培养基的灵敏度检查操作规程

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培养基的灵敏度测试

培养基的灵敏度测试培养基的灵敏度测试是其质量控制的一个重要检测部分。

方法如下：1.用于菌数计数的半固体琼脂培养基促菌生长（灵敏度）检查的方法：对每个不同批号的脱水培养基均应进行灵敏度检查（促菌生长检查）。

取预先制备好的琼脂培养基平皿3~5个，用表面涂布法每块平板表面接种30~100个试验菌，同时用已知质量保证的同型号培养基平皿3~5个（如较著名的如MERCK，DIFICOL产品）做对照试验，待培养基表面的菌液被琼脂培养基吸干或风干后，将培养皿倒置于培养箱的使用温度下培养48~72小时，（也可采用浇碟法进行）取出培养后的平皿点计菌落数。

样品培养基上的微生物数量应不得低于对照培养基上微生物生长数量的70%。

否则，需重新检查，或该培养基被视为不符合促生长要求。

2.用于控制菌检查的富集培养基的促菌生长（灵敏度）检查的方法：对每个不同批号的脱水培养基均应进行灵敏度检查。

每100ml培养基内分别接入试验菌小于100cfu，每个菌种接种两瓶培养基，将接过种的培养基置于指定条件下培养。

应在16~18小时后可明显观察到培养基内有微生物生长，则证明此培养基合格。

原则上无论是采用脱水培养基还是按相关处方配制的培养基，一旦制成成品培养基，则应对每个配制批号培养基进行促菌生长（灵敏度检查）试验，以考察培养基的质量。

按脱水培养基的生产批号做灵敏度检查是基于培养基的灭菌程序已经经过验证。

如果实验室使用的是商购的成品培养基，供应商应随培养基提供相应批次的培养基质量检测报告，报告包括培养基的PH值、无菌检查结果和促菌生长（灵敏度）试验结果等项目。

建议在使用某一新的成品培养基（新供应商或新培养基品种）时，应至少考察三个不同批次的培养基质量，只有三批质量均合格方可使用该培养基。

微生物限度检查用成品培养基一旦初试确认合格后，可审查供应商的质检报告，而不必每批再作无菌检查和灵敏度检查，但半年应至少检查一次，以复核其质量。

用于无菌检查试验的每批培养基，均必须按规定进行灵敏度检查试验，此规定同样适用于实验室自行配制的培养基。

支原体培养基的灵敏度检测SOP

1. 目的建立支原体灵敏度检测操作规程，保证检测结果的真实可靠。

2. 范围用于自制支原体培养基和外购支原体培养基灵敏度的检测。

3. 职责3.1.质量管理部：负责本规程的起草。

3.2. 质量管理部检验人员：负责本规程的操作。

3.3. 总经理：负责本规程的审批。

4. 定义5. 引用标准无。

6. 材料6.1. 所需材料6.1.1. 菌种：肺炎支原体（ATCC 15531）、口腔支原体（ATCC 23714）购自北京中原公司。

6.1.2. 培养基:6.1.2.1 支原肉汤培养基猪胃消化液 500ml 氯化钠 2.5g牛肉浸出液（1：2） 500ml 葡萄糖 5.0g酵母浸粉 5.0g 酚红 0.02g6.1.2.2 支原体半流体培养基按6.1.2.1项处方配制，培养基中不加酚红，加入琼脂2.5～3.0g。

6.1.2.3 支原体琼脂培养基按6.1.2.1项处方配制，培养基中不加酚红，加入琼脂13.0～15.0g。

6.2. 仪器设备无6.3. 器械、用具6.3.1 灭菌玻璃移液管7. 流程图无8. 内容8.1.变色单位试验法：将菌种接种于适宜的支原体培养基中，经36℃±1℃培养至培养基变色，盲传2代后。

将培养物接种到待检培养基中，做10倍系列稀释，肺炎支原体稀释至10-7～10-9，接种到支原体肉汤培养基内；口腔支原体稀释至10-3～10-5，接种在精氨酸支原体肉汤培养基内，每个稀释度接种3支试管，置36℃±1℃培养7～14天，观察培养基变色结果。

8.2. 结果判定以接种后培养基管数的2/3以上呈现变色的最高稀释度为该培养基的灵敏度。

8.3. 液体培养基的灵敏度肺炎支原体（ATCC 15531）应达到10-3，口腔支原体（ATCC 23714）应达到10-4。

9. 注意事项无10. 附录及派生记录无11. 相关文件无12. 修订记录。

SOP-QC-03000培养基灵敏度检查标准操作规程471

SOP-QC-03000培养基灵敏度检查标准操作规程471 GMP标准文件分发号: 流水号:471 编码: SOP-QC-03000 共2页第1页题目: 培养基灵敏度检查标准操作规程制定人 QA审核批准人制定日期审核日期批准日期颁发部门质量技术部颁发日期生效日期质量技术部分发部门目的:建立培养基灵敏度检查标准操作规程，保证无菌检查结果的准确性、可靠性。

范围:适用于培养基灵敏度检查。

职责:QC无菌检验员。

规程:1 实验设备及用具:高压蒸汽灭菌器、恒温培养箱、注射器、针头、注射器盒、试管、试管架、搪瓷托盘、时钟、75,酒精棉球、无菌服。

2 培养基:需气菌、厌气菌培养基(硫乙醇酸盐液体培养基)、真菌培养基，培养基的配制详见《培养基配制标准操作规程》。

3 测试用菌种3.1 藤黄微球菌[CMCC (B) 28 001]3.2 生孢梭菌[CMCC (B) 64 941]3.3 白色念珠菌[CMCC (F) 98 001]4 操作4.1 取藤黄微球菌的营养琼脂斜面和白色念珠菌的真菌培养基琼脂斜面的新鲜培养物，分别用0.9,无菌氯化钠溶液制成均匀的菌悬液;将生孢梭菌不含琼脂的需气菌、厌气菌培养基新鲜培养物，吸至无菌离心管，离心，弃去上清液,菌体用0.9,无菌氯化钠溶液制成均匀的菌悬液。

分别取上述菌悬液,用0.9,无菌氯化钠溶液稀释至与细菌浊度标准管相同的浓度，然后作10倍系列稀释，制成1ml中含10-100个菌并计数。

4.2 取藤黄微球菌、生孢梭菌的需气菌、厌气菌培养基新鲜培养物，白色念珠菌的真菌培养基的新鲜培养物1ml，用0.9%无菌氯化钠溶液作10倍系列稀释，制成1ml中含10—100个菌并计数。

4.3 将藤黄微球菌的上述4.1或4.2的稀释菌液各1ml，分别接种至每管装量为9ml的需气菌、厌气菌培养基3管，生孢梭菌的上述4.1或4.2的稀释菌液各1ml，分别GMP标准文件接种至每管装量为12ml需气菌、厌气菌培养基3管，白色念珠菌的上述4.1或4.2的稀释菌液各1ml，分别接种至每管装量为9ml的真菌培养基3管，以未接种的培养基作对照，按规定的温度培养5天并逐日记录结果。

无菌检验技术—无菌检查用培养基制备

• 2.4.4.3菌悬液的制备 • 购买对应的商业化定量菌株。使用时直接稀释成规定菌含量的菌悬液。目前有进口的bioball和国产的microball等。使用方便，定量精确。 • 2.4.5培养基的生长促进实验 • 2.4.5.1琼脂类培养基的生长促进试验 • 每株菌用2个试验培养基平皿，用表面涂布法在每个平皿表面接种0.1～ 0.5mL的菌悬液（约10～100CFU试验菌），同时用2个对照标准的培养基平皿做对照，接种相同量的菌悬液试验，在规定温度下培养，取出平皿点计菌落数。试验培养基上的微生物数量应为对照培养基上微生物生长数量的70%～ 150%范围内。
• 2.4.2使用的菌株： • 金黄色葡萄球菌CMCC(B)26003 • 铜绿假单胞菌CMCC(B)10104 • 枯草芽孢杆菌CMCC(B)63501 • 生孢梭菌CMCC(B)64941 • 白色念珠菌CMCC(F)98001 • 黑曲霉CMCC(F)98003 • 培养基灵敏度检测所用的菌株传代次数不得超过5代，并采用适宜的菌种保藏技术，以保证试验用菌株的生物学特性。
• 2.无菌检查用培养基灵敏度检查规程 • 2.1目的：为了规范、统一培养基灵敏度检测，确保微生物检测准确、安全进行，建立无菌检查用培养基灵敏度检查规程。 • 2.2范围：本规程适用于2015版中国药典培养基灵的敏度检查。 • 2.3职责：质检室质检员负责本操作规程的执行，质保室质监员负责本操作规程的监督检查。 • 2.4内容： • 2.4.1试验设备及用具：无菌培养皿、移液枪或无菌注射器、无菌玻璃涂布器、培养箱等。
• 1.5操作步骤 • 1.5.1使用JY2002电子天平称取液体硫乙醇酸盐培养基7.25克，于250ml三角瓶内，加入250ml新沸的冷却水，溶解后，将培养基分装入试管中，塞好棉塞，包好牛皮纸扎紧试管口。 • 1.5.2置LDZX-50FA立式压力蒸汽灭菌器内，于115℃高压灭菌30分钟，灭菌后，可直接加样或取出放置至室温后，放入冰箱，备用（冰箱温度控制在 1～4℃）。 • 1.5.3使用前培养基氧化层（粉红色层）的高度不得超过培养基深度的1/5 ，否则需经100℃水浴加热到粉红色消失（不超过20分钟）迅速冷却，只限加热一次，再使用。

实验用培养基适用性检查标准操作规程

起草人Prepared by:起草日期Date: _____________________ QC审核人Reviewed by:审核日期Date: _____________________ QC审核人Reviewed by:审核日期Date: QA批准人Approved by:批准日期Date:质量部QD目的Purpose为保障微生物检验的准确性及相关工作特制定本规定。

范围Scope本程序适用于微生物限度测定培养基的适用性检查及相关工作。

职责Responsibility分析员：严格按照本操作规程执行。

及时完成各类相关记录。

在主管的指导下进行任何可能的OOS及偏差调查。

主管：监督本操作规程的执行。

对检验员进行必要的培训。

指导任何可能的OOS和偏差调查。

内容procedure1检验员应根据培养基配制程序或培养基各自的说明书配制培养基。

2试验用菌种及培养基2.1菌种:2.1.1培养基灵敏度测试所用的菌株传代次数不得超过5代，从国家药检所或菌种保藏中心购买。

2.1.2枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)[ATCC 6633]2.1.3大肠埃希菌(Escherichia coli) [ATCC 8739]2.1.4金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus) [ATCC 6538]2.1.5白色念珠菌(Candida albicans) [ATCC 10231]2.1.6黑曲霉(Aspergillus niger)[ATCC 16404]2.1.7伤寒沙门菌(Salmonella) [ATCC 14028]2.1.8铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa) [ATCC 9027]2.2培养基2.2.1按照培养基说明书进行配制灭菌。

2.2.2大豆酪蛋白消化肉汤Soybean-Casein Digest Broth2.2.3大豆酪蛋白消化琼脂Soybean-Casein Digest Agar2.2.4沙氏葡萄糖琼脂Sabouraud Dextrose Agar2.2.5肠道菌增菌肉汤Enterobacteria Enrichment Broth Mossel2.2.6紫红色胆汁葡萄糖琼脂Violet Red Bile Glucose Agar2.2.7麦康凯肉汤MacConkey Broth2.2.8麦康凯琼脂MacConkey Agar2.2.9RV沙门氏菌富集肉汤Rappaport Vassiliadis Salmonella Enrichment Broth2.2.10木糖赖氨酸脱氧胆盐琼脂Xylose Lysine Deoxycholate Agar2.2.11甘露醇氯化钠琼脂培养基Mannitol Salt Agar2.3微生物计数培养基的适用性检查2.3.1微生物计数用的成品培养基、由脱水培养基或按处方配制的培养基均应进行培养基适用性检查。

培养基灵敏度检查规程

培养基灵敏度检查规程编号：版本：编制：日期：审定：日期：批准：日期：生效日期：管理部门：发放部门：生产部质管部工程部研发部 PMC 采购部仓库营销中心人事行政中心财务部一、目的：确证使用所用的培养基是否符合无菌性检查及灵敏度检查的要求。

二、检查时间：供试品的无菌检查前或者无菌检查同时进行。

三、范围：适应于培养基灵敏度检查四、依据：《中国药典》2020版第四部五、职责：质管部1.实验设备及用具：2.高压蒸汽灭菌器、恒温培养箱、注射器、针头、注射器盒、试管、试管架、搪瓷托盘、时钟、75%酒精棉球、无菌服。

2.培养基：无菌检查用的硫乙醇酸盐流体培养基和胰酪大豆胨液体培养基3. 测试用菌种3.1金黄色葡萄球菌[CMCC（B）26003]3.2 铜绿假单胞菌[CMCC (B) 10104]3.3枯草芽孢杆菌[CMCC（B）63501]3.4 生孢梭菌[CMCC（B）64941]3.5白色念珠菌[CMCC (F) 98001]3.6黑曲霉[CMCC(F)98 003]4. 菌液制备：4.1 接种金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌的新鲜培养物至营养肉汤或营养琼脂培养基中，30～35℃培养18～24 小时。

4.2 接种生孢梭菌的新鲜培养物至硫乙醇酸盐流体培养基中30～35℃培养18～24 小时4.3 接种白色念珠菌的新鲜培养物至胰酪大豆胨琼脂或液体培养基20～25℃培养24～48 小时，上述培养物用0.9%无菌氯化钠溶液逐管稀释成每1ml 含菌量小于100cfu菌悬液4.4 接种黑曲霉的新鲜培养物至至胰酪大豆胨琼脂斜面上20～25℃培养5～7天用适量0.9%无菌氯化钠溶液，将孢子洗脱，吸出孢子悬液至无菌试管内，用0.9%无菌氯化钠溶液逐管稀释成每1ml含孢子数小于100cfu的孢子悬液。

5. 无菌性检查在进行灵敏度检查前应先进行培养基的无菌性检查5.1 方法：每批培养基随机抽取不少于5支，至相应温度下培养14天，应无菌生长。

培养基的灵敏度测试

培育基的灵敏度测试培育基的灵敏度测试是其质量掌握的一个重要检测部分。

方法如下：1.用于菌数计数的半固体琼脂培育基促菌生长（灵敏度）检查的方法：对每个不同批号的脱水培育基均应进行灵敏度检查（促菌生长检查）。

取预先制备好的琼脂培育基平皿3~5个，用表面涂布法每块平板表面接种30~100个试验菌，同时用已知质量保证的同型号培育基平皿3~5个（如较闻名的如MERCK,DIFICoL产品）做对比试验，待培育基表面的菌液被琼脂培育基吸干或风干后，将培育皿倒置于培育箱的使用温度下培育48~72小时，（也可采纳浇碟法进行）取出培育后的平皿点计菌落数。

样品培育基上的微生物数量应不得低于对比培育基上微生物生长数量的70%。

否则，需重新检查，或该培育基被视为不符合促生长要求。

2.用于掌握菌检查的富集培育基的促菌生长（灵敏度）检查的方法：对每个不同批号的脱水培育基均应进行灵敏度检查。

每100ml培育基内分别接入试验菌小于100cfu,每个菌种接种两瓶培育基，将接过种的培育基置于指定条件下培育。

应在16~18小时后可明显观看到培育基内有微生物生长，则证明此培育基合格。

原则上无论是采纳脱水培育基还是按相关处方配制的培育基，一旦制成成品培育基，则应对每个配制批号培育基进行促菌生长（灵敏度检查）试验，以考察培育基的质量。

按脱水培育基的生产批号做灵敏度检查是基于培育基的灭菌程序已经经过验证。

假如试验室使用的是商购的成品培育基,供应商应随培育基供应相应批次的培育基质量检测报告，报告包括培育基的PH值、无菌检查结果和促菌生长（灵敏度）试验结果等项目。

建议在使用某一新的成品培育基（新供应商或新培育基品种）时，应至少考察三个不同批次的培育基质量，只有三批质量均合格方可使用该培育基。

微生物限度检查用成品培育基一旦初试确认合格后，可审查供应商的质检报告，而不必每批再作无菌检查和灵敏度检查，但半年应至少检查一次，以亚核其质量。

用于无菌检查试验的每批培育基，均必需按规定进行灵敏度检查试验，此规定同样适用于试验室自行配制的培育基。

培养基灵敏度验证方案

方案名称:胰酪胨大豆肉汤培养基适用性检查验证方案目录1. 验证目的2. 参照标准3. 验证项目4. 验证职责5. 合格标准6. 试验材料7. 菌液制备8. 菌液计数9. 验证方法10. 结论1. 验证目的：为证明胰酪胨大豆肉汤培养基适合于真菌、需氧菌的无菌检查及无菌灌装模拟试验，特制定本验证方案。

2. 参照标准：2005版中国药典二部附录XI H无菌检查法。

3. 验证项目：3.1. 胰酪胨大豆肉汤培养基灵敏度检查。

3.2. 胰酪胨大豆肉汤培养基无菌性检查。

4.职责：4.1验证委员会：负责验证方案及报告的批准并组织协调验证工作并签发验证证书。

4.2.验证组长4.2.1.负责验证方案的起草4.2.2.负责验证的协调工作，以保证本验证方案的顺利实施。

4.2.3.负责验证报告的审批。

4.2.4.负责发放验证证书。

4.2.5.负责再验证周期的确认。

4．3. 质保部4．3.1.负责验证方案审核4．3.2.负责取样及对样品的检验4．3.3.负责收集验证记录，并加以分析后，起草验证报告。

4．3.4.负责验证数据及结果的审核5. 合格标准：5.1.接种金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽胞杆菌、生孢梭菌（接种量<100CFU）的培养基管各两支和1支空白对照管在30℃～35℃培养3天；接种白色念珠菌、黑曲霉（接种量<100CFU）和1支空白对照管在23℃～28℃培养5天；逐日观察结果，加菌的培养基管均生长良好，空白对照管应无菌生长。

判该批的培养基灵敏度检查符合规定。

5.2.胰酪胨大豆肉汤培养基经121℃，15分钟高压蒸汽灭菌后培养应无菌生长。

6. 试验材料：6.1. 被验证物品：品名规格批号生产厂家6.2. 仪器设备：6.2.1. LMQ、R立式压力蒸汽灭菌器6.2.2. Y OKO-ZX紫外分析暗箱6.2.3. SW-EJ-2FB双人净化工作台6.2.4. 101-2A电热鼓风干燥箱6.2.5.SPX-250B型生化培养箱(23～28℃)6.2.6.PHW-200S恒温培养箱(35～37℃)6.3. 稀释剂灭菌注射用水、0.9%无菌氯化钠溶液6.4. 培养基备注：培养基按培养基管理制度SMP QC 0009.01配制6.5 验证用菌株：7. 菌液制备7.1.取经培养18~24小时的枯草芽孢杆菌、金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌营养肉汤新鲜培养物1ml加入到9ml0.9%无菌氯化钠溶液中，10倍稀释至10-6约为50~100cfu∕ml的菌悬液备用。

支原体培养基灵敏度检査(变色单位试验法)

支原体培养基灵敏度检査（变色单位试验法）及供试品检查方案目的：建立支原体培养基灵敏度检査（变色单位试验法）及供试品检查方案。

范围：适用于支原体培养基灵敏度检査及供试品检查。

依据：《中国药典》2015年版内容:1、概要：除药典推荐培养基外，亦可使用可支持支原体生长的其他培养基，但灵敏度必须符合要求。

2、设备生化培养箱、生物安全柜。

3、培养基灵敏度检査（变色单位试验法）3.1干粉培养基及对应菌种产品号产品名称菌种名称菌种编号11109 支原体肉汤培养基肺炎支原体ATCC 15531株11C21 精氨酸支原体肉汤培养基口腔支原体ATCC 23714株11A09 支原体半流体培养基肺炎支原体ATCC 15531株11321 精氨酸支原体半流体培养基口腔支原体ATCC 23714株3.2 培养基配制按照标签处方量配制成液体培养基，并按标签规定的温度和时间进行湿热灭菌，待用。

3.3灵敏度检查3.3.1菌液制备将菌种接种于适宜的支原体培养基中，经36℃±1℃培养至培养基变色，盲传两代。

3.3.2培养基接种及培养将培养物接种至待检培养基中，做10倍系列稀释，肺炎支原体稀释至10-7〜10-9，接种在支原体肉汤培养基内；口腔支原体稀释至10-3〜10-5，接种在精氨酸支原体肉汤培养基内。

每个稀释度接种 3 支试管，置36℃±1℃培养7〜14天，观察培养基变色结果。

3.3.3结果判定：以接种后培养基管数的2 / 3 以上呈现变色的最高稀释度为该培养基的灵敏度。

灵敏度应达到：支原体肉汤培养基：肺炎支原体（ATCC 15531株）应达到10-8；精氨酸支原体肉汤培养基：口腔支原体( ATCC 23714株)应达到10- 4。

3.3供试品检查法3.1干粉培养基及对应菌种产品类型产品名称产品号液体培养基支原体肉汤培养基11109精氨酸支原体肉汤培养基11C21 半流体培养基支原体半流体培养基11A09精氨酸支原体半流体培养基11321 或：琼脂培养基支原体琼脂培养基11C233.2配制半流体培养基（或琼脂培养基) 按照标签处方量配制，并按标签规定的温度和时间进行湿热灭菌；在使用前应煮沸10〜15分钟，冷却至56°C左右，然后加人灭能小牛血清（培养基: 血清为8 ：2) ，并可酌情加入适量青霉素，充分摇匀。

培养基灵敏度及适用性检查操作规程

培养基灵敏度及适⽤性检查操作规程1. ⽬的：通过培养基适⽤性检查，确保购买的培养基符合实验要求。

2. 范围：本规程适⽤于技术质量部实验员对培养基适⽤性的检查。

3. 职责：质量部实验员负责执⾏此规程。

4. 内容：4.1 检验依据：《中华⼈民共和国药典》2015版4.2 试验⽤具：烧杯、三⾓瓶、酒精灯、接种环、平⽫、试管、吸管、移液枪、滴管、电⼦天平、电热恒温培养箱、⽣化培养箱或恒温恒湿培养箱、单⼈净化⼯作台、⾼压蒸汽灭菌器、微⽣物限度仪、漩涡混合器、试验菌种、检查⽤培养基等。

4.3 ⽆菌培养基适⽤性检查：本检查可在供试品的⽆菌检查前或与供试品的⽆菌检查同时进⾏。

4.3.1 培养基：硫⼄醇酸盐流体培养基、胰酪⼤⾖胨液体培养基或胰酪⼤⾖胨琼脂培养基（培养基的配制按《培养基配制操作规程》配制）。

4.3.2 稀释液、冲洗液及其制备⽅法稀释液、冲洗液配制后应采⽤验证合格的灭菌程序灭菌。

a) 0.1%⽆菌蛋⽩胨⽔溶液取蛋⽩胨1.0g，加⽔1000ml，微温溶解，滤清，调节pH值⾄7.1±0.2，分装，灭菌。

b) pH7.0⽆菌氯化钠-蛋⽩胨缓冲液取磷酸⼆氢钾3.56g，⽆⽔磷酸氢⼆钠5.77g，氯化钠4.30g，蛋⽩胨1.00g，加⽔1000ml，微温溶解，滤清，分装，灭菌。

c) 根据供试品的特性，可选⽤其他经验证过的适宜的溶液作为稀释液、冲洗液（如0.9%⽆菌氯化钠溶液）。

如需要，可在上述稀释液或冲洗液的灭菌前或灭菌后加⼊表⾯活性剂或中和剂等。

4.3.3 ⽆菌性检查：每批培养基随机取不少于5⽀（瓶），置各培养基规定的温度培养14天，应⽆菌⽣长。

4.3.4 灵敏度检查4.3.4.1 菌种培养基灵敏度检查所⽤的菌株传代次数不得超过5代（从菌种保存中⼼获得的⼲燥菌种为第0 代），并采⽤适宜的菌种保藏技术进⾏保存，以保证试验菌株的⽣物学特性。

⾦黄⾊葡萄球菌（Staphylococcus aureus ）〔CMCC（B）26 003〕铜绿假单胞菌（Pseudomonas aeruginosa ）〔CMCC（B）10 104〕枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）〔CMCC（B）63 501〕⽣孢梭菌（Clostridium sporogenes）〔CMCC（B）64 941〕⽩⾊念珠菌（Candida albicans）〔CMCC（F）98 001〕⿊曲霉（Aspergillus niger）〔CMCC（F）98 003〕4.3.4.2 菌液制备a) 接种⾦黄⾊葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌的新鲜培养物⾄胰酪⼤⾖胨液体培养基中或胰酪⼤⾖胨琼脂培养基上，接种⽣孢梭菌的新鲜培养物⾄硫⼄醇酸盐流体培养基中，30～35℃培养18～24⼩时；b) 接种⽩⾊念珠菌的新鲜培养物⾄沙⽒葡萄糖液体培养基中或沙⽒葡萄糖琼脂培养基上，20～25℃培养24～48⼩时，上述培养物⽤pH7.0⽆菌氯化钠-蛋⽩胨缓冲液或0.9%⽆菌氯化钠溶液制成每1ml含菌数⼩于100cfu（菌落形成单位）的菌悬液。

培养基灵敏度检查计划方案

培养基灵敏度检查计划方案一、引言培养基灵敏度检查是一种常见的微生物实验室技术，用于评估微生物对不同抗生素的敏感性。

该检查对于指导临床使用抗生素和防控细菌耐药性具有重要意义。

本文旨在介绍培养基灵敏度检查的计划方案，以确保检查的准确性和可靠性。

二、目标和背景培养基灵敏度检查计划的主要目标是评估微生物对抗生素的抵抗能力，以确定临床治疗中最佳的抗生素选择。

通过此计划，可以培养出对不同抗生素具有不同耐药性的细菌菌株，为耐药性研究和抗生素合理使用提供依据。

三、实验步骤和方法1. 样品采集和处理从临床病例中采集所需的微生物样品，并进行初步处理。

确保采样和处理符合卫生与实验室安全规范，避免污染和误差。

2. 培养基准备准备适当的培养基，根据不同抗生素的需求进行调整。

确保培养基无污染，并能提供细菌正常生长所需的养分。

3. 培养微生物将样品接种到培养基中，通过孵育箱或恒温培养箱，为微生物提供适宜的温度和湿度条件，以促进细菌的生长。

4. 抗生素试纸片制备和测定按照厂家说明书的指导，制备不同抗生素的试纸片。

将试纸片分别放置在含有培养细菌的琼脂培养基平板上，并在指定时间内孵育。

5. 结果评价观察试纸片周围的抑菌圈直径，使用规定的标准参考表来解读结果。

根据抑菌圈直径的大小，判断细菌对抗生素的敏感性。

6. 数据分析和报告将结果数据记录下来，并根据标准参考表评估每个抗生素的灵敏度。

最后，通过报告的形式将灵敏度结果提供给临床医生或研究人员。

四、质量控制和安全措施1. 质量控制- 确保培养基质量良好，符合规定的配方和自凝性能要求。

- 重视实验室清洁和消毒，避免污染。

- 使用符合标准的试纸片，并按照说明书操作。

- 严格按照标准参考表评估结果。

2. 安全措施- 操作人员需佩戴个人防护装备，如手套和口罩，避免直接接触微生物和抗生素。

- 遵循实验室安全规范和卫生要求。

- 正确处置实验废物，避免环境和人员污染。

五、预期结果和讨论通过培养基灵敏度检查，可以获得各个抗生素对不同菌株的抑菌效果。

培养基灵敏度及适用性检查操作规程

1. 目的：通过培养基适用性检查，确保购买的培养基符合实验要求。

2. 范围：本规程适用于技术质量部实验员对培养基适用性的检查。

3. 职责：质量部实验员负责执行此规程。

4. 内容：4.1 检验依据：《中华人民共和国药典》2015版4.2 试验用具：烧杯、三角瓶、酒精灯、接种环、平皿、试管、吸管、移液枪、滴管、电子天平、电热恒温培养箱、生化培养箱或恒温恒湿培养箱、单人净化工作台、高压蒸汽灭菌器、微生物限度仪、漩涡混合器、试验菌种、检查用培养基等。

4.3 无菌培养基适用性检查：本检查可在供试品的无菌检查前或与供试品的无菌检查同时进行。

4.3.1 培养基：硫乙醇酸盐流体培养基、胰酪大豆胨液体培养基或胰酪大豆胨琼脂培养基（培养基的配制按《培养基配制操作规程》配制）。

4.3.2 稀释液、冲洗液及其制备方法稀释液、冲洗液配制后应采用验证合格的灭菌程序灭菌。

a) 0.1%无菌蛋白胨水溶液取蛋白胨1.0g，加水1000ml，微温溶解，滤清，调节pH值至7.1±0.2，分装，灭菌。

b) pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液取磷酸二氢钾3.56g，无水磷酸氢二钠5.77g，氯化钠4.30g，蛋白胨1.00g，加水1000ml，微温溶解，滤清，分装，灭菌。

c) 根据供试品的特性，可选用其他经验证过的适宜的溶液作为稀释液、冲洗液（如0.9%无菌氯化钠溶液）。

如需要，可在上述稀释液或冲洗液的灭菌前或灭菌后加入表面活性剂或中和剂等。

4.3.3 无菌性检查：每批培养基随机取不少于5支（瓶），置各培养基规定的温度培养14天，应无菌生长。

4.3.4 灵敏度检查4.3.4.1 菌种培养基灵敏度检查所用的菌株传代次数不得超过5代（从菌种保存中心获得的干燥菌种为第0 代），并采用适宜的菌种保藏技术进行保存，以保证试验菌株的生物学特性。

金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus ）〔CMCC（B）26 003〕铜绿假单胞菌（Pseudomonas aeruginosa ）〔CMCC（B）10 104〕枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）〔CMCC（B）63 501〕生孢梭菌（Clostridium sporogenes）〔CMCC（B）64 941〕白色念珠菌（Candida albicans）〔CMCC（F）98 001〕黑曲霉（Aspergillus niger）〔CMCC（F）98 003〕4.3.4.2 菌液制备a) 接种金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌的新鲜培养物至胰酪大豆胨液体培养基中或胰酪大豆胨琼脂培养基上，接种生孢梭菌的新鲜培养物至硫乙醇酸盐流体培养基中，30～35℃培养18～24小时；b) 接种白色念珠菌的新鲜培养物至沙氏葡萄糖液体培养基中或沙氏葡萄糖琼脂培养基上，20～25℃培养24～48小时，上述培养物用pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液或0.9%无菌氯化钠溶液制成每1ml含菌数小于100cfu（菌落形成单位）的菌悬液。

培养基使用性检查操作规程

培养基适用性检查操作规程编制人：日期：部门：微生物室审核人：日期：替代：批准人：日期：执行日期：1、目的建立一个培养基适用性检查操作规程。

2、适用范围微生物限度及无菌检查的成品培养基，由脱水培养基或按处方配置的培养基均应进行培养基适用性检查。

3、检验依据按2010年版《中国药典（一、二部）》附录无菌方法进行测试检查。

4、试验所需菌种大肠埃希菌；金黄色葡萄球菌；枯草芽孢杆菌；生孢梭菌；白色念珠菌；黑曲霉。

5、标准规定5.1 无菌培养基使用性检查5.1.1 无菌性：每批培养基随机取不少于5支（瓶），经培养14天应无菌生长。

5.1.2 灵敏度：经培养对照管应无菌生长，试验管接菌小于100cfu均应生长良好。

5.2 微生物限度使用性检查5.2.1 细菌、霉菌和酵母菌计数检查取标准菌株大肠、金葡、枯草、白念、黑曲霉菌50～100cfu,分别接入于测试与对照培养基，经规定温度、时间培养，测试结果测试与对照培养基平均菌落数比不应小于70%。

5.2.2 金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌检查取新鲜标准菌株大肠、金葡、铜绿假单胞菌制备使成10～100cfu菌悬液，分别对测试与对照培养基进行促生长能力、抑制能力及指示能力测试，结果被测培养试验菌的生长反应情况与对照培养基一致。

（液体培养基应记录为生长良好/生长微弱/未生长；固体培养基应记录为符合xx菌特征/不符合xx菌特征）。

5.2.3 大肠埃希菌、大肠菌群检查取新鲜标准菌株大肠、金葡球菌制备使成10～100cfu菌悬液，分别对测试与对照培养基进行促生长能力、抑制能力即指示能力测试，结果被测培养基试验菌的的生长反应情况应与对照培养基一致。

（液体培养基应记录为生长良好/生长微弱/未生长；固体培养基应记录为符合xx菌特征/不符合xx菌特征）。

5.2.4白色念珠菌、梭菌检查取新鲜标准菌株大肠、白念、生孢梭制备使成10～100cfu菌悬液，分别对测试与对照培养进行促生长能力、抑制能力及指示能力测试，结果被测培养基试验菌的生长反应情况应与对照培养基一致。

培养基适用性检查操作规程

培养基适用性检查操作规程
1．目的：检查培养基对相关菌种的适用性，保证微生物实验结果的有效性。

2. 适用范围：适用于首次使用的培养基种类、购入的新批次培养基的适用性检查。

3. 依据：《中国药典》（2010版）四部：无菌检查法/微生物限度检查法-培养基的适用性检查
4. 职责：微生物检验员实施，QA监督。

5. 内容：
5.1 设备和材料
恒温培养箱、无菌培养皿/试管、接种环、酒精灯/火焰喷枪、超净工作台、＜100CFU/ml 的工作菌液、灭菌后的培养基（无菌检查用、计数用）
5.2 培养基适用性检查-无菌检查用
5.2.1 无菌性：
每种培养基每批随机抽取不少于10支，其中5支置30~35℃、另5支置20~25℃培养14天。

14天后均应无菌生长。

5.2.2 灵敏度
取培养基3支，其中2支接种相应的工作菌液各1ml，另1支不接种，作为空白对照，置30~35℃培养3天（或20~25℃培养5天）。

逐日观察结果。

空白对照管应无菌生长，若加菌的培养基管均生长良好，则判定该培养基的灵敏度检查符合规定。

5.3 培养基适用性检查-计数用
取无菌培养皿，吸取相应的工作菌液各1ml注入无菌培养皿，立即倾注培养基，每株试验菌接种2个培养皿，混匀，凝固。

同时用对照培养基替代被检培养基进行上述试验。

置30~35℃培养48小时（或23~28℃培养72小时），计数。

若被检培养基上的菌落平均数不小于对照培养基上的菌落平均数的70%，且菌落形态、大小应与对照培养基上的菌落一致，则判断该培养基的适用性检查符合规定。

6.相关表格：《培养基适用性检查记录》。

培养基灵敏度验证

培养基灵敏度验证方案1．验证目的：通过对培养基的灵敏度验证来增加无菌检查的可信度。

2．原理：不同种培养基内加入符合其生长条件的已知菌株做生长实验，根据加入定量细菌的生长情况来评价该培养基灵敏度。

菌量越少说明培养基灵敏度越高。

3．仪器设备：恒温培养箱（30-35︒C）、恒温培养箱（20-25︒C）、高压灭菌器、干烤箱（250︒C）。

培养基：需气菌、厌氧菌培养基（硫乙醇酸盐培养基，中国药品检定所购买，）；真菌培养基（改良马丁培养基，中国药品检定所购买，）。

测试菌种：金黄色葡萄球菌、白色念珠菌。

4．验证实施4．1培养基配制：分别称取硫乙醇酸盐培养基7.5克，改良马丁培养基7.0克，分别加250ml蒸馏水,热溶解，分装10ml/管，高压灭菌116︒C 20 分钟。

4．2测试菌的培养：在无菌操净台内，分别取金黄色葡萄球菌、枯草杆菌、生孢梭菌菌液少量，接种在硫乙醇酸盐流体培养基（10ml/管）中，在30-35︒C培养24小时；取白色念珠菌菌液少量，接种在改良马丁培养基中在20-25︒C培养24小时。

此时的培养液称为原菌液。

4．3原菌液的稀释：挑选浊度较小原菌液，用灭菌后的生理盐水稀释至10的负六和负七次方，用灭菌后的移液管量取1ml至培养皿并浇筑肉汤琼脂培养基，30-35︒C恒温培养箱中培养3天。

4．4 计数与选择计数，如果在10~100个菌/ml内，即选择。

灵敏度实验：分别将（4）稀释菌液1ml接种到（1）配制的10 ml/管培养基中，每种菌液接种3管培养基，以未接种的培养基为阴性对照，按规定的条件培养5天并逐日记录。

4．6结果判定：以每种菌液接种的培养基不得少于2管呈阳性，即该培养基的灵敏度符合要求。

无菌检查用培养基灵敏度检查标准操作规程

黑曲霉( Aspergillus niger)〔CMCC(F) 98 003〕
4.4菌液制备
接种金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌的新鲜培养物至营养肉汤培养基中或营养琼脂培养基上，接种生孢梭菌的新鲜培养物至硫乙醇酸盐流体培养基中，30℃～35℃培养18小时～24小时；接种白色念珠菌的新鲜培养物至改良马丁培养基中或改良马丁琼脂培养基上，23～28℃培养24～48小时，上述培养物用0.9%无菌氯化钠溶液制成每1ml含菌数小于100cfu（菌落形成单位）的菌悬液。接种黑曲霉的新鲜培养物至改良马丁琼脂斜面培养基上，23～28℃培养5～7天，加入3～5ml含0.05％（ml/ml）聚山梨酯80的0.9%无菌氯化钠溶液，将孢子洗脱。然后，采用适宜的方法吸出孢子悬液至无菌试管内，用含0.05％（ml/ml）聚山梨酯80的0.9%无菌氯化钠溶液制成每1ml含孢子数小于100cfu的孢子悬液。
菌悬液制备后若在室温下放置，应在2小时内使用；若保存在2～8℃可在24小时内使用。黑曲霉孢子悬液可保存在2～8℃，在验证过的贮存期内使用。
4.5培养基接种
取每管装量为12ml的硫乙醇酸盐流体培养基9支，分别接种小于100cfu的金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌、生孢梭菌各2支，另1支不接种作为空白对照，培养3天；取每管装量为9ml的改良马丁培养基5支,分别接种小于100cfu的白色念珠菌、黑曲霉各2支，另1支不接种作为空白对照，培养5天。逐日观察结果。
4.2培养基
硫乙醇酸盐流体培养基、改良马丁培养基、营养琼脂培养基、营养肉汤培养基、改良马丁琼脂斜面培养基。
4.3菌种
培养基灵敏度检查所用代），试验用菌种应采用适宜的菌种保存技术进行保存，以保证试验菌株的生物学特性。
金黄色葡萄球菌( Staphylococcus aureus)〔CMCC(B) 26 003〕

培养基灵敏度检查记录

培养基灵敏度检查记录摘要该文档描述了在实验室中对于培养基的灵敏度检查过程的记录，其中包括了实验的目的、方法、结果和。

该检查可以帮助实验室监测和评估培养基的质量，以便提高实验结果的准确性和可靠性。

目的培养基灵敏度检查的目的在于确定你所使用的培养基的效力和纯度，以便将其用于实验。

检查可以帮助我们确定培养基中是否存在污染物和其他的不良物质。

此外，该检查还可以提供有关细菌对不同抗菌药物的反应的重要信息。

方法实验室中使用了标准的方法来进行培养基灵敏度检查。

在本次实验中，我们使用了以下设备和试剂：•培养基测试板•细菌株（常见的细菌株）•抗生素（几种常见的抗生素）实验分为以下几个步骤：1.准备培养基测试板：在培养基测试板中制造一个0.5麦芽糖浓度的菌液2.加入细菌株：加入细菌株到培养基测试板上，以包含菌液3.添加抗生素：将各种抗生素添加到测试板上，量为MIC（最小抑菌浓度）4.实验过程的记录：记录在培养基测试板上出现的菌落数量并测定其直径结果实验室的培养基灵敏度检查显示我们的培养基十分纯净，并且没有污染，同时抗生素的剂量适中。

检测到的微生物株菌落数量为零，代表我们培养基中不存在细菌或细胞污染。

不同种类的抗生素对于不同的细菌株的反应不同，在检测的过程中，我们发现一些菌株对于某些抗生素具有更高的抵抗力，而对于其他抗生素则没有。

本次实验中，我们成功检测了培养基的纯度，并且也测试了抗生素在不同细菌株中的反应。

这种测试有助于实验室在保证实验准确性以及细胞健康的同时，还可以避免不必要的费用开支。

为了更好地保证培养基的品质，我们应该定期地对培养基进行检查，并且采用多种数据来进行评估。

这样，可以更好地保证实验结果的重现性和可靠性，并且避免浪费时间和资源。

培养基灵敏度查标准操作规程

目的：建立培养基灵敏度检验标准操作规程，保证检查结果的准确性和可靠性。

应用范围：适用于培养基灵敏度的检查。

责任人：QC无菌检验员。

编订依据：《中国药典》2010年版二部、《中国药品检验标准操作规范》2010年版。

内容：1 细菌、霉菌及酵母菌计数用的培养基应进行培养基的灵敏度检查及适用性检查，成品培养基、由脱水培养基或按处方配制的培养基均应检查。

2 菌种试验所用的菌株传代次数不得超过5代（从菌种保存中心获得的冷冻干燥菌种为第0代），并采用适宜的菌种保藏技术，以保证试验菌株的生物学特性。

大肠埃希菌（Escherichia coli）[CMCC(B) 44 102]金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）[CMCC(B) 26 003]枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）[CMCC(B) 63 501]白色念珠菌（Candida albicans）[CMCC(F) 98 001]黑曲霉（Aspergillus niger）[CMCC(F) 98 003]3 菌液制备接种金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌的新鲜培养物至营养肉汤培养基或营养琼脂培养基上，接种生孢梭菌的新鲜培养物到硫乙醇酸盐流体培养基中，30～35℃培养18～24小时；接种白色念珠菌的新鲜培养物至改良马丁培养基或改良马丁琼脂培养基上，23～28℃培养24～48小时。

上述培养物用0.9%无菌氯化钠溶液制成每1ml含菌数为100cfu的菌悬液。

接种黑曲霉的新鲜培养物至改良马丁琼脂斜面培养基上，23～28℃培养5～7天，加入3～5ml含0.05％（ml/ml）聚山梨酯 80的0.9%无菌氯化钠溶液，将孢子洗脱。

然后，采用适宜方法吸出孢子悬液至无菌试管内，用含0.05％（ml/ml）聚山梨酯 80的 0.9%无菌氯化钠溶液制成每 1ml含孢子数100cfu的孢子悬液。

菌液制备后若在室温下放置，应在 2小时内使用；若保存在2～8℃，可在 24小时内使用。

培养基的灵敏度检查操作规程

培养基的灵敏度检查操作规程1 目的建立培养基灵敏度试验的操作规程，是为了规范、统一培养基灵敏度检测，确保微生物检测准确、安全进行。

2 适用范围本标准适用于培养基灵敏度检查。

3 责任者QC检验人员。

4 内容4.1 试验设备及用具：无菌培养皿、无菌刻度吸管或无菌注射器、无菌玻璃涂布器、酒精灯等。

4.2 使用的菌株：EP检测用ATCC的菌株：金黄色葡萄球菌Staphylococcus aureus ATCC 6538大肠埃希菌Escherichia coli ATCC 8739沙门氏菌Salmonella enterica subsp ATCC 14028黑曲霉Aspergillus niger ATCC 16404培养基灵敏度检测所用的菌株传代次数不得超过5代，并采用适宜的菌种保藏技术，以保证试验用菌株的生物学特性。

4.3 检测频率每批新买的培养基配制、灭菌后均应做灵敏度测试。

4.4 操作方法4.4.1 对照标准培养基用已经过试验证明合格的培养基或购买的有质量证书的成品平皿培养基作为对照标准培养基。

4.4.2 试验培养基将琼脂类的试验培养基加热融化后，冷却至45℃左右，以无菌的方式在无菌培养皿中注入15～20mL，备用。

液体类的培养基直接使用。

4.4.3 菌悬液的制备4.4.3.1 细菌菌悬液的制备取细菌的斜面培养物1耳匙接种在酪蛋白大豆消化肉汤培养基中30-35℃培养18-24h，取上述培养物用无菌水按10倍系列稀释，分别制成10-7-10-8的菌悬液备用。

4.4.3.2 霉菌菌悬液的制备取黑曲霉的斜面培养物加入无菌水4mL制成孢子悬液，取上述孢子悬液按10倍系列稀释，分别制成10-6-10-7的菌悬液备用。

4.4.4 培养基的生长促进实验4.4.4.1 琼脂类培养基的生长促进试验每株菌用2个试验培养基平皿，用表面涂布法在每个平皿表面接种0.1-0.5mL的菌悬液（约10-100CFU试验菌），同时用2个对照标准的培养基平皿做对照，接种相同量的菌悬液试验，在规定温度下培养，取出平皿点计菌落数。

培养基灵敏度检查规程[教材]

培养基灵敏度检查规程[教材]培养基灵敏度检查规程目的:建立培养基灵敏度检查的操作规程，保证无菌检查结果的准确性可靠性。

2. 范围:本标准适用于培养基灵敏度检查。

3. 职责:QC无菌检验员对本标准的实施负责。

4. 程序:4.1. 实验设备及用具:高压蒸汽灭菌器、恒温培养箱、注射器、针头、注射器盒、试管、试管架、搪瓷托盘、时钟、75%酒精棉球、无菌服。

4.2. 培养基:需气菌、厌气菌培养基(流体硫乙醇酸盐培养基)、真菌培养基。

4.3. 测试用菌种4.3.1. 藤黄微球菌[CMCC(B)28 001]4.3.2. 生孢梭菌[CMCC(B)64 941]4.3.3. 白色念珠菌[CMCC(F)98 001]4.4. 操作:4.4.1. 取藤黄微球菌、生孢梭菌的需气菌、厌气菌培养基新鲜培养物，白色念珠菌的真菌培养基的新鲜培养物1ml，用0.9%无菌氯化钠溶液作10倍系列稀释，制成1ml中含10-100个菌并计数。

4.4.2. 将藤黄微球菌、生孢梭菌的上述稀释液各1ml分别接种至每管装量为9ml的需气菌、厌气菌培养基3管，白色念珠菌的上述稀释菌液1ml，接种至每管装量为9ml的真菌培养基3管。

以未接种的培养基作对照，按规定的温度培养5天并逐日记录结果。

4.5. 结果判定:以每株菌接种后的培养基不得少于2管呈现生长，即该培养基的灵敏度检查符合要求。

5. 附:培养基灵敏度检查记录ZL0081 00。

压力蒸汽灭菌化学指示卡使用规程目的:建立压力蒸汽灭菌化学指示卡使用规程，保证正确使用，对灭菌效果进行有效监测。

2. 依据:《压力蒸汽灭菌化学指示卡使用说明书》。

3. 范围:本标准适用于压力蒸汽灭菌化学指示卡对压力蒸汽灭菌(121?，30分钟)的灭菌效果进行的监测。

4. 职责:压力蒸汽灭菌操作人员对本标准的实施负责。

5. 程序:5.1. 本指示卡用于下排气式压力蒸汽灭菌器灭菌效果的监测，指示卡上的指示色块在灭菌加热时由淡黄色变为黑色，随颜色变化的深浅可判断灭菌处理是否达到要求。