分子生物学简答题全培训讲学

简答题

6．为什么利用RNAi抑制一个基因的表达较利用反义RNA技术更为彻底。

答：RNAi是外源或内源性的双链RNA 进入细胞后引起与其同源的mRNA特异性降解.dsRNA进入细胞后，在Dicer作用下，分解为21－22bp的SiRNA.SiRNA结合相关

酶，形成RNA介导的沉默复合物RISC.RISC在ATP作用下，将双链SiRNA变成单链

SiRNA,进而成为有活性的RISC,又称为slicer.slicer与靶mRNA结合，导致其断裂，进

而导致其彻底降解。

反义RNA是与靶mRNA互补的RNA，它通过与靶mRNA特异结合而抑制其翻译表达，反义RNA是与靶mRNA是随机碰撞并通过碱基互补配对，所以，mRNA不一定完全

被抑制。

8．简述真核基因表达的调控机制。

答：（1）DNA和染色质结构对转录的调控：

①DNA甲基化，②组蛋白对基因表达的抑制，③染色质结构对基因表达的调控作

用，④基因重排，⑤染色质的丢失，⑥基因扩增；

（2）转录起始调控：

①反式作用因子活性调节，包括表达调节、共价调节，配体调节等蛋白质相互作用

调节），②反式作用因子与顺式作用原件结合对转录过程进行调控；

（3）转录后调控：

①5’端加帽和3’端多核苷酸化调控，②选择剪接调控，③mRNA运输调控，④mRNA

稳定性调控；

（4）翻译起始的调控：

①阻遏蛋白的调控，②对翻译因子的调控，③对AUG的调控，④mRNA 5’端非编

码区的调控，⑤小分子RNA；

（5）翻译后加工调控：

①新生肽链的水解，②肽链中氨基酸的共价修饰，③信号肽调控。

9．简述mRNA加工过程。

答：（1）5′端加帽（由加帽酶催化5′端加入7-甲苷乌苷酸，形成帽子结构m7GpppmNP-）。（2）3′端加入Poly(A)尾（A、组蛋白的成熟mRNA无需加polyA尾；B、加尾信号包括AAUAAA和富含GU的序列；C、加尾不需模板；D剪切过程需要多种蛋白质因

子的辅助）。

（3）mRNA前体的剪接（剪接加工以除去内含子序列，并将外显子序列连接成为成熟的有功能的mRNA分子。内含子两端的结构通常是5′-GU……AG-3′。选择性剪接的作

用机制包括；A使用不同的剪接位点，B选择使用外显子，C、反式剪接，D、使用

不同的启动子，E、使用不同的多腺苷酸化位点）。

（4）RNA的编辑（发生于转录后水平，改编mRNA序列，C→U或A→G，增加遗传信息容量）。

10．简述生物的中心法则。

答：中心法则(genetic central dogma)，是指遗传信息从DNA传递给RNA，再从RNA传递给蛋白质，即完成遗传信息的转录和翻译的过程。也可以从DNA传递给DNA，即完成DNA的复制过程。

11．简述真核生物基因结构及特点。

答：真核细胞的基因也是由编码区和非编码区两部分组成的；

（1）编码区：

外显子——能编码蛋白质的序列。

特点：间隔的、不连续的。即能编码蛋白质的序列被不能编码蛋白质的序列分隔

开来，成为一种断裂的形式不能编码蛋白质的序。

内含子——列。

（2）非编码区：有调控作用的核苷酸序列。

启动子——是基因结构中位于编码区上游的核苷酸序列，是RNA聚合酶结合点，

能准确地识别转录的起点并开始转录，有调控遗传信息表达的作用。

12．简述SNP的特点，SNP如何发挥生物学作用的及研究SNP的意义。

答：特点：

(1)数量多，遍布基因组，分布相对平均，据统计，人类群体中大概有1100万个SNP，

约每300bp就有1个SNP位点，方便挑选位点。

(2)虽有A/C/G/T四种核苷酸，但SNP位点大多是双态，即每个位点在群体中只存在2

种核苷酸形式，因此A/C、A/G、A/T、C/G、C/T、G/T、Indel等几种形态，适合开

展大规模、高通量、自动分化的检测。

(3)人类基因组90%的变异形式为SNP，SNP的遗传很稳定——每一代之间不会有太大

变化。

SNP的研究意义：

虽然人类99%以上的DNA序列是相同的，但DNA序列的变化能对人类对疾病、环境

攻击（比如细菌、病毒、毒素和化学物质)、药物和治疗的反应产生重大影响。这就使

得SNP对生物医学的研究和药物开发、医学诊断的发展有重要意义。SNPs可作为遗传

作图研究中的遗传标记，帮助定位和鉴定功能基因。研究者相信SNP图谱将帮助他们

认识复杂的多基因疾病，如癌症，糖尿病，血管性疾病和某些精神性疾病。

13．简述miRNA的结构特点和生物功能。

答：广泛存在于真核生物中，是一组不编码蛋白质的短序列RNA，它本身不具有开放阅读框架(ORF);通常的长度为20～24nt，但在3′端可以有1～2个碱基的长度变化；成熟的miRNA5′端有一磷酸基团，3′端为羟基,这一特点使它与大多数寡核苷酸和功能RNA的降解片段区别开来；多数miRNA还具有高度保守性、时序性和组织特异性。

miRNA执行一定的生物学功能：对与其互补的mRNA表达水平具有调节作用；一些偏大的miRNA可能参与了基因组的重组装（27nt）。

14．什么是DNA甲基化? 简要说明甲基化的检测方法及其生物学效应。

答：胞嘧啶和甲基在甲基化酶的作用下形成5’-甲基胞嘧啶的过程叫做DNA的甲基化。DNA 甲基化抑制或降低转录水平，在基因转录起始点附近，有高度密集的CpG重复序列，被

称为CpG岛，或HTF岛。推测该序列与基因转录活性有关。

检测方法：①酶切鉴定：HpaⅡ只能切割未甲基化的-CCGG-，HpaⅡ如果第二个C被甲基化了就不能切割。MspⅠ能够识别和切割甲基化或未甲基化-CCGG-。比较这两种酶切割

DNA产生的DNA片段的差异，可知DNA片段甲基化的程度与有无。②限制性内切酶＋

Southernbloting；③甲基化特异性PCR（MSP）；④亚硫酸盐变性后测序；⑤甲基化敏

感性单核苷酸引物扩增（Ms-SnuPE）；⑥甲基化荧光检测；⑦亚硫酸氢钠变性后限制

酶分析（COBRA）；⑧差异甲基化杂交（DMN）；⑨酶的区域性甲基化分析（ERMA）。

15．何为顺式作用元件？请举出三种真核生物基因的顺式作用元件。

答：影响自身基因表达活性的非编码DNA序列，组成基因转录的调控区。例：启动子：转录调节蛋白和RNA聚合酶的结合位点；增强子：是一个有增强转录的顺式作用元件，

能够提高一些真核生物启动子的效率，并能能在启动子的任何方向和任何位置(上游或