯化镁和硫酸钾加入水中，微温溶解，调节pH 使灭菌后为7.3±0.1，加入甘油琼脂，加热溶化，混匀，分装于试管，灭菌，制成斜面。
普通琼脂斜面培养基(pH8.0-8.2)使用方法
陈黄激球菌
CMCC(B)28001
/
+++
大肠埃希氏菌
CMCC(B)H102
!
+++
/
正乱弧菌
/
/
+++
/
普通琼脂斜面培养基微生物灵敏度试验：
按标签用法制备培养基，接种以下质控菌株，放置35-37。C需氧培养20-24小时。
质控菌株
菌株编号
接种量(CFU)
生长情况
其它特征
拈草芽抱杆菌
CMCCCB)63501
/
+++
/
短小芽抱杆菌
CMCCCB)63202
/
+B)26003
/
+++
产品名称：普通琼脂斜面培养基(pH8.0-8.2)
英文名称：Ordinaryagars1antmedium
产品规格:250g
保质期：三年
产品用途：分离培养霍乱弧菌，麦迪霉素检定用
成分(g∕1):
蛋白陈10.0
牛肉浸出粉3.0
氯化钠5.0
琼脂15.0
PH值8.0-8.225℃产品用法：
称取本品33克，加热溶解于IOOOnII蒸储水中，121℃高压灭菌15分钟后，制成斜面备用。
四抗菌药物敏感性试验
四、抗菌药物敏感性试验（一）药敏试验的目的测定病原微生物对化学治疗药物敏感性的试验称为化疗药物敏感性试验（Drug sensitivity test），简称药敏试验。
药敏试验的主要目的是：①用于测定新的抗菌药物或制剂的抗菌谱；②对病灶分离菌进行流行病学调查，主要应用于测定细菌经过多年后敏感性的变化情况和地区特异性；③在临床治疗感染性疾病时，针对病原菌选择合适的首选药物品种。
（二）药敏试验的原理及种类药敏试验是通过培养基培养的细菌确定细菌对药物的敏感性方法。
将被检菌接种在适当的培养基上，然后加上不同种类或不同浓度的抗菌药物（或制剂），观察细菌生长发育的速度和程度。
用药后，细菌在培养基上停止生长并且死亡，抑菌圈清晰，说明细菌对药物敏感，药物表现有较强的杀菌作用；用药后，细菌停止生长，但液体培养基经过一定时间后还可能出现浑浊或固体培养基上的抑菌圈不清晰，说明细菌对药物比较敏感，预示药物对被检细菌只是起抑菌作用。
通常判定一种药物对细菌的杀菌或抑菌作用的强度指标是固体培养基中抑菌圈的大小，但这也不是绝对的，因为抑菌圈的大小与药物对培养基的渗透性是密切相关的。
药敏试验方法较多，但在原理上不外乎是稀释法和扩散法两大类。
而扩散法（包括纸片法、管碟法）通常适用于临床治疗选择药物。
（三）常用培养基制作法1．普通肉汤培养基牛肉浸膏 3.0克蛋白胨 10.0克氯化钠 5.0克蒸馏水 1000毫升放在三角烧瓶中，微温溶解后，调节pH值至7.4~7.6，煮沸10分钟，冷却后的pH值为7.2±0.2。
15磅压力下灭菌15分钟（115℃灭菌30分钟）即得。
本培养基可用作为固体、鉴别、选择等培养基制造的基础原料，大部分细菌都能在其中生长。
1．普通肉汤琼脂培养基照上述普通肉汤培养基的配方及制法，加入15~20克琼脂，加热溶解后，调节pH值使灭菌后为7.2±0.2，分装，115℃灭菌30分钟，即得。
3．0.5%葡萄糖肉汤培养基蛋白胨 10克氯化钠 5克葡萄糖 5克牛肉浸膏 3克蒸馏水 1000毫升微温溶解后，调节pH值至弱碱性，煮沸后，加葡萄糖溶解，摇匀，滤清，调节pH值使灭菌后为7.2±0.2，分装，115℃灭菌30分钟，即得。
各种菌培养方法
副猪、链球、多杀、胸膜培养方法
副猪嗜血杆菌：
肉汤培养基：TSB+5ml/100ml胎牛血清+1ml 0.1g/100mlNAD
琼脂培养基：TSA+5ml/100ml胎牛血清+1ml 0.1g/100mlNAD
药敏试验：
琼脂法：TSA+5ml/100ml胎牛血清+1ml 0.1g/100mlNAD
肉汤法：TSB+5ml/100ml胎牛血清+1ml 0.1g/100mlNAD
链球菌：
肉汤培养基：TSB+5ml/100ml胎牛血清/脱纤维马血
或者MHB+5ml/100ml胎牛血清/脱纤维溶解的马血琼脂培养基：TSA+5ml/100ml脱纤维绵羊血
或者是MHA+5ml/100ml脱纤维绵羊血药敏试验：
琼脂法：MH琼脂+5%脱纤维绵羊血在35±2℃5±2%CO2培养20-24h
肉汤法：MHB+5ml/100ml胎牛血清/脱纤维马血在没有CO2 的培养箱里培养20-24h
多杀性巴氏杆菌中：
肉汤培养基：TSB/MH胎牛血清/脱纤维溶解马血
琼脂培养基：TSA/MHA+绵羊血
药敏试验：
肉汤法：MHB 35±2℃18-24h没有CO2的普通培养箱
琼脂法：MHA+5%脱纤维绵羊血同上
猪胸膜肺炎放线杆菌：
肉汤培养基：TSB+1ml 0.1g/100mlNAD+胎牛血清
琼脂培养基：TSA+1ml 0.1g/100mlNAD+胎牛血清
药敏试验：MH琼脂加+1ml 0.1g/100mlNAD
2014年07。
Ames准备
Ames试验准备一、营养肉汤培养基（一）配制前准备：1、PＨ计使用PH 调节缓冲液配制lN等于1L溶液中某种物质1mol除以该物质的氢当量价所得数值的量氧化钠(NaOH )；分子量＝40．005，当量价＝11N Na0H的配制方法为：m＝40．005／1＝40．005g。
取40．005gNaOH溶解于1L蒸馏水中36％的HCl，即100g的盐酸溶液中含有36g的HCL和64g的水，盐酸1M=1N，1当量盐酸质量为36.5克，已知HCL密度为1.19%克每毫升，1N HCl即（36.5÷0.0119）ml HCl一摩尔的HCl和NaOH是实验室常备的,可以调节稀溶液用,也可以在接近PH目标时使用.２、制作三角瓶瓶塞和棉线：３、准备三角烧瓶2，试管2个（找试管架放置）。
以及后面平皿5个，试管7个，盖好塞子灭菌。
121度20min.先不配制那么多，没有地方放，而且要先确定好方法。
平皿在浇注之前灭菌，超净台前浇注，试管及三角瓶在配好肉汤后灭菌。
（二）配制营养肉汤培养基2００ml：取200ml烧杯加蒸馏水100ml依次加入，牛肉膏 1.0g，胰胨tryptone(或混合蛋白胨mixed peptone)2.0g，氯化钠 1.0g，磷酸氢二钾（K2HPO4·3H2O）0.52gSOP中未加,1987教材也未加，加热溶解，溶解一种加另一种，稍冷用NaOH将pH调为7.0~7.2，用蒸馏水补充失去的水分，分装到50ml 的三角瓶中，每瓶15ml或分装于15*150mm试管中，每管5ml，加棉塞并用牛皮纸包裹瓶口，高压灭菌121 °C，10min，分装后的肉汤冷却后在4 °C保存期限不超过6个月。
分装成2个三角瓶中（15ml/瓶*2=30ml）和2个试管（5ml/瓶*2=10ml）中。
二、营养肉汤琼脂培养基(一)准备：1、制作三角瓶瓶塞和棉线：2、准备平皿5个，试管7个（找试管架放置）。
R2A琼脂对照培养基使用说明
R2A琼脂对照培养基
R2A琼脂对照培养基用途：
培养基适用性实验
R2A琼脂对照培养基注意事项：
1.检查平板内是否干裂或染菌，如长菌请勿使用；
2.请在洁净的环境下操作，避免杂菌干扰；
3.在冰箱储存很久的培养基容易出现一些冷凝水，请在洁净的环境下将水倒出，
然后在培养箱放置10-30Min，待其表面干燥后再接种；或在使用前，提前一到两周放置室温即可；
4.弃物处理：使用后应高压灭菌或焚烧后按一般垃圾处理，也可按专业技术人
员指示方法处理。
保存：避光保存，放于阴凉干燥处。
R2A琼脂对照培养基其他相关对照培养基：
硫乙醇酸盐流体对照培养基
改良马丁对照培养基
营养琼脂对照培养基
营养肉汤对照培养基
玫瑰红钠琼脂对照培养基
胆盐乳糖对照培养基
甘露醇氯化钠琼脂对照培养基
沙氏葡萄糖肉汤对照培养基
麦康凯琼脂对照培养基
沙门、志贺菌属琼脂对照培养基
4-甲基伞形酮葡萄苷酸（MUG)对照培养基
沙氏葡萄糖琼脂对照培养基
念珠菌显色对照培养基
绿脓菌素测定用对照培养基基础
梭菌增菌对照培养基
哥伦比亚琼脂对照培养基
溴化十六烷基三甲铵琼脂对照培养基基础
四硫磺酸钠亮绿对照培养基基础
乳糖发酵对照培养基
酵母浸出粉胨葡萄糖琼脂（YPD）对照培养基
胰酪大豆胨琼脂对照培养基
胰酪大豆胨肉汤对照培养基
R2A琼脂对照培养基
三糖铁琼脂对照培养基
麦康凯液体对照培养基
紫红胆盐葡萄糖琼脂对照培养基肠道菌增菌液体对照培养基
木糖赖氨酸脱氧胆酸盐对照培养基。
几种微生物培养基配方
几种微生物培养基配方微生物培养基是用来培养和繁殖各类微生物的营养基质，其配方可以根据不同微生物种类和研究需求进行调整。
下面将介绍几种常见的微生物培养基配方。
1.普通营养琼脂培养基普通营养琼脂培养基是最常见的一种培养基，适用于大多数微生物的培养。
其主要成分包括肉汤，琼脂，氨基酸和糖类等。
普通营养琼脂培养基的配方如下：-肉汤：10克-酵母浸泡液（菌种培养基，可选）：5克-琼脂：15克-蒸馏水：1000毫升将肉汤和酵母浸泡液加入蒸馏水中，搅拌均匀后加热至溶解，再加入琼脂，继续加热至完全溶解。
搅拌均匀后，将溶液倒入培养皿中，冷却凝固后即可使用。
2.高营养琼脂培养基高营养琼脂培养基适用于对营养需求较高的微生物，如快速生长的细菌或真菌。
其配方相对于普通营养琼脂培养基略有不同，具体配方如下：-肉汤：10克-蛋黄粉：10克-葡萄糖：5克-琼脂：15克-蒸馏水：1000毫升将肉汤和蛋黄粉加入蒸馏水中，搅拌均匀后加热至溶解，再加入葡萄糖和琼脂，继续加热至完全溶解。
搅拌均匀后，将溶液倒入培养皿中，冷却凝固后即可使用。
3.铁琼脂培养基铁琼脂培养基用于培养铁菌等对铁元素营养要求较高的微生物。
其配方如下：-琼脂：15克-蔗糖：10克-磷酸二氢钾：0.2克-氯化铵：2克-硫酸亚铁：0.1克-蒸馏水：1000毫升将以上成分加入蒸馏水中，搅拌均匀后加热至溶解，然后继续加热至沸腾。
搅拌均匀后，将溶液倒入培养皿中，冷却凝固后即可使用。
4.特殊需求培养基除了普通营养基外，一些微生物需要特定的培养基才能生长。
例如，大肠杆菌需要含有葡萄糖和氧气的LB培养基；霉菌需要含有麦芽提取物和琼脂的SDA培养基。
这些特殊需求培养基的配方可以根据具体要求进行调整，以适应不同微生物的生长。
总结：微生物培养基有许多种，以上仅介绍了几种常见的配方。
实际应用中，根据不同微生物种类和研究需求，配方可以根据需要进行调整。
制备培养基时，需要严格按照操作规程操作，避免外界污染，以保证培养基的质量和可靠性。
实验二细菌的接种、培养及代谢产物
实验二细菌的接种、培养及代谢产物（B a c t e r i a l I n o c u l e t i o n a n d A r t i f i c a l C u l t u r e a n dM e t a b o i c p r o d u c t s）一、细菌的人工培养（A r t i f i c a l C u l t u r e o f B a c t e r i a）在适当条件下，绝大多数细菌可用人工方法培养，使其繁殖，通过人工培养，获得纯种细菌，是进一步观察研究各种细菌具有不同特性的基础。
(一)常用培养基的制备1、肉汤培养基：是常用的液体培养基，也是制备某些其他培养基的基础。
材料：（制备100m l肉汤培养基的用量）(1)培养基的成分：牛肉50g蛋白脂1g氯化钠0.5g磷酸氢二钾(K2H P04·12H20)0.1g蒸馏水100m1(2)玻皿、试剂、比色管、比色架、吸管、1N与1／20N 的N a O H、三角烧瓶、漏斗、中试管、酚红指示剂、滤纸、卷筒、天平、蒸馏水。
方法：（1）将已去筋膜脂肪并经绞碎鲜牛肉50g，加蒸馏水100m l，放入冰箱中过夜。
（2）加热45—50℃一小时，并煮沸半小时，用数层纱布或滤纸过滤，滤液用蒸馏水补足其量为100m1。
（3）于滤液中加氯化钠0.5g，蛋白脂1g、磷酸氢二钾0.1g，加热使之完全溶化。
（4）测定酸碱度并调整至P H7.6，必要时用滤纸过滤。
（5）按需要分装于试管或烧瓶内，加棉花塞并包装后，置高压蒸汽灭菌器内经15磅／寸220—30分钟灭菌。
（6）灭菌后置37℃温箱，孵育24h，无杂菌生长，即可应用。
或放冰箱备用。
2、普通琼脂培养基它是最常用的固体培养基。
材料：肉汤、琼脂方法：(1)在肉汤中加入2％琼脂，熔化后调整P H7.6，必要时用棉花纱布过滤。
(2)于琼脂凝固前，分装于试管或小烧瓶内，然后加棉塞并包装。
(3)放入高压蒸汽灭菌器内，经15磅/寸220分钟灭菌。
微生物限度检查法
目的：规范药品微生物限度标准。
适用范围：药品微生物限度的检查。
责任者：操作员、化验员。
中成药、化学药品、生化药品的非灭菌制剂及药用原料、辅料，除另有规定外，皆按本法进行检验，并按中华人民共和国药典2000年版附录XIJ《微生物限度检查法》的规定判定检验结果。
检验方法总则1、抽样1.1 供试品采用随机抽样方法，按批号抽样。
1.2 抽样量一般应为检验用量（2个以上最小包装单位）的3倍量。
1.3 抽样时，凡发现有异常或可疑的样品，应抽选有疑问的样品，但因机械损伤明显破裂的包装不得作为样品。
1.4 凡已能从药品、瓶口（外盖内侧及瓶口周围）外观看出长螨、发霉、虫蛀以及变质的药品，可直接判为不合格品，无需再抽样检验。
2、供试品保存2.1 供试品在检验前，应保存在阴凉干燥处（勿冷藏或冷冻），以防供试品中的污染菌因保藏条件引起致死、损伤或繁殖。
2.2 供试品在检验之前，应保持原包装状态，严禁开启。
包装已开启的样品不得作为供试品。
3、检验3.1 供试品检验项目按中国药典2000年版二部附录XIJ 《微生物限度检查法》确定。
3.2 检验的全过程必须符合无菌操作要求，严防再污染。
3.3 除另有规定外，供试品制备成供试液后，应在均匀状态取样。
3.4 供试品制成供试液后，应在1小时内注皿操作完毕。
4、检验量4.1 所有剂型的检验均需取自2个以上包装单位。
4.2 化学药品、生化药品的胶囊剂、片剂、颗粒剂等检验量为10g。
5、供试液的制备5.1 一般固体供试品称取10g，置研钵中，以100ml稀释剂（0.1mol/L磷酸盐缓冲液或生理盐水），分次加入研磨均匀，并转移至 250ml锥形瓶中，使成1:10供试液。
或者将供试品和稀释剂同置匀浆仪中，以转速3000~5000转／分，开机1~2分钟。
对吸水膨胀或粘度大的供试品，可制成1:20供试液。
5.2 胶囊剂供试液制备方法称取供试品10g置锥形瓶中，加入稀释剂100ml，于45℃水浴中振摇至溶，即为1:10供试液。
药敏试验方案
1抗菌药物筛选1.1 菌液的制备将菌株接种于普通琼脂平板上，置于37℃恒温箱中培养24h，分别挑取单个特征菌落接种于灭菌肉汤培养基中，置37℃恒温箱中过夜培养。
取过夜培养的菌悬液100 μL加入到900μL的肉汤培养基中，依次进行稀释，然后选取适当的浓度涂板，每个浓度三个平行。
选取平板上菌落数目在30～300之间的进行计数，最后用肉汤或无菌生理盐水配成浓度为5个×107-8CFU/mL的菌液作初筛用。
1.2 琼脂扩散法 (K-B) 抑菌试验用无菌棉签将浓度为5个×107-8CFU/mL的标准菌液均匀涂布于普通营养琼脂培养基上，反复几次，每次将平板旋转60度，最后沿周边绕两圈，保证涂均匀。
然后用直径为6mm的无菌圆形玻璃管打孔，将供试药物浓度为100mg／ml的药液加入孔中，加满为止，不得溢出。
再将培养皿置于37℃恒温箱中培养24h，取出观察，用卡尺测量抑菌圈的直径。
每次实验前用大肠杆菌ATCC25922进行质量控制，设置阴性对照和阳性对照，阳性药物的选择依据美国临床实验室标准化委员会(NCCLS)公布的标准。
1.3 药敏试验判断标准按照美国临床实验室标准化委员会(NCCLS)，抑菌圈直径d小于等于6 为-；d小于等于10为+；d小于等于16为++；d小于等于26为+++；d大于26为++++ 。
一般认为++以上具有抑菌活性。
2 抗菌药物最低抑菌浓度(MIC)和最低杀菌浓度(MBC)测定2.1 菌悬液的制备将细菌菌液接种到麦康凯培养基上进行纯化培养，37℃震荡培养24 h。
分别挑取单个特征菌落接种于灭菌肉汤培养基中，置37℃恒温箱中过夜培养。
取过夜培养的菌悬液100 μL加入到900μL的肉汤培养基中，依次进行稀释，然后选取适当的浓度涂板，每个浓度三个平行。
选取平板上菌落数目在30～300之间的进行计数，最后用肉汤稀释菌悬液至含菌落数105 ～106 CFU/mL后备用。
2.2 MIC和MBC测定将1mL的2倍终浓度的药物放到第1管，采用二倍稀释法将药液从第1管到第10分别稀释。
营养琼脂有哪些用途
培养基名称：营养琼脂(普通肉汤琼脂培养基)品种编号：022020培养基英译名称：Nutrient Agar培养基规格： 250g营养琼脂(用途：用于细菌总数测定、保存菌种及纯培养，也可用于消毒效果测定。
营养琼脂使用原理：蛋白胨和牛肉膏粉提供氮源、维生素、氨基酸和碳源;氯化钠能维持均衡的渗透压;琼脂是培养基的凝固剂。
配方(每升)：蛋白胨10g牛肉膏粉3g氯化钠 5g琼脂15g最终pH 7.3±0.2营养琼脂(使用方法：1、称取营养琼脂(33g，加入蒸馏水或去离子水1 L，搅拌加热煮沸至完全溶解，分装三角瓶，121℃高压灭菌15min，备用。
2、(食品)以无菌操作称取检样25克(或25mL)，放入含有225mL灭菌生理盐水或其他稀释液的玻璃三角瓶中(瓶内预置适当数量的玻璃珠)，充分振摇，即为1：10的均匀稀释液。
依次做1：100，1：1000……稀释液。
3、根据对样品污染情况的估计，选择2—3个合适的稀释度，分别在做10倍稀释的同时，吸取1mL稀释液于灭菌平皿中，每个稀释度做2个平皿。
4、稀释液移入平皿后应及时将凉至46℃左右的培养基注入平皿约15mL，并转动平皿使混合均匀，同时将营养琼脂培养基倾入加有1mL稀释液的灭菌平皿内作空白对照。
待琼脂凝固后，倒置于36±1℃温箱中培养48±2h。
5、观察结果。
6、菌落计数方法：做平板菌落计数时，可用肉眼观察，必要时用放大镜检查，以防遗漏，在计下各平板的菌落数后，求出同稀释度的各平板平均菌落总数。
7、菌落计数的报告：选取菌落数在30—300之间的平板作为菌落总数测定标准。
一个稀释度使用两个平板，应采用两个平板平均数，其中一个平板有较大片状菌落生长时，则不宜采用，而应以无片状菌落生长的平板作为该稀释度的菌落数，若片状菌落不到平板的一半，而其余一半中菌落分布又很均匀，即可计算半个平板后乘以2以代表全皿菌落数。
平皿内如有我链状菌落生长时(菌落之间无明显界线)，若仅有一条链，可视为一个菌落;如有不同来源的几条链，则应将每条链视为一个菌落计A：稀释度的选择：应选择平均菌落数在30—300之间的稀释度，乘以稀释倍数报告之。
LB肉汤琼脂培养基说明书
LB肉汤琼脂培养基
产品编号：MMT060-1规格：250g
产品内容
产品组成MMT060-1
LB肉汤琼脂培养基250g
说明书1份
产品简介
本产品用于发酵工程、基因工程和分子生物学中大肠杆菌的培养。
检验原理：胰蛋白胨和酵母浸粉为目标菌生长提供氮源、维生素和生长因子；氯化钠维持渗透压平衡；琼脂是培养基的凝固剂。
胰蛋白胨10.0
酵母浸粉 5.0
氯化钠10.0
琼脂15.0
pH值（25℃）7.0±0.2
保存条件
阴凉干燥、通风处保存，保质期三年。
使用说明
称取本品40.0g，溶解于1000ml纯化水中，分装三角瓶，121℃高压灭菌15分钟，备用。
注意事项
1.配制前请保证所需器材洁净。
2.为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
肉汤琼脂培养基配方
肉汤琼脂培养基配方
肉汤琼脂培养基是一种常用的微生物培养基，主要用于细菌的培养。
配方可能会因实验目的和使用的具体细菌种类而有所不同，但以下是一个常见的肉汤琼脂培养基的基本配方：
成分：
1. 肉汤提取物：通常使用牛肉或羊肉，也可以是其他肉类。
通常为3-5%的肉汤。
2. 琼脂（或琼脂糖）：1.5-2%。
用于凝固培养基，以便于菌落的生长和观察。
3. 食盐：通常为0.5-0.85%。
提供必需的离子平衡和渗透压。
4. 磷酸盐缓冲液：可根据需要加入磷酸盐缓冲液，以维持培养基的酸碱度。
注意：配方中的具体成分含量可能会因制造商和实验目的的不同而有所变化，因此最好根据特定的实验室和细菌培养的需求来确定准确的配方。
另外，无论使用何种培养基，都应严格按照指定配方制备，并进行必要的消毒和无菌操作，以确保培养基的质量，避免细菌外来污染。
肉汤琼脂培养基使用说明
若所有稀释度均无菌落生长，则以小于1乘以最底稀释倍数报告之(见表中例6)。
若有稀释度的平均菌菌落数均不在30-300之间，其中一部分大于300或小于30时，则以最接近30或300的平均菌落数乘以稀释倍数报告之(见表中例7)。
5 27 11 5 —— 270 270或2.7×102
6 0 0 0 —— <1×10 <10
7 多不可计 305 12 —— 30 500 31 000或3.1×104
质量控制：
本品接种下列菌株，置于36±1℃恒温箱中培养48±2h，结果如下：
菌 名 菌 号 生长状况 菌落特征
大肠埃希氏菌 ATCC25922 良好 白色—灰白色，圆形，边缘整齐，表面光滑，湿润。
菌落数的报告：
菌落数在100以内时，按其实有数报告，大于100时，采用二位有效数字，在二位数字后面的有效数值，以四舍五入法计算。为了缩短数字后面的零数，也可以用10的指数来表示(见表中“报告方式栏”)。
稀释度选择及菌落数报告方式
例次 稀释液及菌落数 两稀释液之比 菌落总数个/g或mL 报告方式个/g或mL
3、 根据对样品污染情况的估计，选择2—3个合适的稀释度，分别在做10倍稀释的同时，吸取1mL稀释液于灭菌平皿中，每个稀释度做2个平皿。
4、 稀释液移入平皿后应及时将凉至46℃左右的培养基注入平皿约15mL，并转动平皿使混合均匀，同时将营养琼脂培养基倾入加有1mL稀释液的灭菌平皿内作空白对照。待琼脂凝固后，倒置于36±1℃温箱中培养48±2h。
A：稀释度的选择：
应选择平均菌落数在30-300之间的稀释度，乘以稀释倍数报告之(见附表)。
营养琼脂(普通琼脂)
营养琼脂（普通琼脂）成份：牛肉浸液（或其它浸液，消化液或肉膏汤）100毫升琼脂（视天气，琼脂质量而定）制法：将上物加热溶解，补足水，调ph至7．6，过滤分装121℃，高压灭菌15分钟。
用途：作普通琼脂平皿。
血琼脂平板（BA）制法：取营养琼脂（PH7．6），加热使其溶解待冷至45-50℃，以灭菌操作于每100毫升营养琼脂加灭菌脱纤维羊血或兔血5-10毫升,轻轻摇匀，立即倾注于平板或分装试管，制成斜面备用。
用途：1．一般棉拭子均接种此培养基。
2．尿液，脓液3．分离细菌标本用。
基础培养基（肉膏汤BB）成份：蛋白胨10克牛肉膏5克氯化钠5克水1000毫升制法：将以上各物称好，加水煮沸溶解，用1NNOH校正PH至7．6，过滤分瓶，121℃高压灭菌，20分钟备用。
用途：1 作耐药试验，增菌用分装小管。
2 作普通琼脂斜面。
血液培养基（大管肉汤培养基）成份：1 新鲜牛肉浸液1000毫升2 PABA（对氨基苯甲酸［相当于10mg/毫升］）1g% 1毫升3 MgSO4 [相当于0．493/100毫升] 49．3% 1毫升4 枸椽酸钠0．3g制法：1 将1号，4号混合液，2号，3号液分装高压灭菌。
2 取灭菌1，4号混合液用无菌法加入PABA，MgSO4，再分管，行无菌试验三天方可使用。
用途：作血，骨髓培养用。
肠道杆菌培养基（伊红美兰琼脂）成份：蛋白胨10克乳糖10克氯化钠5克琼脂25（22）克水1000毫升2%伊红溶液20毫升0．5%美兰溶液20毫升制法：将蛋白胨，氯化钠琼脂称好，加水1000毫升使溶解，校正PH7．4过滤，补足失水，加入2%伊红溶液20毫升，0．5%美兰溶液20毫升，（115℃高压20分钟），冷却至50℃左右倾注平板，凝固后存冰箱备用。
（高压以后方可再加乳糖）用途：用作分离沙门氏，志贺氏菌属，也作菌群调查。
罗文斯坦培养基成份：磷酸二氢钾2．4克硫酸镁0．24克枸椽酸钠0．6克天门冬素3．6克纯甘油（丙三醇）12毫升水600毫升马铃薯粉30克鸡蛋1000毫升（约3公斤）2%孔雀绿水溶液20毫升制法：1 除鸡蛋外（还有孔雀绿）。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
中文名称：营养琼脂(普通肉汤琼脂培养基)
英译名称：Nutrient Agar
品种编号：022020
营养琼脂规格：250g干粉培养基
营养琼脂用途：用于细菌总数测定、保存菌种及纯培养，也可用于消毒效果测定。
营养琼脂使用原理：
蛋白胨和牛肉膏粉提供氮源、维生素、氨基酸和碳源;氯化钠能维持均衡的渗透压;琼脂是培养基的凝固剂。
微生物图册：
营养琼脂配方(每升)：
蛋白胨10g
牛肉膏粉3g
氯化钠 5g
琼脂15g
最终pH 7.3±0.2
营养琼脂使用方法：
1、称取本品33g，加入蒸馏水或去离子水1 L，搅拌加热煮沸至完全溶解，分装三角瓶，121℃高压灭菌15min，备用。
2、(食品)以无菌操作称取检样25克(或25mL)，放入含有225mL灭菌生理盐水或其他稀释液的玻璃三角瓶中(瓶内预置适当数量的玻璃珠)，充分振摇，即为1：10的均匀稀释液。
依次做1：100，1：1000……稀释液。
3、根据对样品污染情况的估计，选择2—3个合适的稀释度，分别在做10倍稀释的同时，吸取1mL稀释液于灭菌平皿中，每个稀释度做2个平皿。
4、稀释液移入平皿后应及时将凉至46℃左右的培养基注入平皿约15mL，并转动平皿使混合均匀，同时将营养琼脂培养基倾入加有1mL稀释液的灭菌平皿内作空白对照。
待琼脂凝固后，倒置于36±1℃温箱中培养48±2h。
5、观察结果。
6、菌落计数方法：
做平板菌落计数时，可用肉眼观察，必要时用放大镜检查，以防遗漏，在计下各平板的菌落数后，求出同稀释度的各平板平均菌落总数。
7、菌落计数的报告：
选取菌落数在30-300之间的平板作为菌落总数测定标准。
一个稀释度使用两个平板，应采用两个平板平均数，其中一个平板有较大片状菌落生长时，则不宜采用，而应以无片状菌落生长的平板作为该稀释度的菌落数，若片状菌落不到平板的一半，而其余一半中菌落分布又很均匀，即可计算半个平板后乘以2以代表全皿菌落数。
平皿内如有我链状菌落生长时(菌落之间无明显界线)，若仅有一条链，可视为一个菌落;如有不同来源的几条链，则应将每条链视为一个菌落计。
营养琼脂质量控制：
本营养琼脂接种下列菌株，置于36±1℃温箱中培养48±2h，结果如下：
菌名菌号生长状况菌落特征
大肠埃希氏菌ATCC25922 良好白色—灰白色，圆形，边缘整齐，表面光滑，湿润。
金黄色葡萄球菌ATCC6538 良好黄色，圆形，边缘整齐，表面光滑、湿润，不透明。
贮存：贮存于避光、阴凉干燥处，用后立即旋紧瓶盖。
贮存期三年。