3种经典工艺生产的金银花提取物中糖类成分含量比较(一)

3种经典工艺生产的金银花提取物中糖类成分含量比较(一)

作者：陈有根张蓉邬国庆王志斌

【摘要】：目的比较3种经典工艺生产的金银花提取物中果糖、葡萄糖、蔗糖和总糖的含量差异,为指导含金银花中成药的生产和质量控制提供科学依据。方法用经典的水-醇法、石-硫法和改良石-硫法生产金银花提取物样品,用高效液相-梯度洗脱法测定3种提取物样品中果糖、葡萄糖和蔗糖含量,用分光光度法测定3种提取物样品中总糖含量。结果3种提取物中果糖含量分别为 5.44%、3.47%、4.74%,葡萄糖含量分别为4.35%、2.73%、4.21%,蔗糖含量分别为17.41%、8.47%、14.47%,总糖含量分别为50.63%、41.12%、35.90%。结论测定了金银花提取物中除绿原酸类以外的36%～51%总成分含量,并揭示了其中19%～27%的化学成分组成为果糖、葡萄糖、蔗糖。

【关键词】金银花提取物果糖葡萄糖蔗糖

Abstract：ObjectiveTodeterminethecontentsoffructose,glucose,sucroseandtotalsacch arideinhoneysuckleextractswhichwereproducedbythreeclassicalmethods,t oprovidescientificdataforproducingandcontrollingofthosepatentmedicines containinghoneysuckleextract.MethodsThreeclassicalextractmethodswere usedforproducinghoneysuckleextracts.HPLC-ELSDmethodwasusedfordeter miningthecontentsoffructose,glucose,sucrose,andaspectrophotometricdet erminationmethodwasusedfordeterminingthecontentsoftotalsaccharide.R

esultsThecontentsoffructoseinthreehoneysuckleextractswere5.44%,3.47%, 4.74%,glucosewere4.35%,2.73%,4.21%,glucosewere17.41%,8.47%,14.47%, andtotalsaccharidewere50.63%,41.12%,35.90%,respectively.ConclusionAb out36%～51%oftotalcomponentsofhoneysuckleextractsweredeterminedexceptchlor ogenicacids,and19%～27%ofcomponentsintheextractswerefructose,glucose,sucrose. Keywords：honeysuckleextract；fructose；glucose；sucroses

金银花为常用中药,来源于忍冬科植物忍冬LonicerajaponicaThunb.的干燥花蕾,具有清热解毒、凉散风热的功能。金银花提取物是生产多种中成药制剂的中间原料。《中华人民共和国药典》和《卫生部药品标准》中收载的金银花提取物的生产工艺有3种,即：水-醇法1]、石-硫法2]和改良石-硫法3],它们均属于有法定标准的工艺方法。用这3种工艺生产的提取物分别作为双黄连、茵栀黄和银黄注射液的中间原料。这3种注射剂在临床都有十余年的使用历史,其疗效得到众多临床医生和患者的肯定。关于金银花提取物的质量控制报道较多,多数以绿原酸含量作为控制指标,未见用糖类成分作为指标对金银花提取物进行质量控制研究的报道。本试验采用RP-HPLC-ELSD法测定了3种经典工艺生产的金银花提取物中果糖、葡萄糖和蔗糖含量,本研究可为含金银花中药注射剂的生产和质量控制提供具有实用价值的实验数据。

1仪器与试药

Agilent-1100高效液相色谱仪,四元泵,自动进样器,柱温箱,AlltechELSD2000ES检测器,AgilentA10.02工作站。岛津UV-2450PC型可见-紫外分光光度仪。

果糖、葡萄糖和蔗糖对照品(中国药品生物制品检定所提供)；金银花药材(采自山东省平邑县白彦镇)。乙腈为色谱纯,水为去离子水,其它试剂均为分析纯,苯酚重蒸后用水配成5%的溶液。

2方法与结果

2.1果糖、葡萄糖和蔗糖的含量测定

2.1.1色谱条件

色谱柱：Inertsil-NH2(4.6mm×250mm,5μm)；流动相：乙腈-水(78∶22)；流速：1mL/min；柱温：30℃；ELSD检测器氮气流速2.2L/min,漂移管温度85℃。

2.1.2供试品溶液的制备

取金银花提取物A、B、C细粉300mg(3种提取物样品的制备方法见文献4]),精密称定,分别置50mL量瓶中,加70%乙醇至刻度,超声(600W)处理10min,0.45μm微孔滤膜滤过,取续滤液,备用。

2.1.3线性关系考察

分别精密称取果糖、葡萄糖和蔗糖适量,加70%乙醇制成每1mL含果糖1.484mg、葡萄糖1.456mg和蔗糖2.648mg的混合对照品溶液。精密吸取0.5、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0mL,置10mL量瓶中,加70%乙醇至刻度,摇匀,制成系列混合对照品溶液。按上述色谱条件分别进样10μL,以进样

量的自然对数(lnm)为横坐标,峰面积的自然对数(lnA)为纵坐标,计算,得果糖的回归方程为：lnA＝1.3086·lnm＋7.9464,r＝0.9996,线性范围为0.728～7.280μg；葡萄糖的回归方程为：lnA＝1.2771·lnm＋7.9793,r＝

0.9996,线性范围为0.742～7.420μg；蔗糖的回归方程为：lnA＝

1.2577·lnm＋7.9826,r＝0.9999,线性范围为1.324～13.420μg。

2.1.4系统适应性

在上述色谱条件下测定,结果表明,理论塔板数以果糖峰计算为12745,以葡萄糖峰计算为5578,以蔗糖峰计算为13425(见图1)。

2.1.5精密度试验

取果糖、葡萄糖和蔗糖质量浓度分别为0.2968、0.2912和0.7944mg/mL 的混合对照品溶液,连续进样5次,每次10μL,以果糖、葡萄糖和蔗糖的峰面积计算进样精密度,RSD分别为1.62%、1.59%和1.50%。

2.1.6重复性试验

取提取物C,按供试品溶液制备方法制备5份供试液,依法测定,计算,得果糖平均含量为 4.74%(RSD＝1.43%),葡萄糖平均含量为 4.21%(RSD＝

1.52%),蔗糖平均含量为14.47%(RSD＝1.49%)。

2.1.7稳定性试验

取同一份供试品溶液,每隔2h进样测定,结果5次测定的果糖、葡萄糖和蔗糖的峰面积基本不变,RSD分别为1.03%、1.12%、1.46%,表明供试品溶液在8h内稳定。

2.1.8加样回收率试验