细胞培养2_人体间期细胞X—小体的制备
细胞生物学考试押题及参考答案(1)
一、选择题1-5 BABBB 6-10 BDABB 11-15 ABCAC 16-18 CCC二、填空题1、根据线粒体和叶绿体起源内共生学说，认为线粒体起源于细菌，叶绿体起源于蓝藻。
2、协助扩散和主动运输的主要相同之处在于都需要载体，速度都很快,主要差别在于协助扩散只能顺浓度梯度进行，不消耗能量；主动运输可以逆浓度梯度进行，消耗能量。
3、核纤层结构的组成成分, 属于中间纤维蛋白家族4，核小体的核心由四种组蛋白（H2A、H2B、H3、H4）各两分子共8分子组成的八聚体，核心的外面缠绕了1.75圈的DNA双螺旋，其进出端结合有H1组蛋白分子。
5、YAC（酵母人工染色体）的构建成功说明：一个有功能的染色体至少有自主复制DNA序列,着丝粒DNA序列, 端粒DNA序列三个不可缺少的功能元件。
6、真核细胞和原核细胞中都存在的rRNA是5SrRNA。
7、细胞周期调控中的两个主要因子细胞周期蛋白依赖的蛋白激酶（CDK 激酶）和。
细胞周期蛋白其中前者是催化亚基，后者相当于调节亚基。
三、名词解释1.常染色质(euchromatin):间期核中处于伸展状态，压缩程度相对较低、着色较浅的染色质。
2.双信号系统：以PIP2代谢为基础的信号通路中，胞外刺激使转化为IP3和DAG，引发IP3/Ca2+和DAG/PKC 两条信号转导途径，在细胞内沿两个方向传递，实现细胞对外界的应答，这样的信号系统称之为双信号系统。
3.细胞周期同步化：将一个细胞群体内处于不同时期的细胞处于细胞周期的同一时相的方法。
4.多聚核糖体：具有特殊功能与形态结构的核糖体与mRNA的聚合体。
5.细胞凋亡：为维持内环境稳定，由基因控制的细胞自主的有序的死亡。
6.Hayflick界限：正常的体外培养的细胞寿命不是无限的，只能进行有限次数的增殖。
7踏车行为：在一定条件下,微丝的正极由于肌动蛋白亚基不断添加而延长,负极由于肌动蛋白亚基去组装缩短,这种现象称为踏车行为。
实验五 人体细胞Barr氏小体的制备与观察
间期细胞核内侧靠近核膜处有约1微米大小的反光极强 的颗粒状亮点，即为巴氏小体。材料不同，观察结果 可能有不同，且必须和核仁区别开来（核仁往往离核 膜较远或接近核中央制备与观察
一、实验目的
掌握 X - 染色质鉴别方法，识别 X - 染色质的 形态特征及部位。
二、原理
巴氏小体，又叫巴尔体（Barr body），指雌性动物的体细胞在间期 时，在核膜内面的一块染色很深的染色质。巴氏小体实际上是浓缩 了的X染色体，其上的基因不转录。 哺乳动物的雌性细胞有两个X染色体，其中一条来自母方，另一条 来自父方，在胚胎发育的早期，这两个X染色体中的一条浓缩形成 巴氏小体，因此雌性哺乳动物的体细胞中都含有一个巴氏小体和一 个能转录的X染色体，而雄性哺乳动物的体细胞有一条可转录的X 染色体和一条Y染色体。随着细胞分裂，巴氏小体也要复制，但上 面的基因从不转录。如果这个动物是三倍体，体细胞中也只有一个 能转录的X染色体，其余的X染色体都会浓缩形成巴氏小体。 巴氏小体只有女性有，巴氏小体数=X染色体数-1。
三、材料
人口腔黏膜细胞
四、方法步骤——人体细胞Barr氏小体的制备与观察 用灭菌牙签刮取口腔黏膜细胞； 涂片与风干（涂抹一下，不要来回涂）； 染色及压片（滴卡宝品红压片）： 染色10min后，盖上盖玻片，一头蒸馏水冲 洗，另一头用滤纸吸干。
五、观察结果——Barr body
观察人不同形态的X-染色体，并绘图
形态实验学PPT：人类X小体的检测-形态学自设计实验
——形态学自设计实验
一、实验目的
掌握人类X小体玻片标片的制作方法。 观察识别X小体形态特征及所在部位。
二、实验原理
发现：
1949年，加拿大学者Barr在研究猫的神经元 细胞时，发现雌猫神经元细胞核边缘有一个 染色较深的浓缩小体，而在雄猫则没有这种 结构。进一步研究发现，所有雌性哺乳动物 细胞中都有这种小体，能显示性别差异。 在人类，男性细胞中很少或没有这种小体， 而女性有一个。
3.固定：
（ 1 ） 加 入 固 定 液 1ml ， 混 匀 ， 室 温 预 固 定 2min ， 1200r/min离心8min，弃上清。
（2）加入固定液5ml，吹打混匀，室温固定15min， 1200r/mi。
固定液的重要特性是能迅速穿透细胞，使蛋白凝固，终止细胞代谢过 程，并保持细胞核染色体结构的完整性，并且能够增强染色体的嗜碱 性，达到优良的染色效果。
剂量补偿（dosage compensation effect）
女性有两条X染色体，但所表达的绝大部分遗传物质与只 有1个X染色体的男性是一样多的。这种男女X连锁基因产 物相等的现象在遗传学上称为剂量补偿。
对这一现象的解释是女性的X染色体中只有1个保持活性， 而另一个是晚复制的，没有活性。结果无论男女都只有一 条有功能的X染色体。
该失活的染色体在形态学上呈异固缩状态（细胞分裂周期 中与大部分染色质不同步的螺旋化现象），DNA螺旋压 的很紧，故染色深而致密。
应用：
1. 鉴定个体的性别
取材：口腔上皮细胞、毛囊细胞、羊水细胞
用途：优生学中进行胎儿性别检查，预防性染色体遗传性 疾病的发生。奥运会运动员性别鉴定。
2. 诊断性染色体异常综合征
弃上清时，用吸管吸取上清，弃去，接近下方沉淀时，应 小心吸取。
人类X染色质小体的检测 山东大学
科目遗传学实验题目人类X染色质小体的检测人类X染色质小体的检测摘要X染色质是指雌性哺乳动物体内的体细胞在间期细胞核中，除了一条X染色体外，另一条呈固缩状态的染色质结构，也称巴氏小体。
该特殊结构曾被用于检测奥运女选手遗传性别。
本次实验采用人口腔黏膜细胞和发根细胞为标本，通过硫瑾染液染色，在显微镜下观察巴氏小体部位和形态特征，并进行简单计数统计，估计自己具巴氏小体的细胞比率。
1.引言1948年，Barr的研究生Bertram在研究长时间刺激后神经元是否产生细胞学变化的实验时，观察到核仁附近有一种染色很深的小体，并且存在于部分细胞之中。
Barr通过观察标本，发现该结构与性别有关，称其为“核仁随体”并推测该小体是由两条性染色体的异染色质衍化而来的。
随着人类核型分析技术的成熟，X染色质小体逐渐被证实并且广泛用于大规模筛检X染色体数畸变个体。
1960年，Ohno和Hauschka发现X染色质小体实际上是一条在细胞分裂间期，收缩的、异染色质化的X染色体，与核仁关系不大。
后续研究表明，X染色质小体是由于胚胎发育早期X染色体失活造成的，在X 染色体长臂靠近着丝点的一段序列控制X染色体的失活。
本实验以人类口腔黏膜细胞和发根细胞为标本，经解离、硫瑾染液染色和压片后，观察巴氏小体的部位和形态，通过简单的计数，估计具巴氏小体的细胞比率。
2.材料和方法2.1 实验材料显微镜，牙签，镊子，解剖针，载玻片，盖玻片；冰醋酸，蒸馏水，95%乙醇，1MHCl，染液：硫瑾染液。
2.2 实验方法2.2.1 获取实验材料实验一：口腔黏膜细胞先漱口2-3次，尽可能除去口中的杂物。
用牙签钝头在口腔一侧用力刮取，弃去第一次的刮取物，在同一部位用另一根牙签重新刮取，将刮到的细胞涂在清洁干燥的载片上，反复几次，晾干。
实验二：发根细胞拔取带毛囊的一根头发，将其置于45%的醋酸溶液中解离5Min，等毛根松软之后用解剖针尖将外层毛囊的组织细胞轻轻刮下。
用解剖针将载玻片上的组织细胞摊平。
人类X染色质的制备与观察
人类X染色质的制备与观察摘要X染色质（巴氏小体）是除一条X染色体外，其余的X染色体常浓缩成染色较深的染色质体。
本实验选取口腔粘膜细胞和毛囊细胞，通过解离、染色、压片等方法观察巴氏小体在细胞核内的分布及形态等特征，并且通过显微观察对巴氏小体进行计数，估计巴氏小体在不同性别和不同性格人体细胞中的出现率。
此外，了解X染色体失活的有关假说以及为失活X染色体上的基因所控制的遗传性状地特点也是本实验的目的之一。
关键词X染色质（巴氏小体）口腔黏膜细胞毛囊细胞1.引言X染色质小体（巴氏小体）是由雌性哺乳动物体细胞中失活的X染色体在间期细胞核中呈异固缩状态（染色质高度螺旋化），形成直径约1μm、贴近于核膜边缘的染色小体。
巴氏小体在细胞分裂间期细胞核中出现异固缩现象，表现出浓缩、染色深、无活性的特点。
巴氏小体在不同细胞中呈现不同的形态，有卵圆形，三角形，月牙形，线性等。
一般来说，正常女性口腔粘膜细胞中约30-50%有一个巴氏小体，男性则低于1-2%。
1949年，加拿大学者Barr在雌性猫神经元核仁附近发现一种染色很深的小体，而在雄性猫中则极少出现，Barr称这种小体为“核仁随体”，并推测小体是由两条性染色体的异染色质衍化来的。
1955年，Barr在女性的口腔细胞中发现Barr body（巴氏小体），Moor与Barr 用口腔黏膜上皮细胞检测Barr body，制作出日后被广泛使用的颊涂片。
1959年，人们把性染色体异常造成的畸形与巴氏小体的研究联系起来。
1960年，Ohno和Hauschka发现，X染色质小体实际上是一条在细胞分裂间期，收缩的、异染色质化的X染色体，与核仁并无关系，也不是Barr推测的那样由两条性染色体各贡献一部分异染色质形成。
受此启发，Lyon（1961，1962）研究了小鼠X染色体连锁的皮毛颜色基因突变体，进一步指出异染色质化的X染色体可以来自父方，也可以来自母本；异染色质化的染色体在遗传上没有活性（后来的研究表明异染色质化的染色体中还是有部分基因保持活性）；这种随机失活是性别决定为XX-XY的动物为平衡两性之间性染色体上的基因剂量而采取的一种特殊的调控方式（因为Y染色体上的基因数量很少，因此雌性个体必须通过减少X染色体上基因剂量的方式使两性个体间基因剂量取得均衡），即所谓的“剂量补偿”，这是X染色体失活的意义所在。
人类性染色质小体的制备和观察
箭头所示为巴氏小体（女性细胞[左]中存在，男性细胞[右]中没有）
六、注意事项
1．在实验中取材时应该注意安全； 2．如果用毛囊细胞进行试验，采样前应清 洗头发，因出油后拔漱口数次，用洁净牙签 从女性口腔两侧刮取粘膜，原位刮2～3次， 第1次舍去，第2，3次分别涂于干净载玻片 上。 固定：口腔粘膜细胞加入新配置的固定液 （95%乙醇:冰醋酸＝3:1），固定30min （固定液勿干）以上，空气干燥。
3）染色、制片 滴加染液，室温10min（勿干）； 在95%的酒精中分色1-3分钟； 在无水乙醇中继续分色两次，每次1分钟 用二甲苯透明两次，每次约3分钟； 加盖玻片，压片。
巴氏小体为女性细胞中所特有的染色体结构，是1条X染 色体呈异固缩状态所形成，各实验室所统计的观察率不尽 相同，从30％一50％不等，有些实验室中在男性的细胞 中发现X小体有2%的出现率，但小体结构不规范、典型。 巴氏小体常位于核膜内侧。直径为1μm左右，其形状有微 凸形、三角形、卵形、短棒形和双球形等。观察时需注意 巴氏小体与细胞的比例。 正常女性细胞中仅可观察到1个巴氏小体，而正常男性细 胞中无巴氏小体或仅在个别细胞中有不典型的巴氏小体存 在。
2）固定 口腔粘膜细胞加入新配置的固定液（95% 乙醇:冰醋酸＝3:1），固定30min以上，空 气干燥。
2）固定 毛囊细胞-拔取一根毛根比较大的毛发，在一张干 净的载玻片中央滴一滴45%的醋酸，静置约5分钟， 待毛根稍软后，用镊子尖把外层毛囊的组织细胞 轻轻刮下，弃去毛干。将细胞用解剖针在载玻片 上均匀摊平，并在空气中晾干。 实验改进意见：拿起上述发根的梢部，将其上毛 囊细胞轻轻蹭于另一干净载片上即可达到转移的 目的。（若用刀片或镊子将毛囊细胞刮下，可造 成细胞的堆积，同样会出现多层细胞的现象。1根 发根的毛囊细胞可以转移到3-4张载片上，以达到 充分利用实验材料的目的。观察时又可以看到清 晰的单层涂布细胞，便于观察统计。）
实验六 人类性染色体小体的制备与观察0
人类性染色体小体的制备与观察
实验原理
一、什么是人体X—染色体（1949，美，巴尔；1961，
英，莱昂，剂量补偿效应的X染色体失活假设 ）
常染色体和性染色体，常染色质和异染色质
二、X—染色质数目
克氏综合症XXY，特纳氏综合症XO
三、X—染色质的部位 (靠近核仁、在核质中、靠近核膜)
四、X—染色质的几种名称介绍
① 口腔颊部粘膜细胞：
取材→涂片→染色（3min）→压片
② 毛发根部细胞观察：
取材→45%冰乙酸（软化5分钟）→水洗
→染色（5min）→压片
正常女性头发毛囊细胞X－染色质
正常女性头发毛囊细胞X－染色质
作 业
绘口腔颊部粘膜细胞和毛发根部细胞
Байду номын сангаас
X—染色质，男女同学分别做对照。
①核仁卫星 ⑤X—染色质 ②性染色质 ③Barr小体 ④X—小体
实验目的
实验材料
1、口腔颊部粘膜细胞
2、头发毛囊细胞
实验器具与药品
1、用具：显微镜、镊子（2）、载玻片、盖 玻片、滤纸、刀片（4）、消毒牙签、小 烧杯（1）等 2、药品：45％醋酸（每大组一瓶）、改良 品红染液 （每小组一瓶）
实验步骤
人类X染色质(巴氏小体)制备与观察
人类X染色质（巴氏小体）的制备与观察摘要巴氏小体是由雌性哺乳动物体细胞中失活的X染色体在间期细胞核中形成的呈异固缩状态，贴近于核膜边缘的染色小体，在遗传学、细胞观察方面有重要意义。
实验中作者取人口腔颊部上皮细胞与发根毛囊细胞进行硫瑾染色操作，通过显微观察对巴氏小体进行识别与计数，描述巴氏小体的形态，并统计其在不同性别人体细胞中的出现率。
引言在哺乳动物体细胞间期细胞核中，除一条X染色体外，其余的X染色体失活并呈异固缩状态，此即为巴氏小体。
又称X小体、性染色质，直径约1μm，通常位于间期核膜边缘。
1949年，加拿大学者Barr在雌性猫的神经元细胞核中发现一种染色很深的小体，而在雄性猫中则极少出现[1]。
通常人类男性细胞核中很少或没有巴氏小体，而女性有1个，性染色体异常的患者如XXY、 XXYY、XXX、XXXY等，巴氏小体的数量＝X染色体数量－1。
综合巴氏小体与哺乳动物性染色体的剂量补偿效应，Lyon M．F 于1961年提出Lyon 假说，主要内容有：(1)正常的雌性哺乳动物两条X染色体只有一条在遗传上有活性，另外一条失活；(2)X染色体失活是随机的。
因此表达是随机的，结果在杂合子中会出现嵌合现象（mosaic）。
例外：有袋类失活的X染色体全部是父方的。
(3)失活发生在胚胎发育的早期，如人在受精后的16天（5000-6000个细胞时）。
一个细胞的一条染色体一旦失活，这个细胞的后代细胞中该染色体均失活。
Lyon假说虽然可以解释一些问题但不是全部，如人类中的44AXO型个体表现为Turner 综合症、44AXXY表现为Klinefelter综合症。
随着生物学和医学的发展人们已经认识到单条X染色体失活现象是普遍存在的，但失活的染色体上存在失活区和非失活的。
如人类中位于X染色体上的基因，G6PD（葡萄糖-6磷酸脱氢酶）、AHF（抗溶血第Ⅷ因子）等是非失活的，而Xg血型基因是失活的。
巴氏小体的生物学观察，对于优生学中鉴别性别和预防性连锁疾病的发生，以及作为癌细胞核异常主要形态学特征之一鉴定癌细胞，有重要价值[1]。
9人类性染色质小体的制备与观察
人类在受精后的第16天（受精卵分裂到 5000-6000），植入子宫壁时发生lyon化。
剂量补偿：
由于雌性细胞中的两个X染色体中的一 个发生异固缩（也称Lyon化），失去活性， 这样保证了雌雄两性细胞中都只有一条X染 色体保持转录活性，使两性X连锁基因产物 的量保持在相同水平上。这种效应称为X染 色体的剂量补偿。
➢ 进一步研究发现，其他雌性哺乳动物（包括人 类）也同样有这种显示性别差异的结构。而且不 仅是神经元细胞，在其他细胞的间期核中也可以 见到这一结构，称之为巴氏小体，也称为X染色 质。大小在1µm左右，呈三角形、卵形、短棒形 等。
研究发现，间期核内X染色质的数目总是 比X染色体的数目少1。
进一步研究表明： X染色质是一条异染 色质化（兼性异染色质）的X染色体，在间 期复制要比其他的染色体晚。
知识回顾 Knowledge Review
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实验十 人类性染色质小体 的制备与观察
实验目的 实验原理 实验材料与药品 实验方法 注意事项 实验作业 思考问题
掌握莱昂假说和X染色体剂量补偿的含义。
掌握观察与鉴别X染色质的简易方法，识别 其形态特征及所在部位，为进一步研究人 体染色体的畸变与疾病提供参考依据。
发现
➢ 1949年，Barr在雌猫的神经元间期细胞核中首 次发现一种染色较深的浓缩小体，而在雄猫则没 有。
达，则产生橙黄色毛斑。
Y染色质
正常男性的间期细胞用荧光染料染色后， 在细胞核内可出现一荧光小体，直径为0.3-1μm左右，称为Y染色质。 Y染色质在间期 也呈现异固缩状态。Y染色体长臂远端部分 为异染色质，可被荧光染料染色后发出荧 光。这是男性特有的，女性细胞中不存在。 细胞中Y染色质的数目与Y染色体的数目相 同。
实验四人类X小体、Y小体检测
X小体、Y小体的形态学特征分析
总结词
X小体和Y小体的形态学特征存在明显差 异。
VS
详细描述
X小体通常较大，形状不规则，而Y小体 则相对较小，形态较为一致。此外，X小 体的荧光强度较强，而Y小体的荧光强度 较弱。这些特征有助于区分X小体和Y小 体。
X小体、Y小体的荧光原位杂交技术检测结果分析
总结词
X小体、Y小体的生物学意义
性别决定
X小体和Y小体的存在是性别决定的关键因素之一。男性具有一个X染色体和一个Y染色体，而女性具有两个X染色 体。X小体和Y小体的形成有助于维持性别比例的平衡。
遗传疾病诊断
通过检测X小体和Y小体，可以对某些遗传疾病进行诊断。例如，某些遗传性疾病与X染色体或Y染色体上的基因 变异有关，通过检测这些变异可以诊断疾病。
学习X小体、Y小体的检测方法
X小体检测方法
利用荧光染色技术对间期细胞进 行染色，观察细胞核中呈现的X小 体的数量和形态。
Y小体检测方法
利用荧光染色技术对间期细胞进 行染色，观察细胞核中呈现的Y小 体的数量和形态。
掌握X小体、Y小体检测在临床上的应用
性别鉴定
通过检测X小体和Y小体的数量和形态， 可以确定个体的性别。
肿瘤诊断
某些肿瘤细胞可能存在X小体、Y 小体的异常表达，通过检测这些 异常表达有助于肿瘤的早期发现 和诊断。
遗传性疾病研究
X小体、Y小体的异常可能与某些 遗传性疾病的发生发展有关，通 过检测这些异常有助于深入了解 遗传性疾病的发病机制。
X小体、Y小体检测的未来发展方向
检测技术的改进
随着科技的发展，未来将有更高 效、更准确的检测方法应用于X 小体、Y小体的检测中，提高检
荧光原位杂交技术检测结果显示，X小体和 Y小体在染色体上的定位不同。
人类X染色质小体的制备和观察
人类X染色质小体的制备和观察实验时间2016.12.06晚摘要：本实验利用传统的细胞生物学方法，通过选取女性和男性口腔上皮细胞，制备人类X 染色质小体装片，并进行观察，对X染色质小体的形态特征进行辨别。
最后对奥运利用巴氏小体进行性别检测存在的问题进行分析。
1引言1948年Barr发现雌性动物大多数组织中都存在着被碱性染料深染的小体，并称之为性染色质(sex chromatin)。
在之后的几年，Barr及其学生又相继研发了用皮肤活组织切片及口腔上皮细胞涂片检测性染色质的技术。
国际奥委会曾用使用检测性染色质的方法防止“伪娘”参加女子项目。
从大量的观察、统计的数据中，Harnden归纳出一个细胞中性染色质数与一个个体中所含的X染色体数、倍性的关系：一个细胞中性染色质数(最大值)=X染色体数-倍性/2。
本实验利用传统的细胞生物学方法，通过选取女性和男性口腔上皮细胞，制备人类X染色质小体装片，并进行观察，对X染色质小体的形态特征进行辨别。
最后对奥运利用巴氏小体进行性别检测存在的问题进行分析。
2实验材料2.1实验材料每一个学生：显微镜，载玻片，盖玻片，牙签，一次性水杯，镊子，解剖针。
每一组学生：引用矿泉水，固定液(95%乙醇：冰乙酸=3:1，装在染色缸中)，蒸馏水；70%、95%乙醇，无水乙醇，45%乙醇，5mol/LHCl，记号笔；二甲苯，香柏油，镜头纸；石炭酸品红染液。
2.2实验步骤2.2.1获取实验材料取一干净载玻片，用记号笔在即将涂细胞的一面作个标记。
用水将口漱净，尽可能除去口中杂物。
然后用牙签钝头在口腔(颊内侧)用力刮取，弃去第一次得到的刮取物，在同一部位继续刮取以取得深层的表皮细胞，将刮得的细胞涂抹在干净的载玻片上，反复几次，使玻片上的材料尽量抹厚些。
实验材料选自同学口腔上皮细胞。
2.2.1染色及制片在晾干的玻片上直接滴上石炭酸品红染料,染色10分钟，盖上盖玻片，吸去多余的染料，放在显微镜下观察[1]。
细胞培养技术-细胞周期
01 概况：
G2期02 时期:分裂之前
03
○ 基本特点：进行诱发细胞
进入分裂的
各种生化变化
○ 时间：较短，约2~3 hr
概况： 01
时间：较短，约2~3 hr
03 02
时期:分裂之前
G2期
特点：
机能活动 为分裂作准备 继续合成与分裂有关的物质，
主要合成分裂有关的蛋白质，尤以细胞骨架重新组装的蛋白质 如阻止蛋白质合成，细胞不进入分裂
但就高等生物体而言，细胞周期时间的长短 变化主要在G1期，而S期、G2期和M期的时间 基本稳定 典型的培养哺乳动物细胞周期时间，大致
Tc
G1
S
G2
M
20~30 hr 10~15 hr 6~8 hr 3~6 hr 0.5~1 hr
01 同一细胞
03 条件改变，可改变
05 如用激素
可 几天
07 失血后
在S期与下一次细胞分裂之前，也存在一个时间间隔， 为第二时间间隔期(Gap 2，G2)，位于DNA合成之 后．又称为DNA合成后期
间期：
G1 + S + G2
运营计划简约通用模板
细胞周期的分期
间期 + M期
间期：G1 + S + G2
M 期: 前、中、后、末期
单击此处添加副标题
细胞周期时间 不同种类细胞的细胞周期持续的时间长短不一。 各种细胞的细胞周期存在差异，
细胞开始合成生长所需的各种蛋白质、糖类和脂质以及rRNA。虽然G1期不合成DNA， 但在G1期的后期，DNA合成酶的活性大大增加，为S期做好准备。 对各种环境信号,综合、协调、作出反应 以确定是否进入S期
时间长度变异大：
人类性染色质小体的制备与观察
B.毛囊细胞（Hair follicle cell） 拔取一根毛根比较大的毛发（头发或其他部位，如手臂上的毛发均 可；如可能，尽量选用白色或浅颜色的毛发，这样在制片中就可减 少色素的干扰）。在一张干净的载玻片中央滴一滴45%的醋酸，将 毛根浸渍其中。静置约5分钟，待毛根稍软后用镊子尖或解剖针尖 将外层毛囊的组织细胞轻轻刮下（用力太大，则可能将毛发上的色 素细胞一起刮下，影响制片效果）。弃去毛干。用解剖针将载玻片 上的组织细胞均匀摊平。摊平的材料在空气中晾干。
6.为什么Barr小体一般出现在核膜边缘？
四、实验步骤
1. 口腔颊部粘膜细胞巴氏小体观察
刮取颊部粘膜上皮细胞（用灭菌玻璃片）→涂片（两片45°角）→60%冰 醋酸固定5分钟→吸去冰醋酸，用改良苯酚品红染色1-2分钟→压片→镜检 。
2. 发根细胞巴氏小体观察 拔取带毛囊头发一段→45%冰醋酸解离5分钟→剥取毛囊→染色2-3分钟→ 压片。
表 性染色体组成与X 小体数目的关系 性染色体组成 性别 X小体的数目 XY 男 0 XO 女 0
XX 女 1
XXY 男 1 XXX 女 2 XXXX 女 3
2、莱昂假说 为什么正常男女之间的X染色质存在差异？女性两个X染色体上的 每个基因座的两个等位基因所形成的产物，为什么不比只有一个X 染色体半合子男性的相应基因产物多？为什么某一X连锁的突变基 因纯合子女性的病情并不比半合子的男性严重？ 20世纪60年代以来，不少学者曾提出了一些假说来解释这一现象。 其中比较著名的假说是由M．F．Lyon于1961年提出的Lyon假说 （Lyon hypothesis）： 1.）正常雌性哺乳动物的体细胞中，两条X染色体中只有一条 在遗传上有活性，另一条在遗传上无活性。 2.）X染色体的失活是随机的。 3.）失活发生在胚胎发育早期，X染色体一经失活，其后代细 胞中该染色体均处于失活状态。 4.）杂合体雌性在伴性基因的作用上是嵌合体。
细胞培养2_人类外周血染色体制备
人类外周血染色体制备一、原理人外周血小淋巴细胞，通常都处在G1期（或G0期），一般情况下不进行分裂。
如在培养液中加入植物血凝素（PHA），这种小淋巴细胞受到刺激可转化为淋巴母细胞，进入有丝分裂。
短期培养后，经秋水仙素处理，低渗和固定，即可得到大量的有丝分裂细胞。
人体的1ml外周血内一般含有约1×106～3×106个小淋巴细胞，足够染色体标本制备和分析之用。
二、用品和试剂1．5ml注射器（7号针尖），培养瓶、刻度吸管，需15磅灭菌20分钟。
离心管、吸管、量筒、载玻片，经洗液按常规清洗、烘干备用。
2．超净工作台，恒温培养箱，天平，离心机、显微镜等。
3．试剂：（1）RPMI-1640按要求10.4克/1000ml配制成溶液，并加入NaHCO3 2.0克/1000ml以缓冲pH。
完全溶解后经0.22 μm灭菌滤膜抽滤除菌。
（2）肝素钠（肝素）：称取0.2g溶于100ml双蒸水中，浓度为0.2%，15磅20分钟灭菌。
（3）秋水仙碱（秋水仙素〕，生理盐水配制成10μg/ml浓度，15磅20分钟灭菌，分装，置－20℃。
（4）低渗液：0.35％KCl。
（5）固定液（Carnoy固定液）甲醇∶冰乙酸（3∶l），临时配制。
（6）Giemsa工作液：1份原液和10份磷酸缓冲液，临时配制。
（7）磷酸缓冲液：1/15M Na2HPO4、1/15M KH2PO4等体积混和。
（8）5% NaHCO3灭菌滤器抽滤备用。
三、操作步骤（一）细胞培养1．培养基的配制：在超净工作台中，100ml培养基含以下成分和比例：RPMI-1640 84ml小牛血清15mlPHA 3支肝素钠1ml卡那霉素终浓度为100单位/ml以5% NaHCO3（无菌）或1N HCl调pH至7.2－7.4。
用刻度吸管将培养液分装入培养瓶（10ml/瓶），4℃备用。
2．采血：酒精消毒皮肤，肘静脉采血0.3—0.5ml，立刻将注射针直接穿过培养瓶的橡胶塞，向10ml培养基中注入30—40滴全血，轻摇匀后置37℃恒温箱培养。
大学细胞生物学考试(习题卷27)
大学细胞生物学考试(习题卷27)第1部分：单项选择题，共88题，每题只有一个正确答案,多选或少选均不得分。
1.[单选题]下列哪种细胞结构的微管比较稳定( )A)鞭毛B)中心体C)星射线D)纺锤体答案:A解析:2.[单选题]所有膜蛋白都具有方向性，其方向性在什么部位中确定？A)细胞质基质B)高尔基体C)内质网D)质膜答案:B解析:3.[单选题]已知SV40 DNA周长1500nm。
约5.0kb，若与组蛋白结合将形成多少个核小体结构（ ）：A)34个左右B)30个左右C)25个左右D)不定答案:C解析:4.[单选题]有活性的CDK1激酶符合下列何种描述？（ ）[南开大学2011研]A)与周期蛋白以复合物形式存在B)Thr161去磷酸化C)Thr14和Tyr15磷酸化D)与之结合的周期蛋白泛素化答案:A解析:CDK激酶激活的途径：①CDK蛋白本身不具有蛋白激酶活性；②当周期蛋白B/A 含量积累到一定值时，二者相互结合形成复合体，但不表现出激酶活性；周期蛋白与CDK的结合是CDK激酶活性表现的先决条件；③在wee1/mik1和CAK激酶的催化下CDK的Thr14、Tyr15、Thr161磷酸化，形成高度磷酸化的周期蛋白CDK复合体，但仍不具备激酶活性；④在磷酸酶Cdc25的催化下，Thr14和Tyr15去磷酸化，CDK激酶活性才能表现出 来。
Thr161位点保持磷酸化状态是CDK1激酶活性表现所必需的前提。
5.[单选题]下列属于真核细胞但不具有细胞核的是（ ）。
A)牛红细胞B)鸡红细胞C)小麦成熟筛管细胞D)含多线染色体的果蝇唾液腺细胞答案:A解析:哺乳动物成熟红细胞不含有细胞核。
6.[单选题]关于细胞分化的分子生物学机制，下列说法不正确的是（ ）A)细胞表型特化的分子基础是特异性蛋白质的合成B)已经分化的细胞仍旧具有全能性C)细胞分化是基因选择性表达的结果D)细胞分化的选择性表达是在mRNA水平上的调节答案:D解析:7.[单选题]关于细胞凋亡的叙述，下列哪项是正确的（ ）A)是细胞坏死B)是一种病理过程C)由基因控制的细胞自我消亡的过程D)由意外事件引起的细胞损伤造成答案:C解析:8.[单选题]要观察肝组织中的细胞类型及排列，应先制备该组织的（ ）A)滴片B)切片C)涂片D)印片答案:B解析:9.[单选题]在小肠上皮的顶区和基底区分别存在两种不同的葡萄糖转运载体，这两种载体之所以能够在特定的区域各自工作，而不会相互混合，是因为哪种细胞连接方式的存在 （ ）A)封闭连接B)桥粒C)隔状连接D)间隙连接答案:A解析:10.[单选题]动物细胞中cAMP的主要生物学功能是活化（ ）。
第一篇组成人体的细胞第四章 细胞培养
第一篇组成人体的细胞第四章细胞培养人体是由多细胞构成的整体，在整体条件下要研究单个细胞或某一群细胞在体内（in vivo）的功能活动是十分困难的。
但是如果把活细胞拿到体外（in vitro）培养进行观察和研究，则要方便得多。
活细胞离体后于模拟体内生理环境等特定的体外条件下，进行孵育培养使之生存并增殖和进行生理活动，这一过程就称为细胞培养（cell culture）或细胞培养技术（cell culture technique）。
第一节细胞培养概述一、细胞培养的基本概念细胞培养是从体内组织取出细胞并在体外模拟体内环境下，使之生存、生长、繁殖，并维持其结构和功能的一种培养技术。
二、体外培养细胞的条件模拟细胞在体外能否生存以及生活质量的好坏严格依赖于所提供的这种人工模拟环境是否与体内的生理环境一致或相似。
概括说来，这种人工模拟的生存环境主要包括营养、温度、渗透压、pH等几方面的因素。
（一）营养需求体外培养细胞时，营养需求是满足其生存、生长增殖的首要条件。
而细胞培养基便是在体外培养细胞时供给细胞营养和促使细胞生长增殖的基础物质。
1．细胞对营养的需求离体培养细胞对营养的需求基本上与在体相同，主要包括氨基酸、糖类、无机盐类、维生素、蛋白质、脂类等几个方面。
（1）氨基酸既是细胞合成蛋白质的原料，也是细胞重要的能量来源，氨基酸的种类及数量影响着细胞的密度、增殖、活力等诸多方面。
几乎所有的细胞均需要下列12种氨基酸：精氨酸、缬氨酸、酪氨酸、组氨酸、色氨酸、苏氨酸、苯丙氨酸、蛋氨酸、赖氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、胱氨酸。
（2）用于细胞培养糖类物质主要有葡萄糖和半乳糖，其中以葡萄糖最为多用。
糖类物质是细胞最主要的能量来源，同时也是生物合成核酸、氨基酸、脂类物质重要的碳源。
（3）无机盐对于基础培养基渗透压的调节至关重要，同时还对细胞跨膜电位的调节、细胞附着以及一些酶的活性调节具有重要作用。
经常添加的无机盐离子主要有钠、钾、镁、磷、钙等。
x小体的制备1
3．镜检：气干后即可镜检。
注意事项
用洁净的牙签钝端从口腔两侧颊部刮取粘膜，为防止后面 的离心损耗，应尽量多取一些。 弃上清时，用吸管吸取上清，弃去，接近下方沉淀时，应 小心吸取。 加入低渗液后，轻轻混匀，不能太用力，以防核膜破裂。 固定液使用前需临时配制，长时间放置影响固定效果。 载玻片于临用前在-20度冰箱中取出，现用现取，以防温 度上升。 加热时应距离外焰一段距离（2-3cm），且来回摆动，以 防过热引起断裂。
实验原理哺乳动物体细胞核中除一条x染色体外其余的x染色体发生异固缩功能上处于失活状态将其称为x小体x染色质性染色质巴氏小体barrbody通常位于间期细胞核的核膜边缘染色深而致密
人类X小体的检测
实验目的
掌握人类X小体玻片标本的制作方法。 观察识别X小体形态特征及所在部位。实验原理
发现：
1949年，加拿大学者Barr在研究猫的神经元 细胞时，发现雌猫神经元细胞核边缘有一个 染色较深的浓缩小体，而在雄猫则没有这种 结构。进一步研究发现，所有雌性哺乳动物 细胞中都有这种小体，能显示性别差异。
实验报告
（1）画图：画1个典型细胞，示X小体的形态和 所处部位。 （2）阳性率：观察30个以上可数细胞中X小体出 现的个数， 计算X小体的阳性率。
实验原理
本质：
哺乳动物体细胞核中，除一条X染色体外，其 余的X染色体发生异固缩，功能上处于失活状 态，将其称为X小体（X染色质，性染色质， 巴氏小体 Barr body），通常位于间期细胞 核的核膜边缘，染色深而致密。
实验原理
人类正常的男女体细胞中，22对常染色体并无 区别，但其性染色体分别为XY和XX。女性的两 条X染色体中，有一条在间期呈现浓缩状态， 可由适当的染料显示。正常女性口腔黏膜上皮 细胞中X小体阳性率10-30%。
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人体间期细胞X—小体的制备
一、原理
1949年Barr等发现，在雌性体细胞中的两条X染色体有一条（或这条的大部分）处于凝集不活动状态，从而形成X-小体（或称X-染色质、性染色质、Barr 小体）。
进而发现，所有哺乳类雌体细胞中都有一条这种表现的X染色体，当在个用雌或雄体中，有多于2条X染色体时，在间期细胞内除一条外，其余均形成X-小体。
人类正常的男女体细胞中，22对常染色体并无区别，但其性染色体分别为XY 和XX。
女性的两条X染色体中，有一条在间期呈现浓缩状态，可由适当的染料显示。
正常女性间期细胞中X小体阳性率约为30—50%。
二、仪器、用品及试剂
光学显微镜，恒温水浴箱；
牙签、载玻片、染色缸；
Carnoy固定液（甲醇∶冰乙酸＝3∶l）70%乙醇，硫堇染液；
5N HCl，0.2%甲苯胺兰染液。
三、操作步骤
（一）方法一
l．取材、涂片：取女性口腔上皮细胞均匀涂布在洁净载玻片上。
2．固定：涂片后立即95％乙醇中固定30分钟（不可干燥）。
气干。
3．染色：玻片在蒸馏水中冲洗几次后5N HCl（22℃）水解10分钟，蒸馏水洗去多余HCl，硫堇染色30分钟。
水洗。
4．镜检、气干后即可镜检。
若背景颜色过深可在75%乙醇、95%乙醇中分色后再镜检。
（二）方法二
l．取女性口腔上皮细胞涂片。
待干燥。
2．Carnoy固定液中固定15分钟。
干燥。
3．5N HCl中10分钟。
水洗。
干燥。
4．0.2%甲苯胺兰染色2—5分钟。
水洗。
气干。
5．镜检。
四、注意事项
l．涂片时应均匀涂成单层，取材细胞要多些。
取材前应漱口。
2．镜检应选择完整、核质中颗粒均匀的细胞观察，X-小体大小约为1μm，多位于细胞核边缘。
3．统计X-小体阳性率，计数应选300—500个细胞。
五、试剂
1．硫堇染液配方：
①4%硫堇原液：4g硫堇粉末置研钵中以50%乙醇100ml研磨溶解。
过滤。
②Michaelies缓冲液：醋酸钠9.714g，巴比妥钠14.714g加双蒸水至500ml。
③硫堇工作液（PH5.7）：0.1N HCl 32ml
Michaelies缓冲液28 ml
4%硫堇原液400ml
2．甲苯胺兰染液配方：
0.2g甲苯胺兰粉末溶于100ml双蒸水中即可。