2020年(生物科技行业)实验一微生物拮抗作用
拮抗筛选实验报告

拮抗筛选实验是微生物学中常用的一种实验方法,旨在从自然界中筛选出对特定病原菌具有拮抗作用的微生物。
这种实验对于开发新型生物防治剂、提高作物抗病能力以及保护生态环境具有重要意义。
本实验旨在从土壤样品中筛选出对某种病原菌具有拮抗作用的微生物,并对其进行鉴定。
二、实验目的1. 筛选出对特定病原菌具有拮抗作用的微生物。
2. 对筛选出的拮抗微生物进行鉴定。
3. 探讨拮抗微生物的生物学特性。
三、实验材料1. 土壤样品:采集自农田、公园等环境。
2. 病原菌:实验室保存的已知病原菌。
3. 培养基:牛肉膏蛋白胨培养基、伊红美蓝培养基、改良马丁培养基等。
4. 实验仪器:恒温培养箱、高压蒸汽灭菌器、显微镜、离心机等。
四、实验方法1. 病原菌活化:将病原菌接种于牛肉膏蛋白胨培养基中,37℃培养24小时,活化备用。
2. 土壤样品处理:将采集的土壤样品进行研磨、过筛,取适量土壤样品接种于改良马丁培养基中,37℃培养48小时,观察菌落生长情况。
3. 拮抗筛选:将活化后的病原菌接种于牛肉膏蛋白胨培养基中,37℃培养24小时。
取活化后的拮抗微生物接种于同一培养基中,37℃培养24小时。
观察病原菌和拮抗微生物的生长情况,记录抑菌圈直径。
4. 拮抗微生物鉴定:对筛选出的拮抗微生物进行菌落形态、生理生化特性及分子生物学鉴定。
5. 生物学特性研究:研究拮抗微生物的生长条件、代谢产物、抗菌谱等生物学特性。
1. 拮抗筛选:在土壤样品中筛选出5株对病原菌具有拮抗作用的微生物,编号分别为A、B、C、D、E。
2. 拮抗微生物鉴定:通过菌落形态、生理生化特性及分子生物学鉴定,确定A为解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens),B为巨大芽孢杆菌(Bacillus megaterium),C为海恩西芽孢杆菌(Bacillus haynesii),D为罗氏芽孢杆菌(Bacillus rossii),E为地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)。
药物的拮抗作用实验报告小鼠硫酸镁

标题:药物的拮抗作用实验报告——小鼠硫酸镁的影响导言1. 药物拮抗作用的定义药物的拮抗作用是指两种药物或化合物之间相互抵消或对抗的作用,常用于治疗药物中毒或不良反应。
本实验旨在研究药物拮抗作用对小鼠硫酸镁的影响。
实验设计2. 实验目的本实验旨在研究不同药物对小鼠硫酸镁的拮抗作用,并观察其对小鼠生理和行为的影响。
3. 实验方法在实验中,我们将分组将小鼠注射硫酸镁,然后分别给予不同的药物进行拮抗作用的实验,包括酮康唑和盐酸哌嗪。
实验结果4. 酮康唑对小鼠硫酸镁的拮抗作用实验结果显示,酮康唑对小鼠硫酸镁具有一定的拮抗作用,表现在......5. 盐酸哌嗪对小鼠硫酸镁的拮抗作用实验结果显示,盐酸哌嗪对小鼠硫酸镁也具有一定的拮抗作用,表现在......讨论与分析6. 对实验结果的解读根据实验结果,我们可以得出结论,酮康唑和盐酸哌嗪均具有一定的拮抗作用,对小鼠硫酸镁的影响表现出......7. 对拮抗作用的意义与应用药物的拮抗作用在临床上具有重要意义,可以用于治疗药物中毒或不良反应。
本实验的结果对于......个人观点与总结8. 对药物拮抗作用的个人理解在我看来,药物的拮抗作用不仅仅是一种药物相互抵消的现象,更是对于化学药物相互作用的理解和应用。
在未来的研究中,我希望能够深入探讨......总结通过本次实验,我深入了解了药物拮抗作用对小鼠硫酸镁的影响,并对其具有更加全面、深刻和灵活的理解。
在以后的研究和应用中,我会将这些知识运用到更广泛的领域中,从而推动医学和药物学的发展。
以上是根据您提供的主题《药物的拮抗作用实验报告——小鼠硫酸镁的影响》所撰写的文章。
希望对您有所帮助,如果还有其他要求或修改,可以随时告诉我。
实验讨论与分析在实验结果的基础上,我们对药物拮抗作用的实际意义进行进一步探讨和分析。
酮康唑和盐酸哌嗪作为药物拮抗剂,能够在一定程度上减轻小鼠硫酸镁的毒性作用,这表明它们在治疗硫酸镁中毒的过程中具有潜在的应用价值。
钙镁的拮抗作用实验报告

钙镁的拮抗作用实验报告钙镁的拮抗作用实验报告引言:钙和镁是人体内两种重要的矿物质元素,它们在维持人体正常生理功能中起着重要的作用。
钙是骨骼和牙齿的主要成分,还参与神经传导、肌肉收缩等生理过程。
而镁则是酶的辅助因子,对心脏、血管和神经系统的正常运作至关重要。
本实验旨在探究钙和镁之间的拮抗作用,以及它们在人体内的相互关系。
材料与方法:1. 实验动物:选取健康的小白鼠作为实验对象。
2. 实验药物:分别准备钙盐和镁盐溶液。
3. 实验仪器:包括注射器、天平、试管等。
4. 实验步骤:a. 将小白鼠随机分为多个实验组,每组包含相同数量的小白鼠。
b. 针对每个实验组,分别注射不同浓度的钙盐溶液。
c. 在一定时间后,观察小白鼠的行为和生理指标的变化。
d. 重复上述步骤,但这次注射的是镁盐溶液。
e. 分析和比较不同实验组的结果,探究钙和镁之间的拮抗作用。
结果与讨论:通过实验观察和数据分析,我们得出以下结论:1. 钙盐注射后,小白鼠的肌肉收缩明显增强,表现为活动能力的提高和运动灵活性的增加。
2. 钙盐注射后,小白鼠的神经传导速度加快,反应时间变短。
3. 镁盐注射后,小白鼠的肌肉收缩明显减弱,表现为活动能力的下降和运动灵活性的减弱。
4. 镁盐注射后,小白鼠的神经传导速度减慢,反应时间变长。
5. 钙盐和镁盐的拮抗作用表现在肌肉收缩和神经传导速度上,钙盐增强肌肉收缩和神经传导速度,而镁盐则相反。
6. 钙和镁的拮抗作用可能与它们在细胞内的竞争性结合有关,钙和镁离子在细胞内的浓度平衡对维持正常生理功能至关重要。
结论:本实验通过观察小白鼠在注射钙盐和镁盐后的生理变化,验证了钙和镁之间的拮抗作用。
钙和镁是人体内必需的矿物质元素,它们在维持正常生理功能中起着重要的作用。
进一步研究钙和镁之间的相互关系,有助于我们更好地了解它们对人体健康的影响,为相关疾病的预防和治疗提供科学依据。
微生物拮抗关系实验报告

一、实验目的1. 了解微生物拮抗关系的概念和类型;2. 掌握微生物拮抗关系实验的方法和原理;3. 通过实验验证微生物之间的拮抗关系。
二、实验原理微生物拮抗关系是指微生物之间通过竞争、抑制、杀死等方式相互作用的关系。
根据拮抗关系中的专一性,可以分为专一性拮抗关系和非专一性拮抗关系。
专一性拮抗关系是指一种微生物的生命活动和代谢产物可以抑制另一种微生物的生命活动,甚至杀死另一种微生物的现象。
而非专一性拮抗关系是指微生物之间的拮抗作用没有特异的针对性,凡是不耐酸的微生物都会受到抑制。
三、实验材料与仪器1. 实验材料:(1)微生物菌种:金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、枯草芽孢杆菌、乳酸菌;(2)培养基:牛肉膏蛋白胨培养基、酵母膏培养基;(3)实验工具:培养皿、移液器、无菌操作台、酒精灯、恒温培养箱等。
2. 实验仪器:(1)恒温培养箱;(2)显微镜;(3)移液器;(4)酒精灯;(5)无菌操作台。
四、实验方法1. 金黄色葡萄球菌与枯草芽孢杆菌的拮抗实验(1)将金黄色葡萄球菌和枯草芽孢杆菌分别接种于牛肉膏蛋白胨培养基上,37℃恒温培养24小时;(2)将金黄色葡萄球菌和枯草芽孢杆菌的菌液分别涂布于牛肉膏蛋白胨培养基上,37℃恒温培养24小时;(3)观察并记录金黄色葡萄球菌和枯草芽孢杆菌的生长情况。
2. 大肠杆菌与乳酸菌的拮抗实验(1)将大肠杆菌和乳酸菌分别接种于酵母膏培养基上,37℃恒温培养24小时;(2)将大肠杆菌和乳酸菌的菌液分别涂布于酵母膏培养基上,37℃恒温培养24小时;(3)观察并记录大肠杆菌和乳酸菌的生长情况。
3. 枯草芽孢杆菌与乳酸菌的拮抗实验(1)将枯草芽孢杆菌和乳酸菌分别接种于牛肉膏蛋白胨培养基上,37℃恒温培养24小时;(2)将枯草芽孢杆菌和乳酸菌的菌液分别涂布于牛肉膏蛋白胨培养基上,37℃恒温培养24小时;(3)观察并记录枯草芽孢杆菌和乳酸菌的生长情况。
五、实验结果与分析1. 金黄色葡萄球菌与枯草芽孢杆菌的拮抗实验结果:金黄色葡萄球菌在培养基上生长良好,而枯草芽孢杆菌的生长受到抑制。
一类微生物抑制或杀死其他种类微生物的作用称为拮抗作

抗生素一、发现一类微生物抑制或杀死其他种类微生物的作用称为拮抗作用。
拮抗作用是微生物界的普遍现象,早在微生物发现之前,人们已经利用拮抗作用治病,如我国人利用豆腐上的霉治疗疮,美洲人用发霉的面包治疗伤口化脓等。
随着微生物学的发展,人们认识到了拮抗作用的本质,开始有意识地研究。
本世纪初,已经分离出多种抗生素,但其效率不高,毒性较大,没有实用价值。
1929年,英国人Flemming 在培养葡萄球菌时,发现从空气中落到培养基上的一种青霉菌能抑制其周围的葡萄球菌生长。
他进一步研究发现青霉菌分泌一种抗菌物质,能抑制葡萄球菌生长,于是把它命名为青霉素。
他没有进行动物试验,青霉素也没有用于临床。
直到1940年,牛津大学研究小组提出“青霉素是一种化学治疗剂”,才将它应用于临床。
同年,瓦克斯曼发现链霉素,抗生素时代开始,陆续发现了许多抗生素,成功地治疗了肺炎、结核等传染病,使人类寿命显著提高。
此后三十年间,发现的抗生素有数千种,有上百种被广泛应用,抗生素已经成为一个独立的工业部门。
二、概念抗生素是能以低浓度抑制或影响活的机体生命过程的次级代谢产物及其衍生物。
抗生素的概念是不断扩大的,最初只包括对微生物的作用,现在已经有抗肿瘤、抗真菌、抗病毒、抗原虫、抗寄生虫以及杀虫、除草的抗生素。
近年来把来源于微生物的酶抑制剂也包括在抗生素中,总数已超过9000种。
三、作用机理(一)作用特点1.选择性作用一种抗生素只对一定种类的微生物有作用,即抗菌谱。
青霉素一般只对革兰氏阳性菌有作用,多粘菌素只对革兰氏阴性菌有作用,它们的抗菌谱较窄。
氯霉素、四环素等对多种细菌及某些病毒都有抑制作用,称为广谱抗生素。
2.选择性毒力抗生素对人和动物的毒力远小于对病菌的毒力,称为选择性毒力。
通常抗生素可在极低浓度下有选择地抑制或杀死微生物。
选择性毒力是化学治疗的基础。
3.耐药性细菌在抗生素的作用下,大批敏感菌被抑制或杀死,但也有少数菌株会调整或改变代谢途径,变成不敏感菌,产生耐药性。
微生物的共生与拮抗机制研究及其应用

微生物的共生与拮抗机制研究及其应用微生物是自然界中广泛存在的一种生物,它们在生态系统的构成和物质循环过程中发挥着重要作用。
微生物之间相互影响的机制很复杂,其中包括共生和拮抗等方式。
本文将从微生物的共生和拮抗机制入手,探讨它们的研究进展及在科学研究和实践中的应用。
一、微生物的共生机制共生是指两种或多种生物之间的相互关系,具体表现为相互利益或依存关系。
微生物之间的共生关系有很多种,其中最为常见的是菌根和共生固氮。
同时,微生物还可以通过抑菌或改变宿主代谢等方式,发挥共生效应。
1. 菌根菌根是一种植物与真菌之间的共生关系,它可以极大地提高植物的营养吸收功能。
菌根真菌通过其菌丝和植物根系形成一个共生系统,帮助植物吸收土壤中的水分和养分。
植物因此能够快速生长,而且更加抵抗各种逆境。
2. 共生固氮固氮微生物是一类能够利用气态氮转化为植物能利用的氮源的微生物。
共生固氮的微生物既可以与植物共同生存,也可以单独存在。
比较常见的共生固氮微生物有根瘤菌和蓝藻。
3. 抑菌共生许多微生物会产生一些具有抗菌作用的物质,抑制周围环境中的其他微生物。
这些物质可以帮助它们占据生态位并获得更多的养分。
二、微生物的拮抗机制微生物之间的拮抗关系通常是指它们之间的竞争。
在同一生态系统里,不同种类的微生物之间需要通过竞争来获取适合自己生长的环境和养分。
微生物之间的拮抗关系主要表现为直接杀死或通过生物代谢产生的抑制物质侵袭并抑制周围的微生物。
微生物的拮抗关系在生态系统的稳定中有着重要的作用。
1. 直接拮抗微生物之间可以通过分泌一些直接作用于对手的毒素或杀菌激素,导致其死亡。
这种直接杀死对手的方法是比较常见的微生物拮抗方式之一。
著名的生物制剂硫酸锌杆菌就是这种类型的微生物,它能够分泌出具有杀菌作用的子孢酸类物质,抑制周围的微生物生长。
2. 生物代谢产物拮抗部分微生物可以产生一些生物代谢产物,这些物质能够与对手微生物竞争养分、共存环境等环节,从而使其难以生存。
微生物间拮抗作用机制研究论文素材

微生物间拮抗作用机制研究论文素材随着生物学和生命科学的发展,微生物间的相互作用成为研究的热点之一。
微生物之间不仅存在协同共生的关系,还存在着拮抗作用。
微生物间的拮抗作用是指不同种微生物之间通过产生抑制物质或竞争资源等方式相互制约的现象。
这种拮抗作用对于维持生态平衡和生态系统的稳定具有重要意义。
本文将介绍微生物间拮抗作用的机制,并提供一些相关论文素材供进一步研究使用。
1. 拮抗作用的定义和意义微生物间的拮抗作用是指不同微生物群体之间通过各种方式抑制其他微生物的生长或活性的现象。
这种拮抗作用的机制对于生态系统的稳定和物种多样性的维持至关重要。
它可以降低微生物群落中某些微生物的数量,避免过度繁殖导致生态平衡破坏。
2. 拮抗作用的机制2.1 干扰竞争机制干扰竞争是微生物间拮抗作用中常见的一种机制。
在这种机制中,一种微生物通过产生抑制物质或酶等方式,干扰其他种群的生长和代谢过程。
例如,某些细菌可以产生抗生素来抑制周围的细菌生长,从而获得更多的资源。
2.2 空间竞争机制空间竞争是指微生物群落中不同种群之间通过竞争物理空间来排除其他种群的机制。
这种竞争包括附着表面、利用细胞外聚集物等方式。
空间竞争在土壤、水体等环境中广泛存在。
2.3 资源竞争机制资源竞争是指微生物群落中不同种群之间通过争夺有限的资源来竞争生存的机制。
这种竞争包括争夺营养物质、水分、光照等。
资源竞争是微生物间拮抗作用中最普遍且重要的机制之一。
3. 微生物拮抗作用的应用微生物拮抗作用在农业、医学等领域具有广泛的应用前景。
在农业上,利用微生物拮抗作用可以替代或减少化学农药的使用,从而实现绿色农业的目标。
在医学上,微生物拮抗作用可以用于控制和预防微生物感染,开发新型抗生素等。
4. 相关论文素材以下是一些关于微生物间拮抗作用机制研究的论文素材供参考使用:- 论文1:《微生物间的物质竞争与拮抗作用机制研究》- 论文2:《微生物间拮抗作用对土壤生态系统的影响》- 论文3:《微生物拮抗作用在植物保护中的应用与展望》- 论文4:《微生物拮抗作用与抑制物质研究进展》以上论文素材可以作为进一步研究微生物间拮抗作用机制的参考文献,帮助读者更深入地了解该领域的研究进展和应用前景。
生物科技行业实验一微生物拮抗作用

(生物科技行业)实验一微生物拮抗作用《生物技术大实验》讲义实验壹枯草芽孢杆菌对棉花黄萎病的拮抗作用实验目的:进壹步掌握无菌操作技术,加深对微生物之间互作的进壹步认识实验原理:枯草芽孢杆菌分泌到体外的带谢产物能够抑制棉花黄萎病的生长供试菌株(1)拮抗菌株:枯草芽孢杆菌(冰箱保存)(2)病原菌株:棉花黄萎病菌(冰箱保存)实验步骤1.培养基的制作(1)PD培养液:(2)PDA培养基:查氏培养液:按上述配方配制查氏液体50ml及固体胶培养基125ml分别装在250的三角瓶中,121℃条件下灭菌30分钟。
2.接种培养(1)在无菌操作条件下,将棉花黄萎病菌接种在查氏培养液中,28℃振荡培养4天。
(2)将枯草芽孢杆菌在PD培养液中28℃培养24小时3.抑菌试验(1)平板制备:将固体PDA培养基溶化后倒入培养皿中,制成平板(2)棉花黄萎病菌液涂皿:将棉花黄萎病菌液用玻棒均匀的涂布在查氏平板培养基上(3)枯草芽孢菌的接种:将圆滤纸片放置在平板培养基上,用吸管吸取少许枯草芽孢杆菌菌悬液滴到滤纸片上(4)培养:28℃培养箱中培养4天(5)观察结果实验二酶联免疫法测ABA含量仪器:酶联免疫仪酶标板752分光光度计实验原理本方法是壹种固相抗原型酶联免疫法(EnzymeLinkedImmunoSorbentAssayELISA),先将ABA蛋白质复合物和固相载体(聚苯乙烯微量滴定板)结合,然后将待测的ABA(样品或标准品)和兔抗ABA抗体加入微量滴定板的孔中,进行竞争反应,接着弃去上清液,洗涤固相表面,加入酶标二抗使其和结合在固相ABA上的抗体反应,最后去除多余的未反应的酶标二抗,测定和固相结合的酶活性,酶活性和待测ABA含量呈负函数关系,即固相ABA结合的抗体和酶标二抗量(OD或B%)随待测ABA含量增加而减少,以壹系列已知浓度的ABA的OD值制图而获得标准竞争性抑制曲线,对于未知样品B,只要在同样条件下测定反应后的OD值,就能够从标准曲线上查到ABA的量。
钙镁的拮抗作用实验报告

钙镁的拮抗作用实验报告
《钙镁的拮抗作用实验报告》
在生物学中,钙和镁是两种重要的离子,它们在细胞内起着至关重要的作用。
钙离子参与了细胞信号传导、肌肉收缩和骨骼形成,而镁离子则参与了许多酶反应和细胞代谢过程。
然而,这两种离子之间存在着一种称为拮抗作用的相互关系,即它们在一定程度上可以相互抵消对方的作用。
为了研究钙镁的拮抗作用,我们进行了一系列的实验。
首先,我们在实验室中准备了一定浓度的钙离子和镁离子的溶液。
然后,我们将这些溶液分别加入到含有指示剂的试管中,并观察了它们的反应情况。
在实验中,我们发现当钙离子和镁离子同时存在时,它们会相互竞争与指示剂结合,从而导致指示剂的颜色发生变化。
这表明钙镁之间存在着一定程度的拮抗作用,它们在一定浓度范围内可以相互抵消对方的作用。
此外,我们还进行了一些细胞实验,结果显示在一定浓度范围内,镁离子可以抑制钙离子的作用,从而影响细胞内钙信号传导的过程。
这进一步证明了钙镁之间的拮抗作用在生物体内具有重要的生理意义。
总的来说,我们的实验结果表明钙镁之间存在着一定程度的拮抗作用,这种相互关系对于细胞内的信号传导和代谢过程具有重要的调节作用。
我们的研究为进一步探究钙镁拮抗作用的生理意义提供了重要的实验基础。
希望通过我们的努力,能够更深入地理解这一生物学现象,并为相关疾病的治疗提供新的思路和方法。
微生物的共生与拮抗关系研究

微生物的共生与拮抗关系研究微生物是一个广泛的概念,包括了细菌、真菌、病毒等很多种类。
这些微生物之间有着各种各样的关系,其中最常见的就是共生与拮抗关系。
一、微生物的共生关系共生是指两个或两个以上的生物相互利用、互惠互利的关系。
在微生物界中,共生常见的分为三类:互利共生、寄生共生以及微生物寄主共生。
1、互利共生互利共生是指两个生物之间都可以从对方身上获得益处的关系。
在微生物界中,比较典型的例子就是与植物有着互利共生关系的根瘤菌。
根瘤菌可以在植物根部形成瘤,提供给植物所需的氮源,而植物则可以为根瘤菌提供所需的营养和保护环境。
2、寄生共生寄生共生是指寄主和寄生者之间的共生关系。
在微生物界中,比较典型的例子就是病毒与细胞之间的关系。
病毒通过感染细胞来生存,而宿主细胞则被病毒利用,最终互利共赢。
3、微生物寄主共生微生物寄主共生是指宿主与微生物之间的共生关系。
在微生物界中,比较典型的例子就是人类的肠道微生物。
人类肠道中有着数百种微生物,它们可以分解食物、保护肠道、帮助合成维生素等,与人类之间存在着互利共生的关系。
二、微生物的拮抗关系拮抗是指微生物之间的相互作用,其中一方会对另一方产生负面影响,通过这种方式来与另一方竞争或防止其生长。
在微生物界中,拮抗主要包括两种形式,即竞争拮抗和抑制拮抗。
1、竞争拮抗竞争拮抗是指微生物之间的竞争关系,互相占用生存空间和营养资源,彼此之间形成资源争夺和竞争的关系。
比较典型的例子就是微生物和菌落之间的竞争。
当一个微生物在某个环境中过于繁殖时,就会占用其他微生物的资源,最终竞争胜利。
2、抑制拮抗抑制拮抗是指微生物之间的化学作用,其中一方可以通过发酵产生化学物质,抑制另一方的生长和繁殖。
在微生物界中,抑制拮抗比较典型的例子就是一些细菌之间的相互作用。
其中一些细菌可以通过产生化学物质来抑制其他细菌的生长,使自己占据更多的资源和生存空间。
三、微生物的研究微生物的共生与拮抗关系,在生物多样性领域中有着重要的研究意义。
微生物的拮抗

微⽣物的拮抗
⽣物之间并⾮都是友好相处,也有⽭盾和争⽃,甚⾄⽣死相拼。
拮抗关系是指⼀种微⽣物在其⽣命活动中,产⽣某种代谢产物或改变环境条件,从⽽抑制其它微⽣物的⽣长繁殖,甚⾄杀死其它微⽣物的现象。
在制造泡菜、青储饲料时,乳酸杆菌产⽣⼤量乳酸,导致环境变酸,即pH值的下降,抑制了其它微⽣物的⽣长,这属于⾮特异性的拮抗作⽤。
⽽可产⽣抗⽣素的微⽣物,则能够抑制甚⾄杀死其它微⽣物,例如青霉菌产⽣的青霉素能抑制⼀些⾰兰⽒阳性细菌,链霉菌产⽣的制霉菌素能够抑制酵母菌和霉菌等,这些属于特异性的拮抗关系。
微生物共生和拮抗作用研究与应用

微生物共生和拮抗作用研究与应用近年来,随着科学技术的不断发展,微生物共生和拮抗作用的研究与应用也越来越受到人们的重视。
微生物是一种微小的生命体,其数量很大,种类也很多,其中不乏对人类产生积极影响的微生物。
本文将围绕微生物共生和拮抗作用展开讨论,介绍其研究现状以及在生物领域中的应用前景。
一、微生物共生和拮抗作用的概念1.微生物共生作用微生物共生作用指的是不同种类的微生物之间相互依存,通过交换物质和能量实现共生的过程。
共生可分为互惠共生和非互惠共生两种类型。
互惠共生是指彼此互相利益并共同生长的共生关系,如蚂蚁和蜜蜂。
而非互惠共生是指一种微生物从另一种微生物处得到生存所需的物质,而被依赖的微生物并未从中获得任何益处。
2.微生物拮抗作用微生物拮抗作用指的是两种或两种以上的微生物之间通过竞争、抑制等方式使其它生物不能生长和繁殖的现象。
往往在微生物菌斑内或根部区域共生。
这种抵消作用能够抑制或杀死某些病原体或有害微生物,因此在农业、食品加工、医药等领域具有广泛的应用前景。
二、微生物共生和拮抗作用的研究现状微生物共生和拮抗作用的研究早在19世纪就已经开始。
随着科技的不断进步,相关学者对这一领域的研究也在逐渐深入。
1.微生物共生作用的研究微生物共生作用的研究现状主要包括以下几个方面。
首先,微生物共生作用机理的研究。
研究发现,微生物共生作用机理极为复杂,涉及到体内环境、代谢、信号通路等方面的调控。
目前,国内外学者主要通过单纯介于共生部分菌株的代谢物质来进行研究。
其次,微生物共生应用的研究。
微生物共生作用可用于促进植物生长、抗病等方面,促进动物消化或根际生态调节等方面。
因此,在生物农业、食品加工、医药等领域都有广泛的应用前景。
2.微生物拮抗作用的研究微生物拮抗作用的研究现状主要包括以下两个方面。
首先,微生物拮抗作用机理的研究。
微生物拮抗作用机理一般分为两种:直接和间接拮抗。
直接拮抗是指微生物之间通过竞争或直接杀死其它微生物的方式进行拮抗。
微生物学中的共生和拮抗机制研究

微生物学中的共生和拮抗机制研究微生物学是研究微生物世界的科学,微生物包括细菌、真菌、病毒、寄生虫等。
相较于人类、动物和植物,微生物的形态和种类更加简单多样,它们在生态系统中扮演着极其重要的角色,包括碳循环、氮循环、能量转换、有机质分解等。
同时,微生物也会与它们生存环境中的其他微生物交换物质、建立共生或拮抗机制。
共生和拮抗机制是微生物在生态系统中产生的两种不同关系。
微生物之间通过共生机制来协同生长和繁殖,而通过拮抗机制来控制和竞争生态环境中的其他微生物。
共生机制包括互惠共生和非互惠共生;拮抗机制包括直接拮抗和间接拮抗。
互惠共生是一种双方受益的关系。
它是微生物之间常见的一种共生机制。
例如,植物和根际真菌之间的共生关系,植物提供真菌的生存所需的营养,真菌则通过根系为植物提供一定量的水和营养。
这种互惠共生关系被称为“菌根”。
除了植物和真菌,某些霉菌也可以与淋巴管内皮细胞或其他动物细胞建立互惠共生关系。
非互惠共生是一种单方面受益的关系,繁殖细菌和寄生虫与宿主的关系即是一种非互惠共生。
在某些情况下,微生物可以通过使产生共生关系的其他微生物之间进行抑制,使其相互之间受益发生移动或繁殖。
直接拮抗是一种微生物之间的激烈竞争,导致其中一方的生长或发展被抑制,甚至被淘汰。
直接拮抗是微生物之间经常出现的一种竞争机制,往往是因为这些微生物生长条件相差不大。
间接拮抗是一种微生物之间通过物质代理拮抗,而并非直接的激烈竞争。
例如,某些细菌在生长过程中会产生一些特殊的化合物,使得其他微生物如病原体无法生长或存活,从而实现对病原体的防治。
这些化合物就是被称为“拮抗素”。
拮抗素是一种微生物分泌的代理物质,用于消除或抑制其他微生物的生长或发展。
拮抗素的种类和化学结构是多种多样,现已知的拮抗素种类超过3000种之多。
拮抗素不仅可以用于微生物制剂之间的互相对抗,也可以用于微生物的防治和寄生虫的防治。
共生和拮抗机制是微生物在生态系统中相互影响的重要现象,理解和研究这些机制可以推进微生物学和生态科学的发展。
(高考生物)实验一微生物拮抗作用

(生物科技行业)实验一微生物拮抗作用《生物技术大实验》讲义实验一枯草芽孢杆菌对棉花黄萎病的拮抗作用实验目的:进一步掌握无菌操作技术,加深对微生物之间互作的进一步认识实验原理:枯草芽孢杆菌分泌到体外的带谢产物能够抑制棉花黄萎病的生长供试菌株(1)拮抗菌株:枯草芽孢杆菌(冰箱保存)(2)病原菌株:棉花黄萎病菌(冰箱保存)实验步骤1.培养基的制作(1)PD培养液:(2)PDA培养基:查氏培养液:按上述配方配制查氏液体50ml及固体胶培养基125ml分别装在250的三角瓶中,121℃条件下灭菌30分钟。
2.接种培养(1)在无菌操作条件下,将棉花黄萎病菌接种在查氏培养液中,28℃振荡培养4天。
(2)将枯草芽孢杆菌在PD培养液中28℃培养24小时3.抑菌试验(1)平板制备:将固体PDA培养基溶化后倒入培养皿中,制成平板(2)棉花黄萎病菌液涂皿:将棉花黄萎病菌液用玻棒均匀的涂布在查氏平板培养基上(3)枯草芽孢菌的接种:将圆滤纸片放置在平板培养基上,用吸管吸取少许枯草芽孢杆菌菌悬液滴到滤纸片上(4)培养:28℃培养箱中培养4天(5)观察结果实验二酶联免疫法测ABA含量仪器:酶联免疫仪酶标板752分光光度计实验原理本方法是一种固相抗原型酶联免疫法(EnzymeLinkedImmunoSorbentAssayELISA),先将ABA蛋白质复合物与固相载体(聚苯乙烯微量滴定板)结合,然后将待测的ABA(样品或标准品)和兔抗ABA抗体加入微量滴定板的孔中,进行竞争反应,接着弃去上清液,洗涤固相表面,加入酶标二抗使其与结合在固相ABA上的抗体反应,最后去除多余的未反应的酶标二抗,测定与固相结合的酶活性,酶活性和待测ABA 含量呈负函数关系,即固相ABA结合的抗体与酶标二抗量(OD或B%)随待测ABA含量增加而减少,以一系列已知浓度的ABA的OD值制图而获得标准竞争性抑制曲线,对于未知样品B,只要在同样条件下测定反应后的OD值,就可以从标准曲线上查到ABA的量。
拮抗细菌实验报告

一、实验目的本研究旨在从土壤中分离筛选出具有拮抗作用的细菌菌株,并对其抑菌活性进行鉴定和分析,为生物防治提供潜在的资源。
二、实验原理拮抗细菌是指在一定条件下,能够抑制其他微生物生长繁殖的细菌。
拮抗细菌产生的拮抗物质,如抗生素、酶、毒素等,能够在琼脂培养基中扩散,抑制指示菌的生长,形成透明圈。
通过观察透明圈的直径,可以判断拮抗细菌的抑菌活性。
三、实验材料1. 土壤样品:采集于校园周边农田,用于分离拮抗细菌。
2. 指示菌:金黄色葡萄球菌、大肠杆菌等,用于检测拮抗细菌的抑菌活性。
3. 培养基:牛肉膏蛋白胨培养基、营养琼脂培养基、改良马丁培养基等。
4. 仪器与设备:高压蒸汽灭菌器、恒温培养箱、移液器、接种环、显微镜等。
四、实验方法1. 菌株分离与纯化(1)将土壤样品稀释,取适量涂布于牛肉膏蛋白胨培养基平板上,置于37℃恒温培养箱中培养24小时。
(2)挑取单菌落,接种于牛肉膏蛋白胨培养基斜面,37℃恒温培养箱中培养24小时。
(3)将纯化后的菌株转接至营养琼脂培养基平板上,37℃恒温培养箱中培养24小时,观察菌落特征。
2. 拮抗细菌的筛选(1)将金黄色葡萄球菌、大肠杆菌等指示菌接种于牛肉膏蛋白胨培养基平板上,37℃恒温培养箱中培养24小时。
(2)挑取纯化后的菌株,接种于营养琼脂培养基平板上,37℃恒温培养箱中培养24小时。
(3)将培养好的菌株与指示菌平板进行对峙培养,观察透明圈的形成。
3. 抑菌活性测定(1)将纯化后的菌株接种于牛肉膏蛋白胨培养基斜面,37℃恒温培养箱中培养24小时。
(2)将培养好的菌株制成菌悬液,用无菌水稀释至一定浓度。
(3)取适量菌悬液涂布于营养琼脂培养基平板上,37℃恒温培养箱中培养24小时。
(4)观察透明圈的形成,测量透明圈直径。
五、实验结果1. 菌株分离与纯化共分离纯化出10株具有拮抗作用的细菌菌株,分别命名为A1、A2、A3、A4、A5、A6、A7、A8、A9、A10。
2. 拮抗细菌的筛选通过对峙培养,发现菌株A1、A2、A3、A4对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌等指示菌具有明显的抑制作用,形成透明圈。
真菌拮抗细菌实验报告

一、实验目的本实验旨在探究真菌与细菌之间的拮抗作用,分析不同细菌对特定真菌的抑制效果,为生物防治提供理论依据。
二、实验原理真菌与细菌之间存在拮抗作用,某些细菌能够产生抑制真菌生长的物质,如抗生素、细菌素等。
通过观察细菌与真菌在平板上的生长情况,可以分析细菌对真菌的拮抗能力。
三、实验材料与仪器1. 实验材料:- 真菌:黑曲霉、白色念珠菌等- 细菌:枯草芽孢杆菌、大肠杆菌、金黄色葡萄球菌等- 营养琼脂平板- 细菌培养液- 真菌培养液- 移液器- 酒精灯- 酒精棉球- 灭菌接种环- 培养箱2. 实验仪器:- 电子天平- 紫外可见分光光度计- 恒温培养箱四、实验步骤1. 将细菌和真菌分别接种于相应的培养液中,在恒温培养箱中培养至对数生长期。
2. 将培养好的细菌和真菌分别用无菌移液器取适量,制成菌悬液。
3. 在无菌条件下,将菌悬液均匀涂布于营养琼脂平板上。
4. 用无菌接种环取少量细菌,在平板上划线,重复划线3-4次,形成多个划线区域。
5. 将平板倒置放入恒温培养箱中,培养24-48小时。
6. 观察并记录细菌与真菌的生长情况,比较不同细菌对特定真菌的拮抗能力。
7. 对拮抗效果显著的细菌进行分离纯化,并对其进行鉴定。
五、实验结果与分析1. 在实验中,枯草芽孢杆菌对黑曲霉和白色念珠菌表现出较强的拮抗作用,金黄色葡萄球菌对白色念珠菌也具有一定的拮抗作用。
2. 通过对拮抗效果显著的细菌进行分离纯化,鉴定为枯草芽孢杆菌和金黄色葡萄球菌。
3. 在后续实验中,枯草芽孢杆菌和金黄色葡萄球菌的发酵液对黑曲霉和白色念珠菌的生长具有抑制作用。
六、结论本实验结果表明,枯草芽孢杆菌和金黄色葡萄球菌对黑曲霉和白色念珠菌具有一定的拮抗作用,可作为生物防治真菌病害的潜在资源。
在后续研究中,可进一步探讨其拮抗作用机制,为生物防治提供理论依据。
七、讨论1. 本实验中,枯草芽孢杆菌和金黄色葡萄球菌对真菌的拮抗作用可能与它们产生的抑菌物质有关。
2. 在实际应用中,可通过筛选具有拮抗作用的细菌,制备生物防治制剂,减少化学农药的使用,降低环境污染。
微生物间的拮抗作用

实验十五
微生物间的拮抗作用
3. 用无菌接种环取少量产黄青霉的孢子,在 豆芽汁平板的一边轻划一条线,将产黄青霉 接到平板上; 4. 接种后的平板,倒置于28-30℃培养箱中培 养3天; 5. 3天后,在已长好的产黄青霉菌苔的垂直方 向,分开一定的间隔,分别接三种细菌,做 好标记,平板倒置于37℃培养箱中培养24hr; 6. 24hr后,观察、分析、记录实验结果;
实验十五 微 生 物 间 的 拮 抗 作 用
一、实验背景及目的:
自然环境中存在着大量的微生物。 微生物与环境、微生物与其它生物以及微生 物与微生物之间存在着各种各样的关系 微生物间的关系如:共生、互生、寄生、拮 抗等。 微生物间的拮抗,一般是指:一种微生物的 生命活动或其代谢产物,抑制或干扰另一种 微生物的生命活动的现象。拮抗作用常存在 专一性或特异性。
实验十五 微 生 物 间 的 拮 抗 作 用
本实验以产黄青霉(Penicillium chrysogenum) 为实验菌株,了解、考察其次生代谢产物— —青霉素的抑菌谱,并加深对不同细菌细胞 壁结构和组成差异及特性的理解。
实验十五 微 生 物 间 的 拮 抗 作 用
二、基本原理:
1. 产黄青霉在相应的培养基中生长到一定时 期,会通过复杂的代谢途径合成其次生代谢 产物——青霉素。 若产黄青霉在固体培养基平版上生长并产生、 积累青霉素,就会在培养基平版中形成青霉 素的浓度梯度。 青霉素的存在,会抑制接种在该平版上的细 菌的生长(拮抗)。
实验十五
微生物间的拮抗作用
实验十五
微生物间的拮抗作用
实验十五
微生物间的拮抗作用
2.实验设备及器材:恒温培养箱;恒温干燥 箱;高压蒸汽灭菌锅;培养皿;试管;洁净 工作台等。
小鼠拮抗作用实验报告

小鼠拮抗作用实验报告本实验旨在探究某种药物对小鼠的拮抗作用,评估其对小鼠生理和行为的影响。
实验原理:小鼠是常见的实验动物,其生理和行为特征与人类相似,因此常被用于药物和毒物的研究。
在本实验中,我们将给小鼠注射一种药物,并观察其对小鼠的效应。
实验步骤:1. 将小鼠分成两组,每组包含相同数量的小鼠。
2. 给第一组小鼠注射药物A,给第二组小鼠注射安慰剂(生理盐水)。
3. 观察小鼠在接下来的一段时间内的生理和行为变化。
4. 记录每组小鼠的体重、活动水平、食欲、睡眠情况等指标。
5. 定期观察小鼠,并进行数据记录。
实验结果:根据实验数据统计和分析,我们得出以下结论:1. 药物A对小鼠的体重没有明显影响,与安慰剂组相比,两组小鼠的体重变化趋势相似。
2. 在活动水平方面,药物A组小鼠的活动量较安慰剂组小鼠略有增加。
这可能是因为药物A对中枢神经系统有一定的刺激作用。
3. 药物A组小鼠的食欲相对较强,食量较安慰剂组明显增加。
这表明药物A可以促进小鼠的食欲。
4. 在睡眠方面,药物A组小鼠的睡眠时间相对较短,且入睡时间延长,而安慰剂组小鼠的睡眠时间没有明显变化。
这表明药物A可能具有一定的兴奋作用。
实验讨论:本实验结果表明,药物A对小鼠的生理和行为产生了一定的影响。
药物A增加了小鼠的活动水平和食欲,同时导致小鼠的睡眠时间缩短。
这些结果可能与药物A对中枢神经系统的刺激作用有关。
然而,本实验还存在一些局限性。
首先,我们只观察了药物A的急性效应,没有考虑其长期使用的潜在影响。
其次,我们只观察了少数几个指标,没有对小鼠的生理和行为进行全面评估。
因此,还需要进一步研究来评估药物A的拮抗作用。
结论:通过本实验,我们发现药物A对小鼠的拮抗作用。
然而,关于药物A的具体机制和长期影响仍需进一步研究。
这对于进一步理解和开发药物具有重要意义,也有助于评估其在临床应用中的潜在风险和效果。
生物拮抗作用对农业病虫害的控制

生物拮抗作用对农业病虫害的控制生物抗性作用是指植物或动物通过产生特定的化学物质,抵抗病害或害虫的侵袭。
这种作用不仅可以减少病虫害造成的损失,还可以降低对农药的依赖性,促进可持续发展。
因此,生物抗性促进了农业生产的发展,成为当今农业领域的一个重要研究方向。
一、生物抗性作用的描述生物抗性是生命体中抗病虫害的一种因素。
它是由主体生命体代谢产生的一种抗挫性物质。
生物抗性的产生,通常需要寄主生命体因长期养育某些物质分泌的作用,从而使得寄主具备抗病害胁迫的能力。
它可以显著提高植物或动物的抵御病害或害虫的能力,有效减轻了病虫害的危害。
生物抗性作用是由受体与激素反应而产生的一种化学反应。
受体与激素之间的互相作用使得受体产生信号,从而使得受体细胞产生分泌信号物质。
这种信号物质可以在细胞膜上释放出来,对周围的细胞进行信号传递。
这样,这种抗性可以有效地转移和传播。
二、生物抗性机制1、化学机制生物抗性是由植物或动物生命体体内的一些特定化学物质所组成的复合物。
这些物质由生命体代谢进程中产生,是对环境胁迫的一种自我保护反应。
其中,一些特异的化学物质在生产过程中居于一种干扰或刺激性的作用,从而对病害物或害虫进行攻击。
另外,这些化学物质又往往有一定的遗传性,能够在后代生命体中进一步发展和巩固。
2、生物学机制生物抗性也是由生命体本身的一些生物学机制来实现的。
其包括多种细胞的免疫反应,细胞因子的生成,以及与其他途径的相互作用。
同时,生物抗性的发展和提升也需要主体生命体的长期加强养颡。
这些机制相互递归,形成了生物抗性的完整体系。
三、生物抗性的控制决策农业作物的部分病虫害控制依赖于遗传措施和生态措施。
但对于重要的病虫害,仍需要合理使用农药。
在化学防治方案中,生物抗性除了可以与农药联用,也可以单独应用。
生物抗性与农药联用的目的是为了可以利用农药的优势,将化学杀虫剂和生物抗性综合起来进行控制。
农药多半对病虫害具有快速灭杀、容易掌握、可以快速应用的优势,但却很容易产生抗药性。
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(生物科技行业)实验一微生物拮抗作用《生物技术大实验》讲义实验壹枯草芽孢杆菌对棉花黄萎病的拮抗作用实验目的:进壹步掌握无菌操作技术,加深对微生物之间互作的进壹步认识实验原理:枯草芽孢杆菌分泌到体外的带谢产物能够抑制棉花黄萎病的生长供试菌株(1)拮抗菌株:枯草芽孢杆菌(冰箱保存)(2)病原菌株:棉花黄萎病菌(冰箱保存)实验步骤1.培养基的制作(1)PD培养液:(2)PDA培养基:查氏培养液:按上述配方配制查氏液体50ml及固体胶培养基125ml分别装在250的三角瓶中,121℃条件下灭菌30分钟。
2.接种培养(1)在无菌操作条件下,将棉花黄萎病菌接种在查氏培养液中,28℃振荡培养4天。
(2)将枯草芽孢杆菌在PD培养液中28℃培养24小时3.抑菌试验(1)平板制备:将固体PDA培养基溶化后倒入培养皿中,制成平板(2)棉花黄萎病菌液涂皿:将棉花黄萎病菌液用玻棒均匀的涂布在查氏平板培养基上(3)枯草芽孢菌的接种:将圆滤纸片放置在平板培养基上,用吸管吸取少许枯草芽孢杆菌菌悬液滴到滤纸片上(4)培养:28℃培养箱中培养4天(5)观察结果实验二酶联免疫法测ABA含量仪器:酶联免疫仪酶标板752分光光度计实验原理本方法是壹种固相抗原型酶联免疫法(EnzymeLinkedImmunoSorbentAssayELISA),先将ABA蛋白质复合物和固相载体(聚苯乙烯微量滴定板)结合,然后将待测的ABA(样品或标准品)和兔抗ABA抗体加入微量滴定板的孔中,进行竞争反应,接着弃去上清液,洗涤固相表面,加入酶标二抗使其和结合在固相ABA上的抗体反应,最后去除多余的未反应的酶标二抗,测定和固相结合的酶活性,酶活性和待测ABA 含量呈负函数关系,即固相ABA结合的抗体和酶标二抗量(OD或B%)随待测ABA含量增加而减少,以壹系列已知浓度的ABA的OD值制图而获得标准竞争性抑制曲线,对于未知样品B,只要在同样条件下测定反应后的OD值,就能够从标准曲线上查到ABA的量。
测定方法1、包被:在微量滴定板内准确加入100μLABA包被液,37℃湿盒过夜。
2、标样稀释?:取8支试管每管加150μLDB,第壹管中加入50μL(2000ng/50μL)标准液,充分涡旋后,取50μL至第二号管中,同样涡旋后,取50μL到第三管;依次稀释到第六管,稀释后的标准ABA依次为1000ng、500ng、250ng、125ng、62.5ng、31.25ng、15.625ng、7.8125ng/50μL。
3、洗板:从37℃湿盒中取出滴定板,恢复到室温后,弃去包被液,用WB(洗涤缓冲液)洗涤三次,甩干(吸水纸)。
4、加样:1~8孔对应加入ABA标样50μL,10号孔相应加入最浓ABA标样,9号孔加50μLDB,三排重复;然后每孔加50μL抗体,37℃45分钟。
5、洗板:6、加酶标二抗:每孔加100μL,37℃反应1小时。
7、洗板:8、显色:各孔加10μLOPD显色液,37℃20分钟。
9、终止反应:各孔加50μL6NH2SO4。
10、读数:490nm读取OD值。
其中10号孔调零,而9号孔为最大值(B0),1~8号孔的OD值为B。
11、结果计算:以In(B/B0)∕(1-B/B0)为纵坐标,以标准ABA浓度的常用对数(lg[ABA])为横坐标,绘制曲线。
实验三质粒DNA的提取及其酶切实验目的通过本实验学习和掌握碱裂解法提取质粒DNA。
实验原理碱裂解法提取质粒是根据共价闭合环状质粒DNA和线性染色体DNA在拓扑学上的差异来分离它们。
在pH值介于12.0~12.5这个狭窄的范围内,线性的DNA双螺旋结构解开而被变性,尽管在这样的条件下,共价闭环质粒DNA的氢键会被断裂,但俩条互补链彼此相互缠绕,仍会紧密地结合在壹起。
当加入pH4.8的乙酸钾高盐缓冲液恢复pH至中性时,共价闭合环状的质粒DNA的俩条互补链仍保持在壹起,因此复性迅速而准确,而线性的染色体DNA的俩条互补链彼此已完全分开,复性就不会那木迅速而准确,它们缠绕形成网状结构,通过离心,染色体DNA和不稳定的大分子RNA,蛋白质-SDS复合物等壹起沉淀下来而被除去。
实验步骤(一)提取质粒1.将2ml含相应抗生素的LB液体培养基加入试管中,接入上述的含pUC19质粒的大肠杆菌单菌落,37℃振荡培养过夜。
2.取培养物倒入微量1.5ml离心管中,4000r/min离心2min。
3.弃上清,吸尽残液,使细胞沉淀尽可能干燥。
4.加入100ul溶液Ⅰ,充分混匀,室温放置10min。
5.加200ul溶液Ⅱ(新鲜配制),盖紧管盖,轻轻颠倒数次混匀,将离心管放冰上5min。
6.加入150ul溶液Ⅲ(冰上预冷),盖紧管口,颠倒数次使混匀。
冰上放置15min。
7.12000r/min,离心15min,将上清转至另壹离心管中。
8.加入等体积酚:氯仿(1:1)(去蛋白),反复混匀,12000r/min,离心5min,将上清转移到另壹离心管中。
9.加入2倍体积无水乙醇,混匀后,室温放置5~10min。
12000r/min离心5min。
倒去上清液,把离心管倒扣在吸水纸上,吸干液体。
10.用1ml70%乙醇洗涤质粒DNA沉淀,振荡且离心,倒去上清液,真空抽干或空气中干燥。
11.加50ulTE缓冲液,其中含有20ug/ml的胰RNA酶,使DNA完全溶解,-20℃保存。
(二)酶切取DNA溶液,加酶切缓冲液,Eco RI酶1ul,无菌水补至总体积10ul,37℃保温3h,加终止液,准备下个实验电泳,分析质粒DNA的限制性酶切图谱。
实验四琼脂糖凝胶电泳技术[实验目的]通过本实验学习琼脂糖凝胶电泳检测DNA的方法和技术。
[实验原理]DNA分子在琼脂糖凝胶中泳动时有电荷效应和分子筛效应。
DNA分子在高于等电点的pH溶液中带负电荷在电场中向正极移动。
由于糖-磷酸骨架在结构上的重复性质,相同数量的双链DNA几乎具有等量的净电荷,因此他们能以相同的速度向正极方向移动。
在壹定的电场强度下,DNA分子的迁移速度取决于分子筛效应,即DNA分子本身的大小和构型。
具有不同的相对分子质量的DNA片段泳动速度不壹样,可进行分离。
DNA分子的迁移速度和相对分子质量对数值成反比关系.。
凝胶电泳不仅能够分离不同相对分子质量的DNA,也能够分离相对分子质量相同,但构型不同的DNA分子。
如上次实验提取的pUC19质粒,有3种构型:超螺旋的共价闭合环状质粒DNA(covalentlyclosedcircularDNA,简称CCCDNA),开环质粒DNA,即共价闭合环状质粒DNA1条链断裂,(opencircularDNA,简称OCDNA),线状质粒DNA,即共价闭合环状质粒DNA2条链发生断裂,(linearDNA,简称LDNA)。
这3种构型的质粒DNA分子在凝胶电泳中的迁移率不同。
因此电泳后呈3条带,超螺旋质粒DNA泳动最快,其次为线状DNA,开环质粒DNA。
[实验步骤](一)制备琼脂糖凝胶电泳槽及用胶量将琼脂糖按比例溶入1XTAE缓冲液中,微波炉加热至完全溶化,冷却至60℃,加入适量EB,混匀。
(二)胶板的制备1.取有机玻璃内槽,洗净,晾干,用橡皮膏将有机玻璃内槽的俩端边缘封好(壹定封严,不能留缝隙)。
2.将有机玻璃内槽放置于壹水平位置,且放好样品梳子。
梳子调整齐3.将冷到60℃左右的琼脂糖凝胶液,缓缓倒入有机玻璃内槽,直至有机玻璃板上形成壹层均匀的胶面(注意不要形成气泡)。
4.待胶凝固后,取出梳子,取下橡皮膏,将胶槽放在电泳槽内。
5.加入电泳缓冲液至电泳槽中。
(三)加样,用移液器将已加入上样缓冲液的DNA样品加入样品孔(记录点样顺序及点样量)。
(四)电泳1.接通电泳槽和电泳仪的电源(注意正负极,DNA片段从负极向正极移动)。
DNA的迁移速度和电压成正比,最高电压不超过5V/cm。
2.当溴酚蓝染料移动到距凝胶前沿1~2cm处,停止电泳。
(五)染色将电泳后的凝胶浸入溴化乙锭染色液中,染色以观察在琼脂糖凝胶中的带(戴手套操作)。
实验五真核生物高分子量DNA制备实验原理利用液氮对植物组织进行研磨,从而破碎细胞。
细胞提取液中含有的SDS溶解膜蛋白而破坏细胞膜,使蛋白质变性而沉淀下来。
EDTA抑制DNA酶的活性。
再用酚、氯仿抽提的方法去除蛋白,得到的DNA溶液经乙醇沉淀。
实验材料:新鲜植物叶片[实验步骤]1.取4g新鲜叶片,在液氮中研磨成粉末状(越细越好)。
2.转移至50ml离心管中,加入16mlTENbf,充分混匀。
65℃水浴保温20min。
3.从水浴中取出离心管,加入5ml5mol/LKCl溶液,混匀,水浴20min。
4.4000r/min离心20min。
5.将上清液转移到另壹50ml离心管中。
6.加等体积酚/氯仿混匀,12000r/min离心5min,取上清。
7.加等体积氯仿,混匀,12000r/min离心5min,取上清。
8.加入0.6-1倍体积的异丙醇(沉淀DNA),混匀。
放置时间9.离心获得沉淀,70%乙醇洗3次。
风干沉淀。
10.加入500μLTE缓冲液,溶解DNA。
11.取3μL上清液,琼脂糖凝胶电泳检测DNA浓度、质量。
实验六PCR基因扩增实验目的:掌握PCR反应的基本原理和实验技术实验原理:PCR(PolymeraseChainReaction)-聚合酶链式反应,能够选择性扩增壹段DNA 序列。
其基本步骤是,首先将待扩增的模板DNA变性使之成为单链,DNA样品中,特异性的引物能够和其互补的序列杂交,在dNTPs和Taq酶存在时,就能够合成模板DNA的互补链,反应完成后,将反应混合物加热使DNA双链变性,温度下降后,过量的引物又能够开始第二轮的合成反应。
这种延伸—变性—退火—延伸的循环能够重复多次,使所需要的DNA片段得到特异性的扩增。
1.变性:加热使模板DNA在高温下(94℃)变性,双链间的氢键断裂而形成俩条单链. 2.退火:使溶液温度降至50~60℃,模板DNA和引物按碱基配对原则互补结合.3.延伸:溶液反应温度升至72℃,耐热DNA聚合酶以单链DNA为模板,在引物的引导下,利用反应混合物中的4种脱氧核苷三磷酸(dNTPs),按5ˊ→3ˊ方向复制出互补DNA.上述3步为壹个循环,即高温变性、低温退火、中温延伸3个阶段。
从理论上讲,每经过壹个循环,样本中的DNA量应该增加壹倍,新形成的链又可成为新壹轮循环的模板,经过25~30个循环后DNA 可扩增106~109倍。
典型的PCR反应体系由如下组分组成:DNA模板、反应缓冲液、dNTP、MgCl2、俩个合成的DNA引物、耐热T aq聚合酶。
一、仪器、实验用品、试剂壹、仪器PCR仪冰箱电泳仪微波炉电泳槽离心机紫外检测仪二、试剂PCRBuffer TAE(500ml)Ice 琼脂糖Tag 溴化乙锭dNTPs 溴酚蓝模板DNA markerPrimer1Primer2 石蜡油三、其它用品移液器(壹套)Tip(壹套)PCR管(0.2ml) 防护眼镜壹次性手套胶带四:实验步骤●时间安排:上午10:30配反应体系中午PCR下午电泳●PCR(范提供)反应体系10xBf1x2.5ulTag5u/ul0.2ulDNTPs2.5um2.0ulPrimer110um2.5ulPrimer210um2.5ulDNA2.0ul----------------------------H2Oto25ul混匀,加石蜡油程序:94℃预变性3’以下35cycle94℃变性1.5min50/55℃退火30s72℃延伸1-2min最后72℃5min●电泳配制1%琼脂糖凝胶,取10ul扩增产物电泳分析PCR结果●bf:KCl50mmol/L促进引物退火Tris.HCl10-50mmol/LPH8.4BSA100ug/ml(乙酰化的BSA)对酶有保护作用Mg离子:1.5-2mmol/L1.和dNTP结合(PO4离子)2.和引物中的EDTA结合3.和模板中的EDTA结合4.T aq活性需要游离的Mg离子●购dNTP为25um,需稀释10倍至2.5um●Primers:Boo12F10DBoo14R10D分子量24bp*324.5=7788质量数10D*33=33ug摩尔数33/7788=4.2nmol浓度4.2nmol/84ulH2O=50um取母液(50um)1ul加水至5ul,稀释5倍,则终浓度为10um二、几种常用反应体系:1.在0.2mlEppendorf管内配制25ul反应体系(华美PCRkit)安排4人壹组每班可分5组终浓度10xbf5ul(MgCl2-free)MgCl2325mmol/L1.54dNTPs42.5mmol/L/each0.2P1212.5pmol/ul0.25P2212.5pmol/ul0.25ΛDNA21ng/ul2ngTaq13u/ulH2O31Total50ul混匀离心50ul石蜡油离心PCR程序94℃5min94℃1min60℃1min72℃1min30cycle72℃5min琼脂糖凝胶电泳分析PCR结果配制1%琼脂糖凝胶,取10ul扩增产物电泳。