实验五玻璃器皿的清洗、凶扎及灭菌

实验五玻璃器皿的清洗、凶扎及灭菌

一、目的要求

1、掌握微生物实验室常用玻璃器皿的清洗及包扎方法。

2、掌握干热灭菌和高压蒸汽灭菌的操作方法。

二、实验材料

根据实验需要确定

三、基本原理

为确保实验顺利地进行，要求把实验所用玻璃器皿清洗干净，为保持灭菌后的无菌状态，需要对培养皿、吸管等进行包扎，对试管和三角瓶等加塞棉塞。这些工作看起来很普通简单，但如操作不当或不按操作规定去做，则会影响实验结果，甚至会导致实验的挫败。

灭菌是指杀死一定环境中的所有微生物，微生物实验室常用的灭菌方法包括直接灼烧、恒温干燥箱灭菌、高压蒸汽灭菌、间歇灭菌、煮沸灭菌等方法。这些方法的基本原理是通过加热使微生物体内蛋白质凝固变性，从而达到杀菌的目的。

四、方法与步骤

1、器皿洗涤的注意事项和方法

（1）不能有腐蚀作用的化学试剂，也不能使用比玻璃硬度大的物品来擦试玻璃器皿；新的玻璃器皿应用2%的盐酸溶液浸泡数小时，用水充分洗干净。

（2）用过的器皿应立即洗涤。

（3）强酸、强碱、琼脂等能腐蚀、阻塞管道的物质不能直接倒在洗涤槽内，必须倒在废物缺内。

（4）含有琼脂培养基的器皿，可先将培养基刮去，或用水蒸煮，待琼脂融化后趁热倒出，然后用清水洗涤。凡遇有传染性材的器皿，应经高压蒸汽灭菌再进行清洗。

（5）一般的器皿都可用去污粉、肥皂或配成5%的热肥皂水来清洗。油脂很重的器皿应先将油脂擦去。粘有煤膏、焦油及树脂一类物质，可用浓硫酸或40%氢氧化钠或用洗涤液浸泡；沾有蜡或油漆物，可加热使之融熔后揩去，或用有机溶剂（苯、二甲苯、汽油、丙酮、松节油等）揩去。

（6）载玻片或盖玻片，先擦去油垢，再放入5%肥皂水中煮分钟，立即用清水冲洗，以后放在稀的洗液中浸泡2小时，再用清水冲洗干净，最后用蒸馏水冲洗，干后浸于95%酒精中保存备用。

（7）洗涤后的器皿应达到玻璃壁能被水均匀湿润而无条纹和水珠。

2、器皿包扎

要灭菌后的器皿仍能保持无菌状态，需在灭菌前进行包扎。

（1）培养皿洗净的培养皿烘干后每10套（或根据需要而定）叠在一起，用牢固的纸卷成一筒，或装入特制的铁筒中，然后进行灭菌。

（2）吸管洗净、烘干后的吸管，在吸口的一头寒入少许脱脂棉花，以防在使用时造成污染。塞入的棉花量要适宜，多余的棉花可用酒精灯火焰烧掉。每支吸管用一条宽约4-5cm的纸条，以30-45°的角度螺旋形卷起来，吸管的尖端在头部，另一端用剩余的纸条打成一结，以防散开，标上容量，若干支吸管包扎成一束进行灭菌。使用

时，从吸管事间拧断纸条，抽出吸管。

（3）试管和三角瓶试管和三角瓶都需要做合适的棉塞，棉塞可起过滤作用，避免空气中的微生物进入容器，制作棉塞时，要求棉花紧贴玻璃壁，没有皱纹和缝隙，松紧适宜。过紧易挤破管口和不易塞入；过松易掉落和污染。棉塞的长度不小于管口直径的2倍，约2/3塞进管口（图5-1）。

目前，国内已开始采用塑料试管塞，可根据所用的试管的规格和实验要求来选择和采用合适的塑料试管塞。

若干支试管用绳扎在一起，在棉花塞部分外包裹油纸或牛皮纸，再用绳扎紧（图5-2）。三角瓶加棉塞后单个用油纸包扎。

3、灭菌

（1）电热干燥箱灭菌的操作过程：

①把要灭菌的物品放在箱内，堆积时要留人空隙，勿使接触器壁、铁壳，关闭箱门。

②接通电源，把位于箱顶的通气孔适当打开，使箱内湿空气能逸出，至箱内温度达到100℃时关闭。

③调节温度控制器旋扭，直至箱内温度达到所需要温度为止，观察温度是否恒定。若不稳定，再进行调节，稳定后不可再拨动调节旋扭和通气孔，保持140-160马俊，2-3h。

④灭菌结束后切断电源，待箱内温度降至60℃时，才能打开箱门取出灭菌物品。同时，应将温度调节旋扭调到零点，并打开通气孔。

（2）高压蒸汽灭菌锅的操作过程：

①使用前，先在灭菌锅内加入适量的水，然后把要灭菌的物品放

入锅内，盖上锅盖，对称地拧紧螺栓，以防漏气。

②在灭菌锅底部加热，同时打开排气阀，待自排气阀冒热气3-5min后关闭。至压力表所示压力升至所需压力时开始计时。通过调整热源，而维持一定的压力。达到灭菌时间后，停止加热。

③待锅内蒸气全部排完后，方可打开排气阀，打开锅盖，取出灭菌物。

④使用完后，应及时将锅内的水放去，以防生锈。

高压蒸汽灭菌锅种类规格很多，以上操作步骤适且于手提式高压蒸汽灭菌锅。其它种类的灭菌锅，它在使用时应严格按操作说明书操作。

五、实验内容

1、根据要求清洗各玻璃器皿，并进行包扎。

2、用电热干燥箱对玻璃器皿进行干热灭菌。

3、用高压蒸汽灭菌锅对玻璃器皿进行蒸汽灭菌。

六、实验作业

高压蒸汽灭菌为什么比干热灭菌要求温度低、时间短？