方法学考察PPT-1.6ppt课件

20
中间精密度
在同一个实验室，不同时间由不同分析人员,用不同设备
测定结果之间的精密度，称为中间精密度。 考察的目的：考察随机变动因素对精密度的影响 考察的因素: 不同时间 、不同分析人员、 不同设备 至少3人采用同一设备或同一人采用3台不同设备，对 同一批样品测定含量。计算不同操作者或不同设备测定的 含量平均值和相对标准偏差。
方法学考察 PPT-1.6

1. 中药质量标准方法学验证的意义？ 2. 中药质量标准方法学验证的主要内 容及方法？

2
方法学验证的目的
Ⅰ 方法学验证：是对测定方法的评价,是建立新方法的研究 内容和依据。 Ⅱ 证明采用的方法是否适合于相应的检测方法或分析要求； Ⅲ 新建立的检测方法、改变原检测方法、工艺变更、处方变更
15
拓展2：定量限 （Limit of Quantitative, LOQ）
定量限系指供试品中被测成分能被定量测定的最低量， 其测定结果应具一定准确度和精密度。
试验方法：一般以10倍于噪音的对照品溶液重复点样或进样5-6次，
计算重复点样或进样的峰面积值的RSD%。当RSD%＜3%（薄层扫描法） 或＜2%（高效液相色谱法/气相色谱法）的浓度（或量）为方法的定 量限。若RSD%较大，应重新调整对照品溶液的浓度，进行测定

14
拓展1：检测限
检测限指供试品中被测物能被检出的最低量
试验方法 采用已知浓度的对照品进行试验

直观法 如薄层色谱检测成分的检出量或毒性成分检出限量的确定。 在薄层板上，以已知浓度的对照品点样，依法展开、显色后目测观察， 可检出的最小量为检测限。

仪器法（信噪比法）用于能显示基线噪声的分析方法，即把已知低浓 度试样测出的信号与空白样品测出的信号进行比较，算出能被可靠地 检测出的最低浓度或量。一般以信噪比为3∶1或2∶1时相应浓度或 注入仪器的量确定检测限。
①已有重现性验证，不需验证中间精密度。 ②重现性只有在该分析方法将被法定标准采用时做。 ③如一种方法不够专属，可用其他分析方法予以补充。
5
专属性 线性 检测限、定量限 精密度（重复性、中间精密度、重现性） 稳定性 准确性（回收率） 耐用性

6
专属性（Specificity）
行制备6份供试品进样分析，对测定结果进行评价； 或设3个不同浓度9份样品，用9个测定结果进行评价 （高低浓度可以结合范围的考察设计，中间浓度为样品平 均浓度，计算9份样品的相对标准偏差）
19
重复性

测定数据的精度要求
一般应满足以下规定
相对标准偏差(RSD%)TLCS＜5%，HPLC/GC＜3% 。
重现性(Reproducibility)

精密度考察应使用均匀稳定的、可信的样品。如果得不到，
可用人为配制的样品进行研究。
17
重复性(Repeatability)
重复性:在相同操作条件下，由同一个分析 人员在较短的间隔时间内测定所得结果的 精密度。
18
重复性

实验要求：
在规定范围内，取样品6份，按供试品制备方法，平

专属性定义:专属性系指在其他成分可能存在下，采用的方法能正确
测定出被测物的特性。鉴别反应、杂质检查、含量测定方法，均应考
察其专属性。如方法不够专属，应采用多个方法予以补充。

鉴别：确证被测物是否符合其特性；
检查：确保采用的分析方法可检出被测物中杂质或应控制物的准确含

量，如有关物质、有毒成分、重金属、溶剂残留量等；
有重现性考察的，可以免做中间精密度。
21
胃灵颗粒质量标准研究—中间精密度：
取批号为20130910的胃灵颗粒粉末9份，每份1g，由不同人员按 供试品溶液的制备方法分别制备供试品，每人制备3份，分别进样 20μ l，测定峰面积，结果表明方法中间精密度良好，结果见下表。 表 芍药苷中间精密度试验
12
胃灵颗粒质量标准研究—线性关系考察：
表 芍药苷线性范围
图 芍药苷标准曲线
13
范围：

范围系指能达到一定精密度、准确度和线性，测试方法适 用的高低限浓度或量的区间。

考察的区间应尽可能覆盖日后样品可能的含量范围。 验证试验过程中除取样量和进样量可改变外，一般不得改 动实验操作过程中规定的如溶剂体积、提取时间、萃取次 数等。
留时间相应的位置应无色谱峰或其峰面积小于5%
9
胃灵颗粒质量标准研究—专属性
图 芍药苷含量测定HPLC色谱图 a 芍药苷对照品；b供试品；c白芍阴性对照品；1.芍药苷
10
线性关系考察（Linearity）
线性系指在设计的范围内，测试结果与供试 品中被测物浓度（质量）直接呈正比关系的程度。
11
线性试验方法：
注：中药不需要做定量限，定量限属于有关物质方法学中的一项，主要是考 察仪器能检测的该品种的最小浓度。
16
精密度（Precision）
精密度系指在规定的测试条件下，同一个均匀标准品，经 多次取样测定所得结果之间的接近程度(离散程度) 精密度包括一下三方面： 重复性(Repeatability)
中间精密度(Intermediate precision)
等均须验证。
3
需验证的分析方法类型

鉴别（薄层鉴别） 限量检查（重金属含量限度检查）


含量测定
溶出度、释放度 残留物（农药残留）、添加物（食品添加剂）等的限度检查


4
需验证的分析方法内容
检查 验证项目 准确度 精密度 重复性 中间精密度 重现性② 专属性③ 检测限 定量限 线性 耐用性 范围 鉴别 + + + 定量 + + +① + + + + + + 限度 + + + + 含量测定 + + +① + + + + +

含量测定：提供样品中被测物含量的准确结果。
7
专属性
常用的试验方法

空白阴性对照试验

比较同一分析系统对照品与供试品相应色谱峰的吸收光谱的
一致性
8
专属性
空白阴性对照试验的试验要求：

TLC：目测观察，空白阴性对照应不得显与供试品检测成分
相应的斑点。

HPLC/GC/TLCS ：空白阴性对照色谱中，在与相应对照品保

制备梯度浓度对ຫໍສະໝຸດ Baidu品溶液，以相同体积进样测定峰面积值，制备标准
曲线，并以峰面积值与对照品浓度（或量）作线性回归，计算线性方
程和相关系数；

制备同一浓度的对照品溶液，以不同体积进样测定，同法处理；

线性测定的浓度应尽量在一较宽的范围，一般使待测成分峰面积处于
标准曲线的中间浓度左右为宜；

计算相关系数，要求： TLCS：R＞0.99，HPLC-UV：R＞0.999，HPLCELSD：R＞0.995