masson染色步骤(临床医学研究中心总结)

试剂名：改良 Masson 三色染色液货号：G1345 品牌：索莱宝

1、石蜡切片65℃烘烤1h（使组织更贴合玻片，并溶解石蜡。如果是刚切好的切片，则烘烤2-3h），立即放入脱蜡剂中脱蜡；

2、脱蜡：脱蜡剂Ⅰ（15min）、脱蜡剂Ⅱ（15min）

水化：无水乙醇I（5min）、无水乙醇 II（5min）、95%乙醇I（5min）、95%乙醇II （5min）、85%乙醇（5min）、75%乙醇（5min）脱蜡处理，蒸馏水3min

3、将 Bouin 液滴在组织上，于室温作用一晚或置入 37℃的温箱内 2h 进行媒染，然后流水冲洗至切片组织上的黄色消失。

4、天青石蓝染色液滴染3min，稍水洗玻片上无染料即可。

5、Mayer 苏木素染色液滴染3min，稍水洗玻片上无染料即可。（显微镜下观察，细胞核呈现深蓝色，细胞质有蓝色）

6、酸性乙醇分化液分化3-5s，流水冲洗 10min返蓝。（细胞核呈现灰蓝色，细胞质应相对透明无色）

7、丽春红品红染色液染 2-5min，稍水洗玻片上无染料即可。（容易造成深红或紫红色，基本看不清细胞核。建议先染色30s-1min，显微镜下观察，适当增加时间）

8、磷钼酸溶液浸泡10min，倾去上液，切片不用水洗，直接滴入苯胺蓝染色液染 5-

10min。（如果丽春红染色过深，苯胺蓝也应该适当染久一些，最终应该是红蓝色分明，能明显分辨出胶原显微）

9、弱酸溶液处理 2min。

10、透明：切片直接依次放入无水乙醇 I（5min）-无水乙醇 II（5min）- 脱蜡剂Ⅰ（5min）- 脱蜡剂Ⅱ（5min）。然后用纸巾擦干玻片上残余脱蜡剂，或直接铺平玻片在通风橱内，干燥脱蜡剂。使用中性树脂封片。

注：masson染色不像HE可以把颜色洗脱再重复步骤，建议使用同一批切片，先摸索染色时间。