紫外可见分光光度计概述
紫外可见分光光度计验证方案
紫外可见分光光度计验证方案(一)、概述5.1 概述紫外可见分光光度计是依据物质在紫外和可见光区吸收光谱的特性及光吸收定律对物质进行定性和定量测定的仪器。
光吸收定律为：A=lg1/T=εbc式中：A：溶液的吸收度； T：溶液的透光率；ε：摩尔吸收系数，1/mol·cm；b：液层厚度，cm；c：溶液浓度，mol/L。
紫外可见分光光度计按照光束形式分为单光束型仪器和双光束型仪器，仪器由光源、单色器、样品室、检测器、控制系统和显示系统等部分组成，波长范围190nm～900nm。
(二)、验证目的确认紫外可见分光光度计的安装、运行、性能确认符合中国药典标准，为日常检验提供准确的检测结果。
(四)、验证依据及标准JJG178-2007《紫外、可见、近红外分光光度计》检定规程《中国药典》2010年版二部附录(五)、验证判断标准：1．安装确认判断标准：仪器应具备的技术资料齐全，仪器安装后符合设计要求。
2．运行确认判断标准：安装确认认可后，在不使用试样的条件下，确认该仪器运行正常。
3．性能确认判断标准：符合《中国药典》2010年版二部附录要求。
(六)、验证人员(七)、验证内容1、安装确认1.1安装确认所需文件及资料1.2安装场地单项结论：______________________________________________________________________检测人：日期：年月日复核人：日期：年月日2 运行确认：严格按《紫外可见分光光度计标准操作规程》SOP-进行操作，对仪器进行运行试验，确认其运转性能，并将检查结果填于下表中。
单项结论：检测人：日期：年月日复核人：日期：年月日3．性能确认3.1 验证项目及技术指标3.2 波长的准确度与重复性用仪器固有的氘灯，取单光速能量方式，采用波长扫描，扫描速度慢（如15nm/min），响应快，最小带宽（如0.1nm），量程取0～100%（或参照仪器说明书设定条件）。
TU—1901紫外可见分光光度计
5. 结果显示记录系统
检流计、数字显示、 检流计、数字显示、微机进行 仪器自动控制和结果处理
分光光度计的类型
1.单光束 1.单光束
简单，价廉，适于在给定波长处测量吸光度或透光度， 简单，价廉，适于在给定波长处测量吸光度或透光度， 一般不能作全波段光谱扫描， 一般不能作全波段光谱扫描，要求光源和检测器具有很高 的稳定性。 的稳定性。
E = h ν = h c / λ
（Planck常数：h=6.626 × 10 Planck常数： 常数 S )
-34
J ×
♥ 光的波长越短（频率越高），其能量越大。 光的波长越短（频率越高），其能量越大。 ），其能量越大 ♥ 白光（太阳光）：由各种单色光组成的复合光 白光（太阳光）： ）：由各种单色光组成的复合光 ♥ 单色光：单波长的光（由具有相同能量的光子 单色光：单波长的光（ 组成） 组成） ♥ 紫外光区：近紫外区10 - 200 nm （真空紫外 紫外光区：近紫外区10 区） 远紫外区200 - 400 nm 远紫外区200 可见光区：400可见光区：400-750 nm
3. 样品室
样品室放置各种类型的吸收池 比色皿）和相应的池架附件。 （比色皿）和相应的池架附件。吸 收池主要有石英池和玻璃池两种。 收池主要有石英池和玻璃池两种。 在紫外区须采用石英池， 在紫外区须采用石英池，可见区一 般用玻璃池。 般用玻璃池。
4. 检测器
利用光电效应将透过吸收池的 光信号变成可测的电信号， 光信号变成可测的电信号，常用的 有光电池、光电管或光电倍增管。 有光电池、光电管或光电倍增管。
仪器
可见分光光度计
仪器
紫外-可见分光光度计 紫外-
2. 物质对光的选择性吸收及吸收曲线
分光光度法-紫外可见分光光度计分类及特点、常见故障及排除方法
•
检查保险丝（或更换保险丝）
•
检查计算机主机与仪器主机连线是否正常
➢ 自检时，某项不通过，或出现错误信息
•
关机稍等片刻再开机重新自检
•
重新安装软件后自检
•
检查计算机主机与仪器主机连接是否正常
➢ 自检时出现“钨灯能量低”的错误
检查光度室是否有挡光物 打开光源室盖，检查钨灯是否点亮：如钨灯不亮，则关机，更换新钨灯 开机重新自检 重新安装软件后自检
镜纸由上而下擦拭干净，检视比色皿外无残留液体
➢比色皿放样品室时应注意方向相同 ➢使用完毕后需洗干净，晾干，防尘保存 ➢仪器室不得存放酸、碱、挥发性或腐蚀性等物质，以免损坏仪器。
紫外可见分光光度计维护及故障
02 紫外可见分光光度计常见故障及排除方法
➢ 打开主机后发现 不能自检主机风扇不转
•
检查电源开关是否正常
收池，因为普通玻璃能吸收紫外光，石英吸收池也可用于可见光区。
➢ 检测器 光敏检测器的作用是将接受的光辐射信号转换为相应的电信号，便于测量。紫外可见分光光度计常使用的检测
器是光电倍增管，响应速度快，能检测10-8~10-9s的脉冲光，灵敏度高，比一般光电管高200倍。
➢ 信号显示器 显示装置或读数装置的作用就是检测电流的大小，并将有关分析数据显示或记录下来。
•
检查样品是否有光解
•
检查样品是否太稀
•
检查比色皿是否玷污
•
是否测试时光谱带太小
•
周围有无强电磁场干扰
分光光度法
紫外可见分光光度计维护及故障
分光光度法
02 紫外可见分光光度计常见故障及排除方法
➢ 钨灯是好的，但自检时出现“钨灯能量高”的错误
临床检验仪器——紫外-可见分光光度计
紫外-可见分光光度计一、概述1、分光光度计：指能够从含有各种波长的混合光中将每一单色光分离出来并测量其强度的仪器。
根据其使用光的波长范围不同，分光光度计又可分为紫外分光光度计、可见光分光光度计、红外分光光度计和全波段分光光度计。
现代常用的分光光度计通常将紫外分光光度计和可见光分光光度计合并在一起，称为紫外-可见分光光度计。
2、吸收光谱（absorption spectrum）：不同的物质会吸收不同波长的光。
改变入射光的波长，并依次记录物质对不同波长光的吸收程度，就得到该物质的吸收光谱。
二、工作原理1、每一种物质都有其特定的吸收光谱，因此可根据物质的吸收光谱来分析物质的结构、含量和纯度，这就是吸收光谱分析法的理论基础。
2、光的吸收定律（朗伯-比尔定律）：当用一束单色光照射吸收溶液时，其吸光度与液层厚度b及溶液浓度c的乘积成正比。
3、朗伯-比尔定律适用的条件是：①入射光为单色光。
波长范围越大，单色光纯度越低，对朗伯-比耳定律的偏离就越大。
②溶液浓度不能过大。
在一定浓度范围内的溶液中，邻近分子的存在并不改变每一给定分子的特性，即分子间互不干扰。
当溶液浓度很大时，由于溶液分子的相互干扰，该定律不再成立。
三、基本结构（一）光源（light source）：提供入射光的装置。
1、不同类型的分光光度计根据需要配有不同的光源，但对光源有两个基本要求：①在所需波长范围的光谱区域内发射连续光谱；②有足够的辐射强度并能长时间稳定。
（二）单色器（monochromator）：是将来自光源的复合光分解为单色光并分离出所需波段光束的装置，是分光光度计的关键部件。
1、主要包括：入射狭缝、色散元件，包括棱镜和光栅、准直镜、出射狭缝组成。
（三）吸收池（absorption cell）：又称为比色皿、比色杯、样品池或液槽等，是用来盛放被测溶液的器件。
同时也决定着透光液层厚度、特定波长光的透光度等多种参数，应具有良好的透光性和较强的耐腐蚀性。
紫外可见分光光度计简介
可/可见分光光度计
紫外光 紫外光区：200~400nm 比色皿材质：石英 紫外光区光源：氘灯或氢灯 可见光区：400~800nm 比色皿材质：玻璃\石英 可见光区光源：钨灯 朗伯-比尔(Lambert-Beer)定律。即物质在一定浓度的吸光度与它的吸收介质的厚度呈正比，其数学表示式如下： A=KbC A：吸光度，描述溶液对光的吸收程度； K：摩尔吸光系数，单位L•mol-1•cm-1； b：液层厚度，通常以cm为单位； C：溶液的摩尔浓度，单位mol•L-1; 1.光源：在整个紫外光区或可见光区可以发射连续光谱，具有足够的辐射强度、较好的稳定性、较长的使用寿命。 2.单色器：是将光源辐射的复合光分成单色光的光学装置。是分光光度计的心脏部分。一般由夹缝、色散元件及透镜系 统组成。其中，最关键部分为色散元件。 3.吸收池：用于盛装试液的装置。吸收材料必须能够透过所测光谱范围的光。规格有0.5、1.0、2.0、3.0、5.0cm。分 析测定时，比色皿要经过配套性检验合格后才能投入使用。比色皿配套性的要求：两两比对，测定值≤0.005A 4.检测器：利用光电效应将透过吸收池的光信号变成可测的电信号，常用的有光电管、光电倍增管、光电二极管、光电 摄像管等。 要求：灵敏度高、响应时间短、噪声水平低、稳定性好。 5.显示器：将监测器输出的信号放大并显示出来的装置。 常用的液晶数字指示窗口和计算控制显示。
紫外可见分光光度计 普析
紫外可见分光光度计普析紫外可见分光光度计（UV-Vis spectrophotometer）是一种常用的分析仪器，广泛应用于化学、生物、环境等领域的研究和实验中。
本文将从紫外可见分光光度计的原理、应用以及操作步骤等方面进行介绍。
一、紫外可见分光光度计的原理紫外可见分光光度计是利用物质对紫外可见光的吸收特性进行定量分析的仪器。
根据光的波长范围，可分为紫外光区和可见光区两部分。
紫外光区的波长范围为200-400 nm，可见光区的波长范围为400-800 nm。
紫外可见分光光度计的工作原理是通过光源产生的光经过样品后，被光电二极管或光电倍增管接收，形成光谱图，再通过计算机进行数据处理和分析。
在分析过程中，样品溶液的吸收特性会使光强发生变化，根据吸光度与物质浓度之间的线性关系，可以通过测量吸光度来确定物质的浓度。
二、紫外可见分光光度计的应用紫外可见分光光度计在科研和实验中有着广泛的应用。
以下是其中几个常见的应用领域：1. 生物化学分析：紫外可见分光光度计可用于蛋白质、核酸、酶等生物大分子的浓度测定和纯度分析，如蛋白质含量的测定、核酸的纯度检测等。
2. 药物分析：紫外可见分光光度计可用于药物的含量测定、质量控制和稳定性研究，如药物溶液的吸光度测定、药物的光解动力学研究等。
3. 环境监测：紫外可见分光光度计可用于水质、大气和土壤等环境样品的污染物分析和监测，如水中重金属离子的测定、大气中挥发性有机物的测定等。
4. 食品安全检测：紫外可见分光光度计可用于食品中添加剂、农药残留、重金属等有害物质的检测，如食品中硝酸盐含量的测定、食品中防腐剂的测定等。
三、紫外可见分光光度计的操作步骤使用紫外可见分光光度计进行实验时，需要按照以下步骤进行操作：1. 打开仪器电源，并预热一段时间，使光源和光电二极管稳定工作。
2. 根据实验需要选择合适的光源和检测器，设置光的波长范围。
3. 取一定量的样品溶液，注入样品池中，并调节样品池的位置，使光线通过样品溶液。
卫生化学笔记：紫外可见分光光度计
紫外可见分光光度计（一）概述一、光学分析法光是一种电磁辐射，电磁辐射是一种以巨大的速度通过空间而不需要任何介质作为传播媒介的光子流，具有波粒二象性电磁波谱：按波长顺序排列的电磁辐射近紫外区（200-400nm）和可见光区（400-780nm）能级跃迁类型为：原子的价电子或分子的成键电子能级二、光学分析法的分类1.光谱法与非光谱法当物质与电磁辐射相互作用时，若物质内部发生能级跃迁，记录由能级跃迁所产生的辐射能强度随波长的变化的图谱称为光谱（spectrum）,利用物质的光谱进行定性、定量和结构分析的方法称为光谱分析法。
2.吸收光谱与发射光谱物质通过电致激发，热致激发或光致激发等过程获取能量，成为激发态的原子或分子，激发态的原子或分子极不稳定，它们可能以不同的形式释放能量，从激发态回到基态或低能态，如果是以电磁辐射的形式释放多余的能量就产生发射光谱。
吸收光谱是物质吸收相应的辐射能而产生的光谱。
其实质在于辐射使物质粒子发生由低能级（一般为基态）向高能级（激发态）的能级跃迁，被选择性吸收的辐射光子能量应为跃迁后与跃迁前两个能级间的能量差。
利用物质的吸收光谱进行定性，定量及结构分析的方法称为吸收光谱法。
3.分子光谱法与原子光谱法原子光谱法是测定气态原子（或离子）外层或内层电子跃迁所产生的原子光谱为基础的分析方法。
为线状光谱。
分子光谱法是以测定分子转动能级，分子中原子的振动能级（包括分子转动能级）和分子电子能级（包括振动-转动能级）跃迁所产生的分子光谱为基础的定性，定量和物质结构分析方法，为带状光谱。
三、紫外-可见分光光度计当辐射通过固体、液体或气体等透明介质分子时，物质分子选择性吸收紫外-可见光谱区的光辐射，根据吸收特征和吸收程度来研究物质组成和结构的定性、定量分析方法。
紫外可见分光光度法的特点：灵敏度较高；准确度较高；选择性较好；仪器设备简单；应用范围广。
（二）基本原理一、紫外-可见吸收光谱的形成1.分子的能级分布分子电子能级分子振动能级分子转动能级2.紫外-可见吸收光谱及其特征吸收峰谷肩峰末端吸收二、紫外-可见吸收光谱与分子结构的关系1.有机化合物的电子跃迁类型σ → σ*跃迁：需能量最大，吸收峰波长一般小于150nm。
紫外可见分光光度计范围
紫外可见分光光度计范围紫外可见分光光度计是一种常见的实验仪器，广泛应用于生化分析、环境监测、医学研究等领域。
它能够测量样品在紫外和可见光波段的吸光度，通过测量吸光度的变化，可以得到样品的浓度、反应动力学等重要信息。
紫外可见分光光度计的工作原理是基于光的吸收现象，下面我们来详细了解一下它的工作原理和应用范围。
紫外可见分光光度计的工作原理是基于比尔-朗伯定律，即吸光度与溶液中物质的浓度成正比。
当光通过样品时，样品中的物质会吸收一部分光，剩下的光通过样品溶液。
光度计会测量通过的光的强度，通过计算吸光度与浓度的关系，可以得到样品中物质的浓度。
紫外可见分光光度计的主要组成部分包括光源、样品室、光栅和光电传感器等。
紫外可见分光光度计的应用范围非常广泛。
在生化分析中，紫外可见分光光度计可以用于测量蛋白质、核酸、糖类等生物大分子的浓度。
通过测量吸光度的变化，可以得到样品中生物大分子的浓度，从而实现对生物大分子的定量分析。
在环境监测中，紫外可见分光光度计可以用于测量水中的污染物浓度。
通过测量水样的吸光度，可以判断水中是否含有有害物质，并对水质进行评估。
在医学研究中，紫外可见分光光度计可以用于测量药物的浓度。
通过测量药物的吸光度，可以监控药物在体内的代谢过程，从而指导药物的使用。
除了测量样品的浓度，紫外可见分光光度计还可以用于研究样品的光学性质。
在材料科学中，紫外可见分光光度计可以用于研究材料的光学吸收、反射和透射等性质。
通过测量材料在不同波长下的吸光度，可以得到材料的光学带隙、能带结构等重要参数。
在化学反应动力学研究中，紫外可见分光光度计可以用于测量化学反应的速率。
通过测量反应物或产物的吸光度随时间的变化，可以得到反应的速率常数和反应级数等信息。
总结一下，紫外可见分光光度计是一种常见的实验仪器，广泛应用于生化分析、环境监测、医学研究等领域。
它通过测量样品在紫外和可见光波段的吸光度，可以得到样品的浓度、反应动力学等重要信息。
紫外可见分光光度计的作用
紫外可见分光光度计的作用一、什么是紫外可见分光光度计？分光光度计是一种用于测量物质对光的吸收或透射性能的仪器。
其中，紫外可见分光光度计是应用于紫外光和可见光波段范围内的分光光度计。
它可以测量物质在不同波长下的吸收光强，从而得到吸收光谱和透射光谱，进一步分析样品的特性和成分。
二、紫外可见分光光度计的原理紫外可见分光光度计的原理基于比尔-朗伯定律。
根据这个定律，物质溶液中所吸收的光强与物质浓度成正比，也与光程和物质的摩尔吸光度相关。
通过调节不同波长的入射光，获得样品在不同波长下的吸光度值，可以得到样品吸收光谱。
三、紫外可见分光光度计的工作原理紫外可见分光光度计由光源、光栅、样品室、检测器和计算机组成。
具体工作原理如下：1. 光源光源产生连续的光谱，通常使用氘灯或钨灯作为光源。
紫外光区域使用氘灯，可见光区域使用钨灯。
2. 光栅光栅是紫外可见分光光度计的核心部件，它可以分散光线，使不同波长的光分开。
具体来说，光线经过光栅后，会被分成不同颜色的光，形成连续的光谱。
3. 样品室样品室用于放置待测样品。
样品室透光窗口的材料可以根据不同实验需要选择，例如石英或玻璃。
通过调节样品室中的路径长度，可以改变样品对光的吸收程度。
4. 检测器检测器接收样品室中透射或反射的光，并将光信号转换为电信号。
常用的检测器包括光电二极管（photodiode）和光电倍增管（photomultiplier tube）。
5. 计算机计算机用于控制光源、记录检测器输出和进行数据处理。
通过计算机软件，可以实时显示吸收光谱，并进行数据分析和处理。
四、紫外可见分光光度计的应用紫外可见分光光度计具有广泛的应用范围，以下列举了几个常见的应用领域：1. 生物化学和分子生物学在生物化学和分子生物学中，紫外可见分光光度计可以用于测量DNA和蛋白质的浓度。
通过测量样品在260纳米波长处的吸收光强，可以确定DNA的浓度。
同时，通过测量样品在280纳米波长处的吸收光强，可以确定蛋白质的浓度。
紫外可见分光光度计功能详述
紫外可见分光光度计功能详述紫外可见分光光度计（UV-Vis分光光度计）是一种用于研究物质的吸收、透射和反射光谱特性的仪器。
它由光源、光栅、样品室、检测器和数据处理单元等组成。
以下是对其功能进行详述。
1.宽波长范围：紫外可见分光光度计可以在紫外至可见光范围（190-1100nm）内进行光谱扫描。
这个范围涵盖了大部分无机和有机物质的吸收区域，因此可以用于许多领域的应用，例如化学、物理、生物和环境科学等。
2.定量分析：紫外可见分光光度计可以通过测量样品的吸光度来定量分析物质的浓度。
它根据比尔－朗伯定律，即吸光度与样品溶液浓度成正比关系，利用这个关系可以推导出样品的浓度。
3.质量控制：在工业生产中，紫外可见分光光度计可以用来监测原料、中间产品和最终产品中的成分变化。
通过测量样品吸光度的变化，可以及时探测到质量问题，并从而采取相应措施进行调整。
4.物质识别：每种物质都有其特有的光谱吸收特性。
紫外可见分光光度计可以根据物质的特征光谱图在样品中识别和鉴别物质。
这在犯罪现场分析、药物识别以及食品和饮料检测中具有重要意义。
5.动力学研究：紫外可见分光光度计可以配合温度控制装置，对吸收光谱在时间上的变化进行实时监测和分析。
这使得它在动力学研究中的应用非常广泛，例如反应动力学、酶动力学和酸碱滴定等。
6.样品稳定性研究：紫外可见分光光度计可以用来评估某个物质在不同环境条件下的稳定性，例如光照、温度和湿度等。
通过对光谱形状和吸光度的变化进行分析，可以判断物质的稳定性和降解机制。
7.溶液动力学研究：紫外可见分光光度计可以配合流动注射技术，对溶液中吸收光谱的变化进行测量。
这在药物溶解度、胶体稳定性和离子浓度测定等方面有广泛应用。
8.数据处理功能：紫外可见分光光度计通常配备有数据处理软件，可以进行光谱数据的处理、分析和报告生成。
这使得数据的处理更为方便和高效。
总之，紫外可见分光光度计作为一种重要的光谱分析仪器，具有广泛的应用领域和功能。
菁华紫外可见分光光度计说明书
菁华紫外可见分光光度计说明书
摘要：
一、菁华紫外可见分光光度计概述
二、菁华紫外可见分光光度计的工作原理
三、菁华紫外可见分光光度计的使用方法
四、菁华紫外可见分光光度计的维护与保养
五、菁华紫外可见分光光度计的应用领域
正文：
一、菁华紫外可见分光光度计概述
菁华紫外可见分光光度计是一种精密的分析仪器，用于测量物质在紫外和可见光区域的吸收光谱。
该仪器广泛应用于化学、生物学、环境科学等领域，用于物质的定性鉴别、定量分析以及反应动力学研究等。
二、菁华紫外可见分光光度计的工作原理
菁华紫外可见分光光度计基于朗伯比尔定律进行测量。
当光通过吸收介质时，介质对光的吸收程度与介质中物质的浓度成正比。
菁华紫外可见分光光度计通过测量样品在紫外和可见光区域的吸光度，进而计算出样品中物质的浓度。
三、菁华紫外可见分光光度计的使用方法
使用菁华紫外可见分光光度计进行测量时，需先将样品制备成均匀的溶液，然后将溶液倒入比色皿中。
接下来，设置仪器的波长范围和测量时间，进行吸光度测量。
最后，根据测量结果和朗伯比尔定律计算出样品中物质的浓度。
四、菁华紫外可见分光光度计的维护与保养
为了保证菁华紫外可见分光光度计的测量精度和稳定性，需要定期进行维护和保养。
首先，应避免将仪器暴露在高温和潮湿的环境中。
其次，定期清洁比色皿，避免污染。
最后，定期校准仪器，确保测量精度。
五、菁华紫外可见分光光度计的应用领域
菁华紫外可见分光光度计在多个领域都有广泛应用，包括化学分析、生物学研究、环境监测等。
紫外可见分光光度计介绍
紫外可见分光光度 计可以用于定性分 析，确定物质是否 存在或含量多少。
定性分析可以帮助 研究人员了解物质 的性质、结构、组 成等信息。
定性分析可以应用于 化学、生物、医学、 环境等领域，对物质 进行定性分析。
定性分析还可以用 于检测物质的纯度、 杂质等，确保产品 质量和安全。
01
02
03
04
定量分析
电信号经过放大和处理，得 到样品的吸光度。
吸光度与样品浓度之间存在 一定的关系，通过标准曲线
可以计算出样品的浓度。
光路结构
光源：提供紫外可见光 单色器：将光源分解为单色光 样品池：放置待测样品 检测器：接收样品吸收后的光信号 信号处理：将检测到的信号转换为吸光度或透光率 显示与记录：显示测量结果，记录数据
测量方法
光源：提供紫外可 见光，激发样品中
的分子或原子
检测器：检测样品 吸收光后的强度变 化，转化为电信号
单色器：将光源发 出的光分解成单色
光
样品池：放置样品， 吸收单色光
数据处理：将电信 号转化为吸收光谱，
进行分析和计算
结果输出：显示样 品的紫外可见吸收 光谱，提供定量和
定性分析结果
定性分析
定量分析：
1 通过测量吸 光度值，计 算样品浓度
应用领域：
2 化学、生物、 医学、环境 等领域
定量分析方法：
3 标准曲线法、 标准加入法、 内标法等
定量分析特
4 点：准确、 快速、灵敏、 稳定
应用领域
01
化学分析：用于分析化学物质，如蛋 02
环境监测：用于监测水质、大气、土
白质、核酸、氨基酸等
壤等环境因素
光源故障：检查光源是否正常， 必要时更换光源
第一章 紫外-可见分光光度计
第一节紫外-可见分光光度计的基本结构一、紫外-可见分光光度计的分类紫外-可见分光光度计（UV-Vis spectrophotometer）是量度介质对紫外、可见光区波长的单色光吸收程度的分析仪器，按不同的分类标准所做的分类如表1-1目前，国际上一般按紫外-可见分光光度计的仪器结构将其分为单光束、准双光束、双光束和双波长四类。
本节将对这四者之间的主要区别、各自的特点进行简单介绍。
（一）单光束紫外-可见分光光度计1945年美国Beckman公司推出的世界上第一台成熟的紫外-可见分光光度计商品仪器，就是单光束紫外-可见分光光度计。
顾名思义，单光束紫外-可见分光光度计只有一束单色光，一只比色皿，一只光电转换器（又称光接收器）。
其光电转换器通常采用硅光电池、光敏三极管或光电管，其结构简单、价格便宜，但因其杂散光、光源波动、电子学的噪声等都不能抵消，故单光束紫外-可见分光光度计的光度准确度差。
国外的DU70、PU8700等及我国生产的721、722、723、727、751、752、753、754等紫外-可见分光光度计都是单光束仪器，它们属于低档仪器。
单光束紫外-可见分光光度计的技术指标比较差，特别是杂散光、光度噪声、光谱带宽等主要技术指标比较差，分析误差较大，在使用上收到限制。
一般来讲，要求较高的制药行业、质量检验行业、科研行业等不宜使用单光束紫外-可见分光光度计。
单光束紫外-可见分光光度计的组成如图1-1所示。
（二）准双光束紫外-可见分光光度计所谓准双光束紫外-可见分光光度计，就是有两束光，但只有一只比色皿的紫外-可见分光光度计。
其中，一束光通过比色皿，另一束光不通过比色皿。
不通过比色皿的那束光，主要起抵消光源波动对分析误差影响的作用。
准双光束紫外-可见分光光度计有两种类型：一种是两束单色光，一只比色皿，两只光电转换器；另一种是一束单色光，一束复合光，一只比色皿，两只光电转换器。
1.两束单色光的准双光束紫外-可见分光光度计这种准双光束紫外-可见分光光度计比较多，目前国内外市场上或用户正在使用的准双光束紫外-可见分光光度计，基本上都是这种类型的仪器，它属于普及型的常规仪器。
紫外可见分光光度计的性能特点介绍
紫外可见分光光度计的性能特点介绍紫外可见分光光度计是一种用于分析和测量样品中吸收和透射光的仪器。
它主要应用于化学、生物、食品等领域，具有广泛的应用价值。
在此，我们将详细介绍紫外可见分光光度计的性能特点。
1. 波长范围广紫外可见分光光度计的波长范围通常为190-1100nm，可用于检测紫外至可见光区间的吸收谱线。
在化学分析和生物学实验中，通常使用低波长紫外光(200-400nm)、中波长紫外光(200-300nm)和可见光(400-800nm)进行检测。
由于波长范围广，紫外可见分光光度计能够更精确地测量样品中的吸收率和透过率，从而准确地分析和判断样品的特性。
2. 分辨率高紫外可见分光光度计的分辨率一般为0.1nm，可用于准确地测量样品光谱的细节和变化。
高分辨率可实现更精细的分析，减少光谱图像中峰之间的重叠，提高了数据的可靠性。
3. 灵敏度高紫外可见分光光度计具有高灵敏度，可检测非常小的样品浓度变化。
它通常使用扫描速率较慢的方式测量光谱，从而提高检测的精度和可靠性。
此外，高灵敏度还可缩短操作时间，提高实验效率。
4. 稳定性好紫外可见分光光度计通常采用恒温控制系统，可以稳定保持光源的温度，从而保持光源的持续亮度，提高实验数据的可靠性。
此外，配备高品质的材料和部件，还能有效缓冲温度变化或机械振动对仪器的影响。
5. 操作简便紫外可见分光光度计的操作简单易学，可用于化学实验室的各种需求。
它具有友好的图形用户界面，方便用户查看数据和实验结果。
同时，通用的样品室和灵活的样品架也使得操作更为便捷。
在不同的实验需要下，用户可自定义样品装置(比如：样品台、紫外石英池、石英微量池和吸收池等)，以适应不同类型的实验样品。
总结紫外可见分光光度计作为一种通用的分析检测仪器，其性能特点越来越受到人们的关注。
广泛适用于化学、生物等领域的样品分析和检测，是实验室必备的仪器之一。
在实验过程中，需要根据具体的实验需求和标准，合理地选择不同类型和不同品牌的紫外可见分光光度计。
紫外可见分光光度计详细介绍
紫外可见分光光度计详细介绍紫外可见分光光度计是一种用于测量物质在紫外和可见光波段吸收和发射光线的仪器。
它通过测量试样溶液中吸收或发射的光的强度来确定物质的浓度或化学性质。
紫外可见分光光度计广泛应用于化学、生物、环境科学等领域，为科学研究和工业生产提供准确的光谱数据。
紫外可见分光光度计的工作原理是基于比尔定律。
根据比尔定律，溶液中吸收光的强度与溶液中溶质的浓度成正比。
光度计通过测量入射光和透射光之间的差异来确定溶液中溶质的浓度。
紫外可见分光光度计通常由光源、样品室、光栅、光电探测器和信号处理器等组件构成。
紫外可见分光光度计的光源通常是一种连续光源，如氘灯或钨灯。
紫外光源通常使用氘灯，可见光源通常使用钨灯。
这些光源能够提供广谱的光线，覆盖紫外到可见光波段。
样品室是紫外可见分光光度计中的一个重要组件，用于容纳样品溶液。
样品室通常是一个透明的石英或玻璃室，能够使光线通过并与样品作用。
光栅是紫外可见分光光度计中的一个关键组件，用于分散光线并选择特定波长的光。
光栅通常是一个反射式光栅，由许多平行的凹槽组成。
当光线通过光栅时，不同波长的光会被分散成不同的角度，从而实现波长选择的功能。
光电探测器是紫外可见分光光度计中的另一个关键组件，用于测量透射光的强度。
常用的光电探测器包括光电二极管（photodiode）和光电倍增管（photomultiplier tube）。
光电探测器将透射光转换为电信号，并传送给信号处理器进行处理和显示。
信号处理器是紫外可见分光光度计中的一个重要部分，用于接收和处理光电探测器传输的电信号。
信号处理器通常包括放大器、滤波器和数据记录设备。
放大器用于放大光电探测器输出的微弱电信号，滤波器用于滤除噪声和干扰信号，数据记录设备用于记录和显示测量结果。
使用紫外可见分光光度计进行测量通常需要先进行基线校准。
基线校准是通过测量空白溶液（即不含目标物质的溶液）来确定仪器的零点。
校准后，将待测样品溶液放入样品室中，选择适当的波长和测量模式，然后测量透射光的强度。
紫外可见分光光度计的介绍
紫外可见分光光度计的介绍
紫外可见分光光度计，是一种用于测定液体、气体、固体在紫外光、可见光区域内吸收或透过率的光学仪器。
它可以精确测量样品的吸光度、透过率、反射率等参数，应用于生化、化学、医药、环境、食品等领域的分析和检测。
紫外可见分光光度计的原理是将一束光线经过分光镜拆分成多个波长的光线，经过样品后，样品会吸收或透过部分光线，被干涉光谱仪接收，并将其转换成电信号。
通过测量样品与参照物（空气或去离子水）之间的比较读数，计算出样品的吸光度值。
紫外可见分光光度计的主要特点是：准确性高、灵敏度高、重复性好、分辨率高、操作简单、数据处理快速等。
根据使用范围和波长范围的不同，紫外可见分光光度计可以分为紫外分光光度计、可见分光光度计和紫外可见分光光度计。
紫外可见分光光度计具有广泛的应用。
在生物学领域，可以用于蛋白质、核酸、酶、细胞器等的测定；在医学领域，可以用于药物、体液等的检测；在环境保护领域，可以用于水质、大气污染等的监测；在食品工业中，可以用于食品添加剂、营养成分、产物残留等的检测。
除此之外，紫外可见分光光度计还可以与色谱仪、电泳仪等联用，提高对样品的准确测定，从而满足更高的实验需求。
总之，紫外可见分光光度计是一种重要的实验仪器，具有广泛的应用和推广前景。
它不仅能够提高实验效率和准确度，还可以为相关领域的研究和探索提供重要的技术支持。
第三节课紫外-可见分光光度计
利用UV-Vis吸收光谱法进行化合物的定性鉴 别，一般采用对比法。
➢1．比较法 通常以未知纯试样的紫外吸收光谱图与标准纯试样 的紫外吸收光谱图，或与标准紫外吸收光谱图比较 进行定性。
对比吸收光谱的特征数据（max、max） （在相同溶剂中）
对比吸收光谱的一致性max、 max、峰形均须一致
(1) Woodward-Fieser经验规则
可用于计算共轭烯烃及，-不饱和羰基化合物的 *跃迁的最大吸收波长，计算时以母体生色团 的最大吸收波长λmax为基数，再加上连接在母体 π电子体系上的不同取代基助色团的修正值。
升级版本：
母体是异环的二烯烃或无环多烯烃类型
λ/nm
基数 217
母体是同环的二烯烃或这种类型的多烯烃
基数 253
（注意：当两种情形的二烯烃体系同时存在时，选择波长较长的为其母体系 统，即选用基数为 253nm）
器
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
示
吸收 池
二、基本部件
1、光源
作用：在整个紫外光区或可见光谱区可以发射连续光谱 要求: 具有足够的辐射强度、较好的稳定性、较长的使
用寿命。 可见区：白炽光源如钨灯或碘钨灯
波长范围 320~2500nm 紫外区：气体放电灯，如低压直流氢放电灯或
氘放电灯 波长范围 180~375nm 因玻璃对紫外光有吸收，所以应用石英窗
27
28
(2) Scott经验规则
它用于计算苯甲酸、苯甲醛或苯甲酸酯等芳 香族羰基衍生物R－C6H4－COX的λmax 。计算方 法与伍德沃德规则相同。
23
2.对共轭体系延长的问题
共轭体系的延长就是在母体的基础上, 每增加一个 共轭双键, 其修正值加30 nm。常见错误是认为除了 母体以外, 只要有双键就要算作共轭体系的延长, 而 忽略了双键必须和母体形成共轭体系。
紫外可见分光光度计原理及应用
紫外可见分光光度计原理及应用紫外可见分光光度计是一种常用的光谱仪器，主要用于测量样品溶液的吸光度。
它利用紫外可见光的吸收特性来分析物质的结构和浓度，并在化学、生物、药学和环境监测等领域有广泛的应用。
紫外可见分光光度计的原理基于比尔-朗伯定律和兰伯特-比尔定律。
紫外可见分光光度计的工作原理是利用可见光和紫外光穿过溶液时，溶液中的分子或离子会吸收特定波长的光线。
光的吸收会使得光通过溶液的强度减弱，即溶液中的吸光度增加。
光度计测量的就是经过溶液前后的光强度差值，也就是吸光度。
从而根据吸光度的变化来推断溶液中所含的分析物的浓度或结构。
紫外可见分光光度计可以在190nm至1100nm的波长范围内测量光强度的变化。
常用波长为190nm至800nm之间。
紫外可见分光光度计的光源通常是一束连续的白光，经过光栅或棱镜分散成不同波长的光束，然后通过一个进样室和样品溶液接触。
样品溶液会吸收特定波长的光，其余波长的光会通过样品溶液，最后被一个光敏探测器接收。
光敏探测器会将光信号转换成电信号，并转化成数字信号通过计算机处理。
应用方面，紫外可见分光光度计广泛应用于化学、生物、药学和环境监测等领域。
在化学领域，它可以用于分析溶液中化合物的浓度，并用于酸碱度的测量。
生物领域常用紫外可见分光光度计来测量DNA和蛋白质的浓度，以及酶促反应的速率。
在药学领域，它用于药物的质量控制，测量药物和其他添加剂在制剂中的含量。
在环境监测领域，紫外可见分光光度计被用于测量水体和大气中污染物的浓度，如有机物、重金属和氮浓度等。
总之，紫外可见分光光度计利用吸光度的测量原理，能够准确测量样品溶液中特定波长的光线的吸收程度，从而推断出溶液中所含的分析物的浓度或结构。
它在化学、生物、药学和环境监测等领域中都有重要的应用价值，并在科学研究和工业生产中发挥着重要的作用。
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1 .Lambert-Beer 定律 当强度为I0的入射光束,通过装有均匀待测物的介质时， 该光束将被部分吸收，未被吸收的光将透过待测物溶液。 当入射光波长一定时，待测溶液的吸光度A与其浓度 和液层厚度成正比，即。
A bc
ε为摩尔吸光系数
2、朗伯—比尔定律
A bc
ε为摩尔吸光系数，仅与入射光的波长、被测组分的性 质和温度有关，在一定条件下是被测物质的特征性常数。 ε值越大，吸光程度越大，定量测定时的灵敏度越高； ε>1.0x104时为强吸收， ε=1.0x103—4为较强吸收， ε< 1.0x102为弱吸收；
4、光电转换器 （1）光电转换器是将光辐射转化为可以测量的电信号 的器件。 （2）理想的光电转换器要求： 灵敏度高； S/N大； C）光电转换器种类及应用波段 暗电流小； 响应快且在宽的波段内响应恒定。 检测器种类 检测器 应用波段
早期检测器 人眼(Vis)，相板及照像胶片(UV-Vis) 硒光电池（Photovoltaic cell,光伏管） 光电转换器
多通道转换器
(Multichannel transducer)
电荷转移器件 Charge-transfer device, CTD：
电荷注入器件(Charge-injection device, CID)
UV-Vis
5、信号显示器
由检测器进行光电转换后，信号经适当放大，用记 录仪进行记录或数字显示。 目前国产许多紫外—可见分光光度计的仪器都配置 有工作站和激光打印机，测定信号的记录、处理、打印 操作都可以通过工作站的计算机进行控制，工作较方便。
f 入射狭缝 准直镜 棱镜 物镜 焦面 准直镜
出射狭缝
物镜
f
入射狭缝
光栅 出射狭缝
其中最主要的分光原件为棱镜和光栅。
3、吸收池 除发射光谱外，其它光谱分析都需要吸收池。盛放 试样的吸收池由光透明材料制成。 ①石英或熔融石英： 紫外光区—可见光区—3m； ②玻璃： 可见光区（350-1000nm）； ③透明塑料： 可见光区（350-1000nm）； ④盐窗（NaCl晶体）：红外光区。
第三节、紫外—可见分光光度计 仪器的类型：按光学系统分为单波长和双波长 1. 单波长分光光度计 单光束 双光束（空间分隔） 双光束（时间分隔） 特点：双光束方法因光束几乎同时通过样品池和参比池， 因此可消除光源不稳产生的误差。 2. 双波长分光度计 特点：可测多组份试样、混浊试样、而且可作成导数 光谱、不需参比液、克服了电源不稳而产生的误差，灵 敏度高。
第二节、光谱仪器
组成： 1.光源； 2.单色器； 3.样品容器； 4.检测器（光电转换器）； 5.信号显示器（ 电子读出、数据处理及记录）
1、光源 是一种有光谱特性的器件，理想的光源必须满足： ①在使用波长范围内有足够的辐射强度和良好的稳定性； ②辐射光是连续的，其强度不随波长的变化而发生明显的变化。 常用的紫外光源是氢灯或氘灯，波长范围为160--375nm， 同样条件下氘灯的辐射强度比氢灯大4倍左右。 常用的可见光源为钨灯或碘钨灯，使用的波长范围为350 ～1000nm。 近年来，碘钨灯因寿命长、强度大而代替了钨灯。
第二章、紫外-可见分光光度法
本章主要内容
1、紫外-可见吸收光谱 2、紫外-可见光度计仪器组成 3、吸收光谱的测量-- Lambert-Beer 定律 4、分析条件选择 5、UV-Vis分光光度法的应用
第一节、紫外-可见吸收光谱 UV-Vis方法是分子光谱方法，它利用分子对外来辐射 的选择性吸收特性。 UV-Vis涉及分子外层电子的能级跃迁；光谱区在160 ~780nm。紫外—可见分子吸收光谱测定所用的仪器是紫 外—可见分光光度计，其测定波长范围为200 — 1000nm。 UV-Vis主要用于分子的定量分析，但紫外光谱(UV) 为四大波谱之一，是鉴定许多化合物，尤其是有机化合 物的重要定性工具之一。
(photo transducer)
UV-Vis
350-(500)max-750nm 据光敏材料而定 ibid 190-1100nm
真空光电管（Vacuum phototube） 光电倍增管（Photomultiplier tube） 硅二极管（Silicon diode） 光二极管阵列（Photodiode array, PDA）
2．单波长双光束分光光度计
与单光束相似，不同的是在单色器与吸收池之间加了 一个斩光器。把均匀的单色光变成频率、强度相同的交替 光，一束通过参比溶液，另一束通过样品溶液，然后由检 测器交替接收参比信号和样品信号，并把它们的差值转变 为电信号，经放大后由显示系统显示出来。
双光束分光光度计适用于在宽的光谱区域内扫描复杂 的吸收光谱图，但对生物样品等复杂波长分光光度计
用两种不同的波长的单色光λ 1、λ 2交替照射试液， 并被光电倍增管交替接收，测得的是扣除了背景干扰的 吸光度之差的ΔA0。
双波长测定法不用参比溶液，只用样品溶液即可完 全扣除背景(包括溶液的浑浊、吸收池的误差)，大大提 高了测定的准确度。
第四节、紫外—可见吸收光谱法的定量分析
1．单波长单光束分光光度计 单光束分光光度计只有一条光路，通过变换参比池 和样品池的位置，使它们分别进入光路进行测定。
首先用参比溶液调透光率100％，然后对样品溶液测 量并读数。使用单光束分光光度计时，每换一次波长，要 用参比溶液校正透光率到100％，才能对样品进行测定。 若要做紫外—可见全谱区分析，则很麻烦，并且光源 强度不稳定会引入误差，此时可改用双光束分光光度计。
2、分光系统(单色器)
将由不同波长的“复合光”分开为一系列“单一”波长的
“单色光”的器件。 理想的100%的单色光是不可能达到的，实际上只能 获得的是具有一定“纯度”的单色光，即该“单色光具有一 定的宽度（有效带宽）。 有效带宽越小，分析的灵敏度越高、选择性越好、分 析物浓度与光学响应信号的线性相关性也越好。 构成：狭缝、准直镜、棱镜或光栅、会聚透镜 常用的色散元件有棱镜和光栅。商品仪器多选用光 栅，因光栅可在整个波长区提供良好的均匀一致的分辨 能力，而且成本低，便于保存。