溴酚蓝
物化实验六：分光光度法测溴酚蓝的电离平衡常数
分光光度法测溴酚蓝的电离平衡常数紫外—可见（UV）分光光度法提供了一种测量弱电解质电离平衡常数的简便方法——通过测量不同pH条件下溶液的吸光度A，得到A ~ pH的关系曲线，然后可以间接的计算出该电解质的电离平衡常数。
本实验测定溴酚蓝（BPB）溶液的吸光度，以及相应的PH值，并籍此计算其Ka 。
2、实验部分：2.1 仪器与药品溴酚蓝电离平衡常数紫外—可见分光光度法722光栅分光光度计超级恒温水浴pHS-3B精密电子pH计移液管，量筒，滴管，容量瓶等5E-5 mol /L BPB溶液0.1 mol /L 邻苯二甲酸氢钾溶液（缓冲剂）HCl溶液（0.1mol /L，1 mol /L）NaOH溶液（0.1mol /L，0.2mol /L）2.2 实验过程1、准备工作：打开超级恒温水浴恒温25℃，打开分光光度计预热仪器，掀开样品室盖。
2、确定溶液的最大吸收波长。
（1）准确移取5×10-5mol /L的BPB溶液20mL，置于100mL容量瓶中，并准确加入50mL 0.1mol /L的邻苯二甲酸氢钾缓冲溶液，稀释到刻度。
得1×10-5mol /L BPB溶液。
（2）取1cm厚度的比色皿二只，润洗后分别装入H2O，1.0×10-5mol /L BPB 溶液，以H2O作空白溶液校正仪器。
（3）在480 ~ 630nm波长范围内，从低到高逐一选择仪器的入射光波长，用空白溶液蒸馏水在T档校正仪器的0点和100点，并用吸光旋钮调节H2O的吸光度为0，再测量1.0×10-5mol /L BPB溶液的透光率T——在480 ~ 560nm 的范围内每隔10nm测一次，在560 ~ 600nm范围内每隔5nm测一次。
将所得的结果以吸光度D对 作图，读出最大吸收波长。
3、不同酸度下，溴酚蓝溶液吸光度D的测定。
（1）取7只100mL容量瓶，分别加入20mL 5×10-5mol /L的BPB溶液，再分别加入50mL 0.1mol /L邻苯二甲酸氢钾溶液。
常用显色试剂大全(两篇)
引言概述：显色试剂是化学实验中常用的试剂之一，它们通过与物质反应产生特定的颜色变化来判断样品的性质和成分。
本文将详细介绍常用显色试剂的种类和使用方法，以便读者更好地了解和运用这些试剂。
正文内容：一、氧化还原显色试剂1.硫酸铜溶液：用于检测是否含有还原剂。
2.碘液：用于检测是否含有淀粉、硫醇等物质。
3.高锰酸钾溶液：用于检测是否含有有机物质和还原剂。
4.醋酸铅溶液：用于检测是否含有硫化氢等硫化物。
5.碘酸钠溶液：用于检测是否含有亚硝基化合物。
二、酸碱指示剂显色试剂1.酚酞：在碱性溶液中呈现红色，用于检测溶液的酸碱性。
2.甲基橙：在酸性溶液中呈现红色，用于检测溶液的酸碱性。
3.酚酞指示剂：能够在酸性溶液中呈现红色，用于检测溶液酸碱度。
4.甲基紫：能够在碱性溶液中呈现绿色，用于检测溶液酸碱性。
5.溴酚蓝：能够在碱性溶液中呈现蓝色，用于检测溶液的酸碱性。
三、络合反应显色试剂1.硫氰酸铁：能够与铁离子形成红色络合物，用于检测铁离子的存在。
2.邻苯二胺：能够与钴离子形成蓝色络合物，用于检测钴离子的存在。
3.里尔染液：能够与锌离子形成红色络合物，用于检测锌离子的存在。
4.氨合铜：能够与铜离子形成蓝色络合物，用于检测铜离子的存在。
5.乙二胺四乙酸：能够与钙离子形成紫色络合物，用于检测钙离子的存在。
四、沉淀反应显色试剂1.氯化铵：用于检测金属离子是否颜色沉淀。
2.碱性碳酸铜：用于检测是否含有硫酸根离子。
3.溴化银：用于检测溶液是否含有卤素化合物。
4.氯化钡：用于检测溶液中是否含有硫酸钡沉淀。
5.硝酸银：用于检测溶液中是否含有氯化物离子。
五、其他显色试剂1.过氧化氢：在检测物质是否含有酶的作用时常用。
2.二甲胺磺酸盐：用于检测样品中是否含有微量的重金属离子。
3.三氯化铁：用于检测溶液中是否含有酚类化合物。
4.聚丙烯酸铝：用于检测溶液中是否含有聚合物。
总结：本文介绍了常用的显色试剂大全。
其中包括氧化还原显色试剂、酸碱指示剂显色试剂、络合反应显色试剂、沉淀反应显色试剂以及其他显色试剂。
溴酚蓝
方法1：1%的溴酚蓝
将托盘天平上称取1g溴酚蓝定溶于100ml无水乙醇中，转移入滴瓶中，贴标签备用。
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方法2：0.05%的溴酚蓝
配western blot用的2*SDS上样缓冲液需要用到0.1ห้องสมุดไป่ตู้的溴酚蓝，2-DE中溴酚蓝一般也是配成0.1%母液。实际上，溴酚蓝在水中的溶解度不高，直接将0.1g溴酚蓝溶于100ml水是有困难的。下面是其较合适的配制方法：
名称：溴酚蓝
英文名称: bromophenol Blue
别名: 四溴苯酚磺酞
分子式: C19H10Br4O5S
分子量: 669.97
产品性状: 近似黄色或浅玫瑰色结晶性粉末，微溶于水及乙醚，溶于乙醇或稀碱液及氨液中呈蓝色。PH变色范围 3.0(黄)~4.6(蓝紫)
用途: 酸碱指示剂；非水滴定用指示剂，蛋白电泳染色；病毒化验等。
0.05%的溴酚蓝配制方法：取溴酚蓝0.1g，加0.05mol/L氢氧化钠溶液3.0ml使溶解，再加水稀释至200ml，即得。 变色范围pH2.8～4.6（黄→蓝绿）。只是不知道加入NaOH会不会影响2-DE实验。估计影响不大，因为指示剂用量毕竟很少。
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方法3：1％溴酚蓝
加1g水溶性钠型溴酚蓝于100ml水中，搅拌或涡旋混合直到完全溶解。溴酚蓝其钠盐易溶解在水里。
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本人在配制考马斯亮蓝染色液时，用甲醇溶解其粉状体的，溶解比较快。
另外，在凝胶电泳中，对于碱性凝胶应当使用溴甲酚绿作为示踪染料，因为在碱性pH条件下其显色较溴酚更蓝为鲜明
分光光度法测溴酚蓝的电离平衡常数
分光光度法测溴酚蓝的电离平衡常数摘要：溴酚蓝是一种弱电解质，可以作为酸碱指示剂。
溶液pH 不同，溴酚蓝电离程度亦不同，从而显示出不同的颜色。
溴酚蓝的分子和离子对光的最大吸收的位置是不同的，根据这一性质，用分光光度法测定不同酸碱条件下溶液的吸光度，再根据溶液浓度与吸光度的关系，求得溴酚蓝的电离平衡常数。
关键词：溴酚蓝，弱电解质，平衡常数，分光光度法Measurement of equilibrium constant of bromophenol blue by Uv-Vis SpectrophotometryAbstract ：Bromophenol blue is a kind of weak electrolyte, and can be used as acid-base indicator. The ionization of bromophenol blue varies with the pH of the solution, resulting in different colors. Different types of bromophenol blue have diverse maximum absorption wavelength, according to which the absorbance of the bromophenol blue solution is acquired by Spectrophotometry. And the equilibrium constant is obtained based on the relationship between the absorbance and the concentration of the solution.Keyword:bromophenolblue,weakelectrolyte,equilibriumconstant,Spectrophotometry1、序言弱电解质在水溶液中不能完全电离，因此无法准确获得溶液中各组分的浓度，在求算弱电解质的电离平衡常数时比较困难。
标定溴酚蓝测蛋白质含量的方法
标定溴酚蓝测蛋白质含量的方法在测定蛋白质含量的实验室方法中，溴酚蓝法是一种常用的标定方法。
本文将介绍溴酚蓝法的基本原理和实验步骤。
**1. 原理**溴酚蓝是一种对蛋白质有选择性的染料，它可以与蛋白质结合形成蛋白-染料复合物。
溴酚蓝的吸光度与蛋白质的含量呈线性关系，因此可以通过测量溴酚蓝的吸光度来确定蛋白质的含量。
**2. 实验步骤**以下是标定溴酚蓝测蛋白质含量的基本步骤：1. 准备标准蛋白溶液：选取不同浓度的蛋白质标准品，按照一定比例配制标准蛋白溶液。
确保标准品的浓度范围覆盖待测样品的浓度。
2. 准备待测样品：将待测样品溶解在合适的缓冲液中，确保样品溶解彻底。
3. 配制溴酚蓝染液：按照实验方案中的要求，配制适量的溴酚蓝染液。
4. 进行反应：将一定体积的标准蛋白溶液和待测样品分别与溴酚蓝染液混合，在规定的反应条件下进行一定时间的反应。
5. 测量吸光度：使用分光光度计，测量反应体系的吸光度。
通常选择适当波长进行测量。
6. 绘制标准曲线：将标准蛋白溶液的吸光度值作为纵坐标，蛋白质浓度作为横坐标，绘制标准曲线。
7. 定量分析：根据待测样品的吸光度值和标准曲线，计算出待测样品中蛋白质的含量。
**3. 注意事项**在进行标定溴酚蓝测蛋白质含量的方法时，需要注意以下事项：- 选择合适的标准蛋白品种和浓度范围，以确保标准曲线的可靠性。
- 溴酚蓝染液的配制要准确，不得超过溴酚蓝的最大工作浓度。
- 反应时间和温度要控制好，以避免反应过长或过短导致结果不准确。
- 注意实验室安全，避免接触到有害物质。
标定溴酚蓝测蛋白质含量是一种简单有效的方法，但在实际操作中仍需谨慎操作和准确计量。
通过这种方法可以方便地测定样品中蛋白质的含量，为进一步的研究提供了重要参考数据。
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溴酚蓝与CTAB、OP-10在水溶液、醇水溶液和微乳液中的缔合作用研究
溴酚蓝与CTAB、OP-10在水溶液、醇水溶液和微乳液中的缔合作用研究溴酚蓝与CTAB、OP-10在水溶液、醇水溶液和微乳液中的缔合作用研究引言：溴酚蓝（BPL）是一种重要的染料，广泛应用于有机合成、分析化学和环境监测等领域。
BPL的与表面活性剂的缔合作用对其溶解度、稳定性和应用性能有着重要的影响。
本文研究了BPL分别与两种常用的表面活性剂CTAB和OP-10在水溶液、醇水溶液和微乳液中的缔合作用，并通过紫外可见光谱、荧光光谱和动态光散射等技术手段进行了表征。
实验方法：1. 实验材料：溴酚蓝（BPL）、十六烷基三甲基溴化铵（CTAB）、壬基酚聚氧乙烯醚（OP-10）、苯酚、丙醇、超纯水等。
2. 荧光光谱测试：采用荧光光谱仪，记录BPL在不同条件下的荧光光谱。
3. 动态光散射测试：利用动态光散射仪，测定BPL与CTAB、OP-10缔合体系的聚集行为。
结果与讨论：1. 溴酚蓝与CTAB的缔合作用研究：通过荧光光谱测试发现，溴酚蓝的荧光强度在CTAB存在下明显增加，证明BPL与CTAB形成了缔合物。
随着CTAB浓度的增加，BPL和CTAB的缔合作用增强，荧光强度也呈现逐渐增加的趋势。
动态光散射实验结果表明，当CTAB浓度达到一定范围时，BPL-CTAB缔合物形成了胶束结构。
2. 溴酚蓝与OP-10的缔合作用研究：荧光光谱测试结果表明，OP-10的存在显著增强了溴酚蓝的荧光信号，说明BPL与OP-10发生了缔合作用。
随着OP-10浓度的增加，荧光强度先增加后减少，表明在一定浓度范围内，BPL与OP-10的缔合作用达到最大值。
动态光散射实验结果表明，BPL-OP-10复合体的聚集形态在不同浓度的OP-10条件下有所变化。
3. 不同溶剂条件下的缔合作用：在不同溶剂（水溶液、醇水溶液和微乳液）中，BPL与CTAB和OP-10的缔合作用均呈现出一定的差异。
在水溶液中，BPL与CTAB、OP-10的缔合作用强度较弱；在醇水溶液中，BPL与CTAB的缔合作用较强，而与OP-10的缔合作用相对较弱；在微乳液中，BPL与CTAB和OP-10的缔合作用较为显著。
四大滴定指示剂的作用原理
四大滴定指示剂的作用原理
四大滴定指示剂分别是甲基橙、甲基红、酚酞和溴酚蓝。
它们的作用原理如下：
1. 甲基橙：甲基橙是一种弱酸性指示剂，在酸性溶液中呈现红色，而在碱性溶液中呈现黄色。
它的作用原理是基于酸碱指示剂的颜色变化。
当滴定反应达到滴定点时，溶液从酸性变为碱性或从碱性变为酸性，甲基橙的颜色也相应发生变化，从而判断滴定终点。
2. 甲基红：甲基红是一种弱碱性指示剂，在酸性溶液中呈现红色，而在碱性溶液中呈现黄色。
它的作用原理与甲基橙类似，是基于酸碱指示剂的颜色变化来判断滴定终点。
3. 酚酞：酚酞是一种弱酸性指示剂，在酸性溶液中呈现无色或淡黄色，而在碱性溶液中呈现鲜艳的粉红色。
它的作用原理是基于酸碱指示剂的酸碱变化。
当滴定反应达到滴定点时，溶液从酸性变为碱性，酚酞的颜色也相应从无色或淡黄色变为粉红色，从而判断滴定终点。
4. 溴酚蓝：溴酚蓝是一种弱碱性指示剂，在酸性溶液中呈现黄色，而在碱性溶液中呈现蓝色。
它的作用原理是基于酸碱指示剂的酸碱变化。
当滴定反应达到滴定点时，溶液从酸性变为碱性，溴酚蓝的颜色也相应从黄色变为蓝色，从而判断滴定终点。
这四种滴定指示剂的作用原理都是基于它们在酸碱环境中颜色的变化来判断滴定终点，通过观察颜色变化来确定溶液的酸碱性质。
溴酚蓝MSDS
溴酚蓝化学品安全技术说明书说明书目录第一部分化学品名称第九部分理化特性第二部分成分/组成信息第十部分稳定性和反应活性第三部分危险性概述第十一部分毒理学资料第四部分急救措施第十二部分生态学资料第五部分消防措施第十三部分废弃处理第六部分泄漏应急处理第十四部分运输信息第七部分操作处置与储存第十五部分法规信息第八部分接触控制/个体防护第十六部分其它信息第一部分：化学品名称化学品中文名称：溴酚蓝化学品英文名称：Bromophenol blue；AlbutestCAS No.：115-39-9分子式：C19H10Br4O5S分子量：670.02第二部分：成分/组成信息有害物成分：纯品第三部分：危险性概述危险性类别：侵入途径：吸入、皮肤接触、误食。
健康危害：本品经呼吸道和消化道吸收，能腐蚀眼睛、皮肤和粘膜。
接触后有刺激感、喉痛、咳嗽、呼吸困难、腹痛、腹泻、呕吐、肺水肿。
环境危害：燃爆危险：第四部分：急救措施皮肤接触：立即脱去污染的衣着，用大量流动清水冲洗至少15分钟。
就医。
眼睛接触：立即提起眼睑，用大量流动清水或生理盐水彻底冲洗至少15分钟。
就医。
吸入：迅速脱离现场至空气新鲜处。
保持呼吸道通畅。
如呼吸困难，给输氧。
如呼吸停止，立即进行人工呼吸。
就医。
食入：饮足量温水，催呕，就医。
第五部分：消防措施灭火方法：尽可能将容器从火场移至空旷处，喷水保持火场容器冷却，用泡沫、干、二氧化碳灭火剂或沙土灭火。
直至灭火结束。
第六部分：泄漏应急处理应急处理：隔离泄漏污染区，限制出入。
切断火源。
建议应急处理人员戴防尘口罩，穿全棉防腐服。
不要直接接触泄漏物。
小量泄漏：避免扬尘，小心扫起，使用无火花工。
大量泄漏：收集回收或运至废物处理场所处置。
第七部分：操作处置与储存操作注意事项：密闭操作，局部排风。
防止粉尘释放到车间空气中。
操作人员必须经过专门培训，严格遵守操作规程。
建议操作人员佩戴自吸过滤式防尘口罩，戴化学安全防护眼镜，穿橡胶耐酸碱服，戴橡胶耐酸碱手套。
溴酚蓝
溴酚蓝科技名词定义中文名称：溴酚蓝英文名称：bromophenol blue定义：学名：3,3′,5,5′-四溴苯酚磺酞。
一种pH 指示剂，在pH 3.0~4.6范围，颜色由黄变蓝。
常用做电泳指示染料，凝胶中电泳迁移速度在小分子核酸或蛋白质区域。
所属学科：生物化学与分子生物学（一级学科）；方法与技术（二级学科）本内容由全国科学技术名词审定委员会审定公布目录编辑本段基本信息【中文全程】3，3′，5，5′-四溴苯酚磺酰酞【别名】四溴苯酚磺酞【英文名称】Bromophenol blue;Albutest【分子式】C19H10Br4O5S【相对分子量或原子量】670.02【性状】从乙酸及丙酮混合液中析出者为长六角形棱柱状结晶。
近似黄色或浅玫瑰色结晶性粉末，微溶于水及乙醚，溶于乙醇或稀碱液及氨液中呈蓝色。
PH变色范围 3.0(黄)~4.6(蓝紫)【溶解情况】微溶于水，易溶于甲醇、乙醇和苯，可自由溶于氢氧化钠溶液，同时形成溴酚蓝钠盐水溶液。
【用途】 pH指示剂，pH=3.0时呈黄色，pH=4.6时呈蓝紫色。
酸碱指示剂；非水滴定用指示剂，蛋白电泳染色；病毒化验等。
【制备或来源】将苯酚磺酰酞悬浮于醋酸中，然后徐徐加入溴，并使溴过量，在搅拌下，于50℃进行反应而得。
【其他】溴酚蓝分解温度279℃，在210℃绿色升华物退色为橙色。
编辑本段CAS编号CAS编号：115-39-9编辑本段性状描述浅黄色到棕黄色粉末；易溶于氢氧化钠溶液，溶于甲醇、乙醇和苯，微溶于水(约0.4g/100ml)；最大吸收波长422nm编辑本段物理参数熔点:273℃(dec.)(lit.)编辑本段用途说明酸碱指示剂，pH变色范围3.0(黄色)～4.6(紫色)；吸附指示剂编辑本段贮藏运输密封阴凉干燥保存编辑本段危险说明安全等级:22-24/25编辑本段配置方法方法1：1%的溴酚蓝将托盘天平上称取1g溴酚蓝定溶于100ml无水乙醇中，转移入滴瓶中，贴标签备用。
核酸电泳的双指示剂(溴酚兰和二甲苯青)与染色剂
.；. 核酸电泳的双指示剂（溴酚兰和二甲苯青）与染色剂指示剂核酸电泳常用的指示剂有溴酚兰和二甲苯青。
溴酚兰在碱性液体中，呈紫兰色，在0.6%、1%、1.4%和2%琼脂糖凝胶电泳中，溴酚兰的迁移率分别与1Kb、0.6Kb、0.2Kb和0.15Kb 的双链线性DNA片段大致相同.二甲苯青的水溶液呈兰色，它在1%和1.4%琼脂糖中电泳时，其迁移速率分别与2Kb和1.6Kb的双链线性DNA大致相似。
指示剂一般与蔗糖、甘油或聚蔗糖400组成载样缓冲液。
载样缓冲液的作用有：①增加样品密度，使其比重增加，以确保DNA均匀沉入加样孔内；②在电泳中形成肉眼可见的指示带，可预测核酸电泳的速度和位置；③使样品呈色，使加样操作更方便。
琼脂糖电泳时往往在样品中同时加入这两种指示剂，溴酚蓝指示小片段DNA，二甲苯青指示大片段DNA。
PS：二甲苯青FF C25H27N2O6S2Na FW: 538.6用于琼脂糖聚丙烯酰胺凝胶电泳的示踪染料, 易溶于水和醇，带电荷数少，移动速度慢。
染色剂核酸电泳后，需经染色后才能显现出带型，最常用的是溴化乙锭染色法，其次是银染色。
溴化乙锭(ethidium bromide，EB)是一种荧光染料，EB分子可嵌入核酸双链的碱基对之间，在紫外线激发下，发出红色荧光。
根据情况可在凝胶电泳液中加入终浓度为0.5ug/ml的EB，有时亦可在电泳后，将凝胶浸入该浓度的溶液中染色10～15min.琼脂糖凝胶EB染色，肉眼可见核酸电泳带，其DNA量一般>5ng，当溴化乙锭太多，凝胶染色过深，核酸电泳带看不清时，可将凝胶放入蒸馏水浸泡30min后再观察。
注意：EB具有强致癌性，因此需要防止污染，避免皮肤接触，操作时要控制在划定的污染区，戴一次性塑料手套，废弃物妥善处理。
银染色液中的银离子(Ag+)可与核酸形成稳定的复合物，然后用还原剂如甲醛使Ag+还原成银颗粒，可把核酸电泳带染色黑褐色，主要用于聚丙烯酰胺凝胶电泳染色，也用于琼脂糖凝胶染色，其灵敏度比EB高200倍.但银染色后，DNA不宜回收。
溴酚蓝115-39-9
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1 化学品及企业标识
1.1 产品标识符
化学品俗名或商品名： 溴酚蓝 CAS No.： 115-39-9 别名： 四溴酚磺酞;溴酚蓝(BPB);3,3',5,5'-四溴磺酚酞;四溴酚磺酚酞,溴酚兰;四溴酚磺酚酞;四溴苯酚磺酞 ;
1.2 鉴别的其他方法
碳氧化物,硫氧化物,溴化氢气
5.3 救火人员的预防
如必要的话,戴自给式呼吸器去救火。
5.4 进一步的信息
无数据资料
6 泄露应急处理
6.1 人员的预防,防护设备和紧急处理程序
避免粉尘生成。避免吸入蒸气、烟雾或气体。
6.2 环境预防措施
不要让产品进入下水道。
6.3 抑制和清除溢出物的方法和材料
扫掉和铲掉。放入合适的封闭的容器中待处理。
14.4 包裹组
欧洲陆运危规 : 无数据资料 国际海运危规 : 无数据资料 国际空运危规 : 无数据资料
14.5 环境危害
欧洲陆运危规 :否
国际海运危规 海运污染物 :否 国际空运危规 : 否
14.6 对使用者的特别预防
无数据资料
15 法规信息
15.1 专门对此物质或混合物的安全，健康和环境的规章 / 法规
9 理化特性
9.1 基本的理化特性的信息
a) 外观与性状
形状 : 粉
颜色 : 红
b) 气味
无数据资料
c) 气味临界值
无数据资料
d) pH值
无数据资料
e) 熔点/凝固点
204 °C (399 °F)
https:// 2/4
化学品安全技术说明书
f) 起始沸点和沸程
无数据资料
g) 闪点
溴酚蓝
1 2
三、仪器和试剂
TU-1810DASPC分光光度计一台(北京普析通用仪器责任有限公司) PB-10 pH计一台（德国Sartorius） 10mL 移液管 3支 5×10-5mol· -3的溴酚蓝溶液 dm 5mL 移液管 2支 0.1mol· -3的HCl溶液 dm 25mL移液管1支 1mol· -3的HCl溶液 dm 10mL 量筒2个 0.1mol· -3的邻苯二甲酸氢钾溶液 dm 50mL容量瓶10个 0.1mol· -3的NaOH溶液 dm 25mL烧杯9个 pH为4.003和6.864的标准缓冲溶液 0~50C温度计一支 滴管若干
DA , DB
A B
A, HA A, A B, HA B, A
A
B
A
A, HA
七、附录---解方程组法
若比色皿厚度相同，则
a A , A DB a B , A D A [ A ] [ HA ] a B , A D A a A, A DB
八、参考文献
1、崔献英、柯燕雄、单绍纯编 《物理化学实验》 中国科学技术大学出版社（2000） 2、东北师范大学等校编 《物理化学实验》（第 二版）高等 教育出版 社（1989） 3、武汉大学主编 《分析化学》（上、下册，第五版）高等教育出版社 （2006） 4、顾翼东主编 《化学辞典》（第二版）上海辞书出版社（2003）
实验六 分光光度法测溴酚蓝电离常数
3.3 实验心得 在本次的实验中使用了更加精确的仪器，与以前的实验中较简单 的仪器不同， 学会了很多使用精密仪器的技巧和方法。 在实验中， 一开始很注意温度问题， 在使用 pH 计读数的时候都读得偏早， 后 来发现温度其实并非影响的主要因素，还是应该等待示数稳定下 来之后再进行读数， 使用的 0.1M 盐酸应该是因为只剩一点底部的 溶液了，水可能挥发了不少使得浓度偏高，不过由于吸光度和 pH 值是对应的， 所以虽然配出的酸性溶液 pH 值较低， 但是最后对结 果影响不大。 另外在使用 pH 计的时候应该注意每次用完之后的清 洗以及擦拭的时候不要损坏电极头。
极碱
591
0.668
0.668
0.668
表 2 实验中 pH 值及吸光度的数据
编号 1 2 3 4 5 6 7
λ
max（nm）
535 515 593 593 593 593 592
表 3 实验中各溶液最大吸收峰的波长数值 编号 pH(nm) 1 2 3 4 5 6 7 1.166 1.467 1.448 2.819 4.336 4.571 4.770 D 0.014 0.019 0.021 0.061 0.415 0.505 0.549 D-D1 0.002 0.007 0.009 0.049 0.403 0.493 0.537 D2-D 0.654 0.649 0.647 0.607 0.253 0.163 0.119 ������������ ������ − ������������ ������������ − ������
Abstract: This experiment use spectrophotometry to determine the constant of ionization equilibrium of BPB, a very small constant which is difficult to determine by other method, according to Lamber-Beer law.
新版MSDS——溴酚蓝
第二部分：化学/组成信息 含量 第三部分：危险信息 无资料 皮肤接触，眼睛接触，吸入，食入
CAS No. 115-39-9
健康危害：
无资料
环境危害： 燃爆危险： 皮肤接触： 眼睛接触： 吸入： 食入：
无资料 可燃 第四部分：急救措施 脱去被污染的衣着，用清水彻底冲洗。 立即提起眼睑，用大量流动清水冲洗至少10分钟。就医。 迅速脱离现场至空气新鲜处。 让受害者饮足量水，催吐，就医。 第五部分：消防措施 可燃。燃烧产生有害气体。
பைடு நூலகம்
溴酚蓝
分解产物： 一氧化碳，硫的氧化物，二氧化碳，溴化氢。 第十一部分：毒理学信息 LD50：无资料 急性毒性： LC50：无资料 亚急性和慢性毒性：
刺激性： 致敏性： 致突变性： 致畸性： 致癌性： 生殖毒性： 第十二部分：生态学信息 生态毒理毒性： 生物降解性： 非生物降解性： 生物富集或生物积累性： 其它有害作用： 对水体没有危害。 第十三部分：废弃处置 废弃物性质： 废弃处置方法： 废弃注意事项： 第十四部分：运输信息 危险货物编号： UN编号： 包装标志： 包装类别： 包装方法： 无资料 UN 2265 3/PG 3 无资料 无资料 无资料 对化学品残存物的处置没有统一的国家法规。化学残存物一般作特殊废物。 处置前应参阅国家和地方有关法规。我们建议您联系相关机构或认可的废物 处置公司，他们会建议您如何处置特殊废物。
中国MAC(mg/m3)： 前苏联MAC(mg/m3)： TLVTN： TLVWN： 监测方法： 工程控制： 呼吸系统防护： 眼睛防护： 身体防护： 手防护： 其他防护：
第九部分：理化特性 外观与性状： 固体，浅棕色，酚类味。 pH： 熔点(℃)： 273 相对密度(水=1)： 0.954 g/mL at 20 ° C 沸点(℃)： 605.6° Cat760mmHg 相对蒸气密度(空气=1)： 无资料 分子式： C19H10Br4O5S 分子量： 669.96 主要成分： 饱和蒸气压(kPa)： 燃烧热(kJ/mol)： 无资料 无资料 临界温度(℃)： 临界压力(MPa)： 无资料 无资料 辛醇/水分配系数的对数值： 无资料 闪点(℃)： 爆炸上限 %(V/V)： 320.1°C 无资料 引燃温度(℃)： 爆炸下限%(V/V)： 无资料 微溶于水，易溶于甲醇、乙醇和苯，可自由溶于氢氧化钠溶液，同时形成溴 溶解性： 酚蓝钠盐水溶液。 主要用途： pH指示剂，pH=3.0时呈黄色，pH=4.6时呈蓝紫色。 其它理化性质： 第十部分：稳定性和反应活性 稳定性： 稳定 禁配物： 强氧化剂，强还原剂，强酸，强碱。 避免接触的条件： 加热 聚合危害： 不能发生
阳离子表面活性剂含量的测定
阳离子表面活性剂含量的测定――溴酚蓝光度法溴酚蓝与阳离子表面活性剂定量反应生成蓝色络合物，用有机溶剂苯萃取后可用光度法测定。
试剂：1、0.04%溴酚蓝：40mg溴酚蓝溶于100mL含有1mL 0.1mol/L NaOH 的水中。
使用前配制。
2、10% Na2CO33、苯4、十六烷基三甲基溴化铵标准溶液：10微克/毫升。
准确称取0.2500g十六烷基三甲基溴化铵于小烧杯中，加水溶解后定容500mL。
从中移取5.00mL于另一500mL容量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀。
实验步骤：1、标准曲线的绘制分别移取0.00、2.00、4.00、6.00、8.00、10.00mL标准溶液于分液漏斗中，加1mL0.04%溴酚蓝和5mL10% Na2CO3，混匀后加5.00mL苯，加塞振荡2分钟，静置分层，苯层移入干燥的10mL比色管中（不要最初的1mL）。
用1cm比色皿，在600nm波长处测定各溶液的吸光度。
以标准溶液的体积为横坐标，以吸光度值为纵坐标绘制标准曲线。
2、试样的测定准确称取0.10~0.15g试样于小烧杯中，加少量水溶解后，定量移入250mL容量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀。
从中移取2.00mL于分液漏斗中，加1mL0.04%溴酚蓝和5mL10% Na2CO3，混匀后加5mL苯，加塞振荡2分钟，静置分层，苯层移入干燥的10mL比色管中（不要最初的1mL）。
用1cm比色皿，在600nm波长处测定试液的吸光度。
在标准曲线上查出相应的体积V’，计算试样中阳离子表面活性剂的含量。
计算：计算：V’×10×10-6阳离子表面活性剂季铵盐含量%＝――――---――×100%m s×2.00/250。
溴酚蓝MSDS
溴酚蓝M S D SDocument number：WTWYT-WYWY-BTGTT-YTTYU-2018GT溴酚蓝化学品安全技术说明书说明书目录第一部分化学品名称第九部分理化特性第二部分成分/组成信息第十部分稳定性和反应活性第三部分危险性概述第十一部分毒理学资料第四部分急救措施第十二部分生态学资料第五部分消防措施第十三部分废弃处理第六部分泄漏应急处理第十四部分运输信息第七部分操作处置与储存第十五部分法规信息第八部分接触控制/个体防护第十六部分其它信息第一部分：化学品名称化学品中文名称：溴酚蓝化学品英文名称：Bromophenolblue；AlbutestCASNo.：115-39-9分子式：C19H10Br4O5S分子量：第二部分：成分/组成信息有害物成分：纯品第三部分：危险性概述危险性类别：侵入途径：吸入、皮肤接触、误食。
健康危害：本品经呼吸道和消化道吸收，能腐蚀眼睛、皮肤和粘膜。
接触后有刺激感、喉痛、咳嗽、呼吸困难、腹痛、腹泻、呕吐、肺水肿。
环境危害：燃爆危险：第四部分：急救措施皮肤接触：立即脱去污染的衣着，用大量流动清水冲洗至少15分钟。
就医。
眼睛接触：立即提起眼睑，用大量流动清水或生理盐水彻底冲洗至少15分钟。
就医。
吸入：迅速脱离现场至空气新鲜处。
保持呼吸道通畅。
如呼吸困难，给输氧。
如呼吸停止，立即进行人工呼吸。
就医。
食入：饮足量温水，催呕，就医。
第五部分：消防措施灭火方法：尽可能将容器从火场移至空旷处，喷水保持火场容器冷却，用泡沫、干、二氧化碳灭火剂或沙土灭火。
直至灭火结束。
第六部分：泄漏应急处理应急处理：隔离泄漏污染区，限制出入。
切断火源。
建议应急处理人员戴防尘口罩，穿全棉防腐服。
不要直接接触泄漏物。
小量泄漏：避免扬尘，小心扫起，使用无火花工。
大量泄漏：收集回收或运至废物处理场所处置。
第七部分：操作处置与储存操作注意事项：密闭操作，局部排风。
防止粉尘释放到车间空气中。
操作人员必须经过专门培训，严格遵守操作规程。
分光光度法测溴酚蓝的电离平衡常数
分光光度法测溴酚蓝的电离平衡常数摘要：溴酚蓝（BPB）是一种酸碱指示剂，本身带有颜色且在有机溶剂里电离度很小，所以一般的化学分析法或其他物理化学方法很难测定其电离平衡常数。
然而用分光光度法可以现在蒸馏水的参照下测出 BPB 的最大吸收波长，继而测出在最大吸收波长下对不同浓度的BPB 溶液的吸收，从而求算出溴酚蓝的电离平衡常数。
关键词：溴酚蓝、贝尔-朗比定律、分光光度法、电离平衡常数前言：根据BPB 在不同的电离度下有不同的吸光度测量BPB 的电离度，每种物质对于通过它的单色光的吸收具有选择性。
分光光度法是基于这种物质对光的选择吸收性而建立的，这一特性不仅是研究物质内部结构的基础，也是定量分析的基础。
因此可以利用不同波长对某多组分溶液的组分的不同吸收来确定体系中组分的含量，本实验利用其来求算溴酚蓝（BPB）的电离平衡常数。
BPB 在有机溶剂中存在着以下的电离平衡：zHA = H++A－【1】溶液中含有显色物质HA 和A-引起的，HA 和A-有自己的特定吸收波长，而且不会产生交叉，因此可以利用分光光度法测定两种不同物质的组分，从而确定BPB 的电离平衡常数。
【1】波长为λ的单色光通过任何均匀而透明的介质时，由于物质对光的吸收作用而使透射光的强度（I）比入射光的强度（I0）要弱，其减弱的程度与所用的波长λ有关。
又因分子结构不相同的物质，对光的吸收有选择性，因此不同的物质在吸收光谱上所出现的吸收峰的位置及其形状，以及在某一波长范围内的吸收峰的数目和峰高都与物质的特性有关。
分光光度法就是根据物质对光的选择性吸收的特性而建立的，这一特性不仅是研究物质内部结构的基础，也是定性定量分析的基础。
根据贝尔－郎比定律，溶液对于单色光的吸收，遵守下列关系式：式中D——消光度（或光密度）；I / I0——消光率；K——摩尔消光系数，它是溶液的特性常数；l——被测溶液的厚度（即吸收槽的长度）；c——溶液浓度。
在分光光度分析中，将每一种单色光，分别、依次地通过某一溶液，测定溶液对每一种光波的消光。
实验2 分光光度法测溴酚蓝的电力平衡常数
实验二分光光度法测溴酚蓝的电离平衡常数郭璟中国科学技术大学少年班学院合肥230026摘要：通过分光光度法这一简便而有效的方法，测定了溴酚蓝的电离平衡常数，并分析了这一方法的利弊。
Abstract: I measured the ionization equilibrium constant of BPB (bromophenol blue) through spectrophotometry, and analyzed the pros and cons of this approach.关键词：分光光度法溴酚蓝电离平衡常数前言溴酚蓝（BPB）是一种酸碱指示剂，本身带有颜色且在有机溶剂中电离度很小，所以用一般的化学分析法或其他物理化学方法很难测定其电离平衡常数。
在水中存在解离平衡：，平衡常数=[ ][ ][ ]。
溶液的颜色是由显色物质HA与A－引起的，其变色范围pH在3.1～4.6之间，当pH≤3.1时，溶液的颜色主要由HA引起的，呈黄色；在pH≥4.6时，溶液的颜色主要由A－引起，呈蓝色。
实验证明，对蓝色产生最大吸收的单色光的波长对黄色不产生吸收，在其最大吸收波长时黄色消光为0或很小。
利用这一点，本实验采用分光光度法来测定弱电解质溴酚蓝的电离平衡常数。
分光光度法可以利用不同波长对其组分的不同吸收来确定体系中组分的含量，从而求算溴酚蓝的电离平衡常数。
A-对单色光的吸收符合朗伯-比尔定律D=εbc，因此外界环境相同时（温度相同、比色皿相同），吸光度与浓度成正比，故可用D的比值来代替c的比值。
若极酸条件下的吸光度为D1（此时BPB的存在形式均为HA），极碱条件下的吸光度为D2（此时BPB的存在形式均为A-）,中间各pH的吸光度为D，则可得D 时A-的摩尔分数x：= − −由K a定义式可以得知lg =pH+lg所以只要知道各个pH下的吸光度，就可以通过线性拟合得知BPB的K a 值。
实验部分1.仪器和药品TU-1901双光束紫外可见分光光度计——北京普析通用仪器有限责任公司HK-2A超级恒温水浴——南京南大万和科技有限公司PHS-3B型精密pH计——上海精密科学仪器有限公司雷磁仪器厂10ml移液管2支、20ml移液管1支、50ml移液管1支100ml容量瓶7个5×10-5 mol/L BPB溶液、0.1 mol/L邻苯二甲酸氢钾溶液、蒸馏水0.1 mol/L HCl、0.1 mol/L NaOH、1 mol/L的HCl、0.2 mol/L的NaOH2.操作①打开超级恒温水浴使之恒温在28℃，打开分光光度计，预热仪器，并打开软件，进入初始化。
化学特征有机物颜色反应
化学特征有机物颜色反应一、引言有机物颜色反应是化学领域中一种常见的现象。
许多有机物在受到外界刺激时会发生颜色变化，这种变化往往和化学结构密切相关。
本文将从分子结构的角度出发，介绍几种常见的有机物颜色反应。
二、溴酚蓝的酸碱指示剂特性溴酚蓝是一种常用的酸碱指示剂，其分子结构中含有苯骈环和吡啶环。
在酸性溶液中，溴酚蓝呈黄色；而在碱性溶液中，溴酚蓝呈蓝色。
这是因为溴酚蓝的分子结构中的酚基会与酸性溶液中的氢离子发生反应，形成负离子，导致颜色变化。
三、酞菁蓝的金属配合物特性酞菁蓝是一种具有强烈吸收红光的有机物，其分子结构中含有酞菁环。
酞菁蓝与过渡金属离子形成的配合物具有不同的颜色。
例如，与铜离子配合后，酞菁蓝呈现深绿色，而与锌离子配合后呈现浅绿色。
这是因为过渡金属离子与酞菁蓝分子中的氮原子形成配位键，从而改变了电子的能级结构，导致颜色变化。
四、亚硝酸银的氧化还原反应特性亚硝酸银是一种常见的氧化还原指示剂，其分子结构中含有亚硝酸根离子。
在氧化性较强的条件下，亚硝酸银会被氧化为氧化银，溶液呈现棕色。
而在还原性较强的条件下，氧化银会被还原为亚硝酸银，溶液呈现无色。
这是因为亚硝酸银和氧化银的结构不同，导致颜色变化。
五、酚酞的氧化反应特性酚酞是一种常用的氧化还原指示剂，其分子结构中含有酚醌环和酚环。
在还原性较强的条件下，酚酞会被氧化为酚醌，溶液呈现红色。
而在氧化性较强的条件下，酚醌会被还原为酚酞，溶液呈现无色。
这是因为酚酞和酚醌的结构不同，导致颜色变化。
六、邻苯二酚的氧化反应特性邻苯二酚是一种常见的氧化剂，其分子结构中含有两个酚环。
在氧化反应中，邻苯二酚会被氧化为苯醌，溶液呈现深红色。
这是因为苯醌的结构中含有芳环和酮基，具有吸收红光的能力。
七、结论有机物颜色反应是一种常见的现象，其颜色变化与化学结构密切相关。
通过理解有机物的分子结构，我们可以预测和解释有机物的颜色反应。
这对于有机化学的研究和应用具有重要意义。
有机物颜色反应是化学领域中一种重要的现象。
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二、基本原理
。 根据Lambert-Beer定律，溶液对于单色光的吸收，遵守下列 关系式：
D lg I0 I alc (1)
透光率 摩尔吸光系数 l 比色皿的厚度（cm） c 溶液的摩尔浓度 D 吸光度 在分光光度分析中，将每一种单色光，分别依次地通过某一溶 液，测定溶液对每一种光波的吸收。以吸光度（D）对波长（λ） 作图，就可以得到该物质的吸收光谱曲线。用最大吸收波长的 入射光通过该溶液就有着最佳的灵敏度。 I/I0 a
溶液号 1 2 3 4 pH 值 3.2 3.4 3.6 3.8 0.1mol· -3 的 HCl 溶液 dm 体积/mL 7.85 5.20 3.15 1.40 溶液号 5 6 7 pH 值 0.1mol· -3 的 NaOH 溶液 dm 体积/mL 4.2 4.4 4.6 1.50 3.30 5.55
7、 注意事项 1）、溶液不要配错。 2）、不要将溶液洒在仪器内及机壳上，联机使用时不要打开仪器盖。 3）、在进入测定之前，在不同的测量模式下，需要进行基线的校准 或零点的校准。这时，注意要把两个装有空白溶液的比色皿分别 放入里边的参比池架和外边的样品池架中进行校准。 4）、不要用手接触比色皿的玻璃面，用镜头纸仔细擦净比色皿玻璃 面后再放入比色皿架内。 5）、放置比色皿时，不要拉动比色皿架，如有拉动应报告老师。不 要将毛玻璃面对准光源。不要弄破比色皿。不要弄丢比色皿固定 片，比色皿校正后不要随便更换， 。 6）、比色皿用完后要洗净，用蒸馏水泡在大烧杯中。 7）、请爱惜玻璃仪器。
溴酚蓝离解平衡常数的测定
一、目的
1、掌握一种测定酸碱指示剂离解平衡常数的方法。 2、掌握TU-1810DASPC紫外可见分光光度计有关部分及 PB-10 pH计的使用方法。
二、基本原理
波长为λ的平行单色光通过含有均匀的吸 光物质的介质时，由于物质对光的吸收作用 而使透射光的强度（I）比入射光的强度（I0） 要弱，其减弱的程度与所用的波长有关。又 因分子结构不相同的物质，对光的吸收有选 择性，因此不同的物质在吸收光谱上所出现 的吸收峰的位置及形状，以及在某一波长范 围内的吸收峰的数目和峰高都与物质的特性 有关。分光光度法是根据物质对光的吸收的 特性而建立的，这一特性不仅是研究物质内 部结构的基础，也是定性、定量分析的基础。
D (1 X ) D 1 XD X D D1 D 2 D1 D D1 D2 D
2
代入（ 4）式中得 pH pK
a Biblioteka g（ 5）二、基本原理
在测定D1和D2后，再测一系列pH下的溶液的吸光度及pH，以 D D pH对 lg D D 作图应为一直线，由其在纵轴上的截距可求 pK a （本实验忽略溶液离子强度的变化对它的酸离解平衡常数的影响）。
五、数据记录和处理
1、
在A-最大吸收波长处， 以pH对
lg lg D D1 D2 D
作图，求
pK
a
。
表3、pH及
测量波长： 溶液编号 pH
D D1 D2 D
D D1 D2 D
表
5 6 7
1
2
3
4
lg
*2
在HA最大吸收处作上图，求
pK
a
，并与前面的值进行比较。
六、思考讨论题
七、附录---解方程组法
如HA和 A-的吸收带互相重叠，而且它们都遵守Lambert-Beer定律， 对这一化学反应平衡体系， 分光光度计测得的吸光度包括两者的贡 献。
D A a A , HA [ HA ]l A a A , A [ A ]l A D B a B , HA [ HA ]l B a B , A [ A ]l B
五、数据记录和处理
实验温度： 酸式最大吸收波长： 碱式最大吸收波长： 等色点吸收波长:
五、数据记录和处理
表2、待测液光密度及pH数据表
测量波长： 项目 溶液 1 2 3 4 5 6 7 酸式 碱式 / / / / / / / / / / / / / / 一 二 比色皿厚度： D 电极斜率 三 平均 一 二 三 一 pH 测定 pH 二 三 平均
四、实验步骤
4、 碱式最大吸收波长处，不同酸度下，溴酚蓝溶液吸光度D的测定 1）取7只50mL的容量瓶，分别加入10.00ml 5×10-5mol· -3的溴酚蓝溶液， dm 再分别加入25.00mL 0.1mol· -3的邻苯二甲酸氢钾溶液，加入的HCl和 dm NaOH的量以表1为准，再加蒸馏水稀释到刻度，可分别得到不同pH值时 的溴酚蓝溶液。 表1、不同pH值加入HCl和NaOH量
1 2
三、仪器和试剂
TU-1810DASPC分光光度计一台(北京普析通用仪器责任有限公司) PB-10 pH计一台（德国Sartorius） 10mL 移液管 3支 5×10-5mol· -3的溴酚蓝溶液 dm 5mL 移液管 2支 0.1mol· -3的HCl溶液 dm 25mL移液管1支 1mol· -3的HCl溶液 dm 10mL 量筒2个 0.1mol· -3的邻苯二甲酸氢钾溶液 dm 50mL容量瓶10个 0.1mol· -3的NaOH溶液 dm 25mL烧杯9个 pH为4.003和6.864的标准缓冲溶液 0~50C温度计一支 滴管若干
1、在本实验中，温度对测定结果有何影响？采取哪些措施 可以减少由此引起的实验误差？ 2、溴酚蓝酸式吸收曲线和碱式吸收曲线的交点称之为“等色点”，讨论 在等色点处光密度和溴酚蓝浓度的关系。 3、使用分光广度法对被测物质有什么要求？最大吸收波长是否与浓度有 关？ 4、在吸光度测定中，应该怎样选用比色皿？ 5、用分光光度计进行测定，为什么要用空白溶液校正零点？理论上应该 用什么溶液作为参比？ 6、为什么要用相对浓度？ 为什么可以用相对浓度?
二、基本原理
图1、组分x和y吸收光谱的重叠情况
二、基本原理
溴酚蓝（四溴苯酚磺酞或S,S-二氧化-4,4’-(3H2,1-苯并邻氧硫杂环戊基3-亚甲基)-双-(2,6-二溴 苯酚))的分子式为：
C 1 9 H 10 O 5 Br 4 S
二、基本原理
或
二、基本原理
溴酚蓝是一种弱酸型的酸碱指示剂。具有酸（HA）和 碱（A-）两种形式，它在溶液中部分电离，主要用作酸碱指 示剂,其在溶液中存在以下的离解平衡： HA⇋H++A其离解平衡常数：
四、实验步骤
2）将波长固定在碱式的最大吸收波长处，用光度测量方式以蒸馏水作 参比，用1cm的比色皿测量各溶液的吸光度D。由于此时，HA不 产生吸收，所以溶液的D是不同浓度的A-产生的。 5、测量7种溶液的pH值 用pH为4.003和6.864的标准缓冲溶液校正PB-10 pH计后，分别 测量7种溶液的pH值（每次测定前均需重新校正）。
二、基本原理
从（1）式可以看出，对于固定厚度的比色皿，在最大吸 收波长下，测定不同浓度溶液的吸光度，就可以作出线性的D-c图， 这就是定量分析的基础。也就是说，在该波长时，若溶液遵守 Lambert-Beer定律，则可以选择这一波长来进行定量分析。 以上讨论的是单组分溶液的情况，对于含有多种吸光物质的溶 液，由于各吸光物质对一波长的单色光均有吸收作用，如果各吸 光物质之间互不发生化学反应，且各组分都遵守Lambert-Beer定 律，当某一波长的单色光通过这种含有多种吸光物质的溶液时， 溶液的总吸光度等于各吸光物质的吸光度之和。这一规律称吸光 度的加和性。据此，可以进行多组分的测定和某些化学反应平衡 常数的测定。 假定溶液中有x和y两种吸光物质，它们的定量测量可分别讨论 如下：
DA, DB
A B
A , HA A, A
B , HA
B,A
A
B
A
A , HA
七、附录---解方程组法
若比色皿厚度相同，则
[A ] [ HA ]
a A,A D B a B ,A D A a B ,A D A a A,A D B
八、参考文献
1、崔献英、柯燕雄、单绍纯编 《物理化学实验》 中国科学技术大学出版社（2000） 2、东北师范大学等校编 《物理化学实验》（第二版）高等 教育出版社（1989） 3、武汉大学主编 《分析化学》（上、下册，第五版）高等 教育出版社（2006） 4、顾翼东主编 《化学辞典》（第二版）上海辞书出版社 （2003） 5、杭州大学分析化学教研室编《化学分析》(《分析化学手 册-第二分册》 （第二版）,《分析化学手册》（第二版） (编辑委员会主任：周同惠) ) 化学工业出版社(1997)
Ka [H
][ A ]
(2)
[ HA ]
pK pK
a
4 . 10 4 . 06
I 0 . 00 I 0 . 01
15 C 20 C
0 0
a
20 C
0
二、基本原理
溶液的颜色是由HA和A-引起的，pH变色范围为3.14.6，当溶液的pH≤3.1时，溶液的颜色主要由HA（酸式） 引起呈黄色；当pH≥4.6时，溶液的颜色主要由A-（碱式） 引起，呈蓝紫色。实验表明，对蓝紫色产生最大吸收的 单色光的波长对黄色不产生吸收，在其最大吸收波长处， 黄色的吸光度为零或很小。因此，本实验我们可用对A产生最大吸收波长的单色光测定离解后的混合溶液的吸 光度， 可求出A-的浓度。令 A- 在显色物质中所占的量 分数为X，则HA所占的量分数为1-X， 所以
Ka 或者 pH pK
a
X 1 X
[H ]
（ 3）
lg
X 1 X
（ 4）
二、基本原理
根据上式可知，用pH计测定溶液的pH值及用分光光度法测定溶液中 的[A-]/[HA]后 ，就可以计算出离解平衡常数。 在低pH条件下，HA可视为未离解，此时体系的颜色完全由HA引起， 溶液呈黄色，设此时体系的吸光度为D1；在高pH条件下， HA完全电离， 此时体系的颜色完全由A-引起，此时的吸光度为D2 ，D为两种极 端条件之间的诸溶液的吸光度，它随着溶液的pH而变化