细胞培养2_人体间期细胞X—小体的制备

人体间期细胞X—小体的制备

一、原理

1949年Barr等发现，在雌性体细胞中的两条X染色体有一条（或这条的大部分）处于凝集不活动状态，从而形成X-小体（或称X-染色质、性染色质、Barr 小体）。进而发现，所有哺乳类雌体细胞中都有一条这种表现的X染色体，当在个用雌或雄体中，有多于2条X染色体时，在间期细胞内除一条外，其余均形成X-小体。

人类正常的男女体细胞中，22对常染色体并无区别，但其性染色体分别为XY 和XX。女性的两条X染色体中，有一条在间期呈现浓缩状态，可由适当的染料显示。正常女性间期细胞中X小体阳性率约为30—50%。

二、仪器、用品及试剂

光学显微镜，恒温水浴箱；

牙签、载玻片、染色缸；

Carnoy固定液（甲醇∶冰乙酸＝3∶l）70%乙醇，硫堇染液；

5N HCl，0.2%甲苯胺兰染液。

三、操作步骤

（一）方法一

l．取材、涂片：取女性口腔上皮细胞均匀涂布在洁净载玻片上。

2．固定：涂片后立即95％乙醇中固定30分钟（不可干燥）。气干。

3．染色：玻片在蒸馏水中冲洗几次后5N HCl（22℃）水解10分钟，蒸馏水洗去多余HCl，硫堇染色30分钟。水洗。

4．镜检、气干后即可镜检。若背景颜色过深可在75%乙醇、95%乙醇中分色后再镜检。

（二）方法二

l．取女性口腔上皮细胞涂片。待干燥。

2．Carnoy固定液中固定15分钟。干燥。

3．5N HCl中10分钟。水洗。干燥。

4．0.2%甲苯胺兰染色2—5分钟。水洗。气干。

5．镜检。

四、注意事项

l．涂片时应均匀涂成单层，取材细胞要多些。取材前应漱口。

2．镜检应选择完整、核质中颗粒均匀的细胞观察，X-小体大小约为1μm，多位于细胞核边缘。

3．统计X-小体阳性率，计数应选300—500个细胞。

五、试剂

1．硫堇染液配方：

①4%硫堇原液：4g硫堇粉末置研钵中以50%乙醇100ml研磨溶解。过滤。

②Michaelies缓冲液：醋酸钠9.714g，巴比妥钠14.714g加双蒸水至500ml。

③硫堇工作液（PH5.7）：0.1N HCl 32ml

Michaelies缓冲液28 ml

4%硫堇原液400ml

2．甲苯胺兰染液配方：

0.2g甲苯胺兰粉末溶于100ml双蒸水中即可。