实验五玻璃器皿的清洗、凶扎及灭菌
常用玻璃器皿的清洗、包扎及灭菌技术
实验五常用玻璃器皿的清洗、包扎及灭菌技术一、实验目的1.熟悉微生物实验常用玻璃器皿的名称、规格及配套使用物品；2.掌握实验室常用玻璃器皿的清洗和包扎方法；3.了解干热灭菌、蒸汽灭菌原理，掌握玻璃器皿干热灭菌及高压蒸汽灭菌操作技术。
二、实验原理（一）微生物常用器皿、物品微生物实验常用玻璃器皿的名称、规格及配套使用物品介绍，见表2-1。
表2-1微生物实验常用玻璃器皿的名称和规格名称常用规格及配套使用物品烧杯50mL，100mL，250mL，500mL，1000mL，2000mL，3000mL，5000mL配套烧杯刷：大号，中号，小号三角瓶100mL，250mL，500mL，1000mL，2000mL，3000mL配套三角瓶刷：大号，中号，小号容量瓶无色：25mL，50mL，100mL，250mL，500mL，1000mL，2000mL棕色：25mL，50mL，100mL，250mL，500mL，1000mL，2000mL量筒5mL，10mL，25mL，50mL，100mL，250mL，500mL，1000mL，2000mL移液管1mL（分度0.01mL），2mL（分度0.02mL），5mL（分度0.05mL），10mL（分度0.1mL），20mL（分度0.1mL），50mL（分度0.5mL）配套洗耳球：大号，中号，小号培养皿35mm，75mm，90mm，120mm，150mm配套封口膜：12*12mm，16*16mm 酒精灯150mL配套：火柴漏斗60mL，80mL配套滤纸、漏斗架定性滤纸：7cm，9cm，11cm，12.5cm，15cm 定量滤纸：7cm，9cm，11cm，12.5cm，15cm滴定管酸式滴定管：50mL碱式滴定管：50mL 配套滴定台、蝴蝶夹滴瓶（小口瓶）无色：30mL，60mL，120mL 棕色：30mL，60mL，120mL广口瓶无色：125mL，250mL，500mL，1000mL，2000mL棕色：125mL，250mL，500mL，1000mL，2000mL试管10*100mm，12*100mm，15*100mm，15*150mm，18*180mm，20*200mm 配套试管刷：大号，中号，小号配套试管架：12.5mm，15.5mm，18.5mm，20.5mm载玻片25*75mm，30*60mm，100*100mm，500*500mm，900*600mm盖玻片18*18mm，20*20mm，22*22mm，24*24mm，24*32mm，24*50mm温度计0-100℃，0-200℃，0-300℃坩埚30mL，50mL配套坩埚钳研钵80mm，100mm，120mm，150mm（二）常用玻璃器皿用途：1.烧杯：用于盛装、转移、配制、加热培养基及试剂。
微生物实验思考题参考答案及知识要点
微生物实验思考题参考答案及知识要点一．酵母菌形态观察及死活细胞鉴别1.吕氏碱性美蓝染液浓度和作用时间的不同对酵母菌死细胞数量有何影响?是分析其原因。
美蓝是一种无毒性的染料，它的氧化型呈蓝色，还原型无色。
用美蓝对酵母的活细胞进行染色时，由于细胞的新陈代谢作用，细胞内具有较强的还原能力，能使美蓝由蓝色的氧化型变成为无色的还原型。
因此，具有还原能力的酵母活细胞是无色的，而死细胞或代谢作用微弱的衰老细胞则呈蓝色或淡蓝色，借此即可对酵母菌的死细胞和活细胞进行鉴别。
美蓝浓度高了，代谢不太活跃的活细胞也会被染色，从而使观察到的死细胞较多，活细胞较少；反之，则代谢微弱的细胞也能还原美蓝，不被染色，从而使观察到的死细胞较少，活细胞较多。
二. 细菌的简单染色和革兰氏染色1. 革兰氏染色中那一步是关键?为什么？你是如何操作的？革兰氏染色的关键步骤是：乙醇脱色（是脱色时间）。
如果脱色过度，革兰氏阳性菌也可被脱色而被误认为是革兰氏阴性菌；如脱色时间过短，革兰氏阴性菌也可被脱色而被误认为是革兰氏阳性菌。
脱色时间的长短还受涂片的厚薄，脱色是玻片晃动的快慢及乙醇用量的多少等因素的影响，难以严格规定（脱色是应当控制速度，脱色时间一般为20—30s）。
2. 固定的目的之一是杀死菌体，这与自然死亡的菌体有何不同？自然死亡的菌体本身已经部分自溶，结构已经改变。
固定杀死细菌时细菌结构是保持死亡时的状态的。
3. 不经复染这一步能否区分革兰氏阳性菌和阴性菌？能。
在酒精脱色后，不被酒精脱色而保留紫色者为革兰氏阳性菌（G＋），被酒精脱色为革兰氏阴性菌。
最后一步用番红染液复染，是为了让结果更清楚。
4. 涂片为什么要固定，固定适应注意什么问题？a 杀死细菌并使菌体黏附与玻片上；b 增加其对染料的亲和力。
固定时应注意：手持玻片，菌膜朝上，在微火过3次（手指触摸玻片反面，不烫手为宜），固定时应尽可能维持细胞原有形态，防止细胞膨胀或收缩。
三. 霉菌、放线菌的形态观察1. 镜检时，如何区分基内菌丝与气生菌丝？一般气生菌丝颜色较深，直生或分枝丝状，比基内菌丝粗；而基内菌丝色浅、发亮，可看到横隔膜，继而断裂成球状或杆状小体。
玻璃器皿的清洗包扎干热灭菌及常见培养基配置湿热灭菌
玻璃器皿的清洗包扎干热灭菌及常见培养基配置湿热灭菌玻璃器皿的清洗、包扎和干热灭菌一、目的要求掌握玻璃器皿的清洗、包扎及干热灭菌的操作方法。
二、实验材料玻璃器皿、烘箱、牛皮纸、纱布、纱绳三、操作步骤(一)清洗方法根据实验目的、器皿的种类、所盛放的物品、洗涤剂的类别和沾污程度等的不同而有所不同。
1. 新玻璃器皿的洗涤方法新购置的玻璃器皿含游离碱较多，应在酸溶液内先浸泡数小时，酸溶液一般用2%的盐酸或洗涤液，浸泡后用自来水冲洗干净。
2. 使用过的玻璃器皿的洗涤方法(1)试管、培养皿、三角烧瓶、烧杯等可用瓶刷或海绵沾上肥皂或洗衣粉或去污粉等洗涤剂刷洗，然后用自来水充分冲洗干净。
但是，洗衣粉和去污粉较难冲洗干净，常在器壁上附有次以上充分冲洗，或可用稀盐酸摇洗一次，再用水冲洗。
一层微小粒子，故要用水多次甚至10若内壁的水是均匀分布成一薄层，表示油垢完全洗净，若挂有水珠，则还需用洗涤液浸泡数小时，然后再用自来水充分冲洗。
(2) 装有固体培养基的器皿应先将其刮去，然后洗涤。
带菌的器皿在洗涤前先浸在2%煤酚皂溶液(来苏尔)或0.25%新洁尔灭消毒液内24小时或煮沸半小时，再用上法洗涤 (3)载玻片与盖玻片用过的载玻片与盖玻片如滴有香柏油，要先用皱纹纸擦去或浸在二甲苯内摇晃几次，使油垢溶解，再在肥皂水中煮沸5—10 min，用软布或脱脂棉花擦试，立即用自来水冲洗。
然后在稀洗涤液中浸泡0.5—2 h，自来水冲去洗涤液，最后用蒸馏水换洗数次，待干后浸于95%酒精中保存备用。
3. 洗涤液的配制与使用(1)洗涤液的配制洗涤液分浓溶液与稀溶液两种，配方如下:浓溶液重铬酸钠或重铬酸钾(工业用) 50g自来水 150mL浓硫酸(工业用) 800mL稀溶液重铬酸钠或重铬酸钾(工业用) 50g自来水 850mL浓硫酸(工业用) 100mL配法都是将重铬酸钠或重铬酸钾先溶解于自来水中，可慢慢加温溶解，冷却后徐徐加入浓硫酸，边加边搅动。
玻璃器皿的包扎的实训报告
一、实验背景玻璃器皿是实验室中常用的实验器材，其清洁、干燥、包扎及灭菌是保证实验结果准确性的关键步骤。
包扎作为灭菌前的重要环节，对于防止玻璃器皿在灭菌过程中受到污染具有重要作用。
本实训旨在通过实际操作，使学生掌握玻璃器皿的包扎方法，提高实验技能。
二、实验目的1. 熟悉玻璃器皿的名称、规格及用途。
2. 掌握玻璃器皿的清洗、干燥、包扎及灭菌方法。
3. 培养学生严谨、细致的实验操作习惯。
三、实验原理玻璃器皿的包扎是灭菌前的重要环节，其主要目的是防止灭菌过程中玻璃器皿受到污染。
包扎材料应具有一定的透气性，以便在灭菌过程中蒸汽能够穿透，达到灭菌效果。
同时，包扎材料应具有一定的阻隔性，防止空气中的微生物进入玻璃器皿。
四、实验材料与仪器1. 实验材料：玻璃器皿（试管、培养皿、三角瓶等）、棉塞、牛皮纸、剪刀、镊子、酒精灯等。
2. 实验仪器：高压蒸汽灭菌锅、烘箱、天平等。
五、实验步骤1. 清洗玻璃器皿：将玻璃器皿用去污粉或洗涤液刷洗，然后用自来水冲洗干净，倒置晾干。
2. 制作棉塞：将棉线剪成长约10cm的棉线，用镊子将其穿过试管口，使棉线两端分别位于试管两端，用橡皮筋固定。
3. 包扎玻璃器皿：将洗净、晾干的玻璃器皿放入牛皮纸中，用剪刀将牛皮纸剪成适当大小，将玻璃器皿包裹住，用橡皮筋固定。
4. 灭菌：将包扎好的玻璃器皿放入高压蒸汽灭菌锅中，按照实验要求设置温度、压力和时间，进行灭菌。
5. 冷却：灭菌完成后，关闭电源，待压力降至0时，打开灭菌锅盖，取出玻璃器皿。
6. 验证灭菌效果：将灭菌后的玻璃器皿进行微生物检测，确保无微生物污染。
六、实验结果与分析通过本次实训，学生掌握了玻璃器皿的清洗、干燥、包扎及灭菌方法。
实验过程中，学生认真操作，确保了实验结果的准确性。
1. 清洗：实验过程中，学生掌握了玻璃器皿的清洗方法，确保了玻璃器皿的清洁。
2. 干燥：实验过程中，学生掌握了玻璃器皿的干燥方法，确保了玻璃器皿的干燥。
3. 包扎：实验过程中，学生掌握了玻璃器皿的包扎方法，确保了玻璃器皿在灭菌过程中不受污染。
实验五玻璃器皿的清洗、凶扎及灭菌
实验五玻璃器皿的清洗、凶扎及灭菌实验五玻璃器皿的清洗、凶扎及灭菌一、目的要求1、掌握微生物实验室常用玻璃器皿的清洗及包扎方法。
2、掌握干热灭菌和高压蒸汽灭菌的操作方法。
二、实验材料根据实验需要确定三、基本原理为确保实验顺利地进行，要求把实验所用玻璃器皿清洗干净，为保持灭菌后的无菌状态，需要对培养皿、吸管等进行包扎，对试管和三角瓶等加塞棉塞。
这些工作看起来很普通简单，但如操作不当或不按操作规定去做，则会影响实验结果，甚至会导致实验的挫败。
灭菌是指杀死一定环境中的所有微生物，微生物实验室常用的灭菌方法包括直接灼烧、恒温干燥箱灭菌、高压蒸汽灭菌、间歇灭菌、煮沸灭菌等方法。
这些方法的基本原理是通过加热使微生物体内蛋白质凝固变性，从而达到杀菌的目的。
四、方法与步骤1、器皿洗涤的注意事项和方法（1）不能有腐蚀作用的化学试剂，也不能使用比玻璃硬度大的物品来擦试玻璃器皿；新的玻璃器皿应用2%的盐酸溶液浸泡数小时，用水充分洗干净。
（2）用过的器皿应立即洗涤。
（3）强酸、强碱、琼脂等能腐蚀、阻塞管道的物质不能直接倒在洗涤槽内，必须倒在废物缺内。
（4）含有琼脂培养基的器皿，可先将培养基刮去，或用水蒸煮，待琼脂融化后趁热倒出，然后用清水洗涤。
凡遇有传染性材的器皿，应经高压蒸汽灭菌再进行清洗。
（5）一般的器皿都可用去污粉、肥皂或配成5%的热肥皂水来清洗。
油脂很重的器皿应先将油脂擦去。
粘有煤膏、焦油及树脂一类物质，可用浓硫酸或40%氢氧化钠或用洗涤液浸泡；沾有蜡或油漆物，可加热使之融熔后揩去，或用有机溶剂（苯、二甲苯、汽油、丙酮、松节油等）揩去。
（6）载玻片或盖玻片，先擦去油垢，再放入5%肥皂水中煮分钟，立即用清水冲洗，以后放在稀的洗液中浸泡2小时，再用清水冲洗干净，最后用蒸馏水冲洗，干后浸于95%酒精中保存备用。
（7）洗涤后的器皿应达到玻璃壁能被水均匀湿润而无条纹和水珠。
2、器皿包扎要灭菌后的器皿仍能保持无菌状态，需在灭菌前进行包扎。
水处理生物学实验指导05培养基的制备及灭菌
实验五培养基的制备及灭菌本次实验可为下次实验作准备。
实验内容主要包括玻璃器皿的洗刷、包装和培养基的制备以及灭菌技术等。
在进行微生物学实验时，所用培养基及玻璃器皿等均须进行灭菌。
一、目的1．学会玻璃器皿的洗涤和灭菌前的准备工作。
2．掌握培养基配制和无菌水制备的方法。
3．学会高压蒸汽灭菌技术。
二、实验器材1．培养皿(又称平皿，直径90mm)、试管、吸管、锥形瓶、烧杯等。
2．纱布、棉花、报纸、牛皮纸。
3．pH试纸6—8.4(或pH电位计或氢离子浓度比色计)、洗液、10％HCL、10％NaOH。
4．牛肉膏、蛋白胨、氯化钠、琼脂、蒸馏水。
5．高压蒸气灭菌器、烘箱、冰箱、电炉等。
三、实验内容(一)玻璃器皿的洗刷与包装1．洗刷玻璃器皿在使用前必须洗刷干净。
培养皿、试管、锥形瓶等可先用去污粉或肥皂洗刷，然后用自来水冲洗。
吸管则先用洗液浸泡、再用水冲洗。
洗刷干净的玻璃器皿应放在烘箱中烘干。
2．包装(1)培养皿由一底一盖组成一套，按实验所需的套数一起用牛皮纸包装。
(2)吸管应在吸端用铁丝塞入少许棉花，构成1一1.5cm长的棉塞，以防止细菌吸入口中，并避免将口中细菌吹入管内。
棉花要塞得松紧适宜，吸时既能通气，又不致使棉花滑入管内。
将塞好棉花的吸管的尖端，放在4—5cm宽的长纸条的一端，吸管与纸条约成45°交角，折叠包装纸包住尖端(图8—8)，用左手将吸管压紧，在桌面上向前搓转，纸条即螺旋式地包在管子外面，余下纸头折叠打结，按照实验需要，可单支包装或多支包装，以备灭菌。
培养皿和吸管也有放在特制容器内进行灭菌的。
(3)试管和锥形瓶等的管口或瓶口均需用棉花塞堵塞。
做好的棉塞，四周应紧贴管壁和瓶口，不留缝隙，以防空气中微生物会沿棉塞皱折浸入。
棉塞不宜过松或过紧，以手提棉塞，管、瓶不掉下为准。
棉塞的2／3应在管内或瓶口内，上端露出少许，以便拔塞。
棉塞的大小及形状应如图8—9所示。
在制作培养基的过程中，如不慎将棉塞沾上培养基时，应用清洁棉花重做。
实验室玻璃器皿的清洗方法
实验室玻璃器皿的清洗方法实验室中使用的玻璃器皿在长期使用过程中会积累各种污垢，如残留的试剂、沉淀物、污渍等。
为了保持器皿的清洁并确保实验结果的准确性，需要定期对玻璃器皿进行清洗。
本文将介绍五种常见的玻璃器皿清洗方法：物理清洗法、化学清洗法、电化学清洗法、加热清洗法和低温清洗法。
一、物理清洗法物理清洗法主要通过机械或物理作用清除玻璃器皿表面的污垢。
这种方法通常包括以下步骤：1. 刷洗：使用软毛刷或尼龙刷轻轻刷洗玻璃器皿的内外表面，以去除残留的沉淀物和污渍。
注意不要使用硬毛刷，以免刮伤玻璃表面。
2. 冲洗：使用流动水冲洗玻璃器皿，确保将刷洗掉的污垢全部冲走。
对于一些较难清洗的部位，可以使用注射器或洗耳球吹气，以便彻底冲洗干净。
3. 擦干：将玻璃器皿放置在干净的毛巾或纸巾上，轻轻擦拭，确保表面无水痕残留。
二、化学清洗法化学清洗法利用化学试剂与玻璃器皿表面的污渍发生反应，从而达到清除污垢的目的。
以下是一些常见的化学清洗剂及其用途：1. 酸类：如硝酸、硫酸等，可用于清除金属离子和氧化物污渍。
2. 碱类：如氢氧化钠、氢氧化钾等，可用于清除油脂和蛋白质污渍。
3. 有机溶剂：如甲醇、乙醇等，可用于溶解一些有机污渍。
使用化学清洗剂时需注意以下几点：- 根据污渍类型选择合适的清洗剂，并遵循安全操作规程。
- 将清洗剂稀释后使用，以免对玻璃器皿造成腐蚀。
- 使用完毕后，用大量清水冲洗干净，避免残留物对实验结果造成影响。
三、电化学清洗法电化学清洗法利用电化学反应清除玻璃器皿表面的污垢。
这种方法通常需要将玻璃器皿作为电解池的一个电极，通过施加电压进行电解处理。
电化学清洗法的优点在于对一些顽固污渍有较好的清除效果，同时具有环保性。
但需要注意的是，玻璃器皿在使用电化学清洗法后可能需要进行额外的物理清洗，以确保表面无残留物。
四、加热清洗法加热清洗法通过加热玻璃器皿使污渍分解或挥发，从而达到清除污垢的目的。
加热清洗法适用于一些高温下稳定的玻璃器皿，如烧杯、烧瓶等。
玻璃器皿的清洗包扎、培养基的制备及灭菌
（O3）或使水（H2O）氧化生成过氧化氢（H2O2），O3和H2O2均有
杀菌作用。紫外线穿透力不大，所以，只适用于无菌室、接种箱、手术 室内的空气及物体表面的灭菌。紫外线灯距照射物以不超过1．2m为
宜。
结合理论知识 和生活，在使 用紫外灭菌时 你应该注意什 此外，为了加强紫外线灭菌效果，在打开紫外线灯 么？
清洗
包装 灭菌
洗涤剂、试管刷等
报纸、牛皮纸、专用塑料袋或器皿等
干热灭菌 湿热灭菌 紫外灭菌 过滤
玻璃器皿的清洗
器皿包扎
二、基本原理
（二）培养基简介
培养基是人工配制的适合微生物生长繁殖或积累 按成分： 天然培养基、合成培养基和半合成培养基； 代谢产物的营养基质，用以培养、分离、鉴定、保存 按物理性质： 固体培养基、半固体培养基和液体培养基；
按用途： 基础培养基、鉴别培养基和选择培养基等。 各种微生物或积累代谢产物。
在自然界中，微生物种类繁多，营养类型多样， 加之实验和研究的目的不同，所以培养基的种类很多。
培养基的成分和pH
配制培养基 的原则是什 么？
不同种类的培养基中，一般应含物对pH要求不一
在未调pH之前，先用精密pH试纸测量培养基的原始pH， 如果偏酸，用滴管向培养基中滴加入1mol/L NaOH， 3、按比例加1.6%溴甲酚紫乙醇溶液 边加边搅拌，并随时用pH试纸测其pH，直至pH达到 7.2～7.4。反之，用1mol/L HCl进行调节。注意pH 4、调pH： 值不要调过头，以避免回调，否则，将会影响培养基内各 按实验要求，可将配制的培养基分装入有小倒管（德汉 5、分装： 离子的浓度。对于有些要求 pH值较精确的微生物，其pH 氏小管）的试管内 的调节可用酸度计进行（使用方法，可参考有关说明书）。 6、加塞： 加塞后，将全部试管用麻绳捆好，再在棉塞外包一层牛 皮纸，以防止灭菌时冷凝水润湿棉塞，其外再用一道麻 7、包扎： 绳扎好。用记号笔注明培养基名称、组别、配制日期；
玻璃器皿的清洗和灭菌
.1、玻璃器皿的清洗和灭菌答：(一) 新购的玻璃器皿1、先用热肥皂水刷洗，流水冲净。
2、再浸泡于１～２％的盐酸中数小时，最后用流水冲净。
(二) 用过的玻璃器皿1、含油脂器材的清洗（1）单独高压灭菌；（2）趁热倒去污物；（3）倒放在铺有吸水纸的篮子上，置100 ℃烘箱中烤0.5h;（4）再用5%的碳酸氢钠水煮两次，再用肥皂水刷洗干净。
2、含菌试管的清洗高压灭菌后，肥皂水刷洗干净，烘干或晾干备用3、含菌平皿的灭菌（1）底盖分开放，放入桶中，高压灭菌；（2）趁热倒去污物；（3）肥皂水刷洗干净，烘干或晾干备用。
4、含菌吸管的清洗（1）把含菌吸管投入3%的来苏尔液内浸泡30min以上杀菌；（2）用肥皂水洗涤一次；（3）最后用清水冲洗干净即可。
5、载玻片及盖玻片的清洗（1）将载玻片及盖玻片分别浸入5 %的来苏尔液内浸泡过夜，取出水洗干净；（2）盖片用软布擦干即可；（3）染色用的载玻片要放入肥皂水中煮沸10min，再用肥皂水刷洗干净，最后用95%的酒精浸泡片刻，晾干备用。
2、大型高压蒸汽杀菌锅的基本操作方法答：（1）放干消毒锅内的剩余水，加入纯净水至最高水位；（2）放入物品，关上消毒锅门；冷凝阀开1圈；消毒钮顺时针拨至“关”；（3）选择所需的杀菌压力0.07、0.11或0.14Mpa后；开启电源；（4）当温度达到100℃左右时就可将消毒钮顺时针拨至“消毒”及冷凝阀关至刚好有冷凝水和蒸气冒出为止；（5）当消毒室温度达到所需温度时开始计时，到时间后关闸。
3、手提式高压蒸汽灭菌锅的使用方法（1）关好排水阀门放入清水至标度为止。
（2）将要灭菌的物品用牛皮纸盖好后放入灭菌锅中，关上器盖。
（3）通电加温，同时打开排气活门，排尽锅内的空气，再关闭活门。
（4）当达到所需温度时开始计时，并在此温度下保持所需的时间（5）稍微打开一点排气阀门，使锅内蒸气缓慢排除。
（6）当压力表指针降到零、锅内蒸气完全排尽时，立即打开锅盖取出物品。
器皿的洗涤包扎灭菌ppt课件
2、吸管的包扎
准备好干燥的吸管，在距其粗头顶端约0.5cm处 ，塞一小段1.5cm长的棉花，然后将吸管尖端斜 放在旧报纸条的近左端，与报纸成30度角，并将 左端多余的一段纸覆折在吸管上，再将整根吸管 卷入报纸，右端多余的报纸打一小结。
3、试管和三角瓶等的包扎
（6）开锅。当锅内蒸汽完全排尽时即压力表指针降
到零时，打开锅盖，取出灭菌物品： （7）排水。最后将高压灭菌器内的剩余水排出。 （8）观察灭菌效果。把灭菌培养基放入25℃温箱 中，培养48小时观察灭菌效果。 48小时后不见杂
菌生出，便证明培养基已达到灭菌目的，可以使
用。
器皿的洗涤包 扎灭菌
一、实验目的
1、掌握玻璃器皿的洗涤和包扎方法；
2、了解玻璃器皿的灭菌方法和原理
二、实验原理
为确保实验顺利地进行，要求把实
验所用的玻璃器皿清洗干净。
为保持灭菌后和无菌状态，需要对
培养皿、吸管等进行包扎，
三、实验器材 高压蒸汽灭菌锅、试管、三角瓶、培养 皿和吸管、棉线、纱布、棉花、报纸等
四、操作步骤
（一）、玻璃器皿的洗涤方法
1、新玻璃器皿的洗涤
在2%的盐酸溶液中浸泡数小时，用自来水冲洗干 净（本次实验不要求）
2、旧玻璃器皿的洗涤 试管、培养皿、三角瓶：
洗衣粉和去污粉洗刷，自来水冲洗
装有固体培养基：
刮掉，洗涤
带病原菌培养物的器皿：
先高压蒸汽灭菌，倒去培养物后再洗涤
Байду номын сангаас
（二）玻璃器皿的包扎
（3）通电加温，排冷空气
通常当压力表指针升至0.05MPa时，打开排气阀
放气，待压力表指针降至零点一小段时间后，再
实验七、玻璃器皿的清洗与包扎一、目的要求：1、熟悉微生物实验所需...
实验七、玻璃器皿的清洗与包扎一、目的要求：1、熟悉微生物实验所需的各种常用器皿名称和规格。
2、掌握对各种器皿清洗方法。
3、掌握玻璃器皿的干热灭菌操作过程。
二、材料：1、常用各种玻璃器皿。
2、清洗工具和去污粉、肥皂、洗涤液。
3、电热干燥箱。
三、概述：为了保证实验顺利进行，要求把实验用器皿清洗干净。
保持灭菌后无菌状态，需要对培养皿、吸管等进行妥善包扎。
试管和三角瓶要做棉塞。
这些工作看来很普通，如操作不当或不按规定要求去做，会导致实验的失败。
因此应看作是微生物实验的基本操作。
四、方法：（一）器皿洗涤的注意事项和方法：1、任何洗涤方法，都不应对玻璃器皿有所损伤，所以不能用有腐蚀作用的化学药剂，也不能使用比玻璃硬度大的物品来擦拭玻璃器皿。
2、一般新的玻璃器皿用2%的盐酸溶液浸泡数小时，用水充洗干净。
3、用过的器皿应立即洗涤，有时放置太久会增加洗涤困难。
4、难洗涤的器皿不要与易洗涤的器皿放在一起。
有油的器皿不要与无油的器皿放在一起，否则使本来无油的器皿也沾上了油垢，浪费药剂和时间。
5、强酸、强碱、琼脂等腐蚀、阻塞管道的物质不能直接倒在洗涤槽内，必须倒在废缸内。
6、含有琼脂培养基的器皿，可先用小刀或铁丝将器皿中的琼脂培养基刮去，或把它们用水蒸煮，待琼脂融化后趁热倒出，然后用水洗涤。
7、一般的器皿都可用去污粉、肥皂或配成5%热肥皂水来清洗油质很重的器皿，应先将油层擦去。
8、如果器皿沾有煤膏、焦油及树脂类的一些物质，可用浓硫酸或40%的氢氧化钠液洗，或用洗涤液浸泡。
9、当器皿上沾有蜡或油漆等物质，用加热方法使之融化揩去，或用有机溶剂（苯、二甲苯、丙酮、松节油等）拭揩。
10、洗涤后的器皿达到玻璃能被水均匀湿润而无条纹和水珠。
11、载玻片或盖玻片可先在2%盐酸溶液中浸1小时，然后在水中冲洗2~3次，最后用蒸馏水洗2~3次，洗后烘干冷却或浸于95%酒精中保存备用。
用过的载玻片或盖玻片，先擦去油垢，再放在5%肥皂水中煮10分钟后，立即用清水冲洗，以后放在洗涤液（稀释）中浸泡2小时，再用清水洗至无色为止，最后用蒸馏水洗数次，干后浸于95%酒精中保存备用。
实验九玻璃器皿的清洗包扎培养基的制备及灭菌
对实验结果的个人见解和展望
见解1
本实验中，玻璃器皿的清洗、包扎和培养基的制备及灭菌是微生物培养的关键步骤，任 何一个环节的失误都可能导致实验失败。因此，每个步骤都需要认真对待。
见解2
通过本实验，我深刻认识到实验操作的规范性和细节的重要性。在未来的实验中，我会 更加注重操作的规范性和细节的处理。
展望
技巧
掌握正确的清洗和包扎技 巧，确保玻璃器皿干净、 干燥、无菌。
学会制备培养基
了解培养基的成分
根据实验需要，了解培养 基所需的成分，如营养物 质、水、pH调节剂等。
配置培养基
按照规定的比例和顺序， 将各成分加入到容器中， 搅拌均匀。
灭菌
将配置好的培养基进行高 温灭菌，以杀死其中的微 生物。
了解灭菌的重要性及操作方法
包扎不严密。
• 解决方法
使用足够的纱布和胶带，确保玻璃 器皿的封口严密，防止培养基泄漏 。
对实验过程的改进建议
建议1
在清洗玻璃器皿时，可以先用清水冲洗一遍，再用清洗剂清洗，最 后用清水冲洗干净。这样可以确保器皿清洗得更彻底。
建议2
在制备培养基时，可以加入适量的抗凝剂，以防止培养基凝固。
建议3
在灭菌过程中，可以增加灭菌次数或延长灭菌时间，以确保培养基完 全灭菌。
培养基的制备
准备原料
01
根据实验需要，准备好所需的原料，如牛肉膏、蛋白胨、氯化
钠等。
配置培养基
02
按照配方比例将原料加入到水中，加热搅拌至溶解，调节pH值
至备好的培养基进行高温灭菌，以杀死其中的微生物。
灭菌操作
灭菌前准备
确保灭菌锅已经清洗干净，并按照要求摆放好待 灭菌的物品。
培养皿
实验用玻璃仪器及其它用具的清洁与灭菌标准操作规程
范围：实验用的容量玻璃仪器、一般玻璃仪器、取样用具等职责：质量部、生产车间对本规程的实施负责正文：1.清洁人——本岗位的操作人员操作完毕后要及时清洗所使用的玻璃仪器。
2.清洁剂及其使用范围——最常用的洁净剂有肥皂液、洗衣粉、洗液及有机溶剂等。
2.1肥皂液、洗衣粉——一般用于可以用刷子直接刷洗的仪器，如锥形瓶、烧杯、试管、试剂瓶无刻度要求的一般玻璃仪器。
2.2洗液——多用于不便于用刷子洗刷和对刻度有精密要求的仪器，如滴定管、移液管、容量瓶、玻璃垂熔漏斗、凯氏烧瓶等特殊仪器。
2.3有机溶剂——如氯仿、乙醚、乙醇、丙铜、甲苯、汽油等可用于油脂性污染物较多的仪器。
3.洗液的配制3.1重铬酸钾洗液3.1.1处方：重铬酸钾(含量≥99.5%) 250g纯化水400ml浓硫酸(含量≥98.0%) 加至1000ml3.1.2配法：取重铬酸钾溶解于400ml水中，边搅拌边冷却，慢慢加入浓硫酸至1000ml，冷却后即可使用。
3.1.3注意事项3.1.3.1配制洗液时，切不可将水倒入浓硫酸中，防止浓硫酸飞出伤人。
3.1.3.2浓硫酸和洗液一旦溅至衣物、皮肤、水泥地面等，立即用大量冷水冲洗。
3.1.3.3洗液经多次使用后，颜色转兰绿，就不能使用。
3.1.3.4洗液不能与乙醇混合，以免爆炸。
3.2碱性乙醇洗液——溶解120g氢氧化钠固体于120ml水中，用95%乙醇稀释至1000ml。
4.清洁程序4.1一般的玻璃仪器先用自来水冲洗,以后再用试管刷或其它仪器刷沾取洗衣粉或肥皂液刷洗仪器内外壁，再用自来水清洗干净，然后用纯化水荡洗三次。
4.2滴定管、移液管、容量瓶及玻璃垂熔漏斗等，先用自来水冲洗，沥干，用洗液浸泡4小时以上，再用自来水冲洗干净，最后用纯化水荡洗三次。
4.3洗后进行洗净度检查：将玻璃仪器倒置，内壁应均匀附着一层水膜，即不聚成水滴，也不成股流下，即为洗净，否则重新清洗。
4.4干燥与灭菌4.4.1无特殊要求的玻璃仪器及其它用具洗净后置清洁的仪器架或仪器柜内倒置沥干备用。
实验二 玻璃器皿的清洗、包扎及灭菌汇总
载玻片与盖玻片 若滴加有香柏油，先用邹文纸擦去或浸在二甲 苯里摇晃几次，再在肥皂水中煮沸5～15min 用软纸或脱脂棉花擦拭，立即冲洗，然后在稀 洗涤液中浸泡0.5～2h，自来水冲洗，最后用 蒸馏水换洗几次，干后浸于95%乙醇中保存。 使用时在火焰上烧去乙醇 检查过活菌的先2%煤酚皂溶液或0.25%的 新洁尔灭溶液中浸泡24h，然后按上述洗 涤和保存。
附：棉塞的制作
棉塞的作用
防止杂菌污染 保证通气良好
棉塞：加塞时，1／3在试管口外，2／3在试管 口内。如图2-2所示。做棉塞的棉花要选 纤维较长的，一般不用脱脂棉做棉塞 通气塞：几层纱布（一般8层）相互重叠，或两 层纱布间均匀铺一层棉花而成
3、消毒与灭菌
消毒：一般是消灭病原菌和有害微生物的
高 压 蒸 汽 消 毒 器
高 压 蒸 汽 消 毒 器
（干热灭菌）
(1)将培养皿、吸管等玻璃器皿洗净干燥后，用报纸包好， 或装入特制的铁筒中。 (2)将包装好的玻璃仪器摆入电热烘箱中，彼此间留有一 定的空隙以便流通空气。 (3)关紧箱门，打开排气孔接上电源。 (4)待箱内空气排出到一定程度时，关闭上排气孔，继续 加热至一定温度后，调节温度控制旋钮固定温度，在 160℃～165℃保持2小时即可。
(5)待自然降温冷却后(60℃以下)才能开门取出玻璃器皿。
鼓风干燥箱
实验二 玻璃器皿的清洗，包扎及灭菌
一、目的要求
1、学习并掌握玻璃器皿的清洗，包扎方法
2、学习并掌握玻璃器皿灭菌的方法。
二、实验原理及操作
玻璃器皿一般要求硬质玻璃，才能承受 高温和短暂灼烧而不致破裂； 玻璃器皿的游离碱含量要少，否则会影 响培养基的酸碱度； 玻璃器皿的形状和包装方法要求能防止 污染杂菌为准； 洗涤玻璃器皿方法不当会影响实验结果
玻璃器皿的清洗、包扎及灭菌
实验玻璃器皿的清洗包扎及高压蒸汽灭菌一、目的要求1、了解高压蒸汽灭菌的基本原理。
2、学习高压蒸汽灭菌的操作方法。
二、实验原理灭菌是指杀死或消灭一定环境中的所有微生物，灭菌的方法分物理和化学灭菌法两大类。
本实验主要介绍物理方法的一种，即加热灭菌。
加热灭菌包括湿热和干热灭菌两种。
通过加热使菌体内?蛋白质凝固变性，从而达到杀菌目的。
蛋白质的凝固变性与其自身含水量有关，含水量越高，其凝固所需要的温度越低。
在同一温度下，湿热的杀菌效力比干热大，因为在湿热情况下，菌体吸收水分，使蛋白质易于凝固；同时湿热的穿透力强，可增加灭菌效力。
高压蒸汽灭菌法：高压蒸汽灭菌用途广，效率高，是微生物学实验中最常用的灭菌方法。
这种灭菌方法是基于水的沸点随着蒸汽压力的升高而升高的原理设计的。
当蒸汽压力达到1.05kg/cm2时，水蒸气的温度升高到121℃，经15～30min，可全部杀死锅内物品上的各种微生物和它们的孢子或芽孢。
一般培养基、玻璃器皿以及传染性标本和工作服等都可应用此法灭菌。
干热灭菌法：通过使用干热空气杀灭微生物的方法叫干热灭菌。
一般是把待灭菌的物品包装就绪后，放入电烘箱中烘烤，即加热至160～170℃维持1～2h。
火焰灭菌：直接用火焰灼烧灭菌，迅速彻底。
对于接种环，接种针或其它金属用具，可直接在酒精灯火焰上烧至红热进行灭菌。
此外，在接种过程中，试管或三角瓶口，也采用通过火焰而达到灭菌的目的。
三、实验器材1、器皿：平皿（10个/组），1ml吸管（9支/组），试管18×180（10支/组），试管（15×150）（12/组），三角锥瓶500ml（3个/组）、三角锥瓶500ml（内装蒸馏水250ml），10ml吸管2、其他：牛皮纸或报纸，酒精灯，棉花，高压蒸汽菌锅，电烘箱，线绳,毛刷等四、操作方法（一）玻璃器皿的清洗包扎玻璃器皿在灭菌前必须经正确包裹和加塞，以保证玻璃器皿于灭菌后不被外界杂菌所污染。
1、将平皿用纸包扎好，以5～8个为一包；2、吸管应在管口约0.5厘米以下的地方塞入少许长约1.5厘米的棉花，以拉直的曲别针一端放在棉花的中心，轻轻捅入管口，松紧必须适中，松紧程度以吹气时通气顺畅而不致下滑为准，管口外露的棉花纤维统一通过火焰烧去。
玻璃器皿的清洗包扎及高压蒸汽灭菌课件
准备工具
准备清洗工具，如刷子、 洗涤剂、水桶等。
手工清洗步骤
01
02
03
04
浸泡
将玻璃器皿放入装满洗涤剂和 水的混合液中浸泡一段时间，
以松解残留物。
刷洗
使用刷子轻轻刷洗玻璃器皿表 面，注意不要划伤器皿。
冲洗
用清水彻底冲洗玻璃器皿，确 保洗涤剂和残留物被完全冲走
。
晾干
将玻璃器皿放置在干净的地方 晾干，避免直接阳光照射。
情况应及时处理。
灭菌完成后，应先关闭灭菌器 ，再打开排气阀，避免蒸汽喷
出烫伤操作人员。
灭菌过程中的防护措施
操作人员应穿戴防护服、手套 、口罩等个人防护用品。
在灭菌过程中，应保持室内通 风良好，避免室内温度过高。
对于易燃、易爆、易腐蚀的物 品，应单独存放并采取相应的 安全措施。
意外情况的应急处理
如发生意外情况，如灭菌器故障、泄漏等，应立即停止使用，并采取相应的应急措 施。
根据物品的形状、大 小和重量选择合适的 包扎材料和方法。
03
高压蒸汽灭菌原理
微生物的耐热性
微生物的耐热性
不同微生物对热的敏感程度不同，有些微生物在高温下容 易死亡，而有些则具有较高的耐热性。了解微生物的耐热 性对于确定高压蒸汽灭菌的条件非常重要。
微生物的致死温度
在一定的时间内，高于某个温度微生物会死亡。致死温度 是杀灭90%微生物所需达到的温度。
包扎玻璃器皿
为了避免在灭菌过程中破裂和污染，需要对玻璃器皿进行适当的包 扎。
装载物品
将清洗干净的玻璃器皿放入灭菌器内 ，尽量将大小不同的器皿分开摆放， 以免小的器皿被大的器皿遮挡而影响 灭菌效果。
将装有玻璃器皿的灭菌篮或灭菌盘放 入灭菌器内，并确保其放置稳定。
常用玻璃器皿的洗涤、包装及灭菌
精选ppt
3
三、方法步骤
1．玻璃器皿的洗刷 2．玻璃器皿的包装 3．玻璃器皿的灭菌
精选ppt
4
1．玻璃器皿的洗刷
（1）新购入的玻璃器皿: 用1％～2％盐酸溶液浸泡数小时 或过夜,再用清水反复冲刷，最后用蒸馏水冲洗2～3次， 倒立使之自然干燥或烘干。
（2）一般使用过的器皿:用后立即用清水冲净。凡沾有油 污的，可用肥皂水煮半小时后趁热刷洗，再用清水冲洗干 净，最后用蒸馏水冲洗2～3次，晾干。
洗 液 浸 泡 后 洗 刷 。 重 铬 酸 钾 （ 工 业 用 ） 8 0 g， 粗 硫 酸
100ml，水1000ml。
精选ppt
6
2．玻璃器皿的包装
• 试管 • 三角烧瓶 • 培养皿 • 吸管 • 注射器 • 载玻片与盖玻片
• 接种工具
精选ppt
7
培养皿
常用器具
直径90 mm，高15 mm
精选ppt
技能训练2
2016
实验室常用玻璃器皿洗刷、 消毒和包装
精选ppt
1
一、 实训目的
认识常用玻璃器皿的名称及规格， 熟
悉各种玻璃器皿的洗刷、包装和消毒
精选ppt
2
二、 仪器材料
试管、刻度吸管、培养皿、三角烧 瓶、烧杯、量筒、量杯、漏斗、乳钵、 普通棉花、脱脂棉、纱布、牛皮纸、旧 报纸、新洁尔灭、来苏儿、石炭酸、肥 皂粉、重铬酸钾、粗硫酸、盐酸、橡胶 手套、橡胶围裙等；
棉塞的制作
精选ppt
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3．玻璃器皿的灭菌
常用干热灭菌法
将包装的玻璃器皿放入干燥箱内，为使空气流 通，堆放不宜太挤，也不能紧贴箱壁，以免烧焦。
一般160℃，维持2h。
也可用高压蒸汽灭菌，即121.3℃ ，103.42千帕 经30分钟。
实验九玻璃器皿的清洗包扎培养基的制备及灭菌
四、操作步骤
一、称量 准确、迅速，一种药品一把药勺，勿盖错
药瓶盖 二、溶化 水的加法、加热搅拌 三、调pH 忌调过头后来回调
培养基的制备
四、过滤
五、分装
1、液体分装：试管高度的1/4左右
三角瓶容积的1/2
2、固体分装：试管高度的1/5左右（制斜面）
由于这种培养基多用于培养细菌，因此， 要用稀酸或稀碱将其pH调至中性或微碱性， 以利于细菌的生长繁殖。牛肉膏蛋白胨培 养基的配方如下：
牛肉膏 3g 蛋白胨 10g
NaCl 5g 琼脂15～20g
水
1000ml pH 7．4～7．6
干热灭菌是利用高温使微生物细胞内的蛋 白质凝固变性而达到灭菌的目的。
器皿包扎
六、思考题
（1）培养微生物的培养基应具备哪些条件？为 什么？ （2）在配制培养基的操作过程中应注意些什么问 题？为什么？图Ⅴ—5通气塞
A．配制时纱布塞法；B．灭菌时包牛皮纸； C．培养时纱布翻出 （3）培养基配好后，为什么必须立即灭菌？如何 检查灭菌后的培养基是无菌的？
（4）干热灭菌完毕后，在什么情况下才能 开箱取物？为什么？
三、器材
牛肉膏，蛋白胨， NaCl，琼脂； 1mol/L NaOH， 1mol/L HCl； 试管，三角烧瓶，烧杯，量筒，玻棒，培 养基分装器，扭力天平，牛角匙，高压蒸 汽灭菌锅，pH试纸（ pH 5．5～9．0）， 棉花，牛皮纸，记号笔，麻绳，纱布等。
培养皿，试管，吸管，电烘箱等。
牛肉膏蛋白胨培养基，培养皿（6套一包）， 手提式高压蒸汽菌锅等。
配方：
KH2PO4
1.0g 另加孟加拉红和链霉素
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实验五玻璃器皿的清洗、凶扎及灭菌
一、目的要求
1、掌握微生物实验室常用玻璃器皿的清洗及包扎方法。
2、掌握干热灭菌和高压蒸汽灭菌的操作方法。
二、实验材料
根据实验需要确定
三、基本原理
为确保实验顺利地进行，要求把实验所用玻璃器皿清洗干净，为保持灭菌后的无菌状态，需要对培养皿、吸管等进行包扎，对试管和三角瓶等加塞棉塞。
这些工作看起来很普通简单，但如操作不当或不按操作规定去做，则会影响实验结果，甚至会导致实验的挫败。
灭菌是指杀死一定环境中的所有微生物，微生物实验室常用的灭菌方法包括直接灼烧、恒温干燥箱灭菌、高压蒸汽灭菌、间歇灭菌、煮沸灭菌等方法。
这些方法的基本原理是通过加热使微生物体内蛋白质凝固变性，从而达到杀菌的目的。
四、方法与步骤
1、器皿洗涤的注意事项和方法
（1）不能有腐蚀作用的化学试剂，也不能使用比玻璃硬度大的物品来擦试玻璃器皿；新的玻璃器皿应用2%的盐酸溶液浸泡数小时，用水充分洗干净。
（2）用过的器皿应立即洗涤。
（3）强酸、强碱、琼脂等能腐蚀、阻塞管道的物质不能直接倒在洗涤槽内，必须倒在废物缺内。
（4）含有琼脂培养基的器皿，可先将培养基刮去，或用水蒸煮，待琼脂融化后趁热倒出，然后用清水洗涤。
凡遇有传染性材的器皿，应经高压蒸汽灭菌再进行清洗。
（5）一般的器皿都可用去污粉、肥皂或配成5%的热肥皂水来清洗。
油脂很重的器皿应先将油脂擦去。
粘有煤膏、焦油及树脂一类物质，可用浓硫酸或40%氢氧化钠或用洗涤液浸泡；沾有蜡或油漆物，可加热使之融熔后揩去，或用有机溶剂（苯、二甲苯、汽油、丙酮、松节油等）揩去。
（6）载玻片或盖玻片，先擦去油垢，再放入5%肥皂水中煮分钟，立即用清水冲洗，以后放在稀的洗液中浸泡2小时，再用清水冲洗干净，最后用蒸馏水冲洗，干后浸于95%酒精中保存备用。
（7）洗涤后的器皿应达到玻璃壁能被水均匀湿润而无条纹和水珠。
2、器皿包扎
要灭菌后的器皿仍能保持无菌状态，需在灭菌前进行包扎。
（1）培养皿洗净的培养皿烘干后每10套（或根据需要而定）叠在一起，用牢固的纸卷成一筒，或装入特制的铁筒中，然后进行灭菌。
（2）吸管洗净、烘干后的吸管，在吸口的一头寒入少许脱脂棉花，以防在使用时造成污染。
塞入的棉花量要适宜，多余的棉花可用酒精灯火焰烧掉。
每支吸管用一条宽约4-5cm的纸条，以30-45°的角度螺旋形卷起来，吸管的尖端在头部，另一端用剩余的纸条打成一结，以防散开，标上容量，若干支吸管包扎成一束进行灭菌。
使用
时，从吸管事间拧断纸条，抽出吸管。
（3）试管和三角瓶试管和三角瓶都需要做合适的棉塞，棉塞可起过滤作用，避免空气中的微生物进入容器，制作棉塞时，要求棉花紧贴玻璃壁，没有皱纹和缝隙，松紧适宜。
过紧易挤破管口和不易塞入；过松易掉落和污染。
棉塞的长度不小于管口直径的2倍，约2/3塞进管口（图5-1）。
目前，国内已开始采用塑料试管塞，可根据所用的试管的规格和实验要求来选择和采用合适的塑料试管塞。
若干支试管用绳扎在一起，在棉花塞部分外包裹油纸或牛皮纸，再用绳扎紧（图5-2）。
三角瓶加棉塞后单个用油纸包扎。
3、灭菌
（1）电热干燥箱灭菌的操作过程：
①把要灭菌的物品放在箱内，堆积时要留人空隙，勿使接触器壁、铁壳，关闭箱门。
②接通电源，把位于箱顶的通气孔适当打开，使箱内湿空气能逸出，至箱内温度达到100℃时关闭。
③调节温度控制器旋扭，直至箱内温度达到所需要温度为止，观察温度是否恒定。
若不稳定，再进行调节，稳定后不可再拨动调节旋扭和通气孔，保持140-160马俊，2-3h。
④灭菌结束后切断电源，待箱内温度降至60℃时，才能打开箱门取出灭菌物品。
同时，应将温度调节旋扭调到零点，并打开通气孔。
（2）高压蒸汽灭菌锅的操作过程：
①使用前，先在灭菌锅内加入适量的水，然后把要灭菌的物品放
入锅内，盖上锅盖，对称地拧紧螺栓，以防漏气。
②在灭菌锅底部加热，同时打开排气阀，待自排气阀冒热气3-5min后关闭。
至压力表所示压力升至所需压力时开始计时。
通过调整热源，而维持一定的压力。
达到灭菌时间后，停止加热。
③待锅内蒸气全部排完后，方可打开排气阀，打开锅盖，取出灭菌物。
④使用完后，应及时将锅内的水放去，以防生锈。
高压蒸汽灭菌锅种类规格很多，以上操作步骤适且于手提式高压蒸汽灭菌锅。
其它种类的灭菌锅，它在使用时应严格按操作说明书操作。
五、实验内容
1、根据要求清洗各玻璃器皿，并进行包扎。
2、用电热干燥箱对玻璃器皿进行干热灭菌。
3、用高压蒸汽灭菌锅对玻璃器皿进行蒸汽灭菌。
六、实验作业
高压蒸汽灭菌为什么比干热灭菌要求温度低、时间短？。